小百部藥材的總皂苷含量與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

1、小百部藥材的總皂苷含量與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究                  作者：胡嘉蘊，盧燕，黃永鳳，陳道峰【摘要】目的建立小百部藥材的總皂苷含量測定方法并制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為該藥材的質(zhì)量控制提供 科學(xué) 依據(jù)。方法以小百部苷B為對照品，濃硫酸甲醇（73）為顯色劑建立比色法測定小百部的總皂苷含量；采用 中國 藥典2005版規(guī)定的水分測定法、灰分測定法測定小百部藥材的水分、總灰分和酸不溶性灰分。結(jié)果小百部苷B在10.6127.2 g范圍內(nèi)呈良好的

2、線性關(guān)系，r = 0.999 7，平均加樣回收率為98.36%，RSD=2.38% (n=6)；小百部總皂苷含量為5.96%7.98%。結(jié)論該法操作簡便、準(zhǔn)確，可用作小百部藥材質(zhì)量評價的定量分析方法。根據(jù)測定結(jié)果，建議小百部藥材總皂苷含量以干燥品計不低于6.0%。 【關(guān)鍵詞】   小百部質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)小百部苷B比色法Abstract：ObjectiveTo establish a colorimetric method to determine the total saponins of Asparagus filicinus root for quality evaluation. Me

3、thodsA colorimetric method was established with aspafilioside B as the chemical reference and a mixture of sulfuric acid and methanol (7:3) as the coloring reagent. The moisture, total ash and acid-insoluble ash were determined according to the methods in Chinese Pharmacopoa 2005.ResultsThere was a

4、good linearity ( r = 0. 9997) within the range of 10.6127.2 g. The average recovery of aspafilioside B was 98.36% with RSD of 2.38%. The contents of total saponins were 5.96% 7.98%. ConclusionThe newly-developed colorimetric method can be used for the quality control of Asparagus filicinus root. It

5、is proposed to contain not less than 6.0% of saponins calculated with reference to the dried drug.Key words： Asparagus filicinus;   Quality standard;   Aspafilioside B;   Colorimetry小百部又名滇百部，為百合科(Liliaceae) 天門冬屬(Asparagus) 植物羊齒天門冬Asparagus filicinus Buch.-Ham. ex D.Don的

6、塊根，主產(chǎn)于云南和四川，為云南彝族和傣族的習(xí)用藥物，用于 治療 氣管炎、肺炎和咳嗽，在云南省的一些地區(qū)，也作為中藥百部的代用品1。2005版云南省中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)收錄了“滇百部飲片”和“蜜滇百部”，但均未見定量測定2。 藥 研究表明，小百部具有較強的抗腫瘤活性，超過了同屬抗癌藥用植物蘆筍，是一種具有良好開發(fā)前景的天然藥物3。本課題組前期的化學(xué)和藥理實驗表明，小百部的小百部苷甲、小百部苷B等6個皂苷類化合物對人肺腺癌A-549和乳腺癌MCF-7腫瘤細(xì)胞株均有不同程度的生長抑制活性，皂苷類化合物是小百部抗腫瘤作用的主要活性成分4。為了更好地開發(fā)利用小百部藥材，本文建立比色法對10個不同產(chǎn)地和不同收集時

7、間的小百部藥材進(jìn)行了總皂苷含量的測定，同時測定了水分、總灰分和酸不溶性灰分，以期為制訂小百部的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)和 參考 。 1 儀器與試藥    756MC紫外分光光度計（上海第三分析儀器廠）；SHANGPING FA1004天平（上海天平儀器廠）；DHG系列電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海華連醫(yī)療器械有限公司）；馬弗爐（上海鼎奇實業(yè)有限公司）；甲醇、濃硫酸等試劑均為分析純。對照品小百部苷B由本課題組自制4，經(jīng)HPLC-ELSD檢測，純度達(dá)98%以上；經(jīng)鑒定，10個小百部藥材均為A. filicinus的干燥根，憑證樣本保存于本教研室。 2  方法與結(jié)果 2.1 

8、; 總皂苷含量測定         2.2  水分、總灰分、酸不溶性灰分的測定水分測定參照 中國 藥典2005年版（部）附錄H水分測定法（烘干法）；總灰分、酸不溶性灰分測定參照中國藥典2005年版（部）附錄K灰分測定法 5。 3  討論    本文所研究的小百部又名滇百部1。本品首次以“小百部”藥材名收載于云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)1974版，明確來源為“百合科植物羊齒天門冬Asparagus filicinus Ham.的去皮干燥塊根” 6；在2005版云南省中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)中則以“滇百部

9、飲片”和“蜜滇百部”收錄2?！靶“俨俊币幻嘁娪?005版中國藥典附錄，但其來源被定為“百合科植物小天門冬A. pseudofilicinus Wang et Tang的干燥根”5。經(jīng)查，中國藥典附錄收載的“小百部”為成方制劑“雅叫哈頓散”的配伍藥材之一，傣藥“雅叫哈頓”最早也收載于1974年版云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)，但當(dāng)時處方中明確列出的是“小天冬”，而不是“小百部”，且明確記載百合科小天冬A. pseudofilicinus Wang et Tang與天門冬A. cochinchinensis（Lour.）Merr.的干燥塊根同為藥材天門冬的正品來源，與同時收錄的小百部（羊齒天門冬A. filic

