單核增生李斯特氏菌檢測概述pptPPT課件

1、 25g樣品樣品+225ml FB1增菌液增菌液 1mL轉(zhuǎn)種轉(zhuǎn)種10mLFB2增菌液增菌液 VIDAS 快速篩選快速篩選 陰性，陰性，報告結(jié)果報告結(jié)果 陽性，陽性，繼續(xù)鑒定繼續(xù)鑒定 選擇性培養(yǎng)基（顯色培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基（顯色培養(yǎng)基、OXAOXA、PALCAMPALCAM） 挑選可疑菌落，接種挑選可疑菌落，接種TSA-YE 接種接種TSB-YE藍藍色色菌菌落落檢檢驗驗典典型型運運動動檢檢驗驗過過氧氧化化氫氫酶酶試試驗驗革革蘭蘭氏氏染染色色溶溶血血試試驗驗動動力力試試驗驗協(xié)協(xié)同同溶溶血血試試驗驗血血清清學學試試驗驗 報告結(jié)果報告結(jié)果 API鑒定試驗或生化試驗鑒定試驗或生化試驗尿素酶水解，硝酸鹽還

2、原，尿素酶水解，硝酸鹽還原，葡萄糖，甘露醇，麥芽糖，葡萄糖，甘露醇，麥芽糖，鼠李糖，木糖，七葉苷，鼠李糖，木糖，七葉苷，TSI MR-VP單增李斯特菌無害李斯特菌綿羊李斯特菌馬紅球菌金葡協(xié)同溶血試驗檢樣檢樣25g(或或25mL)樣品樣品+LB1增菌液增菌液225mL，均質(zhì)，均質(zhì)0.1mL+10mL LB2增菌液增菌液李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基PALCAM瓊脂瓊脂接種木糖、鼠李糖，接種木糖、鼠李糖，361 ，24h；同時于；同時于TSA-YE平板劃線純化，平板劃線純化，30 1 ，24h48h木糖木糖-，鼠李糖，鼠李糖+鑒定鑒定結(jié)果報告結(jié)果報告30 1 ，24h30 1 ，1824

3、h36 1 ，24h48h25g樣品樣品+225ml BLEB基礎（加入丙酮酸鈉）基礎（加入丙酮酸鈉） 加入萘啶酮酸、鹽酸吖錠黃、放線菌酮加入萘啶酮酸、鹽酸吖錠黃、放線菌酮 30 4hr劃線接種劃線接種OXA平板平板30 24hr和和48hr 科瑪嘉李氏菌顯色培養(yǎng)基科瑪嘉李氏菌顯色培養(yǎng)基TSA-YE分純分純 35 24hr-48hr 35 24hr過氧化氫酶試驗、革蘭氏染色、溶血試驗、糖發(fā)過氧化氫酶試驗、革蘭氏染色、溶血試驗、糖發(fā)酵試驗（木糖、鼠李糖）酵試驗（木糖、鼠李糖） API Listeria 35 24-48hr報告結(jié)果報告結(jié)果 35 18-24hr 25g樣品樣品+225ml FB1

4、增菌液增菌液 1mL轉(zhuǎn)種轉(zhuǎn)種10mLFB2增菌液增菌液 VIDAS 快速篩選快速篩選 陰性，陰性，報告結(jié)果報告結(jié)果 陽性，陽性，繼續(xù)鑒定繼續(xù)鑒定 選擇性培養(yǎng)基（顯色培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基（顯色培養(yǎng)基、OXAOXA、PALCAMPALCAM） 挑選可疑菌落，接種挑選可疑菌落，接種TSA-YE 接種接種TSB-YE藍藍色色菌菌落落檢檢驗驗典典型型運運動動檢檢驗驗過過氧氧化化氫氫酶酶試試驗驗革革蘭蘭氏氏染染色色溶溶血血試試驗驗動動力力試試驗驗協(xié)協(xié)同同溶溶血血試試驗驗血血清清學學試試驗驗 報告結(jié)果報告結(jié)果 API鑒定試驗或生化試驗鑒定試驗或生化試驗尿素酶水解，硝酸鹽還原，尿素酶水解，硝酸鹽還原，葡萄糖，

5、甘露醇，麥芽糖，葡萄糖，甘露醇，麥芽糖，鼠李糖，木糖，七葉苷，鼠李糖，木糖，七葉苷，TSI MR-VP方法名稱方法名稱一次增菌一次增菌二次增菌二次增菌分離分離鑒定鑒定快速方法快速方法SN 0184-1993加工MBP30，18-24hEB30，24/48hMMA/OXA（35，24-48h）藍色菌落；典型運動；過氧化氫酶；革蘭氏染色；溶血試驗；尿素酶試驗；硝酸鹽還原；MR-VP；三糖鐵；糖發(fā)酵；動力試驗；協(xié)同溶血*；血清學檢驗*；小鼠毒力試驗*無未加工EB（30，24/48h）GB/T 4789.30-2003EB（301，48h）MMA（301，24-48h）藍色菌落；三糖鐵；動力試驗；染色

6、鏡檢（革蘭氏染色、典型運動）；生化特性（溶血反應、硝酸鹽還原、尿素酶、MR-VP、糖發(fā)酵）；小鼠毒力試驗；協(xié)同溶血無LB1（301，24h）LB2（301，24h）FDABLEB+Phy（30，4h）BLEB+Phy+三種抑菌劑（30，20/44h）OXA/PALOM/MOX/LPM+七葉靈+Fe3+推薦BCM /ALOA / RapidLmono /CHROMagar Listeria藍色菌落*；典型運動或動力試驗；過氧化氫酶；革蘭氏染色；溶血試驗；硝酸鹽還原*；糖發(fā)酵；協(xié)同溶血；血清學檢驗；小鼠毒力試驗*篩選、鑒定都可以使用快速方法USDAUVM（302，222h）FB（352，26-48

7、2h）MOX（352，26-482h）初步鑒定：純菌菌落形態(tài)；典型運動；生化鑒定：MICRO-ID Listeria或Api Listeria或BAM等方法中的傳統(tǒng)生化反應；協(xié)同溶血遺傳鑒定：核糖體RNA檢測；PFGE*篩選用的快速方法必須經(jīng)過確認后才可使用鑒定中用到MICRO-ID 、Api、GenProbe AccuProbe、GENE-TRAK方法名稱方法名稱一次增菌一次增菌二次增菌二次增菌分離分離鑒定鑒定快速方法快速方法CFIAMFHPB-30LEB（UVM）（30，24/48h）MFB（35，24-48h）OXA+LPM或MOX或PALCOM典型運動或動力試驗；溶血試驗；甘露醇；木糖

8、；鼠李糖；快速鑒定試劑盒*；過氧化氫酶*；革蘭氏染色*；協(xié)同溶血*；血清學試驗*作為鑒定的可選步驟，允許使用快速方法，如Vitek或API、Micro ID Listeria、Listera AccuprobeISO 11290-1:1996（E）半量Fraser肉湯（30，242h）Fraser肉湯（35或37，482h）OXA和PALCOM（30、35或37，24-48h，）PALCOM平板微需氧或好氧條件培養(yǎng)藍色菌落*；過氧化氫酶；革蘭氏染色；動力試驗或典型運動*；溶血試驗；糖發(fā)酵試驗；協(xié)同溶血；送參考實驗室（血清或噬菌體分型）無NMKL No.136 2nd 1999LB（30.01.0，243h）LB（30.01.0，243h）或Fraser肉湯（37.01.0，484h）OXA和PA