試論瘦肉精的檢測方法

1、試論瘦肉精的檢測方法    【摘 要】“瘦肉精”是-腎上腺受體激動(dòng)劑類化合物的俗稱，包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇等十幾種物質(zhì)。-激動(dòng)劑類化合物大多是醫(yī)學(xué)臨床普遍使用的平喘類藥物。它們另一個(gè)共同特征是，可大大減少食用動(dòng)物的脂肪、增加瘦肉，縮短動(dòng)物的生長期。但是如果大量攝入瘦肉精，這些物質(zhì)很難通過動(dòng)物的代謝排出體外，而是會(huì)聚集于肌肉、內(nèi)臟等各部位。當(dāng)通過食物鏈進(jìn)入人體，且累計(jì)攝入量超過一定值，就會(huì)產(chǎn)生毒副作用。在眾多-腎上腺受體激動(dòng)劑類化合物中，鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CL）和萊克多巴胺（Ractopamine，RAC）因藥效顯著、價(jià)

2、格低廉，成為此類藥物在畜禽養(yǎng)殖中應(yīng)用最為普遍的。雖然世界各國紛紛制定法規(guī)嚴(yán)禁鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺用于畜禽養(yǎng)殖，但因利潤驅(qū)使，其非法使用的報(bào)道還在不斷出現(xiàn)。如何高效快速地檢測出瘦肉精成分，成為其有效監(jiān)管的重要環(huán)節(jié)。 【關(guān)鍵詞】瘦肉精；檢測方法；進(jìn)展 1.色譜檢測法 目前，檢測瘦肉精殘留常用的色譜技術(shù)有高效液相色譜（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC-MS） 、毛細(xì)管電泳法（CE）等。中國已將高效液相色譜法（HPLC）作為檢測飼料中鹽酸克倫特羅殘留的半確證法，將 GC-MS 法定為確證性方法，主要用于最后確認(rèn)和仲裁，GB/T22147-2008“

3、飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的測定液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法”規(guī)定了同步測定飼料中-激動(dòng)劑沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。而對(duì)于動(dòng)物性食品，GB/T 5009.192-2003“動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測定”規(guī)定的第一法為氣相色譜質(zhì)譜法，第二法為高效液相色譜法，第三法為酶聯(lián)免疫法。 除了國標(biāo)方法以外，國內(nèi)外許多學(xué)者也通過研究建立了檢測瘦肉精的色譜法。 毛細(xì)管電泳免疫化學(xué)發(fā)光檢測尿液中鹽酸克倫特羅的方法，檢測限1.2nmol/L。對(duì)于尿液樣本的檢測結(jié)果表明，本方法回收率90%108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8%。 通過場放大進(jìn)樣同步檢測西馬特羅、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇的

4、毛細(xì)管電泳法。在該系統(tǒng)的最佳條件下，上述物質(zhì)檢測限低于2.0ng/ml，與傳統(tǒng)的電遷移進(jìn)樣相比，因更加敏感而更適于尿液中上述指標(biāo)的測定，在尿液中平均回收率高于95.6%和95.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于 3.5%。 激光誘導(dǎo)熒光毛細(xì)管免疫電泳技術(shù)（CEIA-LIF）檢測鹽酸克倫特羅的方法0.7ng/ml。在最優(yōu)條件下，自由和異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的鹽酸克倫特羅可在8min內(nèi)分離，遷移時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.72%，峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2.8%。此法具有良好的選擇性，高分離效率和靈敏度。與其他免疫方法比較相比，CEIA-LIF的優(yōu)勢(shì)在于縮短分析時(shí)間，減少試劑消耗，通過消除洗滌步驟簡化檢測方

5、法。適用于尿液和其他生物液體中CLB的檢測。He等（2007）建立了簡單，靈敏度高，重現(xiàn)性好的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法檢測飼料中的萊克多巴胺和鹽酸克倫特羅，檢測限分別為4g/kg和2g/kg。 快速測定飼料及肉類產(chǎn)品中鹽酸克倫特羅和沙丁胺醇的微型毛細(xì)管電泳法，在最優(yōu)條件下，二者可以60s內(nèi)分離，鹽酸克倫特羅的檢測限為12mol/L，而沙丁胺醇的檢測限為0.65nmol/L。鹽酸克倫特羅的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為84.2%和1.3%，而沙丁胺醇的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為81.2%和1.7%。 通過將解吸電噴霧電離法與串聯(lián)質(zhì)譜法相結(jié)合建立快速檢測尿液中鹽酸克倫特羅的方法，檢測限2.0n

