高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法學(xué)習(xí)交流

1、高效液相色譜高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法串聯(lián)質(zhì)譜法學(xué)習(xí)交流學(xué)習(xí)交流學(xué)習(xí)提綱學(xué)習(xí)提綱第一部分：儀器實(shí)驗(yàn)室（3.18-5.15） 第二部分：微生物實(shí)驗(yàn)室（5.18-5.29）第三部分：理化實(shí)驗(yàn)室（6.1-6.12）第四部分：儀器操作 第五部分：資料收集 第六部分：學(xué)習(xí)總結(jié)、心得體會(huì)第一部分：儀器實(shí)驗(yàn)室（3.18-5.15） 在儀器實(shí)驗(yàn)室的兩個(gè)月時(shí)間里主要學(xué)習(xí)了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和高效液相色譜法，簡(jiǎn)單的學(xué)習(xí)了原子吸收和原子熒光法的基本原理和檢測(cè)內(nèi)容。 在學(xué)習(xí)液-質(zhì)聯(lián)用儀的過(guò)程中主要學(xué)習(xí)了樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)樣液的配制（擴(kuò)項(xiàng)）、流動(dòng)相的配制和儀器原理-儀器操作的學(xué)習(xí)。總計(jì)5大類(lèi)，12個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目，13個(gè)常

2、用標(biāo)準(zhǔn) 1.豆芽中的赤霉素，六-芐基腺嘌呤（液相）；2.豆芽中的四氯苯氧乙酸鈉（液相）；3.動(dòng)物源性食品中的激素、瘦肉精（沙丁胺醇、萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅）-（液質(zhì)）； 4.乳制品的維生素B6（液相）、維生素D（液相）、三聚氰胺（液質(zhì)） 5.蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖，糧谷中農(nóng)藥和保健食品中脫氫表雄甾(zai)酮(DHEA) 其中最多的是：1.豆芽中的赤霉素，六-芐基腺嘌呤；2.肉食品中的瘦肉精；3.乳品中的三聚氰胺2、主要檢驗(yàn)的方法為高效液相色譜法和液相串聯(lián)質(zhì)譜法1、實(shí)驗(yàn)檢測(cè)項(xiàng)目有1、出口水果中赤霉素殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法 -SN/T 0350-20122、無(wú)公害豆芽

3、第3部分：6-芐基腺嘌呤殘留量和4-氯苯氧乙酸鈉殘留量的測(cè)定 -DB33/T 625.3-20073、動(dòng)物源性食品中多種-受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（瘦肉精）-GB/T 22286-20084、原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法 -GB/T 22388-2008（嬰幼兒乳粉）5、嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測(cè)定-GB 5413.13-2010 6、保健食品中脫氫表雄甾(zai)酮(DHEA)測(cè)定-GB/T 5009.193-2003 7、蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測(cè)定方法 液相色譜示差折光檢測(cè)法-GB/T 18932.22-2003 8、牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米

4、赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（質(zhì)控-3個(gè)混標(biāo)）- GB/T 22992-2008 9、嬰幼兒配方粉及嬰幼兒補(bǔ)充谷粉通用技術(shù)條件（含第1號(hào)、第2號(hào)和第3號(hào)修改單，已作廢）GB 10767-1997 （維生素D D測(cè)定 D2、D3）10、動(dòng)物源性食品中11種激素殘留檢測(cè) 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法-農(nóng)業(yè)部1031號(hào)公告-1-200811、糧谷中486種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（凝膠色譜滲透儀凈化）- GB/T 20770-2008 12、動(dòng)物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測(cè)方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法-GB/T 21312-2007

5、13、食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（地方標(biāo)準(zhǔn)）DB31/ 2010-2012 儀器實(shí)驗(yàn)室具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容有： 在本次儀器實(shí)驗(yàn)室學(xué)習(xí)的過(guò)程中，參與了質(zhì)檢院的何沖老師的一個(gè)CNAS認(rèn)證，加有三個(gè)混標(biāo)盲樣（牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚殘留量的測(cè)定 GB/T 22992-2008 ）的質(zhì)控實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中從實(shí)驗(yàn)原理、樣品量取、樣品前處理、凈化的每一個(gè)過(guò)程中都做到認(rèn)真、細(xì)心的學(xué)習(xí)和參與，保證實(shí)驗(yàn)中氮吹、固相萃取柱的活化、淋洗、洗脫以及流動(dòng)相的配制等每個(gè)環(huán)節(jié)都順利進(jìn)行，圓滿的完成了質(zhì)控、比對(duì)實(shí)驗(yàn)，提高了我對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的認(rèn)識(shí)，注重實(shí)驗(yàn)過(guò)程

6、中細(xì)節(jié)操作的重要性。第四部分：儀器操作 此次培訓(xùn)學(xué)習(xí)中我主要學(xué)習(xí)操作的儀器是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜，下面對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)單的介紹質(zhì)譜儀器質(zhì)譜組成部分進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)離子源離子源數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng)數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng)質(zhì)量分析器質(zhì)量分析器檢測(cè)接收器檢測(cè)接收器真空系統(tǒng)真空系統(tǒng)三重四極桿基本功能 Q1 可以篩選母離子Mz1 Q2 通過(guò)碰撞碎裂打碎離子，形成碎片離子峰 Q3 篩選子離子，定量子離子碎片強(qiáng)度Mz2液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜原理簡(jiǎn)介1、四級(jí)桿分析器由四根棒狀電極組成。相對(duì)兩根電極間加有電壓（Vdc+Vrf）,另外兩根電極間加有-（Vdc+Vrf）,其中Vdc為直流電壓，Vrf為射頻電壓。四個(gè)棒狀電極形成一個(gè)四級(jí)電場(chǎng)，下圖

