第二紅細(xì)胞血型系統(tǒng)檢測

1、第一章紅細(xì)胞血型系統(tǒng)主講馬麗Blood type臨床檢驗學(xué)教研室授課內(nèi)容ABO血型系統(tǒng)Rh血型系統(tǒng)其他血型系統(tǒng)Blood type臨床檢驗學(xué)教研室第二章紅細(xì)胞血型檢查主講馬麗Blood type臨床檢驗學(xué)教研室輸血前免疫血液學(xué)檢查輸血前檢查的目的和要求目的:供者和受者血液是否“相容”,血液在受血者體內(nèi)能否有效存活,有無不良反應(yīng)要求：輸入的RBC在受血者體內(nèi)不凝集和溶血，輸入血漿成份不導(dǎo)致患者紅細(xì)胞破壞。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室輸血前檢查的內(nèi)容受者病史和標(biāo)本等檢查、核對及處理ABO和Rh定型抗體篩選和鑒定交叉配血試驗貼和發(fā)血Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室一、受血者病史標(biāo)本的檢查、

2、核對、處理1.病史資料和個人信息：（Ag殘留，Ab產(chǎn)生）受血者的姓名、種族、史、臨床診斷、輸血史（近3月）、妊娠史、特別是以往輸血反應(yīng)的等。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室2.標(biāo)本要求標(biāo)本必須鑒定和標(biāo)記，確實無誤，標(biāo)本留取時間<24h；標(biāo)本正確，符合患者血液的體內(nèi)狀態(tài);防止血樣稀釋，溶血標(biāo)本不能使用；血清、血漿均可作檢查，但血清干擾因素少； 反復(fù)輸血患者應(yīng)抽取新標(biāo)本作配血試驗；肝素治療患者，應(yīng)加硫酸魚精蛋白對抗，使標(biāo)本凝結(jié)。 右旋糖酐、pvp等治療，先洗滌RBC再配血輸血后標(biāo)本物應(yīng)妥善保存28，至少一周。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室二、受血者和供血者的ABO血型鑒定(IgM)

3、+ Ag(RBC)_介質(zhì)凝集原理：Ab正定型(檢查Ag)反定型(血清Ab ）Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室RBC凝集反應(yīng)含義：不同血型的血液混合在一起，RBC成簇的現(xiàn)象。在補體的參與下發(fā)生溶血，本質(zhì)：抗原抗體反應(yīng)。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室實驗技術(shù)及方法鹽水介質(zhì)實驗技術(shù)p44實驗技術(shù)微柱凝集實驗技術(shù)p53鹽水凝集法凝膠微柱法正定型（forward 反定型（reverse鑒定方法grouping）grouping）Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室正定型（forward grouping）標(biāo)準(zhǔn)血清(Ab)+RBC(Ag)_介質(zhì)_凝集Blood type臨床檢驗學(xué)教研室已知反定型及意

4、義反定型:標(biāo)準(zhǔn)RBC(Ag)+血清(Ab)-介質(zhì)-凝集復(fù)檢正定型結(jié)果的準(zhǔn)確性，糾正漏檢，誤檢發(fā)現(xiàn)亞型（正定型AB2誤定為A）不規(guī)則抗體糾正疾病導(dǎo)致的紅細(xì)胞抗原弱，定型錯誤排除獲得性抗原和冷凝集現(xiàn)象對定型的干擾Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室1.鹽水介質(zhì)試驗技術(shù)Ab (IgM)_鹽水凝集原理：Ag(RBC)+應(yīng)用：血型鑒定，IgM抗體篩查鑒定，鹽水介質(zhì)交叉配血方法：試管法、玻片法、微孔板法Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室基本方法試管法：離心增加凝集，反應(yīng)時間短,可發(fā)現(xiàn)亞型或弱抗原抗體反應(yīng),用于常規(guī)檢查方法。定型,玻片法：簡單，時間長，普查，亞型抗原弱、弱凝集易忽略，不時宜反定型。微孔板法Bl

