的粗提取與鑒定活動單李百勝

1、DNA的粗提取和鑒定知識要點：1DNA的物理化學(xué)性質(zhì)，尤其是DNA的溶解性；2二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。一、DNA的粗提取的原理思考1：DNA存在于真核生物細(xì)胞的哪些部位？思考2：提取生物大分子的一般思路是什么？ 1、DNA的性質(zhì)：DNA和蛋白質(zhì)的溶解性、對酶、高溫和洗滌劑的耐受性在NaCl溶液中的溶解度對蛋白酶的耐受性對高溫的耐受性對洗滌劑的耐受性DNA蛋白質(zhì)0.14mol/L NaCl濃度|溶解度DNA粗提取的原理有些哪些？、DNA在 mol/L NaCl溶液中溶解度最小、DNA不溶于 溶液,而蛋白質(zhì)等能夠溶解2、DNA鑒定的原理：在 的條件下,DNA遇 會被染成 。二、DNA粗提取

2、的主要步驟：1、材料選擇：適于作實驗材的材料：選用 的生物材料；如雞（紅）血，其適宜作為實驗材料的原因：雞血（紅）細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；雞血細(xì)胞極易吸水脹破。 哺乳動物紅細(xì)胞呢？破碎細(xì)胞，釋放DNA（核物質(zhì)）方法：將510mL雞血細(xì)胞液加入20mL 中；用玻棒同方向攪拌5min；用34紗布過濾，以除去顆粒較大的雜質(zhì)過濾；收集 。目的：破壞細(xì)胞，釋放核物質(zhì)注意：攪拌不能用力過大，以防止打碎DNA分子；DNA存在：多數(shù)與蛋白質(zhì)結(jié)合，存在于濾液中2、主要實驗步驟（以雞血紅細(xì)胞為例）：溶解細(xì)胞核內(nèi)DNA方法：向濾液中加入2倍體積的 mol/LNaCl溶液，攪拌1min；過濾獲取 目的：使與

3、DNA結(jié)合的 解聚，釋放出 ；DNA溶解于高溶液NaCl溶液中注意：按同一方向攪拌DNA析出方法：沿?zé)谙驗V液中緩慢加入蒸餾水，并輕輕按同一方向攪拌，使DNA析出，直到 ；可以在玻棒上收集到黏稠物（或過濾或離心收集黏稠物）目的：降低NaCl溶液濃度達(dá)到 mol/L左右，使DNA析出注意：加入的蒸餾水不能過多，使NaCl溶液濃度過低，DNA又會 黏稠物：絲狀、略帶黃色（DNA分子上附著有少量蛋白質(zhì)）DNA的初步純化方法：向20mL 2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物，并按同一方向攪拌3min，使DNA充分溶解；過濾，收集濾液；向濾液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的95%乙醇，并用玻棒按同一方向緩

4、慢、均勻地攪拌，在玻棒上收集白色絲狀物（DNA）原理：DNA不溶于 中，而蛋白質(zhì)能溶于 中。歸納：本實驗中幾次過濾？過濾的目的是什么？ 過濾一： 過濾二： 過濾三： 本實驗中幾次加入蒸餾水的目的各是什么？第一次：向雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水，目的： 第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸餾水，目的： 拓展：1、以菜花為材料進(jìn)行實驗時，如何獲得核物質(zhì)？ 取材、剪碎加入洗滌劑、食鹽研磨、過濾加洗滌劑的目的： 加入食鹽的目的： 2、分析教材中方案一、二、三的原理。 方案一： 方案二： 方案三： 3、探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對DNA粗提取量的影響（說說實驗思路）三、DNA的鑒定：1、

5、方法：取甲、乙兩支試管，并向其中加入5mL（等量）的2mol/LNaCl溶液；向甲試管中加入粗提取的DNA，并攪拌使DNA溶解；向兩支試管中各加入4mL（等量）二苯胺試劑，混勻，沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管的顏色（藍(lán)色）變化。2、注意點：實驗中需要對照，目的：證明 四、實驗結(jié)果分析與評價1、實驗結(jié)果評價：是否提取到DNA？觀察提取的DNA顏色：如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定：出現(xiàn)藍(lán)色說明實驗基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實驗操作中出現(xiàn)錯誤，需要重新制備。2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色？實驗提取的DNA粗制品有可能仍然含有

