(新版)無菌工藝驗(yàn)證-培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)

1、1無菌工藝驗(yàn)證無菌工藝驗(yàn)證 培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)吳軍 2011.22目錄目錄主題主題1：為什么要進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證？：為什么要進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證？主題主題2：相關(guān)：相關(guān)GMP法規(guī)對培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證的要求法規(guī)對培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證的要求主題主題3：培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的常規(guī)要求：培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的常規(guī)要求主題主題4：特殊劑型的培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證方法：特殊劑型的培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證方法主題主題5：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證設(shè)計(jì)、執(zhí)行與文件編制：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證設(shè)計(jì)、執(zhí)行與文件編制主題主題6：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證的關(guān)鍵點(diǎn)分析：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證的關(guān)鍵點(diǎn)分析主題主題7：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證檢查要點(diǎn)：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證檢查要點(diǎn)3主題主題1：為什么要進(jìn)行培

2、養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證？：為什么要進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證？4為什么需要進(jìn)行培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)為什么需要進(jìn)行培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)？5幾個(gè)概念幾個(gè)概念n無菌狀態(tài)Asepsis(FDA指南)：通過使用無菌工作區(qū)及防止暴露的無菌產(chǎn)品受到微生物污染的方式進(jìn)行操作所達(dá)到的一種控制狀態(tài)n 無菌工藝Aseptic processing(PDA TR22)：在對空氣、物料、設(shè)備、人員進(jìn)行微生物和顆粒物污染嚴(yán)格控制的環(huán)境下，對無菌物料進(jìn)行加工。n 無菌灌裝Aseptic filling(PDA TR22)：將預(yù)先滅菌的產(chǎn)品灌和/或裝入無菌容器中并密封，屬于無菌工藝的一個(gè)組成部分。 n關(guān)鍵區(qū)Critical area(PDA TR44)：

3、通過設(shè)計(jì)使產(chǎn)品、容器、封裝件和設(shè)備能夠保持無菌性的一個(gè)區(qū)域。6概況概況洗瓶機(jī)干熱隧道隔離柜凍干機(jī)軋蓋機(jī)轉(zhuǎn)移瓶塞灌裝機(jī)容器7來自生產(chǎn)工藝的要求來自生產(chǎn)工藝的要求對產(chǎn)品進(jìn)行最終滅菌，是降低微生物污染風(fēng)險(xiǎn)的常用辦法。對產(chǎn)品進(jìn)行最終滅菌，是降低微生物污染風(fēng)險(xiǎn)的常用辦法。但有大量藥品不適用于最終滅菌而只能采用無菌生產(chǎn)工藝但有大量藥品不適用于最終滅菌而只能采用無菌生產(chǎn)工藝方法。方法。無菌生產(chǎn)工藝是制藥領(lǐng)域中最難的工藝之一，確保產(chǎn)品無無菌生產(chǎn)工藝是制藥領(lǐng)域中最難的工藝之一，確保產(chǎn)品無菌是該工藝最大的難點(diǎn)。菌是該工藝最大的難點(diǎn)。減少無菌工藝藥品污染風(fēng)險(xiǎn)的兩項(xiàng)重要措施減少無菌工藝藥品污染風(fēng)險(xiǎn)的兩項(xiàng)重要措施人員培

4、訓(xùn)無菌工藝驗(yàn)證8最終滅菌工藝與無菌生產(chǎn)工藝的差異最終滅菌工藝與無菌生產(chǎn)工藝的差異最終滅菌工藝最終滅菌工藝在高潔凈凈環(huán)境下進(jìn)行灌裝和密封在高潔凈凈環(huán)境下進(jìn)行灌裝和密封通常，產(chǎn)品、容器和密封件的微生物污通常，產(chǎn)品、容器和密封件的微生物污染水平很低染水平很低在密封容器中進(jìn)行最終滅菌在密封容器中進(jìn)行最終滅菌無菌生產(chǎn)工藝無菌生產(chǎn)工藝產(chǎn)品、容器和密封件分別進(jìn)行滅菌，然產(chǎn)品、容器和密封件分別進(jìn)行滅菌，然后進(jìn)行灌封后進(jìn)行灌封在極高潔凈環(huán)境下進(jìn)行灌裝和密封在極高潔凈環(huán)境下進(jìn)行灌裝和密封產(chǎn)品在最終容器中不再做進(jìn)一步的滅菌產(chǎn)品在最終容器中不再做進(jìn)一步的滅菌處理處理對各個(gè)組成部分的滅菌工藝需要進(jìn)行嚴(yán)對各個(gè)組成部分的滅