5、ood type臨床檢驗學(xué)教研室試驗結(jié)果陽性：紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)或溶血：紅細(xì)胞呈現(xiàn)游離混懸狀態(tài)Blood type臨床檢驗學(xué)教研室血型結(jié)果Blood type臨床檢驗學(xué)教研室ABO血型定型正向定型反向定型結(jié)果抗A-+-+抗B-+抗A,B+A細(xì)胞+-+-B細(xì)胞+-O細(xì)胞-O A BABBloodtype臨床檢驗學(xué)教研室2.微柱凝集試驗技術(shù)Ab (IgM)_凝膠凝集原理Ag(RBC)+（親和效應(yīng) 篩效應(yīng)）種類：中性凝膠、特異性凝膠、抗人球蛋白凝膠結(jié)果：肉眼觀察或血型分析儀優(yōu)點：靈敏、準(zhǔn)確、特異、標(biāo)準(zhǔn)化、微機化管理不足：特殊試劑，成本高。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室試驗原理親合效應(yīng)：紅細(xì)胞抗

6、原與相應(yīng)抗體結(jié)合篩效應(yīng)：低速離心，凝集紅細(xì)胞因體積大，紅細(xì)胞被阻滯不通過凝膠層，而懸浮在凝膠中，即陽性反應(yīng)。而未被抗體結(jié)合的紅細(xì)胞體積小，通過凝膠層沉于凝膠底部形成“細(xì)胞扣”即反應(yīng)。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室微柱凝膠法血型檢測的意圖反應(yīng)腔凝膠分離柱Blood type臨床檢驗學(xué)教研室試驗結(jié)果Blood type臨床檢驗學(xué)教研室正反定型不符合處理的基本程序重新標(biāo)本，重復(fù)試驗詢問病史，洗滌紅細(xì)胞應(yīng)用抗-AB、抗A1、抗-H檢測紅細(xì)胞分析O型篩選細(xì)胞檢測結(jié)果，排除同種異型或自身抗體影響B(tài)loodtype臨床檢驗學(xué)教研室ABO血型鑒定責(zé)任事故技術(shù)事故抗原抗體其他BloodtypeBlood

7、type臨床檢驗學(xué)教研室ABO定型試驗中常見的問題1.技術(shù)和管理錯誤主要，包括：標(biāo)本或試劑錯誤，假陽性或假器材不清潔，假陽性結(jié)果。試劑污染或失效，假陽性或假離心過度或不足，假陽性或假結(jié)果。結(jié)果。結(jié)果Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室ABO定型試驗中常見的問題1.技術(shù)和管理錯誤主要，包括：漏加試劑，假結(jié)果。細(xì)胞與血清比例不適，假陽性或假陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識別，假結(jié)果。結(jié)果結(jié)果。結(jié)果或錯誤，假陽性或假Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室ABO定型試驗中常見的問題2.血清異常氏膠或血清蛋白異常引起串錢狀形成，影響反定型結(jié)果。3.紅細(xì)胞致敏在含高蛋白介質(zhì)的試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。4.異常

8、型ABO亞型的弱抗原難以檢結(jié)果。出，產(chǎn)生假5.近期輸血異型輸血，血液含不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室ABO定型試驗中常見的問題6.嵌合體血型體內(nèi)有兩群紅細(xì)胞，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。7.疾病因素導(dǎo)致抗原減弱原受到抑制。白血病血型抗8.紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的表面異常（細(xì)菌）。9.獲得性類B由于革蘭氏桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。10.近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療，影響抗體效價，造成反定型臨床檢驗學(xué)教研室。BloodtypeABO定型試驗中常見的問題11.異常的血漿蛋白白比例和高濃度的異常的白蛋白、球蛋蛋白

9、原等能導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。12.不規(guī)則抗體的存在受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，與試劑A、B細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng)。13、低丙種球蛋白血癥使血清定型時不見凝集或僅見弱凝集反應(yīng)。Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室ABO定型試驗中常見的問題14、紅細(xì)胞15、由母親等因素造影劑、右旋糖酐引起而類似凝集。因素在未產(chǎn)生抗體的嬰兒、獲得抗體的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試驗時可出現(xiàn)異常結(jié)果。Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室病例患者女，李×芝，39歲，農(nóng)民，因肌瘤行次全切除術(shù)。術(shù)前血型鑒定：A型。Hb110g/L。術(shù)中失血約400mL，手術(shù)結(jié)束時輸A型新鮮全血400

