副溶血性弧菌實驗活動風險評估報告

1、副溶血性弧菌實驗活動風險評估報告 一、生物學特性 （一）種類和細菌分型 副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一種嗜鹽性細菌，屬于弧菌屬，為革蘭陰性菌，主要的棲息地在海水中。 副溶血性弧菌有鞭毛（H）、莢膜多糖（K）和菌體（O）抗原，鞭毛（H）抗原為所有菌株共有，無助于分型。目前，已知至少有13種O抗原、65中K抗原，根據(jù)O抗原、K抗原可以進行血清學分型。二）來源 1950年，日本大阪因食用遭腸炎弧菌污染的青魚干而發(fā)生了一起集體食物中毒事件，造成272人中毒，其中20人死亡。1960年，日本東京及千葉縣一帶發(fā)

2、生了多起因食用竹莢魚而導致食物中毒的事件，檢驗后發(fā)現(xiàn)病原菌是腸炎弧菌，引起醫(yī)學界的關(guān)注。對此，厚生省（今為厚生勞動省，是日本中央政府的衛(wèi)生主管單位）將腸炎弧菌列為引起食物中毒的重要病原菌之一，并進行相關(guān)研究。1963年，日本國立預防衛(wèi)生研究所（今為日本國立傳染病的研究所）的福見秀雄和坂崎利一證明了此種細菌應屬于弧菌屬，將學名改定為Vibrio。 三)傳染性 傳染源為病人，本病可長年發(fā)病，多在夏秋季610月，發(fā)生于沿海地區(qū)、海產(chǎn)品大量上市時，常造成集體發(fā)病，臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。集體發(fā)病時往往僅少數(shù)病情嚴重者住院，而多數(shù)未住院者可能成為傳染源，

3、但由于病人僅在疾病初期排菌較多，其后排菌迅速減少，因此，不存在病人散步病菌而造成廣泛流行的說法。另外，有腸道病史的居民或漁民帶菌率偏高，也是傳染源之一。（四）傳播途徑 副溶血性弧菌分布極廣，主要在海水和水產(chǎn)品中，我國華東地區(qū)沿岸的海水的副溶血性弧菌檢出率為47.5%66.5%，海產(chǎn)魚蝦的平均帶菌率為45.6%48.7%，夏季的指標可高達90%以上。 副溶血性弧菌食物中毒，是由進食含有該菌的食物所致。含有該菌的食物主要來自海產(chǎn)品，如墨魚、海魚、海蝦、海蟹、海蜇。其次，為咸菜、熟肉類、禽肉、禽蛋類。中毒原因主要是烹調(diào)時未燒熟煮透或熟制品污染。若食品制作時，熟食被接觸過生海產(chǎn)品的

4、刀、砧板容器等污染，熟食保管不善，則一旦受到副溶血性弧菌污染，其增代時間僅10min，故易于大量繁殖，足以達到致病菌量。（五）易感性 男女老幼均可患病，但以青壯年為多，病后免疫力不強，可重復感染。 （六）潛伏期 潛伏期572h，多數(shù)為10h左右，平均24h。進食被副溶血性弧菌污染的食物后10h左右，會出現(xiàn)上腹部陣發(fā)性絞痛、腹瀉。多數(shù)患者在腹瀉后出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹瀉多為水樣便，重者為粘液便和黏血便。嘔吐、腹瀉嚴重，失水過多者可出現(xiàn)虛脫并伴有血壓下降。本病病程為16d不等，大部分病人發(fā)病后23d恢復正常，一般恢復較快，少數(shù)嚴重病人由于休克、昏迷而死亡。（七）劑量-效應

5、關(guān)系 是否發(fā)生副溶血性弧菌的食物中毒與感染劑量密切相關(guān)。有資料顯示，吞服10萬個以上活菌即可發(fā)病，個別可成敗血癥表現(xiàn)。不同人群感染劑量的多少和出現(xiàn)的臨床癥狀存在個體差異，患者體質(zhì)、免疫力不同，臨床表現(xiàn)輕重不一，呈多型性。山區(qū)、內(nèi)陸居民去沿海地區(qū)而被感染時，病情較重，臨床表現(xiàn)典型；沿海地區(qū)發(fā)病者的病情一般較輕。（八）致病性 目前，認為所有副溶血弧菌分離株都含有不耐熱溶血毒素。這種溶血素是副溶血弧菌所特有的，因此，它的編碼基因不耐熱溶血毒素基因常被用作檢測副溶血弧菌的靶基因，但它并不是一個毒素基因。真正與致病相關(guān)的是副溶血弧菌的耐熱直接溶血素（Thermostable 

6、;direct hemolysin，TDH）和溶血相關(guān)溶血素（Thermostable related hemolysin，TRH）。因此，它們的編碼基因TDH、不耐熱溶血毒素基因常被用作副溶血弧菌致病性檢測的特異基因，具有溶血活性、腸毒素和致死作用，可引起腸袢腫脹、充血和腸液潴留，從而引起腹瀉。TDH對心臟有特異性心臟毒，可引起心房纖維性顫動、期前收縮或心肌損害。（九）變異性 目前，科研論文的檢索資料顯示，副溶血性弧菌具有遺傳多態(tài)性，且環(huán)境分離株的多態(tài)性高于臨床分離株。分子分型研究顯示，不同地區(qū)、不同來源、同一血清型副溶血性弧菌菌株的基因型存在差異，臨

7、床感染分離株與環(huán)境或食品來源分離株的分子分型存在差異。 （十）環(huán)境中的穩(wěn)定性 副溶血性弧菌存貨能力強，在抹布和砧板上生存1個月以上，海水中可存貨47d。室溫下，自來水中，1d內(nèi)死亡；河水、塘水、井水中不超過2d死亡。 (十一）藥物敏感性 對磺胺噻唑、氯霉素敏感；對新霉素、鏈霉素、多粘霉素、呋喃西林中度敏感；對青霉素、磺胺嘧啶耐藥。（十二）消毒劑敏感性 對常用消毒劑抵抗很弱，可被低濃度的酚和煤酚皂溶液殺滅。副溶血性弧菌畏酸，在1%鹽酸中5min死亡。 （十三）物理滅活 對高溫抵抗力小，65時510min即可死亡；5020min

