各種培養(yǎng)基瓊脂原理

1、ss瓊脂SS培養(yǎng)基用于用于沙門氏菌和志賀氏菌的分離培養(yǎng)SS平板的原理:SS為強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基.其成分除了有必要的月東、牛肉膏等氮、碳源外，其他則為選擇性抑制劑和緩沖劑。檸檬酸鈉、膽鹽、硫代硫酸鈉的協(xié)同作用及煌綠共同來抑制腸道非病原性細(xì)菌及部分大腸桿菌的生長。對志賀菌屬及沙門菌屬相對抑制性較弱。硫代硫酸鈉有助于大腸菌的著色，檸檬酸鐵能緩解某些藥物對病原菌的毒副作用，同時與細(xì)菌產(chǎn)物起反應(yīng)呈黑色菌落。中性紅指示劑可把分解乳糖和不分解乳糖的細(xì)菌鑒別開，前者為紅色菌落，后者為無色菌落。堿性變黃，酸性變紅變色范圍pH值6.8（紅）8.0（橙黃）；酚紅酸性變黃，堿性變紅pH：6.8（黃）-8.4（紅）Xld瓊

2、脂酵母膏粉提供氮源、維生素、生長因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；木糖、乳糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類，產(chǎn)酸使酚紅指示劑變黃；去氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽性菌，但不影響沙門氏菌的生長；硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原硫化氫，與檸檬酸鐵鏤中的鐵鹽生成黑色硫化鐵；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；酚紅為pH指示劑。GN增菌液胰蛋白月東提供碳源、氮源、維生素和礦物質(zhì)；葡萄糖和甘露醇提供糖類；檸檬酸鈉和去氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽性細(xì)菌，但不影響沙門氏菌和志賀氏菌（陰性菌）的生長；磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀是緩沖劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓。高鹽察氏培養(yǎng)基硝酸鈉提供氮源；磷酸二氫鉀是緩沖劑；硫酸鎂、氯化鉀、硫酸亞鐵提供必須的離子；含量較高的氯化鈉具

3、有抑制細(xì)菌和減緩生長速度快的毛霉科菌種的作用；蔗糖提供碳源；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。三糖鐵瓊脂（TSI）1 .原理分析本培養(yǎng)基適合于腸桿菌科的鑒定。用于觀察細(xì)菌對糖的利用和硫化氫（變黑）的產(chǎn)生。該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1,只能利用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被加之細(xì)菌利用培分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化,養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物（K）,故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌（e.coli）,則產(chǎn)生大量的酸（A）,使整個培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如培養(yǎng)基接種后產(chǎn)生黑色沉淀，是因為某些細(xì)菌能分解含硫氨基

4、酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。2 .試驗方法以接種針挑取待試菌可疑菌落或者純造就物穿刺接種并涂布于斜面置36小C造就18-24h觀察結(jié)果3 .化學(xué)性質(zhì)粉紅色粉末，一種鑒別培養(yǎng)基，由牛肉膏、酵母菌膏、卵白月東、月東、葡萄糖、乳糖、蔗糖、硫酸亞鐵、氯化鈉、硫代硫酸鈉、酚紅、瓊脂等配合制造而成。易吸濕，加水煮沸熔解后成橘紅色半透明液體，pH約7.5,冷至45c開始凝固。4 .結(jié)果志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生H2S。大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生H2S。沙門氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生H2S,多

5、數(shù)產(chǎn)氣。2志賀氏菌3沙門氏菌4大腸桿菌KIA和TSI常用于觀察微生物發(fā)酵葡萄糖和乳糖的能力，只用KIA一種就可以把腸桿菌科細(xì)菌和其他科細(xì)菌區(qū)別出來。KIA成分中含有葡萄糖和乳糖，二者比例為1:10,指示劑為酚紅，其在PH<6.8時變?yōu)辄S色，而KIA的PH為7.4,產(chǎn)少量的酸就可導(dǎo)致顏色變化。生化原理：斜面部分暴露于空氣中，為有氧環(huán)境。而下部與空氣隔絕是相對厭氧的環(huán)境。因此配KIA或TSI時，最重要的是斜面部分和管下部瓊脂的長度，兩者均為3cm,以保證兩部分相對應(yīng)的有氧或厭氧環(huán)境。用針穿刺時，取單個菌落，穿刺至底部3-5mm處，然后在斜面上往復(fù)劃線。放35度培養(yǎng)18-24小時。觀察結(jié)果：有