10、inus Ham.的去皮干燥塊根）實為兩個不同的藥材品種6。此外，徐國鈞等7學(xué)者核查后也指出小百部的學(xué)名應(yīng)采用A. filicinus Ham. ex D. Don。綜合以上分析，我們認(rèn)為2005版中國藥典“雅叫哈頓散”處方及附錄中收錄的“小百部”一名有誤，應(yīng)更正為“小天冬”。 實際上，小百部藥材的名稱和基源一直比較混亂。在第2版中藥大辭典中收錄的“小百部”來源為百合科天門冬屬植物石刁柏A. officinalis L.的塊根，而本文研究的小百部（滇百部）則以其原植物名“羊齒天冬”收錄其中8。同樣以“羊齒天冬”收錄的還有全國中草藥匯編 9、 中藥學(xué)大辭典10等。綜合實際情況和各 文獻(xiàn) 考慮，我

11、們建議來源于羊齒天門冬塊根的藥材統(tǒng)一采用“小百部（滇百部）”之名，以示區(qū)分。   本課題組前期對小百部化學(xué)成分的研究分離得到12個甾體皂苷，體外抗腫瘤活性測試發(fā)現(xiàn)，其中的小百部苷甲、小百部苷B等6個化合物對人肺腺癌A-549和乳腺癌MCF-7腫瘤細(xì)胞株均有不同程度的生長抑制活性，表明皂苷類化合物是小百部抗腫瘤作用的主要活性成分4。另外，本課題組曾建立HPLC-ELSD法測定小百部中小百部苷B的含量，結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地的小百部藥材中小百部苷B的含量從0.128%至0.361%不等，含量差異較大；同時發(fā)現(xiàn)天門冬藥材的HPLC譜中無小百部苷B峰，選擇小百部苷B作為評價小百部藥材質(zhì)

12、量的指標(biāo)性成分具有一定的專屬性11。因此，本實驗選擇抗腫瘤活性較好的小百部苷B為對照品，建立比色法測定小百部藥材的總皂苷含量，作為評價小百部藥材質(zhì)量的 參考 依據(jù)。   對供試品溶液的制備方法，我們分別考察了提取溶劑（甲醇、50%乙醇）、提取溶劑用量（10，20，30 ml）、提取方式（超聲，加熱回流、滲漉）、提取時間（20，30，40 min），最后確定甲醇20 ml超聲30 min可提取完全且操作簡便易行。同時對純化方式也進(jìn)行了考察，主要比較了正丁醇萃取和大孔樹脂純化法，測得的總皂苷含量分別為4.96%和6.02%（云南曲靖2003-09收集樣品），另外正丁醇萃取法存在

13、操作繁瑣、氣味難聞等缺點，而大孔吸附樹脂具有吸附容量大、選擇性好、易解吸、效率高等優(yōu)點12，且加樣回收率實驗結(jié)果滿意，故采用大孔樹脂作為純化方式。   含量測定結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的小百部藥材的總皂苷含量為5.96%7.98%，與HPLC-ELSD法測定小百部中小百部苷B的含量結(jié)果 11相比，總皂苷含量相對穩(wěn)定，且考慮到小百部的多個皂苷類成分均具有抗腫瘤活性，因此，以總皂苷含量來控制小百部藥材的質(zhì)量更為合理。根據(jù)本實驗的測定結(jié)果，我們建議小百部藥材的總皂苷含量以小百部苷B計不少于5.0%；如果以干燥品計，總皂苷含量不少于6.0%。   水分、總灰分和酸不溶

14、性灰分的測定結(jié)果顯示，小百部藥材的水分含量為6.29%9.50%，水分較高，總皂苷含量應(yīng)以干燥品 計算 較為合理；總灰分含量3.22%4.38%，各批次間差異不顯著；酸不溶性灰分含量較低，從0.110%0.510%不等。依據(jù)上述結(jié)果，建議水分不超過10.0%，總灰分不超過5.0%，酸不溶性灰分不得超過1.0%。此研究結(jié)果可作為制定小百部藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1云南省藥材公司云南中藥資源名錄M北京： 科學(xué) 出版社，1993：6302云南省食品藥品監(jiān)督局云南省中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)S昆明：云南出版社，2005：863溫晶源，李穎，丁聲頌中國百合科天門冬屬九種藥用植物的藥理作用篩選J上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1993，20（2）：1074Zhou L B，Chen T H，Bastow K F，et alFiliasparosides A-D,Cytotoxic Steroidal Saponins from the Roots of Asparagus filicinusJJNatProd，2007，70（8）：12635國家藥典委員會中國藥典，部S北京：化學(xué) 工業(yè) 出版社，2005：附錄476云南省衛(wèi)生局云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)S北京：科學(xué)出版社，1974：58 ，62，3227徐國鈞，徐珞珊常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究M福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1997：648南京中醫(yī)藥大