5、菌工藝需要進(jìn)行嚴(yán)格驗(yàn)證和監(jiān)控格驗(yàn)證和監(jiān)控在灌封前和灌封過程中的操作會(huì)帶來污在灌封前和灌封過程中的操作會(huì)帶來污染風(fēng)險(xiǎn)染風(fēng)險(xiǎn)空瓶滅菌隧道密封件蒸汽滅菌釜除菌過濾人員半壓塞瓶凍干機(jī)全壓塞瓶9無菌生產(chǎn)系統(tǒng)9消毒劑消毒劑滅菌設(shè)備滅菌設(shè)備清洗清洗設(shè)備設(shè)備蒸汽蒸汽滅菌滅菌干熱干熱滅菌滅菌水預(yù)水預(yù)處理處理純蒸汽純蒸汽發(fā)生器發(fā)生器高風(fēng)險(xiǎn)操作區(qū)域高風(fēng)險(xiǎn)操作區(qū)域混合混合灌裝灌裝其他其他VHP,EOVHP,EO發(fā)生器發(fā)生器凍干機(jī)凍干機(jī)最終最終滅菌滅菌壓縮空氣壓縮空氣無菌檢測無菌檢測10污染類型舉例來源（舉例）處理方法（舉例）非活性（粒子）金屬斑點(diǎn)衣物纖維儀器人員衣物外部空氣供水懸浮粒子由高效過濾器過濾接觸部分清潔和滅

6、菌純化水系統(tǒng)活性（微生物）細(xì)菌酵母，霉菌人員水外部空氣儀器工具輔料活性物質(zhì)有限的無菌核心區(qū)干擾懸浮粒子由高效過濾器過濾溶液無菌過濾（0.2um）蒸汽滅菌或零件的輻射滅菌內(nèi)毒素（通常與空氣中的細(xì)菌無關(guān)）來源于某種有機(jī)體細(xì)胞壁（經(jīng)常水生的）潮濕的設(shè)備或更換零件，或暴露一段時(shí)間后的容器/密封容器加熱的苛性鈉溶液高溫（大于200度）時(shí)間視情況而定ISPE：無菌設(shè)施設(shè)計(jì)規(guī)范P1611USPUSP注射劑無菌測試結(jié)果注射劑無菌測試結(jié)果n試驗(yàn)?zāi)康模翰缓细竦目赡苄栽囼?yàn)?zāi)康模翰缓细竦目赡苄?%)n試驗(yàn)批量：試驗(yàn)批量：60,000支支n試驗(yàn)方法：按美國藥典無菌測試方法試驗(yàn)方法：按美國藥典無菌測試方法真實(shí)的不合格率真

7、實(shí)的不合格率測試測試20支樣品支樣品不合格的可能性不合格的可能性測試測試40支樣品支樣品不合格的可能性不合格的可能性118.2%33.1%564.2%87.2%1596.1%99.8%3099.9%100.0%12無菌工藝產(chǎn)品的無菌保證無菌工藝產(chǎn)品的無菌保證 無菌工藝產(chǎn)品PersonnelEnvironment工藝驗(yàn)證人員原料環(huán)境無菌檢驗(yàn)13注射劑生產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)分析n內(nèi)源性的影響因素n系統(tǒng)n設(shè)備n工藝過程n物料和中間體的質(zhì)量n外源性的影響因素n人員 14作業(yè)環(huán)節(jié)與風(fēng)險(xiǎn)作業(yè)環(huán)節(jié)與風(fēng)險(xiǎn)作業(yè)環(huán)節(jié)作業(yè)環(huán)節(jié)驗(yàn)證難易度驗(yàn)證難易度人員依賴程度人員依賴程度相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)滅菌滅菌易易低低低低房間設(shè)計(jì)房間設(shè)計(jì)N/A