6、三種類型A.非發(fā)酵型：無碳?xì)浠衔锇l(fā)酵，所以無酸產(chǎn)生，斜面上瓊脂的肽降解產(chǎn)物是堿性物質(zhì)導(dǎo)致斜面變紅。這種類型的細(xì)菌稱為非發(fā)酵型。非發(fā)酹型B.非乳糖發(fā)酵型：如果接種的是發(fā)酵葡萄糖不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌，培養(yǎng)基內(nèi)僅有0.1%葡萄糖可以產(chǎn)酸Ao開始階段，培養(yǎng)8-12h時，產(chǎn)生的酸足以引起斜面和底部顏色變成黃色。在接下來的時間里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分的細(xì)菌在有氧條件下開始氧化降解氨基酸，產(chǎn)生的胺類很快就中和斜面上存在的酸；到18-24h，整個斜面又轉(zhuǎn)換成堿性PH,顏色有變成紅色。深部（厭氧區(qū)域），氨基酸降解不足以中和形成的酸，培養(yǎng)基仍為黃色。非乳精發(fā)酹型開始反應(yīng)時為A/A,斜面和底部都變黃色*氧1后為

7、R/品喜I面為ftfer底部為黃色.B.非發(fā)薛乳糖室示意圖C.乳糖(蔗糖)發(fā)酵型乳精發(fā)酵型C.發(fā)酵乳餐型示意圖MH瓊脂（MHA）用途：用于抗生素敏感試驗配方：(g/L)牛肉粉可溶性淀粉酸水解酪蛋白瓊脂pH值7.3土0.6.01.517.517.0125c原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、維生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代謝產(chǎn)物；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。用法：稱取本品42.0g,加熱溶解于1000ml蒸儲水中，121C高壓滅菌15分鐘待冷至50C,傾入無菌平皿，備用。質(zhì)量控制：在36±1C培養(yǎng)18-24小時。質(zhì)控菌株菌株編號生長情況其它特征金黃色葡萄球菌ATCC25923+黃色菌落

8、大腸埃希氏菌ATCC25922+半透明菌落沙門氏菌ATCC14028+半透明菌落銅綠假單胞菌CMCC10104+綠色菌落mh瓊脂(mullerhintonagar)是至今被國際公認(rèn)和who推薦的最適用于瓊脂紙片擴(kuò)散法(kirby-baner紙片擴(kuò)散法)測定細(xì)菌對抗生素敏感性的培養(yǎng)基。究其原因，主要由于mh瓊脂培養(yǎng)基產(chǎn)品批間藥物敏感試驗重復(fù)性比其他培養(yǎng)基好;接種于mh瓊脂培養(yǎng)基上，絕大多數(shù)致病菌生長良好；mh瓊脂培養(yǎng)基對磺胺、甲氧芳胺喀咤、四環(huán)素的抑制成分含量低EC肉湯中文名EC肉湯菌種大腸菌群大腸桿菌英文名E.ColiBroth用途：用于糞大腸菌群、大腸桿菌的測定(GB2008、SN標(biāo)準(zhǔn))配方

9、：(g/L)胰蛋白月東乳糖氯化鈉磷酸氫二鉀磷酸二氫鉀三號膽鹽pH值6.9±020.05.05.04.01.51.525C原理：胰蛋白陳提供碳氮源；三號膽鹽抑制革蘭氏陽性菌，特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞鏈球菌；乳糖是可發(fā)酵的糖類；磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀為緩沖劑；氯化鈉可維持均衡的滲透壓。用法：稱取本品37.0g,加熱攪拌溶解于1000ml蒸儲水中，分裝到有倒立發(fā)酵管的16mm*150mm試管中，每管8ml,121C高壓滅菌15分鐘備用。質(zhì)量控制：在44.5C培養(yǎng)24-48小時。質(zhì)控菌株菌株編號生長情況其它特征糞大腸菌群+產(chǎn)氣大腸埃希氏菌ATCC25922+產(chǎn)氣金黃色葡萄球菌ATCC259