10、mL。輸血后約10分鐘，患者寒戰(zhàn)、腰痛、發(fā)熱39，1.5小時后排出醬油色尿，手術(shù)切口滲血不止，即按急性溶血反應(yīng)治療，再次核定血型為B型。2天后出現(xiàn)急性腎功能衰竭。3天后，死于轉(zhuǎn)院途中Blood type臨床檢驗學(xué)教研室分析：醫(yī)護(hù)誤將39歲看成39床，錯用39床的血標(biāo)本測定血型并作配血試驗。39床血型為A型，女，李×。實際上，患者為28床，血型為B型。引發(fā)抗原抗體間的免疫性反應(yīng)，患者急性溶血，腎功能衰竭而定論：責(zé)任事故所致的溶血性輸血反應(yīng)。意見：重視輸血質(zhì)量管理，臨床檢驗學(xué)教研室及對癥治療Blood type思考若患者輸血后一周才發(fā)病還考慮是急性溶血性輸血反應(yīng)？慢性溶血性輸血反應(yīng)的抗原

11、、抗體類型有哪些？應(yīng)對措施和處理原則Blood type臨床檢驗學(xué)教研室三、Rh血型鑒定1.抗D標(biāo)準(zhǔn)血清鑒定（臨床）Rh陽性凝集抗D血清+受者RBCR反之2.抗C、c、D、E、e血清鑒定（分型）Blood type臨床檢驗學(xué)教研室三、Rh血型鑒定2.抗C、c、D、E、e血清鑒定（分型）分型鑒定應(yīng)用：家系，父權(quán)鑒定，產(chǎn)前篩查，交叉配血發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室Rh血型鑒定方法p實驗技術(shù)Coombs、蛋白酶、凝聚胺法低離子強度鹽水人源鹽水介質(zhì)抗D實驗微柱凝膠法Blood type臨床檢驗學(xué)教研室抗人球蛋白（Coombs）試驗技術(shù)抗人免疫球蛋白自身抗體直接Coombs試驗Blo

12、odtype臨床檢驗學(xué)教研室抗人球蛋白（Coombs）試驗技術(shù)同種異型抗體抗人免疫球蛋白間接Coombs試驗間接Coombs試驗Blood type臨床檢驗學(xué)教研室（Coombs）試驗原理Coombs試驗：是利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異抗體連接，使紅細(xì)胞凝集。包括兩類方法。直接試驗：是檢查紅細(xì)胞上有無全抗體間接試驗：是檢查血清中游離的全抗體Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室直接法患者體內(nèi)發(fā)生+RBCRBC為Rh+7S的IgG抽血作用：檢測RBC表面結(jié)合的全抗體和補體。意義：HDN和AIHA，免疫性溶血性輸血反應(yīng)其他溶血性疾病?？笽gGBlood type臨床檢驗學(xué)教

13、研室間接法血清全抗體RBC為Rh+體外測試+作用：檢測游離在血清中的全抗體?？笽gG臨床意義：交叉配血、血型鑒定，抗體檢測及鑒定。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室Coombs）試驗影響因素抗體的結(jié)合力孵育時間和溫度抗原抗體比例洗滌體外補體致敏Blood type臨床檢驗學(xué)教研室2.酶處理實驗技術(shù)原理：破壞RBC表面唾液酸，降低負(fù)電荷；改變RBC結(jié)構(gòu)，隱蔽抗原位點。Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室酶試驗技術(shù)分類一步法：直接酶試驗抗原抗體混合后加入酶，引起特異性凝集。 方法簡便，時間較長，敏感性較二步法試驗差。二步法：間接酶試驗可以事先將紅細(xì)胞用酶處理，增加抗原性，再 加入抗體，抗原抗體特異

14、性凝集。速度快，靈敏 度。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室酶試驗注意事項酶處理可以增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性（Rh和Kidd系統(tǒng)較為顯著）唾液酸是有些抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，因此用酶處理也會破壞紅細(xì)胞的一些表面抗原(MNSFya、Fyb)，所以酶試驗不適于檢查它們相應(yīng)當(dāng)抗體。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室酶試驗注意事項n 酶處理還可以改變紅細(xì)胞懸液的物理性質(zhì)，且引起紅細(xì)胞自發(fā)凝集，造成假陽性。n 有些酶（木瓜酶）處理過度，酶就降解IgG，從而得到假結(jié)果。Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室3.聚凝胺介質(zhì)試驗技術(shù)試劑-聚凝胺試劑盒低離子介質(zhì)（LIM）聚凝胺液（polybrene soluti

