試驗(yàn)五血液分析儀的使用和結(jié)果分析

1、實(shí)驗(yàn)五血液分析儀的使用和結(jié)果分析Usage and Result Assessment of Hematology Analyzer實(shí)驗(yàn)原理電阻抗型血細(xì)胞分析儀原理： 儀器的小孔管有內(nèi)外兩個(gè)電極， 在接通電源的電解質(zhì)溶液中， 內(nèi)、外電極之間形成一個(gè)穩(wěn)定的電流。 細(xì)胞懸液經(jīng)負(fù)壓吸引通過(guò)小孔管上的寶石計(jì)數(shù)小孔時(shí)， 由于血細(xì)胞具有相對(duì)非導(dǎo)電的特性， 使電路中小孔感應(yīng)區(qū)內(nèi)的電阻突然增大， 引起瞬間電壓變化而形成脈沖信號(hào)。 這些脈沖信號(hào)經(jīng)過(guò)放大、閾值調(diào)節(jié)、甄別、整形、計(jì)數(shù)及自動(dòng)控制保護(hù)系統(tǒng)，完成對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和體積的測(cè)定， 自動(dòng)打印出結(jié)果。 脈沖信號(hào)的強(qiáng)弱反映細(xì)胞體積的大小， 脈沖信號(hào)的多少反映細(xì)胞的

2、數(shù)量。儀器的光電比色裝置可測(cè)定血紅蛋白濃度。1紅細(xì)胞分析（1）細(xì)胞計(jì)數(shù)：與血小板在同一通道進(jìn)行檢測(cè)。采用閾值調(diào)節(jié)和浮動(dòng)界標(biāo)法區(qū)分紅細(xì)胞與血小板。通道內(nèi)的細(xì)胞介質(zhì)為等滲、近中性的電解質(zhì)溶液。（2）血紅蛋白測(cè)定：在白細(xì)胞通道內(nèi)進(jìn)行。紅細(xì)胞被溶血?jiǎng)┢茐暮螅尫懦龅难t蛋白轉(zhuǎn)化為血紅蛋白衍生物， 吸收峰在 530nm 550nm 之間，儀器內(nèi)有流動(dòng)比色裝置進(jìn)行測(cè)定。因 ICSH 推薦使用 HiCN 法進(jìn)行儀器矯正，故采用的溶血?jiǎng)┲卸嗪杌铮?形成氰化血紅蛋白； 為避免環(huán)境污染， 也可以采用不含氰化物的溶血?jiǎng)?，?SLS-Hb 法。（3）紅細(xì)胞參數(shù)分析： MCV 、 RDW ：儀器取自近萬(wàn)個(gè)紅細(xì)胞體積

3、的檢測(cè)數(shù)據(jù)，由統(tǒng)計(jì)學(xué)運(yùn)算得到的平均值和變異系數(shù)。 HCT ：MCV 與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的乘機(jī)。 MCH 、MCHC ：計(jì)算方法與手工法相同。2白細(xì)胞分析（1）白細(xì)胞計(jì)數(shù)：白細(xì)胞通道有滴加溶血素的裝置，破壞紅細(xì)胞后方可進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)。（2）白細(xì)胞分群：溶血素在破壞紅細(xì)胞的同時(shí)，也改變了白細(xì)胞膜的通透性，使細(xì)胞內(nèi)液外溢而引起了白細(xì)胞體積的改變， 此時(shí)細(xì)胞體積的大小取決于細(xì)胞內(nèi)顆粒的含量和細(xì)胞核的大小。將白細(xì)胞分成 2 群 3 群，可計(jì)算出各自百分率及絕對(duì)值：小細(xì)胞群： 30fl 90fl ，以淋巴細(xì)胞為主。因淋巴細(xì)胞核較小，細(xì)胞質(zhì)最少。中間細(xì)胞群： 90fl 160fl ，主要包括嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒

4、細(xì)胞、單核細(xì)胞。嗜酸性粒細(xì)胞、 嗜堿性粒細(xì)胞顆粒較淋巴細(xì)胞豐富； 單核細(xì)胞核體積最大但胞質(zhì)顆粒并不豐富。大細(xì)胞群： 160fl 450fl，以中性粒細(xì)胞為主。中性粒細(xì)胞顆粒最豐富。3血小板分析（1）血小板計(jì)數(shù)：與紅細(xì)胞在同一通道進(jìn)行檢測(cè)。（2）血小板參數(shù)分析： MPV 和 PDW ：原理同 MCV 和 RDW 。 PCT 是 PLT 和 MPV 的乘積4血細(xì)胞體積分布直方圖：血細(xì)胞分析儀的微電腦以各種細(xì)胞的體積為橫坐標(biāo)，相應(yīng)大小的細(xì)胞所占百分率為縱坐標(biāo)繪制成的 3 個(gè)擬合曲線。分別反映各類血細(xì)胞的群體分布情況。試劑與器材校正后的電阻抗型血細(xì)胞分析儀、配套試劑和消耗品（樣品杯、抗凝管、采血器材、

5、消毒紗布或紙巾） 。操作步驟1啟動(dòng)儀器、準(zhǔn)備器材。2采血、稀釋 毛細(xì)血管血和靜脈血都可使用，采血方法同第一章實(shí)驗(yàn) 1，抗凝劑首選 EDTA-K 2 。毛細(xì)血管血可隨時(shí)進(jìn)行預(yù)稀釋，也可先轉(zhuǎn)移到盛有抗凝劑的帶蓋容器中等待集中測(cè)定。 如使用靜脈血測(cè)定， 多采用機(jī)內(nèi)自動(dòng)稀釋， 測(cè)定前需注意轉(zhuǎn)換儀器的測(cè)定模式。3上機(jī)測(cè)定，具體的儀器按說(shuō)明書(shū)操作。儀器將自動(dòng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行測(cè)試并打印結(jié)果。4記錄結(jié)果、關(guān)機(jī)。注意事項(xiàng)1確認(rèn)儀器在正常工作狀態(tài)（1）稀釋液空白計(jì)數(shù)各項(xiàng)指標(biāo)應(yīng)達(dá)到說(shuō)明書(shū)要求。（2）測(cè)定低、中、高定值的全血質(zhì)控標(biāo)本或單項(xiàng)指標(biāo)質(zhì)控標(biāo)本時(shí)，其結(jié)果應(yīng)在 X2SD 之內(nèi)，或質(zhì)控圖處于質(zhì)控狀態(tài)。（3）檢測(cè)標(biāo)本時(shí)，儀

6、器計(jì)數(shù)時(shí)間在規(guī)定范圍內(nèi)，無(wú)堵孔現(xiàn)象。防止堵孔的措施有采血順利，及時(shí)混勻。防止消毒棉或紙巾上的纖維物質(zhì)混入血液中。保證稀釋液清潔無(wú)污染。疑為冷凝集的標(biāo)本，可在37溫箱溫育后測(cè)定。2堅(jiān)持檢查結(jié)果審核復(fù)查制度 對(duì)已確診或懷疑血液病、 發(fā)熱待查患者的標(biāo)本，無(wú)論檢查參數(shù)及直方圖是否正常， 均應(yīng)進(jìn)行血涂片的顯微鏡檢查。 對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類異常的標(biāo)本、血小板嚴(yán)重減少或顯著增加的標(biāo)本，也應(yīng)進(jìn)行復(fù)查。3嚴(yán)格按照操作手冊(cè)使用儀器并作好儀器使用登記。4定期保養(yǎng)儀器。參考范圍儀器型號(hào)不同， 所提供的參數(shù)數(shù)量和直方圖的圖形也不盡相同。 但各項(xiàng)參數(shù)的數(shù)值（見(jiàn)表 2-9）與手工檢測(cè)結(jié)果差異不大。表 2-9血細(xì)胞自動(dòng)分析儀提

7、供的參數(shù)和直方圖（以成人為例）項(xiàng)目（英文縮寫(xiě)）參考值報(bào)告方式白細(xì)胞數(shù) (WBC)410（靜脈血 3.59.5）×109/L紅細(xì)胞數(shù) (RBC)M：4.0 5.5；F：3.54.0×1012/L血紅蛋白 (Hb or HGB)M：120 160； F： 110150g/L血紅細(xì)胞比容 (HCT or PCV)M：0.4 0.5；F：0.3.70.48L/L平均紅細(xì)胞體積（ MCV ）80 100fl平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH ）27 31pg平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC ）320 360g/L血小板數(shù)（ PLT or Plt）150 350×109/L小細(xì)胞

