骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查

1、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查骨髓骨髓:人體的主要造血器官。組成：由分布于骨小梁之間的基質(zhì)、血管、神經(jīng)、網(wǎng)狀組織和發(fā)育過程中的血細(xì)胞組成。一、血細(xì)胞的生成、發(fā)育規(guī)律一、血細(xì)胞的生成、發(fā)育規(guī)律造血干細(xì)胞的功能特點(diǎn)：自我更新多向分化血細(xì)胞的生成：-造血微環(huán)境、造血細(xì)胞生長因子 干細(xì)胞 祖細(xì)胞 各系原始細(xì)胞 幼稚細(xì)胞 成熟細(xì)胞血細(xì)胞的發(fā)育過程髓系：紅細(xì)胞系統(tǒng)(Epo) 粒-單細(xì)胞系統(tǒng)：粒系 嗜中性 (GM-CSF) 嗜酸性 嗜堿性 單核系 巨核細(xì)胞系統(tǒng)(Meg-CSF和Tpo)淋系：T淋巴細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞-漿細(xì)胞血細(xì)胞發(fā)育中形態(tài)學(xué)演變規(guī)律細(xì)胞的大小及外形 細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核核質(zhì)比例血細(xì)胞發(fā)育、演變規(guī)

2、律圖原始幼稚（紅系和粒系：早幼、中幼和晚幼）成熟胞體：大?。ň藓思?xì)胞：小大,且不規(guī)則） 胞核：大 ?。捍笮。t細(xì)胞核消失，巨核細(xì)胞：小大） 形 狀：圓不規(guī)則 染色質(zhì)：細(xì)致稀疏粗糙致密，淺深 核 仁：多少無 ，清晰模糊消失胞質(zhì)：數(shù)量：少多 染色：嗜堿、深染嗜堿、淡染嗜酸、淡染（單核細(xì) 胞和淋巴細(xì)胞仍嗜堿） 特殊物質(zhì)（血紅蛋白、特殊顆粒等）：無少多 核/質(zhì)：大小（核大質(zhì)少核小質(zhì)多），巨核細(xì)胞則相反。二、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查方法和內(nèi)容二、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查方法和內(nèi)容骨髓涂片-骨髓穿刺術(shù)骨髓活檢-骨髓活組織檢查術(shù)骨髓涂片檢查低倍鏡檢查： 1. 1.確定取材和涂片、染色是否滿意確定取材和涂片、染色是否滿意

3、 2. 2.判斷骨髓增生程度判斷骨髓增生程度 3. 3.巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)巨核細(xì)胞計(jì)數(shù) 4. 4.觀察有無異常細(xì)胞觀察有無異常細(xì)胞油鏡檢查： 1. 1.有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 2. 2.觀察細(xì)胞形態(tài)觀察細(xì)胞形態(tài)骨髓涂片鏡檢結(jié)果分析骨髓增生程度：有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞比值各系細(xì)胞及其各發(fā)育階段細(xì)胞的比例、形態(tài)各系細(xì)胞比例改變的臨床意義有無特殊細(xì)胞及寄生蟲增生程度增生程度 有核細(xì)胞有核細(xì)胞/ /成熟紅成熟紅 有核細(xì)胞有核細(xì)胞% % 常見疾病常見疾病極度活躍 1:1 50%以上 各類型白血病明顯活躍 1:10 10%以上 各類型白血病、 增生性貧血、ITP增生活躍 1:20 5%左右 正常骨髓或某

4、些貧血 增生減低 1:50 1%以下 再障、粒缺或 粒細(xì)胞減少癥增生極度減低 1:300 0.5%以下 再障骨髓增生程度5級骨髓各系細(xì)胞比例的正常范圍骨髓各系細(xì)胞比例的正常范圍粒系：50-60%，原粒1% 早幼粒5%； 紅系：20%，淋巴系：20%單核細(xì)胞系：4%漿細(xì)胞系統(tǒng)：5:1 5:1粒系細(xì)胞增多 紅系細(xì)胞生成受抑比例減低：比例減低： G/EG/E 2:1 2:1粒系細(xì)胞減少紅系細(xì)胞增多（四（四）淋巴細(xì)胞系統(tǒng)淋巴細(xì)胞系統(tǒng)lymphocyteslymphocytes（1 1）淋巴細(xì)胞）淋巴細(xì)胞絕對性增多絕對性增多急、慢性淋巴細(xì)胞性白血病淋巴瘤傳染性淋巴細(xì)胞增多癥傳染性單核細(xì)胞增多癥病毒感染（