10、23/沙門氏菌ATCC14028+/、產(chǎn)氣HE瓊脂（HE）用途：用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）配方：（g/L）蛋白月東,肉膏卜糖區(qū)糖卜楊素?fù)?dān)鹽“化鈉京脂“麝香草酚蘭H代硫酸鈉除酸鐵俊,氧膽酸鈉性復(fù)紅pH值7.5±0.22.03.012.012.02.020.05.020.00.0646.80.82.00.125C原理：蛋白月東、牛肉膏提供碳源、氮源、維生素和礦物質(zhì)；乳糖、蔗糖和水楊素為可發(fā)酵的糖類；膽鹽、去氧膽酸鈉、澳麝香草酚蘭和酸性復(fù)紅抑制革蘭氏陽性菌；氯化鈉維持均衡的滲透壓；硫代硫酸鈉和檸檬酸鐵俊用于檢測硫化氫的產(chǎn)生，使菌落中心呈黑色；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；澳麝香草酚蘭

11、和酸性復(fù)紅為pH指示劑，發(fā)酵糖產(chǎn)酸的菌落呈紅色，不發(fā)酵糖的菌落為藍(lán)綠色。用法：稱取本品95.8g,加熱溶解于1000ml蒸儲水中,冷至50-55C時,傾入無菌平皿，本培養(yǎng)基個需要局壓滅菌.質(zhì)量控制：在36±1cM#18-24小時。質(zhì)控菌株菌株編號生長情況其它特征金黃色葡萄球菌ATCC25923-/大腸埃希氏菌ATCC25922+桔更色菌落沙門氏菌ATCC14028+無色透明菌落，后黑色中心福氏志賀氏菌ATCC12022+無色透明菌落伊紅美藍(lán)瑞氏染料培養(yǎng)基(EMB)伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(eosin-methylenebluemedium,簡稱EMBmedium),一般用于檢測大腸桿菌。伊紅為

12、酸性染料，美藍(lán)為堿性染料。伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基在藥典中又名曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基。當(dāng)大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時細(xì)菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍(lán)結(jié)合形成紫黑色菌落，弁帶有綠色金屬光澤。而產(chǎn)氣桿菌則形成呈棕色的大菌落。在堿性環(huán)境中不分解乳糖產(chǎn)酸的細(xì)菌不著色，伊紅和美藍(lán)不能結(jié)合，故沙門氏菌等為無色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培養(yǎng)基上不生長。常用的伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基，可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌。如果有大腸桿菌，因其強(qiáng)烈分解乳糖而產(chǎn)生大量的混合酸，菌體帶H+,故菌落被染成深紫色，從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤。DHL瓊脂（膽硫乳瓊脂）培養(yǎng)基蛋白月東、牛肉膏粉提供碳源、氮源、維生素

13、和礦物質(zhì)；乳糖、蔗糖為可發(fā)酵的糖類；去氧膽酸鈉和檸檬酸鈉抑制革蘭氏陽性菌及大多數(shù)的大腸菌群和變形桿菌，但不影響沙門氏菌的生長；硫代硫酸鈉和檸檬酸鐵鏤用于檢測硫化氫的產(chǎn)生，使菌落中心呈黑色;中性紅為pH指示劑，發(fā)酵糖產(chǎn)酸的菌落呈紅色，不發(fā)酵糖的菌落為無色；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）用途用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)。成分（g/L）蛋白陳5.0g乳糖4.0g亞硒酸氫鈉4.0g磷酸氫二鈉5.5g磷酸二氫鉀4.5gL-胱氨酸0.01gpH值7.0±0.1用法稱取本品23.0克，加熱溶解于1000ml蒸儲水中，無菌操作分裝于滅菌三角瓶或試管中備用。當(dāng)天制備當(dāng)天使用，無需高壓滅菌。質(zhì)量控制和典型特征接種10-100個沙門氏菌于36±1C培養(yǎng)18-24小時生長明顯，溶液混濁。原理：蛋白月東提供碳源和氮源滿足細(xì)菌生長的需求；乳糖是可發(fā)酵的糖類；亞硒酸氫鈉抑制革蘭氏陽性菌和非沙門氏菌的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌；磷酸鹽是緩沖劑；L-胱氨酸為還原劑。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基用途：用于腸道致病菌的選擇性分離培養(yǎng)配方：(g/L)蛋白月東乳糖牛膽鹽氯化鈉中性紅瓊脂PH值20.0g10.0g5.0g5.0g0.03g14.0g7.1土0.2原理：蛋白臍提供碳氮源、維生素和生長因子；牛膽鹽可抑制革蘭氏陽性菌的生長；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基