6、核蛋白、多糖等雜質(zhì)。3、影響絲狀物總量的因素有哪些？ 實驗材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時的NaCl溶液濃度、實驗方法、攪拌方法（攪拌不當(dāng)可能破壞DNA）五、案例：（快速閱讀、理解步驟原理）以菜花為實驗材料進(jìn)行DNA的粗提取【實驗材料準(zhǔn)備】 將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為95的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24 h【提取DNA的具體步驟】1、取材 稱取30 g菜花，去梗取花，切碎。2、研磨 將碎菜花放入研缽中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。教材中建議采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑，使植物細(xì)胞膜破碎，釋放DNA。學(xué)生可以設(shè)置對照實驗，比較哪一種方法可以提取到純度更高的DNA。一般實驗室提取高純度的

7、DNA都采用一種陽離子去污劑十六烷三甲基溴化銨分離緩沖液，使細(xì)胞膜破碎，同時將DNA與植物中多糖等雜質(zhì)分開，再用氯仿異丙醇混合液（體積比為241）抽提去除雜質(zhì)蛋白，得到高純度的DNA。3、過濾 在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾到燒杯中(有條件的學(xué)?？蓪V液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心，用1000 r/min的轉(zhuǎn)速，離心25 min，取上清液放入燒杯中)。在4 冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。4、沉淀 將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95的預(yù)冷乙醇溶液中，并用玻璃棒緩緩、輕輕地攪拌溶液(玻璃棒不要直插到燒杯底部)。沉淀35 min后，可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，將絮

8、狀物纏繞在玻璃棒上。六、訓(xùn)練題：1在DNA粗提取的過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用分別是A稀釋血液；沖洗樣品 B使血細(xì)胞破裂；降低氯化鈉的濃度C使血細(xì)胞破裂；增大DNA的溶解度 D使血細(xì)胞破裂；沖洗樣品2下列實驗中所用試劑錯誤的是A在觀察植物細(xì)胞有絲分裂實驗中，使用醋酸洋紅溶液使染色體著色B在提取葉綠體色素實驗中，使用丙酮提取色素C在DNA的粗提取與鑒定實驗中，使用氯化鈉溶液析出DNAD在蛋白質(zhì)的鑒定實驗中，使用蘇丹染液鑒定蛋白質(zhì)3NaCl的物質(zhì)量為多少mol/L時，DNA的溶解度最小A0.12 B0.13 C0.14 D0.154在提取的細(xì)胞核物質(zhì)的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液

9、40ml目的是A溶解雜質(zhì) B溶解蛋白質(zhì) C析出DNA D溶解DNA5從細(xì)胞核中提取DNA所用的提取溶液是ANaCl溶液 B酒精 C蒸餾水 D檸檬酸鈉6提取含雜質(zhì)較少的DNA所用的溶液 ANaCl溶液 B冷卻90%的酒精 C加熱95%的酒精 D冷卻95%的酒精7DNA遇二苯胺（沸水?。r，會染成 A磚紅色 B紅色 C紫色 D藍(lán)色8可以鑒定DNA的物質(zhì)是A斐林試劑 B95%的酒精 C甲基綠溶液 D二苯胺溶液9破譯生物基因組DNA的遺傳信息或進(jìn)行基因操作，首先要提取細(xì)胞核DNA。下列不適宜作為DNA提取的實驗材料是A雞血細(xì)胞 B蛙的紅細(xì)胞C人的成熟紅細(xì)胞 D菜花10（多選）下表是關(guān)于DNA粗提取與鑒

10、定實驗中所使用的材料、操作及其作用的表述正確的是試劑操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸餾水與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)胞形狀C蒸餾水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后DNA的NaCl中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)11（多選）下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法不正確的是A洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜，同時也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B在探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNA提取的影響實驗中，需要控制的變量是洗滌劑和植物細(xì)胞C常溫下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色D將濾液放在6075的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘能去除濾液中的雜質(zhì)，其原理是利用了DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同12如圖所示是關(guān)于“DNA的粗提取和物理性狀觀察”實驗：（l）實驗材