8、N/A中等中等環(huán)境監(jiān)測環(huán)境監(jiān)測中等中等可變可變高高消毒消毒難難高高高高更衣更衣難難很高很高很高很高物品轉(zhuǎn)移物品轉(zhuǎn)移難難高高高高無菌技術(shù)（灌封）無菌技術(shù)（灌封）難難很高很高很高很高無菌裝配無菌裝配難難很高很高很高很高15 廠房/房間人員 無菌工藝 生產(chǎn)線 工藝 人流 物流 布局 HVAC/公用工程* 日常無菌保證 培養(yǎng)基灌裝 QA/QC 消毒操作 偏差&環(huán)境控制趨勢Richard L. Friedman, M.S.藥物評價(jià)及研究中心 法規(guī)辦公室，美國FDA* 包括設(shè)計(jì)及維護(hù)16為什么要進(jìn)行無菌工藝驗(yàn)證為什么要進(jìn)行無菌工藝驗(yàn)證n證明采用無菌工藝生產(chǎn)無菌產(chǎn)品的能力證明采用無菌工藝生產(chǎn)無菌產(chǎn)品

9、的能力n無菌工藝人員資格和保證無菌工藝人員資格和保證n符合現(xiàn)行的符合現(xiàn)行的GMP要求要求17無菌工藝的意義無菌工藝的意義n無菌工藝試驗(yàn)僅證明無菌工藝系統(tǒng)（環(huán)無菌工藝試驗(yàn)僅證明無菌工藝系統(tǒng)（環(huán)境、設(shè)備、程序和人員）能力在某一個(gè)境、設(shè)備、程序和人員）能力在某一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表現(xiàn)。時(shí)間點(diǎn)的表現(xiàn)。n并不保證生產(chǎn)程序在同一個(gè)生產(chǎn)線不同并不保證生產(chǎn)程序在同一個(gè)生產(chǎn)線不同時(shí)間段表現(xiàn)出相同的微生物質(zhì)量水平。時(shí)間段表現(xiàn)出相同的微生物質(zhì)量水平。n通過控制和驗(yàn)證所以的相關(guān)工藝，如環(huán)通過控制和驗(yàn)證所以的相關(guān)工藝，如環(huán)境監(jiān)測、人員確認(rèn)和清潔、滅菌程序的境監(jiān)測、人員確認(rèn)和清潔、滅菌程序的驗(yàn)證，維持工藝模擬驗(yàn)證時(shí)的無菌水平。驗(yàn)

10、證，維持工藝模擬驗(yàn)證時(shí)的無菌水平。18主題主題2：相關(guān)：相關(guān)GMP法規(guī)對培養(yǎng)基灌裝法規(guī)對培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證的要求驗(yàn)證的要求19來自來自FDA和和USP的要求的要求FDA CGMP 無菌工藝藥品指南（無菌工藝藥品指南（2004年版）年版） An aseptic processing operation should be validated using a microbiological growth medium in place of the product. This process simulation, also known as a media fill. USP 31 潔凈室和其它控制

11、環(huán)境的微生物學(xué)評價(jià)潔凈室和其它控制環(huán)境的微生物學(xué)評價(jià) To assure that minimal bioburden is achieved, additional information on the evaluation of the microbiological status of the controlled environment can be obtained by the use of media fills. An acceptable media fill shows that a successful simulated product run can be condu

12、cted on the manufacturing line at that point in time.20來自來自EU GMP和國內(nèi)的要求和國內(nèi)的要求EU GMP 附件附件1 無菌藥品的生產(chǎn)（無菌藥品的生產(chǎn)（2008年年2月新版）月新版） Validation of aseptic processing should include a process simulation test using a nutrient medium (media fill).中國藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范附錄（中國藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范附錄（1998年修訂）年修訂）SFDA 化學(xué)藥品注射劑基本技術(shù)要求（試行）化學(xué)藥

13、品注射劑基本技術(shù)要求（試行） 培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證是對設(shè)備、環(huán)境以及人員操作的培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證是對設(shè)備、環(huán)境以及人員操作的一種系統(tǒng)驗(yàn)證一種系統(tǒng)驗(yàn)證,是判斷無菌保證水平的關(guān)鍵手段是判斷無菌保證水平的關(guān)鍵手段 采用無菌生產(chǎn)工藝的粉針劑，應(yīng)能保證采用無菌生產(chǎn)工藝的粉針劑，應(yīng)能保證SAL不大于不大于10-3-3 21附錄一：無菌制劑附錄一：無菌制劑第四十七條 無菌生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證應(yīng)包括培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。 應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的劑型以及培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養(yǎng)基。應(yīng)盡可能模擬常規(guī)的無菌生產(chǎn)工藝，包括所有對產(chǎn)品的無菌特性有影響的關(guān)鍵操作，及生產(chǎn)中可能出現(xiàn)的各種干預(yù)和最差條件。 培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的