15、on）解聚液（Resuspending solution）中和液Blood type臨床檢驗學(xué)教研室原理：1.RBC非特異性凝集LIM:降低介質(zhì)離子強度>降低RBC的Zeta電位，促進(jìn)RBC與相應(yīng)Ab結(jié)合Polybrene：（多價陽離子氨基聚合物）溶解產(chǎn)生大量正電荷，中和RBC表面的負(fù)電荷，促RBC凝集Blood type臨床檢驗學(xué)教研室2.RBC特異性凝集血清IgM(IgG)+RBC >RBC特異凝集解聚液中和聚凝胺正電荷，如果是抗體介導(dǎo)的特異性凝集，加入解聚液后，凝集不消散；如是聚凝胺引起的非特異性凝集加入解聚液后，凝集解散。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室聚凝胺介質(zhì)試驗技

16、術(shù)適用范圍：血型鑒定，抗體篩查，交叉配血注意事項：ü 不能使用枸櫞酸和肝素抗凝標(biāo)本；ü 對冷凝集有加強作用，冷凝集配血不用此法；ü 聚凝胺使正常紅細(xì)胞凝集，缺乏唾液酸細(xì)胞無作用；ü 聚凝胺配血不符，用Coombs試驗重復(fù)，以Coombs試驗結(jié) 果為準(zhǔn)；若受血者血清(血漿)含肝素，如洗腎患者，須 加46滴Po1ybrene溶液以中和肝素。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室4.低離子強度鹽水試驗技術(shù)低離子強度鹽水（0.03mmol/LNaCl）-IgG原理：降低RBC表面的Zeta電位，增加抗原抗體間的引力。Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室5.人源鹽水介

17、質(zhì)抗D試驗二硫蘇糖醇（IgG的變性劑）處理人的IgG（抗D血清）IgM轉(zhuǎn)變成（鹽水凝集）Blood type臨床檢驗學(xué)教研室Rh血型鑒定常見問題-假陽性受檢細(xì)胞已被免疫球蛋白致敏受檢細(xì)胞與抗血清孵育時間過長，含高蛋白的定型試劑會引起串錢狀形成。標(biāo)本抗凝不當(dāng)，蛋白凝塊，誤判陽性。定型血清中含有事先未被檢測特異性抗體多凝集，器材或抗血清被污染，假陽性。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室Rh血型鑒定常見問題-假n 受檢RBC濃度高與抗血清比例失調(diào)，n 漏加和錯加試劑，血清失效。n 重懸細(xì)胞沉淀搖動用力過度，搖散微弱的凝集。n 弱D抗原或D變異型與某些抗-D不反應(yīng)n DAT陽性，HDN患兒紅細(xì)胞被抗

18、-D附著。Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室四、抗體篩選和鑒定不規(guī)則抗體：即意外抗體，是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗體。不規(guī)則抗體包括：同種抗體或異種抗體IgG或IgM方法：鹽水介質(zhì)ISS、酶白介質(zhì)法、聚凝胺法、Coombs、微柱凝膠法確認(rèn)實驗：CoombsBloodtype臨床檢驗學(xué)教研室不規(guī)則抗體篩查和鑒定技術(shù)條件：患者有輸血史或妊娠史，輸血前應(yīng)常規(guī)進(jìn)行抗體篩查?？贵w篩查陽性，做特異性鑒定。防止輸血反應(yīng)抗體篩查：血清中是否存在自生抗體、同種抗體。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室（四）紅細(xì)胞抗體檢測（篩查鑒定）n 試劑：2或3人份的非混合O型紅細(xì)胞，包括抗原：Rh系統(tǒng)D、C、c

19、、E、e抗原；MNS系統(tǒng)M、N、S、s 抗原；P系統(tǒng)P1抗原；Kell系統(tǒng)K、k抗原；Kidd 系統(tǒng)Jka、Jkb抗原；Duffy系統(tǒng)Fya、Fyb抗原；Lewis系統(tǒng)Lea、Leb抗原。n 方法：鹽水介質(zhì)法、聚凝胺法、酶法、抗球蛋白介質(zhì)法、低離子強度介質(zhì)法等。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室（四）紅細(xì)胞抗體檢測抗體鑒定：抗體篩查陽性，確認(rèn)抗體特異性。試劑：普細(xì)胞，由816人份O型紅細(xì)胞組成，具有不同血型系統(tǒng)的各種抗原成分，根據(jù)反應(yīng)格局，鑒定常見抗體。保證抗體鑒定的準(zhǔn)確性。要求：每個抗原應(yīng)有足夠的和陽性紅細(xì)胞。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室Blood type臨床檢驗學(xué)教研室注意事項