5、2 2）淋巴細(xì)胞）淋巴細(xì)胞相對性增多相對性增多再生障礙性貧血粒細(xì)胞缺乏或減少癥（五）單核細(xì)胞系統(tǒng)（五）單核細(xì)胞系統(tǒng)monocytesmonocytes增多增多急性單核細(xì)胞性白血病急性粒單細(xì)胞性白血病骨髓增生異常綜合征感染性疾病自身免疫性疾病惡性腫瘤（六）漿細(xì)胞系統(tǒng)（六）漿細(xì)胞系統(tǒng)plasmacytes增多增多多發(fā)性骨髓瘤漿細(xì)胞白血病巨球蛋白血癥反應(yīng)性漿細(xì)胞增多：慢性炎癥，感染，腫瘤，自身免疫性疾病，過敏性疾病再生障礙性貧血、粒細(xì)胞缺乏（七）巨核細(xì)胞系統(tǒng)（七）巨核細(xì)胞系統(tǒng)megakaryocytesmegakaryocytes 增高：增高： （1）特發(fā)性血小板減少性紫癜， （2）Evans綜合征

6、 （3）骨髓增殖性疾病 （4）脾功能亢進(jìn)和大出血后 （5）AML-M7 減低：減低：（1）再生障礙性貧血 （2）急性白血?。ǔ釧ML-M7） （3）其他骨髓病、放射病 （4）急性感染、中毒三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色過氧化物酶（peroxidase，POX )蘇丹黑染色（Sudan black B stain，SB）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(Neutrophli alkaline phosphatase， NAP)非特異性酯酶染色（NSE）+NaF抑制試驗(yàn)糖原染色(periodic acid Schiffs reaction，AS)鐵染色酸性磷酸酶染色（acid phosph

7、atase，ACP）特異性酯酶染色（specific esterase，SE）POXPOX【原理】【原理】 【結(jié)果】【結(jié)果】強(qiáng)陽性：胞質(zhì)中藍(lán)黑色顆粒粗大而密集 弱陽性：胞質(zhì)中藍(lán)黑色顆粒細(xì)小而稀疏 陰 性: 胞質(zhì)中無藍(lán)黑色顆粒者【正常參考值】【正常參考值】 POX主要存在于粒細(xì)胞系統(tǒng)，原粒細(xì)胞為陰性,隨細(xì)胞的成熟反應(yīng)越強(qiáng)，但嗜堿性粒細(xì)胞為陰性?！九R床意義】【臨床意義】 陽性反應(yīng)：急性粒細(xì)胞性白血病。 陰性反應(yīng)：急性淋巴細(xì)胞性白血病。SBSB【原理原理】【結(jié)果和正常參考值結(jié)果和正常參考值】與POX染色大致相同?！九R床意義】【臨床意義】同POX染色反應(yīng)。NAPNAP【原理】【原理】【結(jié)果】【結(jié)果】

8、NAP主要存在于成熟粒細(xì)胞胞漿中，其他血細(xì)胞均為陰性反應(yīng)。【正常參考值】【正常參考值】 陽性率：平均為1040 ，以“十” 陽性反應(yīng)為主。 積分值：陽性積分值40 80（分）?！九R床意義】【臨床意義】慢性粒細(xì)胞性白血病與類白血病反應(yīng)慢性粒細(xì)胞性白血病與類白血病反應(yīng)的鑒別：CML時(shí)NAP活性明顯減低，類白血病反應(yīng)NAP活性極度增高。陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿與再生障礙性貧血陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿與再生障礙性貧血的鑒別:前者NAP活性減低，后者增高。急性白血病類型急性白血病類型的鑒別：急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)NAP活性增高，急性粒細(xì)胞白血病時(shí)減低。其他血液病其他血液病：淋巴瘤、骨髓增值性疾病、慢性淋巴細(xì)胞