14、首次驗(yàn)證，每班次應(yīng)連續(xù)進(jìn)行3次合格的試驗(yàn)?？諝鈨艋到y(tǒng)、設(shè)備、生產(chǎn)工藝及人員重大變更后，應(yīng)重復(fù)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)通常應(yīng)按生產(chǎn)工藝每班次半年進(jìn)行1次，每次至少一批。22 培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應(yīng)足以保證評價(jià)的有效性。批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基灌裝的數(shù)量應(yīng)至少等于產(chǎn)品的批量。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的目標(biāo)是零污染，應(yīng)遵循以下要求： （1）灌裝數(shù)量少于5000支時(shí)，不得檢出污染品； （2）灌裝數(shù)量在5000至10000支時(shí)： 1. 有1支污染，需調(diào)查，可考慮重復(fù)試驗(yàn)； 2.有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證。 （3) 灌裝數(shù)量超過10000支時(shí)： 1.有1支污染，需調(diào)查； 2.有2支污染，

15、需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證。 （4）發(fā)生任何微生物污染時(shí)，均應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。23主題主題3：培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的常規(guī)要求：培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的常規(guī)要求24定義與目的定義與目的 目的證明生產(chǎn)線采用無菌工藝生產(chǎn)無菌產(chǎn)品的能力對人員進(jìn)行資格確認(rèn)符合GMP的要求使用培養(yǎng)基模擬藥品進(jìn)行無菌灌封，對無菌工藝進(jìn)使用培養(yǎng)基模擬藥品進(jìn)行無菌灌封，對無菌工藝進(jìn)行驗(yàn)證。又稱為行驗(yàn)證。又稱為“工藝模擬試驗(yàn)工藝模擬試驗(yàn)”. .25工藝模擬試驗(yàn)的通常流程工藝模擬試驗(yàn)的通常流程 將培養(yǎng)基暴露于設(shè)備、容器膠塞密封系統(tǒng)的表面和關(guān)鍵環(huán)將培養(yǎng)基暴露于設(shè)備、容器膠塞密封系統(tǒng)的表面和關(guān)鍵環(huán)境條件中，并模擬實(shí)際生產(chǎn)完成工藝操作。境條件中，并模擬實(shí)際生產(chǎn)完

16、成工藝操作。對裝有培養(yǎng)基的密閉容器進(jìn)行培養(yǎng)以檢查微生物的生長。 評價(jià)結(jié)果，確定實(shí)際生產(chǎn)中（如灌裝前的調(diào)試、加入無菌原輔材料、無菌連接、灌裝和密封）產(chǎn)品污染的可能性。 26工藝模擬的過程工藝模擬的過程n從滅菌開始到完全灌裝結(jié)束的全過程。從滅菌開始到完全灌裝結(jié)束的全過程。n如處方混合階段采用的無菌過程必須作為驗(yàn)證如處方混合階段采用的無菌過程必須作為驗(yàn)證的一部分。的一部分。n配制后除菌、原液的保存。如取樣、保存時(shí)間、物配制后除菌、原液的保存。如取樣、保存時(shí)間、物料的循環(huán)等操作。料的循環(huán)等操作。n灌裝操作。如容器、設(shè)備的灌裝操作。如容器、設(shè)備的CIP和和SIP；設(shè)備依照；設(shè)備依照設(shè)定的速度和包裝規(guī)格包

17、裝容器等，正常與異常干設(shè)定的速度和包裝規(guī)格包裝容器等，正常與異常干擾等。擾等。n凍干工藝過程凍干工藝過程27模擬條件模擬條件-最差條件最差條件n最差條件的目的是有意對工藝、系統(tǒng)、設(shè)備在最差條件的目的是有意對工藝、系統(tǒng)、設(shè)備在更高的挑戰(zhàn)條件下進(jìn)行驗(yàn)證。更高的挑戰(zhàn)條件下進(jìn)行驗(yàn)證。n使用的原料、組件和密封在無菌工藝區(qū)域保存時(shí)間使用的原料、組件和密封在無菌工藝區(qū)域保存時(shí)間超出控制要求；超出控制要求；n增加灌裝人員的數(shù)量，超過正常灌裝生產(chǎn)所需的人增加灌裝人員的數(shù)量，超過正常灌裝生產(chǎn)所需的人員數(shù)量；員數(shù)量；n在工藝模擬實(shí)驗(yàn)中使用促生長培養(yǎng)基，而不是使用在工藝模擬實(shí)驗(yàn)中使用促生長培養(yǎng)基，而不是使用有抑制性或

