實驗八.中性粒細胞吞噬功能檢測

1、實驗七思考題：為何常用密度為實驗七思考題：為何常用密度為1.077土土0.002的分層液分離人單個核細胞？的分層液分離人單個核細胞？答：這和人外周血中各類成分密度有關(guān)。答：這和人外周血中各類成分密度有關(guān)。 血小板：血小板： 1.030-1.035，淋巴細胞：，淋巴細胞： 1.075-1.090，粒細胞，粒細胞 : 1.092，紅細胞：，紅細胞： 1.093，因此將血液疊加在因此將血液疊加在1.077土土0.002的分層液上面，的分層液上面，經(jīng)離心會單個核細胞會處于血漿和分離液中間，經(jīng)離心會單個核細胞會處于血漿和分離液中間，從而達到分離目的。從而達到分離目的。實驗八實驗八 中性粒細胞吞噬功能檢測

2、中性粒細胞吞噬功能檢測 臨床微生物及免疫學檢驗教研室臨床微生物及免疫學檢驗教研室一、實驗目的一、實驗目的l掌握中性粒細胞吞噬功能試驗的原理。掌握中性粒細胞吞噬功能試驗的原理。l熟悉中性粒細胞吞噬功能試驗的操作方法。熟悉中性粒細胞吞噬功能試驗的操作方法。二、實驗原理二、實驗原理 中性粒細胞具有吞噬細菌和異物顆粒的能力。中性粒細胞具有吞噬細菌和異物顆粒的能力。 在體外將中性粒細胞與細菌或異物顆粒共同孵育在體外將中性粒細胞與細菌或異物顆粒共同孵育后，即可被中性粒細胞吞噬、攝入，顯微鏡觀察可后，即可被中性粒細胞吞噬、攝入，顯微鏡觀察可見中性粒細胞內(nèi)有細菌或異物顆粒。見中性粒細胞內(nèi)有細菌或異物顆粒。二、

3、實驗原理二、實驗原理l計算吞噬有細菌或異物顆粒的中性粒細胞數(shù)占計算吞噬有細菌或異物顆粒的中性粒細胞數(shù)占中性粒細胞總數(shù)的百分率和每個中性粒細胞平中性粒細胞總數(shù)的百分率和每個中性粒細胞平均吞噬細菌或異物顆粒數(shù)，可反應(yīng)中性粒細胞均吞噬細菌或異物顆粒數(shù)，可反應(yīng)中性粒細胞的吞噬功能。的吞噬功能。 三、實驗器材三、實驗器材l標本：人抗凝血標本：人抗凝血l被吞噬物被吞噬物 ： 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌l培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基l試劑：瑞吉氏染液、無菌生理鹽水試劑：瑞吉氏染液、無菌生理鹽水l器材：枸櫞酸鈉抗凝管、試管、載玻片、器材：枸櫞酸鈉抗凝管、試管、載玻片、 恒溫箱、顯微鏡等。恒溫箱、顯微

4、鏡等。l制備被吞噬物：制備被吞噬物：金葡菌接種于肉湯培養(yǎng)金葡菌接種于肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h12h后，置后，置44備用。備用。2. 2. 準備被檢測標本：準備被檢測標本：枸櫞酸鈉抗凝血枸櫞酸鈉抗凝血1ml1ml。四、實驗步驟四、實驗步驟實驗步驟實驗步驟混合培養(yǎng)：混合培養(yǎng)：在在1ml1ml抗凝血中加入金葡菌懸抗凝血中加入金葡菌懸液液3-53-5滴，混勻，置滴，混勻，置37 37 水浴箱中，孵育水浴箱中，孵育30min30min，期間每，期間每10min10min搖勻搖勻1 1次。次。制備細胞推片，瑞制備細胞推片，瑞- -吉染色：吉染色：油鏡觀察：油鏡觀察：計數(shù)計數(shù)200200個中性粒細胞，

5、記錄個中性粒細胞，記錄吞噬細菌的細胞數(shù)和每個中性粒細胞吞入吞噬細菌的細胞數(shù)和每個中性粒細胞吞入的細菌數(shù)。的細菌數(shù)。五、結(jié)果判斷五、結(jié)果判斷l(xiāng)中性粒細胞核深染且分葉，胞漿淡紅色，細菌呈紫色中性粒細胞核深染且分葉，胞漿淡紅色，細菌呈紫色-l吞噬百分率（吞噬百分率（% %）= = 100100l吞噬指數(shù)吞噬指數(shù)= =l參考區(qū)間：吞噬率參考區(qū)間：吞噬率（9191 + + 5.85.8）% %；吞噬指數(shù)大于；吞噬指數(shù)大于1 1計數(shù)的中性粒細胞吞噬細菌總數(shù)計數(shù)的中性粒細胞吞噬細菌總數(shù)計數(shù)的中性粒細胞總數(shù)計數(shù)的中性粒細胞總數(shù)吞噬細菌的中性粒細胞數(shù)吞噬細菌的中性粒細胞數(shù)計數(shù)的中性粒細胞總數(shù)計數(shù)的中性粒細胞總數(shù)

6、 -六、注意事項六、注意事項1.1.抗凝劑的選擇：抗凝劑的選擇：肝素抗凝時白細胞著色不佳，肝素抗凝時白細胞著色不佳，經(jīng)瑞經(jīng)瑞- -吉染色后易出現(xiàn)深藍色背景；吉染色后易出現(xiàn)深藍色背景；EDTAEDTA影響影響 白細胞的吞噬功能；構(gòu)椽酸鈉抗凝最合適。白細胞的吞噬功能；構(gòu)椽酸鈉抗凝最合適。2.2.細菌的濃度和孵育溫度：細菌的濃度和孵育溫度：3.3.血涂片的質(zhì)量：血涂片的質(zhì)量：七、應(yīng)用與評價七、應(yīng)用與評價l本試驗可用于檢測有吞噬功能障礙的病癥，如結(jié)合本試驗可用于檢測有吞噬功能障礙的病癥，如結(jié)合NBTNBT（硝基藍四氮唑還原試驗），在一定程度上可（硝基藍四氮唑還原試驗），在一定程度上可反映機體的免疫功能狀態(tài)，也可用于有免疫調(diào)節(jié)活反映機體的免疫功能狀態(tài)，也可用于有免疫調(diào)節(jié)活性藥物的篩選。性藥物的篩選。l此法操作簡便，不需特殊設(shè)備，省時，費用低廉。此法操作簡便，不需特殊設(shè)備，省時，費用低廉。但光學顯微鏡分辨率低，有時難以計數(shù)吞入的細菌但光學顯微鏡分辨率低，有時難以計數(shù)吞入的細菌顆粒。顆粒。八、思考題八、思考題繪制中性粒細胞吞噬細菌的鏡下形態(tài)。繪制中性粒細胞吞噬細菌的鏡下形態(tài)。人有了知識，就會具備各種分析能力，明辨是非的能力。所以我們要勤懇讀書，廣泛閱讀，古人說“書中自有黃金屋?！蓖ㄟ^閱讀科技