腸桿菌科細(xì)菌鑒定課件

1、腸桿菌科細(xì)菌(xjn)鑒定組員(z yun)：李木生，顏大鈞，鄭偉壇，朱俊林，胡思妙，王榮迎，陳琳蔓第一頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定腸桿菌(gnjn)科細(xì)菌一般性鑒定程序未知腸桿菌未知腸桿菌(gnjn)分離分離(fnl)培養(yǎng)培養(yǎng)挑取可疑菌落挑取可疑菌落純培養(yǎng)純培養(yǎng)革蘭染色鏡檢革蘭染色鏡檢生化實驗鑒定生化實驗鑒定藥敏試驗藥敏試驗血清學(xué)試驗血清學(xué)試驗第二頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定一.分離(fnl)培養(yǎng)無菌操作用接種環(huán)提取可疑(ky)腸道桿菌，在EMB上分區(qū)劃線接種。送37培養(yǎng)24小時。第三頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定二.純培養(yǎng)(piyng)（一）確定可疑菌落。1.觀察(gunch)EMB表

2、面的菌落特征：（1）.凡紫黑色的單個菌落可初步定為可疑大腸桿菌菌落，標(biāo)號為。（2）.凡光滑無色透明的單個小菌落可初步定為痢疾桿菌屬菌落或傷寒桿菌屬菌落，標(biāo)號為。第四頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定（二）.可疑菌落純化培養(yǎng) 無菌操作(cozu)用接種針挑取已編號可疑菌落，分別接種在雙糖鐵高層瓊脂斜面和半固體培養(yǎng)基上，送37溫箱培養(yǎng)2448小時。（三）.雙糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)特征觀察與動力觀察初步初步(chb)確定為傷寒桿菌確定為傷寒桿菌初步確定初步確定(qudng)為大腸桿菌為大腸桿菌第五頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定革蘭染色(rns)鏡檢 挑取純培養(yǎng)后的可疑菌落(jnlu)進(jìn)行革蘭染色，確定為革蘭陰

3、性菌后進(jìn)行革蘭陰性菌革蘭陰性菌短桿狀，分散短桿狀，分散(fnsn)排列排列第六頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定生化試驗(shyn)鑒定 將需全面鑒定的可疑細(xì)菌從雙糖鐵瓊脂斜面挑菌分別接種于各種將需全面鑒定的可疑細(xì)菌從雙糖鐵瓊脂斜面挑菌分別接種于各種( ( zhn)zhn)生化反應(yīng)培養(yǎng)基。每株可疑菌需接種的培養(yǎng)基計有糖發(fā)酵管（生化反應(yīng)培養(yǎng)基。每株可疑菌需接種的培養(yǎng)基計有糖發(fā)酵管（葡葡. .乳乳. .麥麥. .甘甘. .蔗蔗）各）各1 1支，支，蛋白胨水蛋白胨水1 1支（支（I I），），葡萄糖蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水2 2支支（M.VpM.Vp），），枸櫞酸鹽瓊脂斜面枸櫞酸鹽瓊脂斜面1 1支（支（C

4、 C）。接種完畢后，試管置于）。接種完畢后，試管置于試管架上，送試管架上，送3737溫箱培養(yǎng)溫箱培養(yǎng)24482448小時后觀察記錄結(jié)果。小時后觀察記錄結(jié)果。第七頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定1.1.不變黃，小管無氣泡：糖發(fā)酵不變黃，小管無氣泡：糖發(fā)酵(f jio)(f jio)為為陰性（陰性（）。2.2.黃色，小管有氣泡（產(chǎn)酸，產(chǎn)黃色，小管有氣泡（產(chǎn)酸，產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為氣）：糖發(fā)酵為陽性（陽性（+ +）。 黃色，小管無氣泡（產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣黃色，小管無氣泡（產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為）：糖發(fā)酵為陽性（陽性（+ +）。第八頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定第九頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定VPVP試驗試驗

5、(shyn)(shyn)紅色為紅色為VPVP陽性陽性。第十頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定表1 腸桿菌(gnjn)科細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定結(jié)果記錄表細(xì)菌細(xì)菌編號編號葡萄葡萄糖糖 乳糖乳糖麥芽麥芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗糖蔗糖 吲哚吲哚甲基甲基紅紅 VP枸櫞枸櫞酸鹽酸鹽H2S動力動力大腸桿菌 + + + - - - +傷寒桿菌 - - - + - + + +細(xì)菌細(xì)菌編號編號葡萄葡萄糖糖 乳糖乳糖麥芽麥芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗糖蔗糖 吲哚吲哚甲基甲基紅紅 VP枸櫞枸櫞酸鹽酸鹽H2S動力動力大腸桿菌 -/+ + + - - - +傷寒桿菌 + - + + - - + - - -/+ +表2 腸桿菌科細(xì)菌生化反應(yīng)(

6、fnyng)鑒定數(shù)據(jù)參考表第十一頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定 實驗原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在己接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷地向紙片周圍區(qū)域擴散(kusn)，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的最低抑菌濃度 （MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。藥物敏感(mngn)試驗第十二頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定實驗方法 （一）接種肉湯培養(yǎng)基 （二）菌液均勻涂抹平板培養(yǎng)基 （三）分別夾取青霉素、鏈霉素、慶大霉素和頭孢拉定四種(s zhn)抗生

7、素紙片貼在平板上進(jìn)行培養(yǎng)第十三頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定實驗實驗(shyn)結(jié)結(jié)果果第十四頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定青霉素(mm）鏈霉素（mm）頭孢拉定（mm）慶大霉素（mm）大腸桿菌-1815(敏感）-2415(敏感）沙門菌-1615(敏感）-1915(敏感）志賀菌-2215(敏感）-2515(敏感） 實驗(shyn)結(jié)果 三種(sn zhn)菌對鏈霉素鏈霉素和慶大霉素慶大霉素敏感敏感，但對青霉素青霉素和頭孢拉定頭孢拉定耐藥耐藥。 第十五頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定血清學(xué)試驗(shyn)第十六頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定第十七頁，共十八頁。腸桿菌科細(xì)菌鑒定內(nèi)容(nirng)總結(jié)腸桿菌科細(xì)菌鑒定。血清學(xué)試驗。無菌操作用接種環(huán)提取可疑腸道桿菌，在EMB上分區(qū)劃線接種。（1）.凡紫黑色的單個菌落可初步定為可疑大腸桿菌菌落，標(biāo)號為。（2）.凡光滑無色透明的單個小菌落可初步定為痢疾桿菌屬菌