6、g/ml，對(duì)不同的尿樣測定的回收率均在100%±20%，分析一個(gè)加標(biāo)尿樣時(shí)間在4min以內(nèi)可以完成。除了分析速度快，串聯(lián)質(zhì)譜法還能提供結(jié)構(gòu)信息以對(duì)鹽酸克倫特羅確認(rèn)。 快速分析克倫特羅，沙丁胺醇，丙卡特羅和非諾特羅的毛細(xì)管電泳法，檢測時(shí)間約1min，檢測限0.52.0mg/L，線性范圍2.030mg/L，相關(guān)系數(shù)>0.996。準(zhǔn)確性、特異性高無疑是色譜法檢測瘦肉精的顯著優(yōu)勢(shì)，但是由于儀器較為昂貴，其在基層檢測部門推廣應(yīng)用還存在一定難度，因此，許多學(xué)者開展了基于免疫分析法檢測瘦肉精的研究。 2.免疫分析法 在檢測瘦肉精的免疫法中，酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）較為成熟，國內(nèi)外許多公

7、司都開發(fā)了基于ELISA 法檢測瘦肉精的試劑盒，與 HPLC法相比，更為敏感、快速和經(jīng)濟(jì)，但重現(xiàn)性與特異性較HPLC法差，因此適用于大批量樣品的快速初篩。 檢測豬組織中萊克多巴胺時(shí)間分辨熒光免疫分析法，當(dāng)萊克多巴胺濃度為110gkg-1時(shí)，加標(biāo)試驗(yàn)豬肌肉和肝臟中萊克多巴胺的回收率分別為88.2%110.6%以及102.3%118.5%。變異系數(shù)分別為7.1%16.4% 以及14.3%20.5%。同時(shí)，通過使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同步檢測樣品，證實(shí)了時(shí)間分辨熒光免疫分析法分析樣品的可行性。 然而，前述方法還存在樣品前處理時(shí)間較長、過程較繁瑣的問題，因此，通過制備鹽酸克倫特羅分子印跡聚合物檢測鹽酸克

8、倫特羅的方法，利用分子印跡技術(shù)（Molecularly imprinted technology， MIT）制備了對(duì) CLB具有高特異性、高選擇性的 MIPs，進(jìn)而建立了MISPE 程序，并與 ELISA技術(shù)結(jié)合，建立了動(dòng)物組織樣品中CLB的聯(lián)用快速檢測方法，顯著提高了對(duì)動(dòng)物組織類樣品的前處理效率和檢測靈敏度（0.5g/kg）。更重要的是，這對(duì)于食品安全領(lǐng)域中其它違禁藥物等小分子物質(zhì) MIPs的制備和應(yīng)用提供了一種有益的嘗試和參考。 通過分子印跡聚合物（MIP）的使用檢測動(dòng)物組織中的痕量萊克多巴胺，該方法對(duì)豬肌肉組織和肝臟中萊克多巴胺的檢測限為0.200.90mg/L，回收率分別為85.2%1

9、10.2%及83.8%115.2%。納米材料是非常敏感的化學(xué)和生物傳感器，固定有能選擇性結(jié)合靶分子的生物探針的納米傳感器稱為納米生物傳感器。它們能和生物芯片、免疫技術(shù)、標(biāo)記技術(shù)等技術(shù)手段結(jié)合，從而使檢測更加高效、簡便。 3.展望 當(dāng)前，造成鹽酸克倫特羅屢禁不止的原因之一就是國內(nèi)外檢測 CLB的方法、手段還不完善，還沒有建立宰前（毛、尿液）監(jiān)測體系和準(zhǔn)確、迅速、方便、精確的檢測方法，從成本現(xiàn)場檢測設(shè)備簡便基層同步篩選法檢測（試紙條法、試劑盒法）優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、時(shí)間短、成本低，適合在現(xiàn)場進(jìn)行大量樣品的快速篩查，但結(jié)果受環(huán)境、溫度等因素影響大，容易出現(xiàn)“假陽性”，因此試紙條法和試劑盒法檢測結(jié)果不能直接作為執(zhí)法依據(jù)。確證法檢測采用液相色譜-質(zhì)譜