7、為分析器示意圖。（Vdc+Vrf）-（Vdc+Vrf） 2、離子從離子源經(jīng)過(guò)離子光學(xué)系統(tǒng)聚焦后進(jìn)入四極電場(chǎng)，在四極電場(chǎng)的作用下做簡(jiǎn)諧振蕩，如果質(zhì)量為m，電荷為e的離子從z方向進(jìn)入四極場(chǎng)。1.子離子掃描2.母離子掃描3.中性丟失掃描4.多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)串聯(lián)質(zhì)譜QQQ幾種操作方式： Q1選擇某一特定質(zhì)量的母離子，Q2碰撞池碰撞產(chǎn)生碎片離子。Q3只分析一個(gè)碎片離子。此過(guò)程產(chǎn)生一個(gè)簡(jiǎn)單的單個(gè)離子碎片譜圖1.1.子離子掃描子離子掃描 Q1 Q2碰撞池 Q3Q1Q1只允許目標(biāo)離只允許目標(biāo)離子子210210通過(guò)通過(guò)Q3Q3只檢測(cè)來(lái)自母離子只檢測(cè)來(lái)自母離子210210的碎片的碎片158158，進(jìn)行，進(jìn)行定性定量分

8、析定性定量分析 在QQQ中進(jìn)行中性丟失掃描，Q1和Q3分析器的結(jié)合使靈敏度 和選擇性得到最大化。Q1/Q3中性丟失掃描可監(jiān)測(cè)母離子特定的中性丟失，例如縮氨酸磷酸鹽中一個(gè)磷酸根的丟失。在這個(gè)例子中，Q1和Q3的掃描得到母離子的譜圖，這張譜圖是母離子為了磷酸化，丟失了碎片98而得到的2.2.中性丟失掃描中性丟失掃描 Q1 Q3 碰撞池 掃描 中性丟失掃描 Q1選擇某一質(zhì)量的母離子，碰撞單元產(chǎn)生碎片離子。Q3用于搜尋多個(gè)選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)，這就是多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。3.3.多重反應(yīng)檢測(cè)多重反應(yīng)檢測(cè) Q1Q1 碰撞池碰撞池 Q3Q3 子離子掃描子離子掃描 選擇選擇m/zm/z 只允許目只允許目標(biāo)里子標(biāo)里

9、子210210和和350350通過(guò)通過(guò) Q3Q3僅監(jiān)測(cè)來(lái)自離子僅監(jiān)測(cè)來(lái)自離子210210的特征碎片的特征碎片191191和和來(lái)自離子來(lái)自離子350350的特征的特征碎片碎片226226，進(jìn)行定性，進(jìn)行定性定量分析定量分析Q1Q1和和Q3Q3均為選擇性離子監(jiān)測(cè)模式均為選擇性離子監(jiān)測(cè)模式 1、液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）主要可解決如下幾方面的問(wèn)題：不揮發(fā)性化合物分析測(cè)定；極性化合物的分析測(cè)定；熱不穩(wěn)定化合物的分析測(cè)定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析測(cè)定。 2、質(zhì)譜分析是先將物質(zhì)離子化，按離子的質(zhì)荷比分離，然后測(cè)量各種離子譜峰的強(qiáng)度而實(shí)現(xiàn)分析目的的一種分析方法。質(zhì)譜應(yīng)用1、樣品必須離子化

10、，只有離子是帶電的，帶電的才有可能分析，離子化的化合物才能被移動(dòng)，控制和質(zhì)量分析。2、必須具有一定的真空（真空系統(tǒng)）和分子渦旋泵，離子飛行的平均自由程需要最大化，理論上，真空度越高越好。3、必須測(cè)量離子的質(zhì)量數(shù)、質(zhì)荷比（m/z）質(zhì)譜的特點(diǎn)常見(jiàn)術(shù)語(yǔ)常見(jiàn)術(shù)語(yǔ)1、質(zhì)荷比：離子質(zhì)量（以相對(duì)原子量單位計(jì)）與它所帶電荷（以電子電量為單位計(jì)）的比值，寫(xiě)作m/z.2、峰：質(zhì)譜圖中的離子信號(hào)通常稱(chēng)為離子峰或簡(jiǎn)稱(chēng)峰。3、離子豐度：檢測(cè)器檢測(cè)到的離子信號(hào)強(qiáng)度。4、分子離子：自由基離子M+ 很活潑，易碎裂而產(chǎn)生廣義的碎片離子。5、準(zhǔn)分子離子：由軟電離技術(shù)產(chǎn)生的質(zhì)子或其它陽(yáng)離子加合離子以及質(zhì)子化或其它陰離子加合離子。6、碎片離子：電離后具有過(guò)剩內(nèi)能的分子離子能以多種方式裂解生成碎片離子。 學(xué)習(xí)過(guò)程中主要操作和使用的儀器設(shè)備有高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀；液相色譜法；凝膠色譜滲透凈化儀；氮吹儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；固相萃取裝置，詳