腸桿菌科細(xì)菌鑒定課件

1、腸桿菌科細(xì)菌(xjn)鑒定組員(z yun)：李木生，顏大鈞，鄭偉壇，朱俊林，胡思妙，王榮迎，陳琳蔓第一頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定腸桿菌(gnjn)科細(xì)菌一般性鑒定程序未知腸桿菌未知腸桿菌(gnjn)分離分離(fnl)培養(yǎng)培養(yǎng)挑取可疑菌落挑取可疑菌落純培養(yǎng)純培養(yǎng)革蘭染色鏡檢革蘭染色鏡檢生化實(shí)驗(yàn)鑒定生化實(shí)驗(yàn)鑒定藥敏試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)第二頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定一.分離(fnl)培養(yǎng)無(wú)菌操作用接種環(huán)提取可疑(ky)腸道桿菌，在EMB上分區(qū)劃線接種。送37培養(yǎng)24小時(shí)。第三頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定二.純培養(yǎng)(piyng)（一）確定可疑菌落。1.觀察(gunch)EMB表

2、面的菌落特征：（1）.凡紫黑色的單個(gè)菌落可初步定為可疑大腸桿菌菌落，標(biāo)號(hào)為。（2）.凡光滑無(wú)色透明的單個(gè)小菌落可初步定為痢疾桿菌屬菌落或傷寒桿菌屬菌落，標(biāo)號(hào)為。第四頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定（二）.可疑菌落純化培養(yǎng) 無(wú)菌操作(cozu)用接種針挑取已編號(hào)可疑菌落，分別接種在雙糖鐵高層瓊脂斜面和半固體培養(yǎng)基上，送37溫箱培養(yǎng)2448小時(shí)。（三）.雙糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)特征觀察與動(dòng)力觀察初步初步(chb)確定為傷寒桿菌確定為傷寒桿菌初步確定初步確定(qudng)為大腸桿菌為大腸桿菌第五頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定革蘭染色(rns)鏡檢 挑取純培養(yǎng)后的可疑菌落(jnlu)進(jìn)行革蘭染色，確定為革蘭陰

3、性菌后進(jìn)行革蘭陰性菌革蘭陰性菌短桿狀，分散短桿狀，分散(fnsn)排列排列第六頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定生化試驗(yàn)(shyn)鑒定 將需全面鑒定的可疑細(xì)菌從雙糖鐵瓊脂斜面挑菌分別接種于各種將需全面鑒定的可疑細(xì)菌從雙糖鐵瓊脂斜面挑菌分別接種于各種( ( zhn)zhn)生化反應(yīng)培養(yǎng)基。每株可疑菌需接種的培養(yǎng)基計(jì)有糖發(fā)酵管（生化反應(yīng)培養(yǎng)基。每株可疑菌需接種的培養(yǎng)基計(jì)有糖發(fā)酵管（葡葡. .乳乳. .麥麥. .甘甘. .蔗蔗）各）各1 1支，支，蛋白胨水蛋白胨水1 1支（支（I I），），葡萄糖蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水2 2支支（M.VpM.Vp），），枸櫞酸鹽瓊脂斜面枸櫞酸鹽瓊脂斜面1 1支（支（C

4、 C）。接種完畢后，試管置于）。接種完畢后，試管置于試管架上，送試管架上，送3737溫箱培養(yǎng)溫箱培養(yǎng)24482448小時(shí)后觀察記錄結(jié)果。小時(shí)后觀察記錄結(jié)果。第七頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定1.1.不變黃，小管無(wú)氣泡：糖發(fā)酵不變黃，小管無(wú)氣泡：糖發(fā)酵(f jio)(f jio)為為陰性（陰性（）。2.2.黃色，小管有氣泡（產(chǎn)酸，產(chǎn)黃色，小管有氣泡（產(chǎn)酸，產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為氣）：糖發(fā)酵為陽(yáng)性（陽(yáng)性（+ +）。 黃色，小管無(wú)氣泡（產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣黃色，小管無(wú)氣泡（產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為）：糖發(fā)酵為陽(yáng)性（陽(yáng)性（+ +）。第八頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定第九頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定VPVP試驗(yàn)試驗(yàn)

5、(shyn)(shyn)紅色為紅色為VPVP陽(yáng)性陽(yáng)性。第十頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定表1 腸桿菌(gnjn)科細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定結(jié)果記錄表細(xì)菌細(xì)菌編號(hào)編號(hào)葡萄葡萄糖糖 乳糖乳糖麥芽麥芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗糖蔗糖 吲哚吲哚甲基甲基紅紅 VP枸櫞枸櫞酸鹽酸鹽H2S動(dòng)力動(dòng)力大腸桿菌 + + + - - - +傷寒桿菌 - - - + - + + +細(xì)菌細(xì)菌編號(hào)編號(hào)葡萄葡萄糖糖 乳糖乳糖麥芽麥芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗糖蔗糖 吲哚吲哚甲基甲基紅紅 VP枸櫞枸櫞酸鹽酸鹽H2S動(dòng)力動(dòng)力大腸桿菌 -/+ + + - - - +傷寒桿菌 + - + + - - + - - -/+ +表2 腸桿菌科細(xì)菌生化反應(yīng)(

6、fnyng)鑒定數(shù)據(jù)參考表第十一頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定 實(shí)驗(yàn)原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在己接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷地向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散(kusn)，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌的生長(zhǎng)被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)測(cè)試菌的最低抑菌濃度 （MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。藥物敏感(mngn)試驗(yàn)第十二頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定實(shí)驗(yàn)方法 （一）接種肉湯培養(yǎng)基 （二）菌液均勻涂抹平板培養(yǎng)基 （三）分別夾取青霉素、鏈霉素、慶大霉素和頭孢拉定四種(s zhn)抗生

7、素紙片貼在平板上進(jìn)行培養(yǎng)第十三頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)結(jié)果果第十四頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定青霉素(mm）鏈霉素（mm）頭孢拉定（mm）慶大霉素（mm）大腸桿菌-1815(敏感）-2415(敏感）沙門(mén)菌-1615(敏感）-1915(敏感）志賀菌-2215(敏感）-2515(敏感） 實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果 三種(sn zhn)菌對(duì)鏈霉素鏈霉素和慶大霉素慶大霉素敏感敏感，但對(duì)青霉素青霉素和頭孢拉定頭孢拉定耐藥耐藥。 第十五頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定血清學(xué)試驗(yàn)(shyn)第十六頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定第十七頁(yè)，共十八頁(yè)。腸桿菌科細(xì)菌鑒定內(nèi)容(nirng)總結(jié)腸桿菌科細(xì)菌鑒定。血清學(xué)試驗(yàn)。無(wú)菌操作用接種環(huán)提取可疑腸道桿菌，在EMB上分區(qū)劃線接種。（1）.凡紫黑色的單個(gè)菌落可初步定為可疑大腸桿菌菌落，標(biāo)號(hào)為。（2）.凡光滑無(wú)色透明的單個(gè)小菌落可初步定為痢疾桿菌屬菌