8、、655min或801min即可被殺死。 （十四）在宿主體外存活 副溶血性弧菌體外培養(yǎng)對應營養(yǎng)的要求不高，嗜鹽畏酸，在無鹽培養(yǎng)基上，不能生長，3%6%胨水中繁殖迅速，低于0.5%或高于8%鹽胨水中停止生長。在-20含鹽蛋白胨水中11周，仍能繼續(xù)存活。副溶血性弧菌對酸比較敏感，當PH=6以下時，不能生長；在普通食醋中13min即死亡；在3%6%NaCl溶液中繁殖迅速，每89min為一周期。 (十五)與其他生物和環(huán)境的交互作用 副溶血性弧菌主要生活于海水，存在于海洋魚、蟹、貝殼和甲殼類動物等海水產(chǎn)品中，常見者為蟹類、烏賊、海蜇、魚、黃泥螺等，其次為蛋品、肉類

9、或蔬菜。在鹽腌漬品中也有存在，人類副溶血性弧菌食物中毒主要通過食用上述食品引起。（十六）預防和治療方案 1.副溶血性弧菌的預防控制 應采取綜合性措施防治集體食物中毒的發(fā)生。經(jīng)過調(diào)查，加工海產(chǎn)品的案板上副溶血性弧菌的檢出率為87.9%。因此，對加工海產(chǎn)品的器具必須進行嚴格清洗、消毒；海產(chǎn)品一定要燒熟煮透，加工過程中生、熟用具要分開；烹調(diào)和調(diào)制海產(chǎn)品拼盤時可加適量食醋；食品燒熟至食用的放置時間不要超過4h。 2.副溶血性弧菌的治療 （1）藥物治療 本病一般呈自限性，輕者患者可不用抗菌藥物，對病情較重而伴有高熱或黏液血便的患者，可選用氟喹諾酮類、頭孢

10、菌素類、氨基糖苷類、氯霉素類抗生素。也可根據(jù)藥物敏感試驗，選用抗菌藥物。至癥狀消失34d后停藥。 （2）支持及對癥治療 視病情輸入適量生理鹽水或葡萄糖鹽水。對輕度和中度脫水者可采用口服補鹽液（Oral rehydration salts，ORS）輕度脫水者的ORS按50mL/kg體重，中度脫水者的ORS按100mL/kg體重，4h內(nèi)服完。重度脫水者最好先靜脈快速補液，待病情好轉(zhuǎn)后再改為口服補液。腹痛時給解痙止痛劑，如阿托品、山莨菪堿，血壓下降時，除補充血容量，糾正酸中毒外，尚可加用多巴胺、間羥胺等升壓藥。二、實驗室相關(guān)活動風險評估與控制 （一）

11、實驗室感染性因子的種類、來源和危害 1.感染性因子的種類 副溶血性弧菌主要的致病因子是耐熱直接溶血素（TDH）和溶血相關(guān)溶血素（TRH），還可產(chǎn)生黏附素和黏液素酶等多種毒力因子。根據(jù)其生物學特性和中心實驗室檢測能力范圍，可能的感染因子為副溶血性弧菌病原體本身。 2.感染性因子的來源 （1）食物中毒事件中采集的食物、糞便等可疑標本，日常檢測的食品、水等樣品。 （2）樣本采集和檢測過程中涉及的所有實驗場所。 （3）實驗室檢驗過程中操作中可能產(chǎn)生的含病原體的氣溶膠。 3.感染性因子可能造成的危害 （1）被污染的實驗器材、

12、器皿等對實驗室環(huán)境造成污染。 （2）實驗室廢棄物對環(huán)境造成污染。 （3）實驗室人員暴露后感染。 （4）實驗室含病原菌的氣溶膠對實驗室環(huán)境造成的污染。 副溶血性弧菌傳播途徑主要通過糞-口途徑感染人體，在實驗室工作中，各種原因?qū)е碌囊后w飛濺或微滴濺出，污染器物表面或地面等，通過手的接觸，造成意外食入感染是較可能的實驗室獲得性感染方式。二）實驗活動風險識別與風險控制 1.實驗方法 （1）主要風險點識別 未采用國家標準、行業(yè)標準進行檢測；使用新的或變更過的國家標準或行業(yè)標準前，未經(jīng)技術(shù)確認，可能存在安全風險。 （2）風險控

13、制措施 盡量采用國家標準、行業(yè)標準進行檢測，或使用經(jīng)過充分驗證的實驗方法；在使用新的或變更過的國家標準、行業(yè)標準前，必須經(jīng)過嚴格的技術(shù)確認。2.樣品采集 （1）食品和水樣等樣品采集 主要實驗設備和器材 采樣剪刀或鑷子、密閉盛樣容器等。 主要風險點識別 食品和水樣等樣品中可能存在感染性病原體，采樣人員采樣不規(guī)范、盛裝容器密合不嚴、玻璃容器意外破損等，可導致樣品濺灑、溢出、滲漏而污染環(huán)境；同時，玻璃容器意外破損和剪刀、鑷子的使用不當，存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風險。 風險控制措施 食品和水樣等樣品采集容器必須防水、防