9、性白血病等NAP活性中度增高。其他情況：其他情況：腎上腺皮質(zhì)激素功能亢進(jìn)、妊娠及應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素、雌激素等， NAP積分可增高。NSE+NSE+NaF抑制試驗(yàn)【正常參考值】【正常參考值】 NSE主要存在于單核細(xì)胞中，從原單核細(xì)胞到成熟單核細(xì)胞逐漸增強(qiáng)，粒細(xì)胞一般呈陰性或弱陽性?！九R床意義】【臨床意義】急性單核細(xì)胞性白血病為強(qiáng)陽性，且可被氟 化鈉所抑制。急性粒細(xì)胞性白血病與均為陰性或弱陽性,但 陽性反應(yīng)不被氟化鈉所抑制。急性淋巴細(xì)胞性白血病為陰性反應(yīng)。PASPAS【正常參考值正常參考值】有核紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)；淋巴細(xì)胞多呈陰性，少數(shù)弱陽性；粒系中，原粒細(xì)胞糖原染色（），早幼粒以下階段為（+），逐

10、漸增強(qiáng)；單核細(xì)胞呈弱陽性反應(yīng)巨核細(xì)胞和血小板呈陽性反應(yīng)【臨床意義臨床意義】鑒別紅白血病與其他幼紅細(xì)胞增多的疾?。杭t白血病時(shí)幼紅細(xì)胞的PAS染色呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，積分值增高。鑒別良性與惡性淋巴細(xì)胞增生性疾?。簮盒粤馨图?xì)胞增生性疾病，其淋巴細(xì)胞的PSA染色積分值增高；病毒感染等淋巴細(xì)胞良性增生時(shí)，淋巴細(xì)胞積分值正常。三種急性白血病類型的鑒別： 急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，原始及幼稚粒細(xì)胞PAS染 色常呈陰性反應(yīng)； 急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)，原始及幼稚淋巴細(xì)胞常 呈陽性反應(yīng)，陽性物質(zhì)呈粗顆?；驂K狀； 急性單核細(xì)胞白血病時(shí)，原始及幼稚單核細(xì)胞多 呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，陽性物質(zhì)呈均勻彌漫或細(xì)顆 粒狀。鑒別某些細(xì)胞類型：（1）不

11、典型的巨核細(xì)胞與李-斯（Reed-sternberg）細(xì)胞的鑒別：前者呈陽性反應(yīng)，后者一般為陰性或弱陽性反應(yīng)。（2）高雪細(xì)胞與尼曼匹克細(xì)胞的鑒別：前者呈陽性反應(yīng)，后者一般為陰性或弱陽性反應(yīng)。（3）腺癌細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，骨髓轉(zhuǎn)移時(shí)有助于與白血病細(xì)胞的鑒別。細(xì)胞化學(xué)染色 急淋 急粒 急單 過氧化物酶 （-） 分化差的原始細(xì)胞 （-）（ ）（POX） （-）（+） 分化好的幼稚細(xì)胞 （+）（+） 糖原染色 粗顆?；驂K狀 彌漫性淡紅色 淡紅色細(xì)顆粒狀 （PAS） （+） （-）/（ ） （+） 非特異酯酶 （-） NaF抑制不敏感 可被NaF抑制 （NSE） （-）（+） （+）（+）堿性磷酸酶 增加

