豬病抗體疾速檢測卡在現(xiàn)代養(yǎng)豬保健中的作用

1、實驗室檢測在豬病防控中的作用和實施方法隨著畜牧獸醫(yī)技術(shù)的不斷進步，豬的養(yǎng)殖品種和養(yǎng)殖技術(shù)發(fā)生了很大的變化。我們在享用新技術(shù)帶來進步的同時卻驚異地發(fā)現(xiàn)豬越來越難養(yǎng)，豬病越來越多。個中緣由我們在此不去深究，當(dāng)務(wù)之急是如何解決面臨的問題，如何采取有效的方法預(yù)防和控制豬病的發(fā)生。如果現(xiàn)在還僅僅依靠常規(guī)的臨床解剖，我們會發(fā)現(xiàn)我們的眼睛越來越不可靠，對看到的現(xiàn)象越來越困惑和不解。為什么會這樣，大家都知道其中的原因，簡單地講就是現(xiàn)在的豬病呈現(xiàn)非典型化和復(fù)合感染的趨勢。面對目前的狀況，我們在改善豬群生長環(huán)境和飼料配方的同時，要努力構(gòu)建豬群疫病防控體系，而實驗室檢測是重中之重，不可或缺。一、實驗室檢測的作用1了

2、解豬群的健康狀況通過病原檢測，可以了解豬群是否感染某種病原，如果感染，陽性率是多少；通過抗體檢測可以了解豬群的整體免疫狀況，從而掌握整個豬群的健康狀況，為相應(yīng)措施的采取提供依據(jù)。2為免疫程序的制定和修改提供依據(jù)豬群在免疫某種疫苗后通過定期檢測，可以了解豬群是否產(chǎn)生抗體、產(chǎn)生抗體水平的高低，從而為免疫程序的制定和修改提供依據(jù)。此外，目前市場上疫苗廠家眾多，疫苗質(zhì)量參差不齊，加上疫苗運輸、保存、注射等環(huán)節(jié)都會影響免疫效果，通過實驗室檢測可以了解這些疫苗質(zhì)量是否有保證，為下一步的疫苗選擇提供參考。3豬場疫病凈化通過定期對某種病原進行實驗室檢測，掌握豬場某種病原的真實存在情況，采取相應(yīng)的措施，如淘汰陽

3、性感染豬、建立陰性種豬群、全進全出等措施逐步完成對某種疾病在豬場的根除。如通過對豬偽狂gI抗體的檢測，確定偽狂犬病病毒感染豬群或豬只，從而采取撲殺、隔離等措施達到豬群凈化的目的。二、實驗室檢測的內(nèi)容實驗室檢測的內(nèi)容很多，目前臨床上主要的有病原檢測和抗體檢測兩種。臨床上可以根據(jù)檢測目的不同分別進行選擇。1病原檢測病原檢測分兩種，一種是采用某種方法，如細(xì)菌培養(yǎng)、動物接種等直接檢測某種病原微生物是否存在；另一種是采用PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）等方法檢測樣品中某種病原微生物的核酸是否存在，從而間接反應(yīng)某種病原微生物是否存在。第一種方法做起來費時費力，第二種方法方便快捷，在較短時間就能得到結(jié)果，所以目前病

4、原檢測主要采用的是第二種方法。2抗體檢測抗體檢測目前普遍采用的是ELISA方法，檢測血清中某種病原的抗體含量。實驗室目前主要使用的是已經(jīng)商業(yè)化的成品試劑盒。三、實驗室檢測的實施實驗室檢測的實施是一個系統(tǒng)工程，從樣品的采集到實驗室檢測各個環(huán)節(jié)都要嚴(yán)格把關(guān)，這樣得出的數(shù)據(jù)才真實可靠，具有可分析性。1樣品采集量的確定樣品采集量大小首先取決于本次檢測的目的，如估測感染率，或篩查陽性個體，或重復(fù)檢測。如用于估測感染率，通用的數(shù)學(xué)公式為n=1-（a）1/DxN（D一1）/2（其中，n一樣本量大小，a一置信區(qū)間，D一估測陽性動物數(shù)發(fā)病動物數(shù)，N一動物總數(shù)）。如a一090，D一10，N一4000，則n=22。