14、漏，容器外面要包裹足量的吸收性材料，以便容器被打破或泄漏時，能吸收溢出的所有液體。在使用剪刀、鑷子、玻璃容器等銳器時必須進行規(guī)范操作，做好防護，防止刺傷或劃傷。 (2)食物中毒事件中糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物、剩余食物等的采集 主要實驗設備和器材 PV螺旋蓋采便盒（管）、玻璃試管或培養(yǎng)皿、采樣棉簽等。 主要風險點識別 糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物樣品中可能存在感染性病原體，采集過程存在樣本濺出并形成小顆粒氣溶膠；工作人員采樣不規(guī)范、個人防護不到位，導致環(huán)境污染和人員感染；破碎玻璃試管或培養(yǎng)皿存在刺傷或劃傷采樣人員的隱患。 風

15、險控制措施 采集糞便和嘔吐物等樣品時，采樣人員應戴手套、口罩、防護眼鏡；采樣時動作輕柔，采樣容器盡量使用外螺旋蓋塑料管；發(fā)生污染時，應立即進行消毒處理。 （3）血液的采集 主要所用器材 一次性采血針和真空采血管、消毒棉簽及一次性利器盒。 主要風險識別點 血液樣品可能存在感染性病原體，采血管封蓋意外脫落或注射器內(nèi)殘留血滴落，造成血樣濺灑從而污染人員或環(huán)境；采血針頭存在意外或劃傷采樣人員的風險。 風險控制措施 使用一次性采血針和真空采血管，采樣人員經(jīng)過正規(guī)采血培訓，并熟練掌握采血技巧。采血前做好個人防護（防護服、乳膠手

16、套、口罩）；認真、仔細、謹慎操作，抽血后的針頭直接放入利器盒內(nèi)，禁止用手直接接觸使用后的針頭重新套上針頭套；采好血后直立于試管架中，防止倒翻；消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專用袋中，統(tǒng)一進行消毒處理。3.樣品的包裝和運送 （1）主要實驗設備和器材 真空密封采血管、外螺旋蓋玻璃瓶、PV螺旋蓋采樣罐（管）主容器、95千帕樣品運輸罐、B類標本運輸箱（UN3373冷藏箱）、運送車輛。 （2）主要風險點識別 盛樣容器不堅固、密合不嚴，有可能存在樣品濺灑、溢出、滲漏；使用不合格運輸包裝進行運送，存在玻璃容器或包裝容器意外破損、刺傷或劃傷采送樣人員的隱患。 

17、（3）風險控制措施 盛裝樣品容器必須堅固，不易破碎，盡可能選用塑料制品，采樣后必須檢查容器的密合性。樣品嚴格按照3層包裝和運送，由采樣人員專車運回實驗室。 4.樣品接受和前處理 (1)主要實驗設備和器材 剪刀、鑷子、振蕩器、均質(zhì)器、均質(zhì)袋、離心機、生物安全柜和潔凈工作臺。 （2）主要風險點識別 樣品管理員未按實驗室«樣品管理程序»（XJK/CX32)要求接收樣品；樣品前處理時打開糞便或嘔吐物等感染性樣品包裝的動作過猛，會造成樣品側(cè)翻；對食品等固形物樣品進行剪切時，操作不慎而發(fā)生手剪傷；均質(zhì)器均質(zhì)樣本時，發(fā)生均質(zhì)袋破

18、裂；離心操作時，離心管破裂等發(fā)生意外情況。 （3）風險控制措施 樣本接收必須在專用的區(qū)域進行，合同評審人員和收樣人員嚴格按照«樣品管理程序»（XJK/CX32）要求交接樣品，不得擅自打開樣品包裝，收樣后及時洗手。 開始檢測前，對盛裝感染性材料樣品的容器，必須在生物安全柜中緩慢打開，食品和水樣必須在潔凈工作室內(nèi)打開，開啟容器時管口不能對著操作者。 對食品等固體物樣品取樣，要小心使用剪刀和鑷子，盡可能剪取食物可食部分，以防止樣品均質(zhì)時堅硬物質(zhì)刺破均質(zhì)袋，從而造成樣液濺灑。對含有感染性樣品進行離心振蕩時，必須將離心蓋封嚴實，并關(guān)上離心機機蓋

19、。 實驗室應配備應急藥箱，發(fā)生手剪傷等意外事件時，應立即進行消毒包扎處理。 當發(fā)生離心管或均質(zhì)袋意外破裂、濺出時，應及時對所有涉及污染的部位進行消毒處理，同時，按«二級生物安全實驗室建設與管理»中的“實驗室意外事故的處置”章節(jié)處置。5.樣本檢測過程 （1）主要實驗設備和器材 培養(yǎng)箱、水浴箱、細菌鑒定和藥敏測試儀（ATB儀）、全自動快速致病菌檢測儀（miniVIDAS）、PCR儀、凝膠成像儀、生物安全柜、金屬浴、振蕩器、離心機及離心管、吸管和試管、移液器及吸頭、接種環(huán)、培養(yǎng)皿、無水乙醇、溴化乙啶等。 （2）主要風險點識別

20、60;對食品、水樣、食物中毒事件中糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物、剩余食物等樣品進行副溶血性弧菌分離鑒定、生化試驗、藥敏試驗、核酸提取等實驗活動均涉及活菌操作，在檢測過程中移液、混勻震蕩、劃線分離、涂片染色、離心等操作都可產(chǎn)生氣溶膠，雖然副溶血性弧菌不通過呼吸道感染，但由于樣品可能含有其他未知的病原體，因此，也不應忽視。 實驗過程中玻璃器材意外破碎或滲漏、離心操作時離心管意外破裂等事故，可造成液體濺出污染設備表面或工作臺面等環(huán)境，間接污染操作者皮膚、黏膜,通過糞-口途徑食入一定量的副溶血性弧菌導致實驗室人員感染。 提取核酸時使用的無水乙醇屬易燃易爆物質(zhì)，溴化乙啶具有強烈致

