芪蛭膠囊對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷保護(hù)作用的研究

1、芪蛭膠囊對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷保護(hù)作用的研究 【摘要】 目的 研究芪蛭膠囊對(duì)四氯化碳（CCl4）所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。方法 采用0. 2% CCl4液體石蠟灌胃制作CCl4小鼠急性肝損傷模型。通過(guò)檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、腫瘤壞死因子-（TNF-）、總蛋白（TP）和白蛋白（ALB）水平，探討芪蛭膠囊對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。結(jié)果 模型組與空白組比較 , 血清ALT、AST明顯增高（P0.01）；芪蛭膠囊組與模型組比較，血清ALT、AST、TNF-明顯降低（P0.01）。結(jié)論 芪蛭膠囊對(duì)CCl4所致小鼠急性肝損傷有一定的保護(hù)作用。 石自剛（197

2、9），男，漢族，河南籍，青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院2005級(jí)研究生 【關(guān)鍵詞】 芪蛭膠囊 四氯化碳 急性肝損傷 實(shí)驗(yàn)研究 Abstract Objective To investigate the protective effects of Qizhi capsule against acute hepatic injury induced by CCl4 in mice. Methods Acute hepatic injury model was induced by intragastric administration of 0.2% CCl4 paroleine. To explore the

3、roles of Qizhi capsule against acute hepatic injury induced by CCl4 in mice, by observe the change of blood serum alanine aminotransferase（ALT）、aspartate aminotransferase（AST）、tumor necrosis factor -（TNF-）、total protein（TP）and albumin（ALB） Results The serum ALT, AST, TNF- in mice in model group were

4、 increased significantly compared with control group (P0.01). The serum ALT, AST, TNF- in Qizhi capsule group were decreased significantly compared with model group (P0.01). Conclusion Qizhi capsule have an extended protection effect to the acute hepatic injury induced by CCl4 in mice. Key words Qiz

5、hi capsule Carbon tetrachloride Acute hepatic injury Experimental study 本實(shí)驗(yàn)研究是在芪蛭膠囊對(duì)大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的預(yù)干擾作用研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，其研究提示芪蛭膠囊對(duì)灌服高脂乳劑引起的脂質(zhì)代謝紊亂有一定的預(yù)防和調(diào)節(jié)作用。本文報(bào)告其對(duì)CCl4 所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。 1 材料與方法 1.1 材料 1. 1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 全雄性ICR小鼠 40只，體重 （255）g，由青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。飼料為全價(jià)顆粒飼料，水為生活飲用水。 1. 1. 2 藥物 芪蛭膠囊由本院中醫(yī)系中藥制劑實(shí)驗(yàn)室制備，4貯存?zhèn)溆谩?shí)驗(yàn)時(shí)去膠囊殼，

6、加蒸餾水混溶，制成所需濃度的混懸液。聯(lián)苯雙酯滴丸由浙江萬(wàn)邦藥業(yè)有限公司生產(chǎn) （產(chǎn)品批號(hào)：070202），用時(shí)加蒸餾水混溶，制成所需濃度的混懸液。 1. 1. 3 主要儀器 AU2700全自動(dòng)生化分析儀（日本奧林巴斯公司生產(chǎn)）由青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院提供；Elx800酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-TEK公司生產(chǎn)）由青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院高原醫(yī)學(xué)研究中心提供。 1.1. 4 主要試劑 TNF-試劑盒由上海麥莎生物科技有限公司提供；四氯化碳(CCl4)，分析純，由上海化學(xué)試劑供應(yīng)站提供（批號(hào)：811208）。 1. 2 方法 1. 2. 1 分組與處理 雄性ICR小鼠40只，稱(chēng)重，隨機(jī)分為4組，即空白組、造模組、聯(lián)苯

7、雙酯組及芪蛭膠囊組。芪蛭膠囊組與聯(lián)苯雙酯組每日灌胃給藥（聯(lián)苯雙酯組，0.20 g/ kg， 芪蛭膠囊組，12.8g/ kg），1 次/d，連續(xù)1W?？瞻讓?duì)照組與模型組給予等量蒸餾水。除空白組外其他各組于第1、4、7d在給藥或蒸餾水30min后用0.2% CCl4液體石蠟（10ml/kg）灌胃造模。末次造模6h后取材。 用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、AST、TP、ALB。用酶聯(lián)吸附法（ELISA）檢測(cè)TNF-，用Elx 800酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450 nm處檢測(cè)吸光度值。 1.2. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用 SPSS13. 0 軟件分析。多組間均數(shù)進(jìn)行單因素方差分析。 2 結(jié)果 2.1 芪蛭膠囊對(duì)