8、或淋巴細(xì)胞百分比20 40（ W SCR or lymph ）大細(xì)胞或中性粒細(xì)胞百分比50 70（ W-LCR or Gran ）中等大小細(xì)胞（單核細(xì)胞+嗜酸<10+嗜堿粒細(xì)胞）百分比 W-MCRor Mid （ M+E+B ）小細(xì)胞或淋巴細(xì)胞絕對(duì)值0.84.0×109/L（ W-SCC or lymph# ）大細(xì)胞或中性粒細(xì)胞絕對(duì)值W-LCC or Gran#中等大小細(xì)胞（單核細(xì)胞+嗜酸+嗜堿粒細(xì)胞）絕對(duì)值（ W-MCC or Mid# ）紅細(xì)胞體積分布寬度（ RDW ）血小板比容（ PCT）平均血小板體積（MPV ）血小板體積分布寬度（PDW ）白細(xì)胞體積分布直方圖紅細(xì)胞體

9、積分布直方圖血小板體積分布直方圖2.07.0×109/L<1.0×109/L14.5 15.5%L/L6.813.6fl15.5 18.1%結(jié)果分析1紅細(xì)胞參數(shù)的變化 意義同前面章節(jié)。血細(xì)胞分析儀還可提供反映紅細(xì)胞彼此之間體積差異程度的指標(biāo) RDW ，其意義在于幫助鑒別缺鐵性貧血和輕型珠蛋白合成障礙性貧血：前者 RDW 增大而后者可以正常，可能性各占 100%及 88%。早期診斷缺鐵性貧血： RDW 升高早于 MCV 的下降。貧血形態(tài)學(xué)分類： Bessman根據(jù) MCV / RDW 可將貧血分為 6 類（表 2-10），對(duì)貧血的鑒別診斷有一定價(jià)值。表 2-10 Bes

10、sman 的貧血形態(tài)學(xué)分類類型MCVRDW常見(jiàn)疾病小細(xì)胞均一性貧血正常輕型珠蛋白合成障礙性貧血、慢性疾?。ǜ腥?、尿毒癥、腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等）小細(xì)胞非均一性貧血缺鐵性貧血、慢性失血性貧血、鐵粒幼細(xì)胞貧血正細(xì)胞均一性貧血正常正常再生障礙性貧血早期、 MDS、急性失血性貧血和溶血性貧血正細(xì)胞非均一性貧血正常早期缺鐵性貧血、營(yíng)養(yǎng)性混合性貧血大細(xì)胞均一性貧血正常部分再生障礙性貧血、溶血性貧血、甲狀腺機(jī)能低下大細(xì)胞非均一性貧血巨幼細(xì)胞貧血、免疫性溶血性貧血2白細(xì)胞參數(shù)的變化 如白細(xì)胞檢查各項(xiàng)參數(shù)都正常，可直接報(bào)告，無(wú)須復(fù)查血涂片。 白細(xì)胞計(jì)數(shù)異常， 臨床意義同手工計(jì)數(shù)， 但白細(xì)胞分群并不能真正代表白細(xì)

11、胞分類結(jié)果。儀器出現(xiàn)報(bào)警信號(hào)時(shí)仍需手工復(fù)查。3血小板參數(shù)的變化 血小板計(jì)數(shù)見(jiàn)第四章實(shí)驗(yàn)四。血小板其他參數(shù)中臨床價(jià)值較大的指標(biāo)為 MPV 和 PDW，是判斷骨髓生成巨核細(xì)胞和血小板能力的重要依據(jù)。 MPV 的參考值并非在一個(gè)統(tǒng)一的范圍。 Bessman 研究表明，血小板數(shù)與 MPV 值呈非線性負(fù)相關(guān)。血小板減少紫癜病人血小板持續(xù)減少伴 MPV 下降和 PDW 上升提示骨髓衰竭、預(yù)后不良。另外，血標(biāo)本的干擾如：血小板聚集，可導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)減少，MPV 增大。紅細(xì)胞碎片造成血小板計(jì)數(shù)增多。小紅細(xì)胞，造成血小板計(jì)數(shù)增多，MPV 及 PDW 增大。4血細(xì)胞體積分布直方圖（1）白血細(xì)胞體積分布直方圖：白細(xì)