12、 減少或（-） 正?；蛟黾?（NAP）PAS（糖原染色）用于鑒別紅白血病M6（強(qiáng)陽性）和巨幼貧 鐵染色【結(jié)果】【結(jié)果】細(xì)胞外鐵：按陽性強(qiáng)度（藍(lán)色物質(zhì)、藍(lán)色顆粒、藍(lán)色小珠）分為5級。細(xì)胞內(nèi)鐵：以鐵粒幼細(xì)胞所占的百分率表示。 環(huán)狀鐵粒幼細(xì)胞：10個(gè)以上的粗大鐵粒，環(huán)繞細(xì)胞核排列超過核周徑的2/3以上。【參考值參考值】細(xì)胞外鐵：一般為+或+ 細(xì)胞內(nèi)鐵：陽性率為20-90，平均為65%。細(xì)胞漿內(nèi)常見15個(gè)鐵染色顆粒。【臨床意義臨床意義】缺鐵性貧血：細(xì)胞外鐵明顯降低或消失，細(xì)胞內(nèi)鐵陽性率減低，常30%，急性溶血可達(dá)50%，以中、晚幼紅為主，粒系相對減少，各階段比例及形態(tài)大致正常G/E 倒置巨核細(xì)胞系大致

13、正常HA再生障礙性貧血（再生障礙性貧血（aplstic anemia,AA )aplstic anemia,AA )造血干細(xì)胞數(shù)量或質(zhì)量的異常全血細(xì)胞減少根據(jù)疾病發(fā)展和血液學(xué)特點(diǎn)，可分為： 急性型 慢性型再生障礙性貧血血象特點(diǎn)紅細(xì)胞和血紅蛋白平行下降，貧血為正細(xì)胞、正色素性白細(xì)胞明顯減少，中性粒細(xì)胞減少淋巴細(xì)胞相對增高血小板明顯減少網(wǎng)織紅細(xì)胞減少再生障礙性貧血骨髓象特點(diǎn)增生減低或極度減低；粒系及紅系均減少，淋巴細(xì)胞相對增多；漿細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞增多；巨核細(xì)胞減少甚至缺乏；若為慢性再障，可出現(xiàn)骨髓呈灶性增生，表現(xiàn)為骨髓象增生活躍，但巨核細(xì)胞明顯減低或缺乏。（二）白血病Leukemia白

14、血病是造血系統(tǒng)的一種惡性腫瘤，其特征為造血組織中某一類血細(xì)胞過度增生，并浸潤和破壞其它組織，骨髓和外周血中常有血細(xì)胞質(zhì)和量的異常。臨床常有貧血、發(fā)熱、出血和肝、脾、淋巴結(jié)腫大等表現(xiàn)。根據(jù)自然病程及血細(xì)胞的分化程度而分急性、慢性。根據(jù)白血病細(xì)胞類型不同而分為髓細(xì)胞性和淋巴細(xì)胞性。急性白血?。╝cute leukemia,AL）：病程短， 6個(gè)月。骨髓和血液中以分化差的原始/幼稚細(xì)胞大量增殖為主。慢性白血病(chronic leukemia, CL)：骨髓和血液中以成熟或接近成熟的異常細(xì)胞為主。急性白血病血象特點(diǎn)正細(xì)胞、正色素性貧血，少數(shù)可出現(xiàn)幼紅細(xì)胞白細(xì)胞計(jì)數(shù)可增多、減少或正常，可出現(xiàn)幼稚細(xì)胞血

15、小板計(jì)數(shù)減少急性白血病骨髓象特點(diǎn)骨髓增生明顯活躍或極度活躍某一系或兩系的血細(xì)胞過度異常增生，原始/幼稚細(xì)胞明顯增多， 30%ANC其他系列細(xì)胞受抑細(xì)胞特殊形態(tài)或結(jié)構(gòu)：Auer小體，藍(lán)細(xì)胞白血病FAB分型急性髓細(xì)胞白血?。ˋML/ANLL，M1-M7）急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL，L1，L2，L3）慢性粒細(xì)胞白血病（CML）慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）急性粒細(xì)胞白血病急性粒細(xì)胞白血病早幼粒細(xì)胞白血病早幼粒細(xì)胞白血病早幼粒細(xì)胞白血病早幼粒細(xì)胞白血病POX急性單核細(xì)胞白血病急性單核細(xì)胞白血病急性淋巴細(xì)胞白血病急性淋巴細(xì)胞白血病慢性粒細(xì)胞白血?。╟hronic myelocytic leukemia，C