8、急性肝臟損傷模型小鼠肝生化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表1）表1芪蛭膠囊對(duì)CCl4 所致肝損傷小鼠血清生化指標(biāo)的影響( 注：*與造模組比較P0.01；#與空白組比較P0.01. 表 1顯示，各組小鼠TP、ALB之間均無(wú)顯著性差異，提示CCl4 所致急性肝損傷小鼠血清蛋白含量改變不明顯。但是模型組小鼠血清 ALT、AST活性顯著升高（P0.01），說(shuō)明小鼠急性肝損傷模型已建立。芪蛭膠囊組、聯(lián)苯雙酯組與模型組比較均能降低小鼠血清ALT、AST活性（P0.01），表明芪蛭膠囊與聯(lián)苯雙酯均有保肝作用，而聯(lián)苯雙酯更明顯。 2.2 芪蛭膠囊對(duì)急性肝損傷模型小鼠TNF-的影響（見(jiàn)表2） 表2芪蛭膠囊對(duì)CCl4所致肝損傷模

9、型小鼠TNF-的影響( 表 2顯示，造模組與空白組相比較，TNF-顯著升高（P0.01），而給藥組與造模組比較TNF-明顯下降（P0.05，P0.01），提示聯(lián)苯雙酯與芪蛭膠囊均有保肝作用，但芪蛭膠囊降低TNF-的效果優(yōu)于聯(lián)苯雙酯，可能與芪蛭膠囊具有減少致炎作用的細(xì)胞因子的釋放有關(guān)。 3 討論 祖國(guó)醫(yī)學(xué)中沒(méi)有肝損傷的病名，在臨床的辨證論治中，多將其歸于脅痛、黃疸、肝氣郁結(jié)等病癥中。其病因主要為濕熱外侵或疫毒感染蘊(yùn)結(jié)肝脾，肝失疏泄，不能調(diào)暢氣機(jī)而氣滯，木不疏土，影響脾胃運(yùn)化，使氣血生化失源，最終導(dǎo)致氣滯血瘀，脈絡(luò)失和。 “見(jiàn)肝之病，則知肝當(dāng)傳之與脾，故先實(shí)其脾氣”（難經(jīng)七十七難）；“見(jiàn)肝之病，知

10、肝傳脾，當(dāng)先實(shí)脾”（金匱要略）。芪蛭膠囊為自擬方, 具有益氣健脾、活血化瘀之功效。黃芪為方中君藥，能益氣健脾，氣旺則瘀血行，脾健則防肝病之傳變，同時(shí)能升發(fā)脾胃之陽(yáng)氣。瘀血屬陰邪，為有形之邪，賴(lài)陽(yáng)氣以化，黃芪之溫而微微生火，使脾復(fù)健運(yùn)，清濁升降有序，輸化正常。水蛭為方中臣藥，具有破血逐瘀之效，善于祛經(jīng)絡(luò)之瘀。黃芪配伍水蛭，奏益氣活血之效。姜黃活血化瘀，兼有舒肝行氣止痛之效，姜黃可加強(qiáng)水蛭活血化瘀之功效，善入肝，為方中佐藥，具有行氣及化肝郁脾虛所致的瘀血停滯之功效。該方補(bǔ)運(yùn)結(jié)合，既能益氣舒肝健脾，防肝病之傳變，又能行氣活血化瘀，使氣機(jī)流暢，從而調(diào)節(jié)肝的疏泄功能。本方重在健脾益氣，防病之傳變，以去瘀

11、血。 CCl4 進(jìn)入肝臟后，可直接溶解肝細(xì)胞膜，同時(shí)生成活性較強(qiáng)的三氯甲基自由基和氯甲基自由基，這些自由基作用于細(xì)胞膜脂質(zhì)，啟動(dòng)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，致肝細(xì)胞損傷。本實(shí)驗(yàn)中芪蛭膠囊組 ALT、AST的含量與造模組比較有不同程度的降低（P0.01），提示芪蛭膠囊有一定的保肝作用，這種作用可能與黃芪中所含的黃芪多糖有關(guān)，同時(shí)這種作用也可能與姜黃中的姜黃素對(duì)AST、ALT活性的抑制作用和姜黃苷促進(jìn)膽汁分泌的作用有關(guān)。 CCl4造成的肝損傷可刺激單核/巨噬細(xì)胞釋放多種細(xì)胞因子，主要有TNF-及IL-1等。細(xì)胞因子TNF-是引起急性肝損傷的重要炎癥介質(zhì)之一，在肝細(xì)胞受損時(shí)產(chǎn)生，并對(duì)肝細(xì)胞造成繼發(fā)性損傷，即“二次打擊”，進(jìn)一步加重肝臟炎癥。有研究表明，TNF-對(duì)肝臟具有明顯的致毒作用，其含量與ALT含量及肝