21、癌性。 （3）風險控制措施 開展檢測時，檢測人員應按照級生物安全防護要求做好自身防護措施。若接觸可疑程度較大的上述感染性標本，則工作人員應戴雙層（兩副）手套以增加保護。 進行食品、水樣等樣品制備、均質(zhì)等操作，應在潔凈實驗室內(nèi)進行；糞便、嘔吐物等所有具有感染性材料的操作必須在生物安全柜內(nèi)進行，必須保證潔凈實驗室和生物安全柜處于正常運行狀態(tài)。進行活菌操作時，應在安全柜工作臺面上放置一塊浸有消毒液的紗布或吸有消毒液的紙，避免感染性物質(zhì)的擴散。 涉及高濃度或大體積的感染性的材料離心操作時，應選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機離心。若有意外污染，應及時進行消毒、沖洗并

22、擦干飛濺出的液體。實驗結(jié)束后必須對桌面、臺面及時進行消毒處理。 嚴禁用嘴吸液，必須使用移液器或吸球移取樣液。使用吸管和移液器操作時動作要輕緩，所有吸管應用棉塞，移液頭盡可能使用帶濾芯的，以減少對移液器或吸球的污染。旋蓋及使用移液器操作時，動作要輕緩。 為避免接種液從接種環(huán)上低落，接種環(huán)的直徑為23mm并完全封閉，手柄的長度應小于6cm以最大限度減少振動。盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，避免在酒精燈的明火上加熱以防止感染性物質(zhì)的爆濺。 盡可能避免使用注射器及其他銳器的器具，嚴禁用帶有注射針頭注射器吸液，更不可把注射器當吸管用。用過的銳器應直接放入利器盒。針頭

23、經(jīng)消毒后廢棄，禁止將使用后的針頭重新套上針頭套。盡可能以塑料器皿代替玻璃器皿，若必須使用玻璃器皿，只能用實驗室級玻璃（硼硅酸鹽）。任何破碎或有紋路的器皿都應被丟棄。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片、玻璃碎片等銳器。 分子生物學檢測實驗中使用的無水乙醇屬易燃易爆物質(zhì)，應放置在通風柜中從而遠離熱源；溴化乙啶屬有毒物質(zhì)，需專人專管。 在任何可能導致潛在的傳染性物質(zhì)濺出的操作過程中，應保護好面部、眼睛和嘴；發(fā)生液體濺出、溢出等事故，或明顯暴露于傳染源時，則應立即向科室負責人報告，及時處理并對事故的發(fā)生于處理作記錄，必要時進行適當?shù)尼t(yī)學評估、觀察、治療，并保留書面記錄。 

24、6.菌株使用、保存和運輸 （1）主要實驗設備和器材 接種針(環(huán)）、菌株保存管、生物安全柜、95千帕樣品運輸罐、B類標本運輸箱（UN3373冷藏箱）和運送車輛。 （2）主要風險點識別 工作人員陽性菌株保菌操作不規(guī)范、個人防護不到位、磁珠管等保存容器意外破損、磁珠掉落等會導致病原菌污染實驗室環(huán)境和實驗人員。 副溶血性弧菌使用和保存未按照«菌（毒）種管理規(guī)程»（XJK/CX37）要求實施管理，存在菌株被惡意使用及污染環(huán)境等生物安全隱患。 副溶血性弧菌陽性菌株上送等運輸過程中，若使用不合格包裝進行運輸、容器密封不嚴，或運輸

25、工具無安全保障，則可能導致運輸過程中包裝容器意外破損，從而產(chǎn)生病原體的擴散。 （3）風險控制措施 副溶血性弧菌分離純化及保菌操作應在生物安全柜內(nèi)進行。若發(fā)生磁珠管破損、磁珠掉落時，則應立刻對所涉及的器物進行消毒處理，并按«二級生物安全實驗室建設與管理»中“意外事故處理方法”章節(jié)進行規(guī)范處置。 副溶血性弧菌標準菌株的使用、保存嚴格按照«菌（毒）種管理規(guī)程»（XJK/CX37）要求進行操作，嚴格實行雙人雙鎖保管，嚴防菌株被惡意使用而造成的生物危害。 副溶血性弧菌陽性菌株在上送等運輸過程中，嚴格執(zhí)行規(guī)范3層包裝，攜帶“可

26、感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸許可證”，由專車運送，并由專業(yè)人員全程護送。7.實驗室的清潔和消毒 （1）主要實驗設備和器材 7075%的酒精、施康清洗消毒液等。 （2）主要風險點識別 工作完畢后，若不及時對工作臺面、生物安全柜進行消毒，則有可能會對下次操作人員造成污染或感染。（3）風險控制措施 工作完畢后，及時對檢測所涉及的工作臺面、地面和生物安全柜進行消毒，使用稀釋100倍的施康清洗消毒液擦拭，用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%75%的酒精擦拭消毒。待實驗和消毒完畢后，先脫去手套，再脫去防護服，并正確用肥

27、皂和流水洗手。8.廢棄物處置 （1）主要實驗設備和器材 醫(yī)療廢棄物專用袋、硬質(zhì)耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。 （2）主要風險點識別 樣品采集和實驗檢測過程中產(chǎn)生的感染性廢棄物，如食品、水樣等樣品，食品加工環(huán)節(jié)涂抹物、糞便、嘔吐物標本，病原菌的培養(yǎng)基和陽性菌株等所有實驗過程涉及的用品，釋放前未按照規(guī)范要求處理，導致病原體外泄從而污染環(huán)境或人員。 樣品采集和實驗檢測過程產(chǎn)生的被病原微生物污染的損傷性廢棄物，如一次性使用采血用具、載玻片、玻璃試管、玻璃安瓶、培養(yǎng)皿等未按照規(guī)范要求處理，存在意外刺傷或劃傷工作人員的隱患。 （3）風險控制

28、措施 實驗室廢棄物處理應遵循«醫(yī)療廢棄物管理條例»«醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)醫(yī)療廢棄物管理辦法»«醫(yī)療廢物專用包裝袋、容器和警示標志標準»等相關(guān)法規(guī)要求，分類收集，規(guī)范處置。所有損傷性廢棄物必須放置于有警示標識的硬質(zhì)、防漏、防銳器刺破的專用利器盒中；所有感染性廢棄物必須放置于有警示標識的醫(yī)療廢物專用包裝袋中，使用高效消毒液浸泡或高溫高壓滅菌后集中處理后，集中存放至中心指定的醫(yī)療廢棄室，由有資質(zhì)的醫(yī)療廢棄物處理單位上門收集并集中處置。同時，做好廢棄物處置交接記錄，所有相關(guān)記錄應定期整理歸檔。三）實驗過程中其他風險識別和控制 1.