12、胞直方圖的變化，可以評(píng)價(jià)血液中白細(xì)胞群體的變化， 但缺乏特異性，不同種類的白細(xì)胞增多或減低可使白細(xì)胞直方圖產(chǎn)生相似的變化。 因此，異常白細(xì)胞直方圖只能提示白細(xì)胞分群之間的比例變化或可能出現(xiàn)的異常細(xì)胞（表2-11），具體診斷時(shí)必須用顯微鏡復(fù)查血液涂片。更多的是作為檢驗(yàn)醫(yī)師進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制的依據(jù)之一。表 2-11影響白血細(xì)胞體積分布直方圖圖形改變及出現(xiàn)警報(bào)信號(hào)的原因分析警告信號(hào)出現(xiàn)位置可能的原因直方圖改變R0或R1淋巴細(xì)胞左側(cè)血小板聚集、巨大血小板、瘧原蟲(chóng)、有核紅細(xì)胞、不溶解紅細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞、冷球蛋白等。R2淋巴細(xì)胞和單異型淋巴細(xì)胞，異常淋巴細(xì)胞，原幼細(xì)胞、個(gè)核細(xì)胞之間漿細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞，嗜

13、堿性粒細(xì)胞等R3單個(gè)核細(xì)胞和未成熟細(xì)胞，異常細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞等粒細(xì)胞之間R4粒細(xì)胞右側(cè)粒細(xì)胞增多癥RM多個(gè)區(qū)域以上多種因素同時(shí)出現(xiàn)（2）紅細(xì)胞直方圖：紅細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用價(jià)值不同于白細(xì)胞直方圖，對(duì)指導(dǎo)臨床醫(yī)師進(jìn)行貧血的鑒別診斷和療效觀察意義較大。不同類型的貧血直方圖形峰的位置、峰低的寬度、峰頂?shù)男螤畋憩F(xiàn)不同，根據(jù)直方圖形的不同，對(duì)不同類型的貧血進(jìn)行鑒別診斷； 在貧血的治療過(guò)程中通過(guò)觀察紅細(xì)胞直方圖是否出現(xiàn)峰頂移動(dòng)， 是否可出現(xiàn)雙峰現(xiàn)象來(lái)進(jìn)行治療效果的觀察。但應(yīng)明確，因紅細(xì)胞平均壽命約 120d，故而貧血有效治療后出現(xiàn)的雙峰現(xiàn)象可持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間。（3）血小板直方圖：血細(xì)胞自動(dòng)分析儀根據(jù)血小板體

14、積的大小和離散情況表現(xiàn)出不同的直方圖，其范圍主要分布在 2fl-30fl 之間。影響血小板直方圖的因素有：紅細(xì)胞碎片：可干擾血小板直方圖，使其出現(xiàn)異常。血小板聚集：直方圖顯示峰左側(cè)起點(diǎn)較高， 血液涂片上可見(jiàn)聚集成堆的血小板。 小紅細(xì)胞干擾：直方圖顯示峰的右側(cè)離橫坐標(biāo)較高， 呈拖尾狀，血液涂片上可見(jiàn)較多的小紅細(xì)胞。血小板體積異常縮小：直方圖顯示峰左移， MPV 偏小，提示血樣中以小血小板為主。實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)1血細(xì)胞分析儀可分為電阻抗型、光電型、光散射型、電容型等。目前臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最為廣泛的儀器為電阻抗型，主要完成紅細(xì)胞、 血小板各項(xiàng)參數(shù)的檢測(cè)及白細(xì)胞計(jì)數(shù)及三部法分類?？蛇M(jìn)行五部法白細(xì)胞分類的儀器有：容量、電導(dǎo)、光散射型，阻抗與射頻聯(lián)合白細(xì)胞分類法，激光與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)聯(lián)合白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)和多角度偏振光散射白細(xì)胞分類技術(shù)。其中電阻抗型血液分析儀在臨床應(yīng)用范圍最廣。2本法具有標(biāo)