植物油中磷脂含量的測定

1、2021/6/161項目五植物油中磷脂含量的測定食品分院劉深勇2021/6/162主要內容n實驗目的實驗目的n 掌握用油脂中磷脂測定的原理和方法。n 學習吸收曲線的制作和結果計算。n 進一步熟練掌握分光光度計的使用方法。2021/6/163磷脂的定義2021/6/164實驗原理植物油脂中的磷脂經灼燒成五氧化二磷，被熱鹽酸變成磷酸，遇鉬酸鈉生成磷鉬酸鈉，用硫酸聯(lián)氨還原形成鉬藍，在680nm，用分光光度法測定其含量。2021/6/165磷脂測定儀器和器具n鉬藍比色法鉬藍比色法n1.瓷坩堝或石英坩堝；n2.分光光度計或帶塞的50 ml比色管；n3.移液管：5、10 ml；n4.電爐、高溫爐；n5.容

2、量瓶：100、500、1000 ml；n6.表面皿、燒杯、量筒；n7.恒溫水浴鍋；n8.漏斗、坩堝鉗、試劑瓶等 2021/6/166磷脂測定的試劑1.50氫氧化鉀溶液；2.鹽酸、硫酸、氧化鋅、濾紙；3.0.015硫酸聯(lián)氨溶液；4.2.5鉬酸鈉稀硫酸溶液：量取140 ml硫酸注入300 ml水中，搖勻，冷卻至室溫，加入 12.5 g鉬酸鈉，溶解后加水至500 ml，搖勻，靜置24 h備用。5.磷標準溶液：稱取無水的磷酸二氫鉀0.4391 g溶于1000 ml水中，作為1號液，含磷0.1 mg/ml，吸取1號液10 ml，加水稀釋至100 ml，含磷0.01 mg/ml，作為2號液，比色用。202

3、1/6/167操作步驟1.繪制標準曲線繪制標準曲線：取4只50 ml比色管，編成1，2，4，8五個號碼，按號碼順序分別注入磷標準2號液1，2，4，8 ml，再按順序分別加水9，8，6，2 ml。接著向4只管內各加0.015硫酸聯(lián)氨溶液8.0ml；各加鉬酸鈉稀硫酸溶液2.0 ml，加塞、搖勻。去塞，將4只管置于正在沸騰的水浴中加熱10 min，取出冷卻至室溫，用水稀釋至50 ml，充分搖勻，靜置10 min后，用分光光度計在波長650 nm 下，用1cm液槽，用水調整零點，分別測定吸光度值。以吸光度為縱坐標，以磷量（0.01、0.02、0.04、 0.08 mg）為橫坐標繪制標準曲線。2021/

4、6/168操作步驟2.制備被測液制備被測液：用坩堝稱取試樣約10 g（準確至0.001 g），加氧化鋅0.5 g（氧化鋅在灰化中能和磷形成磷酸鋅防止磷以氧化物的形式揮發(fā)造成損失），先在電爐上加熱炭化，然后送入550600的高溫爐中灼燒至灰化（白色），灼燒時間約1 h，取出坩堝冷卻至室溫，用熱鹽酸（1 1）10 ml溶解灰分，并加熱微沸5 min，將溶解液過濾注入100 ml容量瓶中，用熱水沖洗坩堝和濾紙，待濾液冷卻至室溫后，用50氫氧化鉀溶液中和至出現混濁，緩慢滴加鹽酸使氧化鋅沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀釋至刻度，搖勻。2021/6/169操作步驟操作步驟3.比色比色：用移液管吸取被測

5、液10 ml注入50 ml比色管中，加入0.015硫酸聯(lián)氨8.0 ml，加2.0 ml鉬酸鈉稀硫酸溶液，加塞，搖勻。去塞，將比色管置于正在沸騰的水浴中加熱10 min，取出冷卻至室溫，用水稀釋至50 ml，充分搖勻，靜置10 min后，用分光光度計在波長650 nm下，用1cm液槽，用水調整零點，測定吸光度值。2021/6/1610結果計算結果計算 根據被測液的吸光值，從標準曲線查得磷量（P），按公式（1）計算磷脂含量：式中：P標準曲線查得的磷量，mg；V1樣品灰化后稀釋的體積，ml；V2比色時所取的被測液體積，ml；26.31每毫克磷相當于磷脂的毫克數；W試樣重量，g。雙試驗結果允許差不超過0.04，求其平均數，即為測定結果。測定結果取小數點