29、電力 （1）主要風險點識別 副溶血性弧菌的分離和鑒定對溫度有明確要求，實驗過程中突然間隙斷電或電力供應不穩(wěn)定會對檢測結(jié)果的準確性帶來一定的影響。實驗室沒有布置雙路供電或者相關(guān)儀器未配備不間斷電源，一旦電力供應發(fā)生故障，就會導致設備突然停止工作，存在實驗活動被迫終止等所帶來的相關(guān)安全風險。 （2）預防控制措施 盡可能在實驗室布置雙路供電，若客觀條件受限制，則對副溶血性弧菌檢測所用關(guān)鍵儀器需配備應急電源（UPS）。 2.電氣操作 （1）主要風險點識別 實驗室活動涉及的電氣操作，包括實驗室工作區(qū)內(nèi)電氣設備的啟動、關(guān)閉、安裝和維修；

30、設備層內(nèi)UPS、空調(diào)機組等電氣設備的啟動、關(guān)閉和維修等。這些電氣操作的過程可能存在觸電、電擊、造成電氣故障等風險。 （2）預防控制措施 電氣設備的設計及制造符合相關(guān)安全標準的要求。實驗室工作區(qū)內(nèi)若有380V電源插座，則需明確標識，并由有資質(zhì)的專業(yè)人員進行操作。 新的、改裝過的或修理過的電氣設備在未經(jīng)專業(yè)人員（如有資質(zhì)的電工)完成電氣安全測試和設備符合安全使用要求之前，不允許使用。電氣設備使用人員接受正確操作的培訓，操作方式不降低電氣安全性。電氣設備使用人員要定期檢查設備中可能引起電氣故障的破損。只有專業(yè)人員可從事電氣設備和電路工作。禁止未經(jīng)授權(quán)的工作。 

31、采取措施對設備去污染，以降低維護人員感染的風險。 3.實驗室給排水設施設備 （1）風險點識別 實驗室含有給排水的設施設備，包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。當管道意外破裂、排水管道阻塞時，可能導致感染性材料溢出，有污染實驗人員和環(huán)境的風險。 (2)預防控制措施 實驗室產(chǎn)生的所有染菌物及器具，必須先經(jīng)高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，洗消產(chǎn)生的污水集中排入中心污水池進行消毒處理，嚴禁直接排放，及時發(fā)現(xiàn)安全隱患。4.實驗室設施設備管道 （1）風險點識別 實驗室設施設備管道穿越維護結(jié)構(gòu)的部位可能存在密封不嚴的問題，當感

32、染性材料溢出時，有污染環(huán)境的風險。 （2）預防控制措施 所有管道穿越維護結(jié)構(gòu)的部位應嚴格密封，定期進行檢查檢測，避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境。 5.主要檢測儀器設備 （1）ATB儀（細菌鑒定和藥敏測試儀）、PCR儀、核酸提取儀、凝膠成像儀等設備 主要風險點識別 對疑似副溶血性弧菌鑒定要用到ATB儀進行生化鑒定及藥敏試驗，或用核酸提取儀、定量熒光PCR儀進行毒力基因檢測。使用這些設備時，如果不按操作規(guī)程進行規(guī)范操作，則會導致病原體濺出、滲漏而污染試驗環(huán)境。 預防控制措施 嚴格按ATB儀、核酸提取儀、PCR儀、凝膠成

33、像儀等設備操作規(guī)程操作和維護，每次使用完畢后對設備箱體及可能污染的實驗環(huán)境進行消毒。 （1）離心機 主要風險點識別 未正確配備密閉蓋離心機、密封頭的真空采血管、耐壓螺旋蓋離心管，高速離心時可產(chǎn)生氣溶膠擴散；離心血樣時沒有做好平衡，可能存在離心管破裂、離心機管蓋脫落、血樣污染離心轉(zhuǎn)子和離心腔的風險。 預防控制措施 實驗室配備密閉蓋離心機、密封頭的真空采血管、耐壓螺旋蓋離心管；離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力；規(guī)范正確操作；每次使用后做好清潔消毒和使用維護記錄，并定期進行功能檢查，確保離心機性能正常。6.生物安全設施設備 （1）

34、生物安全柜 主要風險點識別 沒有按照設備操作規(guī)程或使用說明書進行操作、維護，使生物安全柜的氣溶膠防護效果明顯降低，甚至消失，失去安全防護效果。設備長時間使用或未及時更換HEPA過濾膜，可出現(xiàn)工作窗口氣流速度降低或流向紊亂等功能失常狀況；生物安全柜使用后未進行徹底消毒處理，對于清潔、維護人員將會產(chǎn)生污染。設備長期關(guān)停，將會使部分電器元件老化從而失去正常功能。對于設備移位、碰撞受損等沒有及時進行性能檢測。 預防控制措施 正確選配生物安全柜，使用人員接受相關(guān)操作、維護培訓，做到規(guī)范 使用和維護。每月進行空氣沉降菌檢測，每年請有資質(zhì)的服務機構(gòu)對生物安全