5、2樣品采集方法檢測項目不同，采樣方法和注意事項也有所不同。如做PCR檢測病原時，可以采集病變組織或者動物血液，組織要求是具有典型病變的部位，血液最好是發(fā)病期的血液，采集后，最好置于一20C冰箱保存。做ELISA檢測時，采集的血液不能加抗凝劑，室溫下靜置35小時（季節(jié)不同，時間有所變化），待血液凝固有血清析出時，低速離心分離血清，裝入1.5mL離心管中，置于4C冰箱保存。3樣品運輸采集的病變組織和血清應(yīng)置于放有低溫冰袋的泡沫箱中進行運輸，避免反復(fù)凍融，每份樣品都應(yīng)有相應(yīng)的標(biāo)簽，并保證在抵達實驗室時仍能被辨認(rèn)。同時應(yīng)提供詳細(xì)的豬場信息和聯(lián)系方式（尤其是電話號碼），以便檢測結(jié)果出來時能及時聯(lián)系和溝通

6、。運輸方式的選擇應(yīng)本著在價格可接受的范圍內(nèi)抵達目的地的時間越短越好。4.實驗室的選擇檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性取決于各個方面，但實驗室條件是其中最重要的環(huán)節(jié)之一，比如實驗室檢測環(huán)境要具備恒溫、恒濕等條件才能保證抗體檢測的準(zhǔn)確性，所以在選擇實驗室時，在廣泛聽取同行意見，征求相關(guān)豬病專家建議的基礎(chǔ)上，要進行認(rèn)真比較。四、檢測數(shù)據(jù)的利用通過各種檢測方法得出的數(shù)據(jù)，如果不經(jīng)過相關(guān)專家的分析和解釋，養(yǎng)殖者一般不能正確理解。這也提醒養(yǎng)殖場在選擇實驗室時，要求實驗室不僅能提供檢測數(shù)據(jù)，也能提供詳細(xì)的分析報告和建議。如陽性率、陰性率、差異度等，此外還應(yīng)要求實驗室對當(dāng)前的免疫程序、用藥情況、疫苗質(zhì)量等提出建議。只

7、有這樣才能真正做到“檢有所值，檢有所用總之，隨著養(yǎng)殖新技術(shù)和養(yǎng)殖新模式的不斷應(yīng)用，之前僅僅依靠臨床經(jīng)驗對疾病進行的分析將越來越不可靠，越來越不能正確詮釋臨床上遇到的問題，而實驗室檢測必將發(fā)揮越來越大的作用。只要按照科學(xué)、專業(yè)、合理的實驗室檢測方法進行操作，相信我們養(yǎng)豬業(yè)因疾病因素所帶來的困擾會逐步減少。豬病抗體快速檢測卡在現(xiàn)代養(yǎng)豬保健中的作用在現(xiàn)代生產(chǎn)中，為減少的發(fā)生和流行，除加強的隔離消毒，減少環(huán)境中的病毒等生物安全措施外，還必須制定合理的免疫程序，使得豬體內(nèi)長期保持抵抗強毒攻擊的有效抗體，而要了解豬體內(nèi)的有效抗體水平，就必須開展免疫抗體水平監(jiān)測。目前對抗體水平檢測方法很多，如ELISA檢測

8、法、DOT-ELISA檢測法和間接血凝法等，這些檢測技術(shù)雖然具有微量、特異的優(yōu)點，但需要條件較好、設(shè)備齊全的實驗室和經(jīng)過專門訓(xùn)練，具有較高的獸醫(yī)微生物專業(yè)技術(shù)水平的人員操作，1次檢測至少需要4個小時。檢測程序繁瑣，對操作人員要求專業(yè)性高，不適合基層獸醫(yī)站和養(yǎng)殖場使用。免疫抗體金標(biāo)試紙條快速檢測卡是建立在單克隆抗體的基礎(chǔ)上，其檢測結(jié)果的特異性及靈敏度大大提高，而且樣品不必預(yù)處理，也大大降低了實驗過程中的人為誤差和工作強度；實際操作中只需要按照產(chǎn)品說明進行簡單的操作，不需要任何儀器設(shè)備，已廣泛應(yīng)用在醫(yī)學(xué)檢驗和農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)中，適用于不同的檢疫和診斷機構(gòu)，更適合于基層獸醫(yī)站及養(yǎng)殖場，為動物疫病的早期診斷