16、ML）慢性起病，青壯年多見粒細(xì)胞顯著增高和脾臟顯著增大Ph染色體和abl/bcr融合基因CML血象特點(diǎn)早期可無貧血，病情進(jìn)展可出現(xiàn)正色素正細(xì)胞性貧血白細(xì)胞顯著增高，以中性晚幼粒細(xì)胞為主，原粒細(xì)胞和早幼粒細(xì)胞10%，嗜堿性粒細(xì)胞增高血小板早期增高或正常，晚期可進(jìn)行性下降CML骨髓象特點(diǎn)骨髓增生極度活躍粒系顯著增生，G/E明顯增高，以中幼粒以下階段細(xì)胞為主，原、早幼10%，嗜堿、嗜酸細(xì)胞50%，以成熟小淋巴細(xì)胞為主粒系、紅系增生受抑，并發(fā)溶血時(shí)，紅系可增生巨核細(xì)胞早期增多，晚期減少（三）原發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)自身免疫

17、性疾病血小板抗體產(chǎn)生，導(dǎo)致血小板破壞過多巨核細(xì)胞成熟受抑臨床分為：急性型 慢性型ITPITP血象特點(diǎn)血象特點(diǎn)紅細(xì)胞和血紅蛋白常正常，急性或慢性出血時(shí)可合并貧血白細(xì)胞計(jì)數(shù)多正常血小板減少ITPITP骨髓象特點(diǎn)骨髓象特點(diǎn)骨髓增生明顯活躍紅系和粒系比例、形態(tài)常無明顯異常，合并出血時(shí)紅系可增多巨核細(xì)胞增多，伴成熟障礙五、細(xì)胞免疫分型即細(xì)胞免疫標(biāo)記檢測，是利用單克隆抗體及免疫學(xué)技術(shù)對細(xì)胞膜表面和/或細(xì)胞內(nèi)存在的特異性抗原進(jìn)行檢測。常用：流式細(xì)胞儀（FCM）臨床應(yīng)用識別不同系列的細(xì)胞識別不同的淋巴細(xì)胞檢測T淋巴細(xì)胞亞群識別不同分化階段的細(xì)胞識別不同功能狀態(tài)的細(xì)胞分離、鑒定不同系列和不同分化階段的細(xì)胞白血病

18、免疫分型白血病微小殘留病的檢測AML免疫分型 M1 M2M3M4M5M6M7CD13 + + + + + - -CD33 + + + + + +CD14 - +- - + + - -CD41 - - - - - -+Ret - - - - - +ALL免疫分型 CD2 CD7 CD19HLA-DR CD33T + + - - -B - - + + -六、細(xì)胞遺傳學(xué)分析臨床常見白血病染色體改變 染色體改變?nèi)旧w改變 融合基因融合基因M2 t(8;21)(q22;q22) AML1/ETOM3 t(15:17)(q22;Q21) PML/RAR， RAR/PMLM4Eo int/del(16)(q

19、22) CBFB/MYH11M5 t/del(11)(q23) MLL/ENLL3(B-ALL) t(8:14)(q24;q32) MYC與與IgH并列并列ALL（5-20%） t(9:22)(q34;q11) bcr/abl,m- bcr/ablM3 PML/RAR-維維A酸治療有效的分子基礎(chǔ)酸治療有效的分子基礎(chǔ) 白血病MIC分型形態(tài)學(xué)Morphology免疫學(xué)Immunology細(xì)胞遺傳學(xué)cytogenetics不明原因的一種或多種血液成分的減少，如各種白不明原因的一種或多種血液成分的減少，如各種白血病，再生障礙性貧血，溶血性貧血，血小板減少血病，再生障礙性貧血，溶血性貧血，血小板減少性紫癜等。性紫癜等。 不明原因長期發(fā)熱，如某些傳染病或寄生