35、柜的風速、氣流、塵埃粒子數(shù)、紫外線強度等主要性能進行檢測，確保其功能正常。對于生物安全柜使用，一旦造成污染，則應及時進行消毒。 （2）高壓滅菌器 主要風險點識別 若沒有正確配備高壓滅菌器，則存在氣溶膠污染環(huán)境的隱患；沒有按照設備操作規(guī)程或使用說明書進行操作、維護，可能使高壓滅菌器效果明顯降低或失效，失去去污染和無害化的作用；壓力鍋長時間使用又不定期監(jiān)測滅菌效果，對壓力容器的滅菌效果無從考證，存在滅菌不徹底引起污染的隱患；壓力鍋長期關(guān)停期間，如果不及時排干鍋體水分，將會使內(nèi)部器件老化從而失去正常功能。 預防控制措施 采用下排式高壓滅菌器，防止氣溶

36、膠污染。操作人員持證上崗，規(guī)范正確操作，定期維護，確保高壓滅菌器性能正常；定期檢定與核查，做好使用記錄。使用壓力滅菌器每次監(jiān)測化學指示物，監(jiān)控記錄溫度、壓力、時間等滅菌參數(shù)，每周進行生物監(jiān)測，以保證滅菌質(zhì)量。（3）個人防護用品 主要風險點識別 實驗室若不提供足夠數(shù)量的、符合質(zhì)量要求的防護服、一次性乳膠手套、口罩等，使用大小不合適的個人防護用品，個人防護用品穿戴、脫卸的程序、方法不符合要求，均可能造成人員感染或環(huán)境污染。 預防控制措施 選擇正規(guī)、符合質(zhì)量要求的防護用品，使用前進行必要的培訓，按照規(guī)定的程序正確使用、脫卸，及時更換受污染和破損的防護裝備，避免

37、使用有破損、缺陷和過期的產(chǎn)品。 （4）應急救治設施和用品 主要風險點識別 實驗室若沒有配備洗眼器、應急藥箱等必要的應急設施和物品，或配備的急救用品種類不全、不合適或過期，則會導致急用時無法發(fā)揮作用。 預防控制措施 在實驗室內(nèi)正確配備洗眼器，確保功能正常。配備的75%乙醇、碘附或其他消毒劑、創(chuàng)可貼等急救物品與實驗活動相適應，并在有效期內(nèi)使用，由專人負責管理，定期維護、清理和更新。 (5)消毒滅菌劑 主要風險點識別 消毒產(chǎn)品無生產(chǎn)許可證、過期、配制方法或濃度不正確，種類選擇不合理，都將會導致消毒效果降低，生物滅活能力降

38、低或?qū)ξ锲犯g性增加，對皮膚造成刺激等問題。 預防控制措施 選擇符合國家標準的正規(guī)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，選擇合適的消毒劑，按照規(guī)定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度（劑量）進行消毒，避免使用過期產(chǎn)品；消毒過程中消毒人員應做好必要的個體防護，防止發(fā)生意外。根據(jù)副溶血性弧菌特點，選用70%75%酒精和稀釋1025倍、50100倍、200倍的施康消毒劑（主要成分為次氯酸鈉）作為實驗室常用消毒劑。7.管理體系的風險 （1）主要風險點識別 管理體系（包括應急預案）是否健全和完善，是否符合實際管理要求，程序文件、作業(yè)指導書和操作規(guī)程是否科學和具有可操作性，是能否能確保生物安全

39、的主要因素。如果組織結(jié)構(gòu)不健全、設置不合理，體系文件與實際工作不匹配，以及部門職責不清或銜接不當?shù)?，則都可能帶來安全風險。 （2）預防控制措施 定期開展對管理體系的評審，發(fā)現(xiàn)問題及時修訂、完善，以確保生物安全管理體系持續(xù)有效的運行。 （四）工作人員的風險評估與預防控制措施 1.人員數(shù)量和素質(zhì) （1）人員數(shù)量 主要風險點識別 人員過少會因缺少相互提示監(jiān)督或因工作量增大而導致操作過程中工作失誤增加，風險增加。 預防控制措施 采樣和檢測人員的數(shù)量應與工作量相匹配，盡量有2名工作人員同時進行采樣和檢測工作。（2）

40、人員結(jié)構(gòu) 主要風險點識別 新進人員沒有高資歷人員帶教操作，不能很好應對意外事件，風險增加。 預防控制措施 實驗室檢測人員的年齡和資歷結(jié)構(gòu)應配備合理，新進人員應由高資歷人員帶教或監(jiān)督操作。 （3）職業(yè)操守 主要風險點識別 若責任心不強的人員參與該項工作，則產(chǎn)生生物危害而危及人員安全、環(huán)境安全與社會安定的可能性較大。 預防控制措施 加強職業(yè)道德教育，培養(yǎng)工作責任心。 2.健康管理  主要風險點識別 健康狀況主要包括生理、心理素質(zhì)與免疫狀態(tài)。若實驗室檢測相關(guān)人員出現(xiàn)呼吸道

41、或消化道感染癥狀、機體免疫力低下等其他不合適工作的狀況，則職業(yè)暴露風險會增加。 預防控制措施 建立健康申報制度，遇有呼吸道或消化道感染及其他不適合工作的情況，則及時向科室負責人報告并暫停工作。 3.人員資質(zhì)  （1）主要風險點識別 檢測人員不具備衛(wèi)生檢測相關(guān)學歷教育背景，不熟悉檢測方法及操作規(guī)范，未執(zhí)行相關(guān)的專業(yè)知識培訓和考核并沒有獲得上崗證，就無法保證工作質(zhì)量和安全。 （2）預防控制措施 檢測人員必須由檢驗或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，經(jīng)過上崗培訓和考核合格，持證上崗。 4.生物安全培訓要求（1）主要風險點識別