9、和適時免疫提供了新的技術(shù)手段。1、原理(以豬瘟為例說明)豬瘟抗體快速檢測試紙采用酶聯(lián)免疫原理和膠體金層折技術(shù)制成，快速檢測豬血清(或血液)中的豬瘟抗體，將豬瘟抗原包被在硝酸纖維素膜的檢測線(T)上，兔抗豬瘟抗體包被在硝酸纖維素膜的質(zhì)控線(C)上，用膠體金標(biāo)記的豬瘟抗原干燥后置于玻璃纖維素膜下端。當(dāng)血清加入加樣孔內(nèi)，由于層析的原理，血清開始沿紙條移動擋遇上干燥的金標(biāo)抗原，將其溶解，并帶著金標(biāo)抗原繼續(xù)往上移動，至硝酸纖維素膜的檢測線。如果樣品中有豬瘟抗體存在時，會與玻璃纖維素膜上的金標(biāo)豬瘟抗原和包被在檢測線上的豬瘟抗原，在檢測線(T)上形成一個夾心的免疫復(fù)合物，呈一條紫紅色線。樣品中的抗體越高，色

10、線顏色越深，判定為陽性。如果樣品中沒有豬瘟抗體，在檢測線(T)上沒有色帶出現(xiàn)，判定為陰性。樣品和金標(biāo)抗原繼續(xù)往上移至質(zhì)控線(C)時，此處的兔抗瘟抗體將會同金標(biāo)豬瘟抗原結(jié)合，在質(zhì)控線(C)上形成一條紫紅色線，證明本試紙有效。整個試驗僅需5-20分鐘。操作簡便，快速，靈敏度高，準(zhǔn)確率達98以上，直觀，結(jié)果容易判定?？谔阋?、偽狂犬、藍耳病檢測原理同豬瘟。2、抗體快速檢測卡使用方法(以豬瘟為例說明)21操作步驟2.1.1在檢測卡的加樣孔內(nèi)加入2滴(60-100IIL)待檢的血清或血液樣品(血液樣品最好加滿樣孔)。2.1.2將測試卡平放在桌面上，室溫下靜置5-20分鐘，判斷結(jié)果。超過30分鐘，檢測結(jié)果只

11、能作為參考。2.2結(jié)果判定2.2.1陽性在檢測線(T)和質(zhì)控線(C)同時出現(xiàn)紫紅色線。豬瘟抗體滴度越高，檢測線(T)的顏色越深；若檢測線(T)出現(xiàn)的紫紅色線顏色很淺，則說明為弱陽性。2.2.2陰性只在質(zhì)控線(C)出現(xiàn)一條紫紅色線。2.2.3失效在檢測線(T)和質(zhì)控線(C)都不出現(xiàn)紫紅色線，視為失效。2.3診斷參2.3.1當(dāng)被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤對照卡中豬瘟為1：16（口蹄疫為1：64，偽狂犬為1：40）效價時，說明檢測樣品牛豬瘟抗體的滴度較高，不需進行豬瘟疫苗接種免疫。2.3.2當(dāng)被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤對照卡中豬瘟為1：16（口蹄疫為1：64，偽狂犬1：40）效價時，說明檢測樣