20、n 試驗設(shè)立自生對照防止冷自生抗體凝集反應(yīng)；n 聚凝胺法：需要Coombs試驗對照；n 酶法：對MNS、 Fya、Fyb抗原有破壞作用；n 當(dāng)抗體強度弱，或有兩種以上抗體，結(jié)合吸收放散等試驗，對抗體特異性進(jìn)行分析；n 抗體篩查不意味血清中沒抗體，防止低親和力和低效價抗體漏檢，增加血清與紅細(xì)胞比例Blood type臨床檢驗學(xué)教研室五、交叉配血n 目的：受者和供者是否存在血型抗原和抗體不符合的情況n 意義:驗證血型是否相符，發(fā)現(xiàn)ABO不規(guī)則抗體和亞型Bloodtype臨床檢驗學(xué)教研室交叉配血的方法及評價缺點方法優(yōu)點不能檢測IgG鹽水配血實驗ABO簡單、快速、準(zhǔn)確性較差酶介質(zhì)配血法Rh簡單、快速、

21、復(fù)雜、昂貴抗球蛋白實驗全抗體靈敏、準(zhǔn)確所有抗體靈敏、準(zhǔn)確特殊試劑聚凝胺實驗試劑昂貴所有抗體靈敏、準(zhǔn)確，上機微柱凝膠配血Blood type臨床檢驗學(xué)教研室原則鹽水法IgM無輸血和妊娠史Coombs蛋白酶膠體介質(zhì)聚凝胺法IgG有輸血和妊娠史微柱凝膠配血臨床檢驗學(xué)教研室所有（IgG、IgM）Blood type配血試驗的內(nèi)容主側(cè)：受血者血清+獻(xiàn)血者RBC(受血者血清中有無破壞獻(xiàn)血者RBC的抗體）次側(cè)：受血者RBC+獻(xiàn)血者血清自生對照：受血者RBC+受血者血清（自身抗體，DAT陽性及紅細(xì)胞串錢狀假陽性存在）Blood type臨床檢驗學(xué)教研室Blood type臨床檢驗學(xué)教研室交叉配血微柱凝膠免疫技

22、術(shù)Blood type臨床檢驗學(xué)教研室交叉配血試驗的影響因素緡錢狀（串錢狀）的形成（37或室溫）常見于多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血，以及其它表現(xiàn)為血沉的一些病例中。交叉配血試驗結(jié)果不相容，顯示有未檢明的同種抗體存在。室溫反應(yīng)結(jié)果陽性，可能有自身抗體IgM抗體抗球蛋白試驗陽性，顯示有自身抗體。臨床檢驗學(xué)教研室Bloodtype交叉配血試驗的影響因素抗體篩選試驗和交叉配血結(jié)果陽性現(xiàn)象，提示可能有未檢明的抗體存在。交叉配血試驗離心力不當(dāng)，假或假陽性。水浴箱溫度不正確，造成錯誤結(jié)果。紅細(xì)胞洗滌和懸浮不正確，Coombs出現(xiàn)假。血清中如含有溶血性抗體，交叉配血結(jié)果應(yīng)視為陽性反應(yīng)。血清中存在補體應(yīng)滅活后再試驗

23、Blood type臨床檢驗學(xué)教研室六、已配合血液的與發(fā)出配血試驗顯示供、受者血液配合，黏貼配血在配血單上，姓名，床號，ABO及Rh血型，醫(yī)院，血袋編號，交叉配血試驗結(jié)果，發(fā)液名稱，日期和時間，以及的姓名。反復(fù)核對輸血申請單，配血報告單和血液的，血液外觀正確無誤后，將血液血液制品及時發(fā)出。Blood type臨床檢驗學(xué)教研室Blood type臨床檢驗學(xué)教研室Blood type臨床檢驗學(xué)教研室Blood type臨床檢驗學(xué)教研室配血樣例本血液與以下患者配合患者姓名： 患者住院號： 患者標(biāo)識碼： 患者床號： 血型：效期：配血日期： 簽名：如不使用請交還血庫Blood type臨床檢驗學(xué)教研室其他試驗技術(shù)吸收放散試驗Blood type臨床檢驗學(xué)教研室吸收放散試驗抗體與抗原可在一定條件下發(fā)生凝集及致敏，這種結(jié)合是可逆的，改變試驗條件，抗體可以從抗原抗體復(fù)合物上游離下來