42、60;檢測人員、輔助人員、后勤保障人員、進修實習人員上崗前沒有接受嚴格的生物安全，以及相關(guān)生物安全設備操作的技術(shù)培訓，易造成生物安全事故的發(fā)生。 （2）預防控制措施 檢測人員、輔助人員、后勤保障人員每年參加本中心組織的生物安全知識或生物安全操作技術(shù)培訓、考核。上崗前，熟練掌握生物安全儀器設備、設施操作技術(shù)，具備相關(guān)的安全防護能力。進修實習人員參與實驗活動前必須進行生物安全知識的培訓，在帶教老師的監(jiān)督下工作。 5.應急事件處理能力 （1）主要風險點識別 實驗人員上崗前沒有接受實驗室意外事故處理、職業(yè)暴露后預防等突發(fā)事件處置的培訓，一旦發(fā)生意外事件

43、，就不能有效地進行早期處理和控制生物安全事件。 (2)預防控制措施 實驗室工作人員必須嚴格按照«實驗室意外事故和職業(yè)性疾病報告制度»和«病原微生物生物安全應急處置技術(shù)方案»中規(guī)定的要求進行應急事件的處置，強化職業(yè)暴露的應急處理能力。 （五）實驗室非常規(guī)活動中的風險評估與預防控制措施 1.主要的實驗室非常規(guī)活動 （1）實驗室外專業(yè)人員對實驗室設施設備的維護、維修、檢定/校準、檢測驗證（如主要設施設備的檢測驗證）和更換（如高效過濾器等的更換）等。 （2）實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環(huán)境的保潔、實

44、驗器材的清洗消毒。 （3）實驗室外人員參觀實驗室和上級部門對實驗室的檢查。 （4)任何其他人員需要進入實驗室從事實驗活動外的行為。濾膜或高效過濾器時，應先對高效過濾器、HEPA過濾膜等作原位消毒后，專業(yè)人員才進行更換。 （6）為確保自己和他人的安全，禁止未穿防護服的人員隨意進出實驗室的防護區(qū)域。7）離開實驗室前，必須正確洗手。 （六）被誤用和惡意使用的風險與預防控制措施 1.主要風險點識別 陽性標本未明確標識，未嚴格實行雙人雙鎖管理，實驗活動結(jié)束后不及時對操作場所進行消毒，工作人員在不知情的情況下可能可能誤用標本、實驗材料和設施設備等

45、，導致人員感染和實驗室環(huán)境污染、人員受傷或設施設備損壞等事故。 2.預防控制措施 （1）實行嚴格的人員準入和持證上崗制度。 （2）所有獲得批準進入實驗室工作的人員，必須嚴格按規(guī)程操作實驗材料和設施設備,以及其他一切實驗活動，不得私自動用實驗室內(nèi)任何不熟悉物品。 （3）發(fā)生事故時必須及時報告并作必要的處理和記錄。 （4）實驗所用材料和試劑等必須有明確的標識。 （5）陽性標本實施嚴格的雙人雙鎖管理，上送的陽性標本必須經(jīng)中心蓋章批準，攜帶“可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸許可證”，由專車運送，并由專業(yè)人員全程護送。

46、0;（七）相關(guān)實驗室已發(fā)生的事故分析和從中得到的啟示 目前，尚未有副溶血性弧菌檢測導致實驗室人員感染的相關(guān)報道，但任何一種病原微生物都有可能導致實驗室感染的風險。因此，工作人員應嚴格遵守實驗室相關(guān)規(guī)定，做好個人防護和規(guī)范操作，規(guī)避職業(yè)暴露風險。三、實驗室理化因素風險評估及安全防護措施 （一）紫外線 1.主要風險點識別 二級生物安全實驗室、潔凈實驗室內(nèi)傳遞窗、生物安全柜均使用紫外線燈進行物體表面消毒。 紫外線波長250280nm，主要影響眼睛和皮膚，引起急性眼角膜炎和結(jié)膜炎、慢性白內(nèi)障等眼疾病，還可誘發(fā)皮膚癌。紫外線燈開啟時，人員在不知情的情況下

47、進入可受到傷害。 2.安全防護措施 在實驗室工作應避免紫外線直接照射人體，特別是眼部。生物安全柜表面應張貼紫外線危害的標識，提醒實驗人員小心紫外線危害。在進行紫外線消毒時，實驗人員盡量遠離消毒區(qū)域。如此，基本可以規(guī)避紫外線對人體的危害。 （二） 輻射 1.主要風險點識別 實驗室籌建選址時未對周圍輻射源進行排查，使用含輻射的儀器未嚴格進行管理，存在輻射源或輻射事故間接導致病原微生物屏障系統(tǒng)的隱患。 2.安全防護措施 實驗室籌建選址時對周邊建筑群可能存在的輻射源進行嚴格排查，實驗室不使用有輻射源的儀器設備，輻射造成的風

48、險基本不予考慮。 （三） 施康清洗消毒劑 1.主要風險點識別 施康清洗消毒劑屬于含氯消毒劑，有效氯的含量為4.55%5.55%，次氯酸鈉為主要殺菌因子。含氯的消毒液會殘留在空氣中不揮發(fā)，長期使用會使人感到頭疼、惡心，刺激黏膜，對于有過敏體質(zhì)的人，還容易引發(fā)過敏、哮喘疾病等。高濃度的含氯消毒劑對人的呼吸道黏膜和皮膚有明顯的刺激作用，可使人流淚、咳嗽，并刺激皮膚和粘膜，嚴 重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒者出現(xiàn)躁動、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀，甚至因窒息而死。 2.安全防護措施 按照使用說明，根據(jù)消毒對象不同而配制不同的稀釋倍數(shù)，避

49、免使用不必要的高濃度的消毒液，稀釋和使用時戴好手套，消毒后可及時開窗通風，基本可規(guī)避消毒液對人體的危害。 （四）其他 1.主要風險點識別 實驗室內(nèi)的照明和聲音（生物安全柜等）有可能因強光和噪聲對人員造成損害。 2.安全防護措施 對實驗室的照明和聲音等參數(shù)進行檢測，確保合格，避免強光和噪聲對人員的損害。 四、實驗室火災風險評估與預防控制措施 1.主要風險點識別  （1）超負荷用電，電線過長 （2）電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良，如電纜的絕緣層破舊或損壞。 （3）用火不當?shù)纫l(fā)火災。