12、品中豬瘟抗體效價不能有效抵抗豬瘟強毒攻擊，這時應(yīng)該及時進行豬瘟疫苗接種。2.3.3當(dāng)被檢樣品檢測線（T）處無明顯色帶出現(xiàn)，說明檢測樣品中無豬瘟抗體或抗體水平很低。如果動物群體健康，應(yīng)當(dāng)及時進行豬瘟疫苗接種；如果動物群體中有個別動物出現(xiàn)疑似豬瘟病時，則可作為診斷豬瘟病的一個參考依據(jù)。2.4檢測范圍2.4.1外調(diào)須逐個檢測，育肥豬按10%15%比例抽檢。？2.4.2自繁檢測，豬瘟效價應(yīng)不低于1：32（口蹄疫為1：128，偽狂犬為1：80），抽檢比例為10%20%。2.4.3出生首日至5日齡，測其母源抗體，首免后15-20天，二免后10-15天進行抗體檢測，檢測比例為3%-5%，豬瘟效價不能低于1：

13、16（口蹄疫為1：64，偽狂犬為1：40）。25注意事項251檢測卡從鋁箔袋取出后應(yīng)盡快使用，受潮后檢測卡將失效。252檢測卡應(yīng)在4qC保存，可保存較長時間。室溫下保存有效期為1年。?253口蹄疫、偽狂犬、藍耳病抗體檢測卡使用方法同豬瘟。?3、檢測卡在現(xiàn)代保健中的作用（以豬瘟為例說明）31檢測卡可用于檢驗豬瘟疫苗的質(zhì)量和確定免疫的最適劑量。如專業(yè)戶或大型場購買大量量的豬瘟疫苗放在自己場里的冰箱冷凍層內(nèi)，每次最好購買同一批號（一般以生產(chǎn)日期定批號）的豬瘟疫苗?？梢詮闹腥〕鲆黄恳呙?，選擇不同日齡的乳豬、小豬、若干頭，分別應(yīng)用2頭份、3頭份、4頭份、5頭份豬瘟疫苗進行免疫接種，免疫15天后采血，用抗

14、體免疫金標(biāo)檢測卡測定抗體滴度。如果各組都能產(chǎn)生抵抗強毒攻擊的免疫抗體時，則可以從中選擇免疫頭份少，抗體滴度高作為本批號疫苗最佳免疫劑量。如果檢測的豬瘟抗體達不到強毒攻擊的最低保護強度時，則應(yīng)當(dāng)檢查是否是疫苗本身問題，還是豬群存在有免疫抑制病毒（如圓環(huán)病毒）的干擾。這時可以采取更換該廠家不同批號的豬瘟疫苗或另選廠家的豬瘟疫苗，再按上述方法進行不同劑量免疫，來確定是否是該批疫苗失效或是免疫抑制病毒的干擾，判定適宜的免疫劑量。32當(dāng)母豬分娩時，用豬瘟抗體免疫金標(biāo)試紙檢測卡檢測母豬的抗體水平。如果在試紙條上只出現(xiàn)1條色線（質(zhì)控線C），說明母豬體內(nèi)的豬瘟抗體滴度已低于抵抗豬瘟強毒攻擊的最低保護強度，母豬應(yīng)當(dāng)及時進行豬瘟疫苗接種，同時乳豬應(yīng)當(dāng)及時采用超前免疫，以免發(fā)瘟病。如果試紙條上出現(xiàn)2條色線，說明豬體內(nèi)的豬瘟抗體滴度較高，可以抵抗豬瘟強毒的攻擊，就不需要進行超前免疫。因為可以通過初乳獲得母源抗體，這時可以按照正常的免疫程序進行預(yù)防注射。33當(dāng)從外地購進大量量的小豬或時，飼養(yǎng)主自己無法了解購買的小豬是否進行過豬瘟疫苗免疫或免疫是否有效，應(yīng)使用檢測卡。為了防止豬瘟病發(fā)生，選擇什么時間再進行豬瘟免疫最適宜時，則可以根據(jù)不同地域、不同日齡的豬，選擇有代表性的豬采血，應(yīng)用豬瘟抗體免疫金標(biāo)檢測卡進行快速檢測。通過檢測結(jié)果，可以了解整個豬群豬瘟抗體的狀況，以便決定是否及時開展免疫及選擇適宜的免疫劑量，