50、0;（4）儀器設備在不使用時未關(guān)閉電源。 （5）使用的儀器設備不是專為實驗室環(huán)境設計。 （6）易燃、易爆品處理、保存不當。 （7）不相容化學品沒有正確隔離。 （8）在易燃物品和蒸汽附近有能產(chǎn)生火花的設備。 （9）通風系統(tǒng)不當或不充分。 2.預防控制措施 實驗室采取以下預防控制措施避免火災發(fā)生，保證發(fā)生火災后能夠安全撤離實驗室。 （1）定期檢查電器插座、電線絕緣層是否完好，保證用電負荷，對易燃、易爆等危險品進行有效區(qū)域隔離。 （2）實驗室配備滅火器。放置在易取的地點，擺放部位張貼滅火器標識。該滅火器用于撲滅

51、可控制的火災，幫助人員撤離火場；對滅火器進行定期檢查和維護，確保其有效使用。 （3）實驗室需裝設應急燈，所有出口都有黑暗中可見的“緊急出口”標識；當出現(xiàn)緊急狀況時，實驗室所有出口的鎖必須處于開啟狀態(tài)，出口設計應保證不經(jīng)過高危險區(qū)域就能逃脫，所有出口都能通向一個開放空間。 （4）走廊、流通區(qū)域不得放置障礙物，以不受人員流動和滅火設備移動的影響。 （5）在實驗室工作區(qū)顯著位置張貼火警電話標識。實驗室每年對工作人員進行消防知識培訓，包括消防器材的使用、火災發(fā)生時的應急行動等。 五、自然災害風險評估與安全防護措施 自然災害可能導致的實驗室緊急狀況主要包

52、括水災和地震等。 （一） 水災 1.主要風險點識別 水災可能導致實驗室維護結(jié)構(gòu)和設施損壞，實驗室內(nèi)感染性材料隨水外溢。2.安全防護措施 （1）在安全手冊中制定«實驗室緊急事件應急預案»，并對所有實驗室人員培訓。 （2）實驗室一旦發(fā)生水災報警時，應立刻停止工作。首先，考慮實驗室內(nèi)感染性物質(zhì)和人員的轉(zhuǎn)移。實驗室負責人、中心主任根據(jù)條件及時采取對策，第一時間聯(lián)系相關(guān)消防人員。消防人員應有防護措施，并在受過訓練的實驗室工作人員陪同下，進入實驗室完成菌毒種和人員的安全轉(zhuǎn)移工作。 （二）地震 1.主要風險點

53、識別 發(fā)生地震等自然災害會導致實驗室維護結(jié)構(gòu)和設施損壞，存在人員傷害和實驗室感染性材料的風險外溢。     2.安全防護措施 實驗室應采取措施降低自然災害帶來的風險，保證災害發(fā)生后能夠安全撤離實驗室，減少對人員和環(huán)境的影響。發(fā)生地震后，首先，設立距實驗室維護結(jié)構(gòu)20m范圍內(nèi)的封鎖區(qū)。其次，對封鎖區(qū)進行消毒，然后由專業(yè)人員在做好個人防護的前提下對實驗室內(nèi)部環(huán)境邊消毒邊清理，清理到樣品保存地點。如果保藏樣品的容器沒有被破壞，可把它安全轉(zhuǎn)移到其他安全的實驗室存放。如果保藏樣品的容器已被破壞和發(fā)生外溢，應立即用可靠方法進行徹底消毒滅

54、菌。 六、 生物安全及其他緊急事件（事故）處理預案 （一） 實驗室生物安全事件（事故）處理措施 （1）當生物安全柜或潔凈實驗室出現(xiàn)持續(xù)正壓時，室內(nèi)人員應立即停止操作，通知運行保障人員采取措施恢復負壓。如果不能及時恢復和保持負壓，則應停止實驗，按規(guī)程退出。發(fā)生此類事故或發(fā)生意外停電，造成具有傳染性物質(zhì)暴露潛在危險的事故和污染時，工作人員除了采取緊急措施外，立即報告實驗室安全負責人，組織對實驗室進行終末消毒。 （2）在離心過程中離心管破裂時，應馬上關(guān)閉電源，讓離心機停止工作，并靜止30min，然后緩慢打開離心機蓋，將離心杯平穩(wěn)地拿到生物安

55、全柜中。如果發(fā)生泄漏，用1%的次氯酸鈉消毒液灌入離心杯腔體中消毒30min，然后棄去消毒液和離心管碎片，將離心杯清洗后擦干。 （3）發(fā)生污染物潑濺或溢出時，立即用清潔布或吸水紙覆蓋污染處，并倒上1025min倍稀釋的施康消毒液，作用至少30min，方可清理全部污染物，用消毒劑擦拭污染區(qū)域。所有這些操作過程中都應戴手套。若發(fā)生大范圍污染物擴散事故時，應立即通知實驗室主管領(lǐng)導和安全負責人到達事故現(xiàn)場。待其查清情況，確定消毒方案，并組織對實驗室進行終末消毒。 （二） 其他緊急事件（事故）處理措施 在制定的應急預案中應包括消防人員和其他緊急救助人員。應事先告知他們哪些實驗室有潛在的感染性物質(zhì)，讓他們熟悉實驗室的布局和設備。實驗室人員要熟悉緊急撤離的情況及緊急撤離的路線標識。在實驗室發(fā)生不可控制的火災、水災、爆炸或其他危險情況時，為確保工作人員的安全，要進行緊急撤離。所有實驗室人員須了解緊急撤離的行動計劃、撤離路線和緊急撤離的集合地點。每年至少參加一次緊急撤離演習，包括急救設備使用和采