18、保護(hù)性的處方。有抑制性或保護(hù)性的處方。 HACCP、FEMA、FAT方法確定最差條件方法確定最差條件28培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)的時(shí)機(jī)：培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)的時(shí)機(jī)： 初始驗(yàn)證與再驗(yàn)證初始驗(yàn)證與再驗(yàn)證初始驗(yàn)證初始驗(yàn)證需要重復(fù)多次，以確保結(jié)果的一致性和有效性。需要重復(fù)多次，以確保結(jié)果的一致性和有效性。有差異的多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果工藝過程失控的象征定期再驗(yàn)證定期進(jìn)行，評估無菌工藝的受控情況。應(yīng)綜合考慮每一班次及班次變化過程中有代表性的活動(dòng)及干預(yù)。對人員的資格再確認(rèn)應(yīng)納入到定期再驗(yàn)證中。29培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)的時(shí)機(jī)：培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)的時(shí)機(jī)： 增補(bǔ)性培養(yǎng)基灌封試增補(bǔ)性培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)驗(yàn)變更及其評估變更及其評估對產(chǎn)品或生產(chǎn)線的每一種變更

19、，均應(yīng)根據(jù)書面的變更對產(chǎn)品或生產(chǎn)線的每一種變更，均應(yīng)根據(jù)書面的變更控制系統(tǒng)進(jìn)行評估控制系統(tǒng)進(jìn)行評估 。如果通過評估認(rèn)為此項(xiàng)變更會(huì)影響到無菌生產(chǎn)工藝產(chǎn)如果通過評估認(rèn)為此項(xiàng)變更會(huì)影響到無菌生產(chǎn)工藝產(chǎn)品的無菌保證水平，則需要進(jìn)行增補(bǔ)性培養(yǎng)基灌封實(shí)品的無菌保證水平，則需要進(jìn)行增補(bǔ)性培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)。驗(yàn)。比如，設(shè)施或設(shè)備的變化、生產(chǎn)線配置的變動(dòng)、人員比如，設(shè)施或設(shè)備的變化、生產(chǎn)線配置的變動(dòng)、人員重要變動(dòng)、環(huán)境監(jiān)控結(jié)果異常、容器重要變動(dòng)、環(huán)境監(jiān)控結(jié)果異常、容器-膠塞系統(tǒng)變更、膠塞系統(tǒng)變更、停車時(shí)間延長、無菌檢查結(jié)果陽性等。停車時(shí)間延長、無菌檢查結(jié)果陽性等。30實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基和培養(yǎng)溫度的選擇實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基和培養(yǎng)溫

20、度的選擇選擇時(shí)的注意事項(xiàng)選擇時(shí)的注意事項(xiàng)適應(yīng)廣譜微生物生長，包括細(xì)菌和真菌適應(yīng)廣譜微生物生長，包括細(xì)菌和真菌較好的澄明度，較小的粘度較好的澄明度，較小的粘度易于除菌過濾易于除菌過濾常用培養(yǎng)基：常用培養(yǎng)基：3大豆胰蛋白肉湯（大豆胰蛋白肉湯（TSB）厭氧培養(yǎng)基僅在特殊情況下使用厭氧培養(yǎng)基僅在特殊情況下使用培養(yǎng)溫度培養(yǎng)溫度FDA - 20-35，目標(biāo)值，目標(biāo)值2.5，不少于，不少于14天；如選天；如選擇兩個(gè)溫度，則每一溫度下至少培養(yǎng)擇兩個(gè)溫度，則每一溫度下至少培養(yǎng)7天，從低溫開始。天，從低溫開始。PIC - 20-25下至少下至少14天，或，先天，或，先20-25下下7天，天， 然后然后30-35下

21、下7天。天。31培養(yǎng)基的選擇試驗(yàn)培養(yǎng)基的選擇試驗(yàn)n培養(yǎng)基的配制和滅菌培養(yǎng)基的配制和滅菌n培養(yǎng)基驗(yàn)證培養(yǎng)基驗(yàn)證n分裝到若干數(shù)量的無菌小瓶或試管分裝到若干數(shù)量的無菌小瓶或試管n制備三種微生物（枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、制備三種微生物（枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌的混懸液，菌液濃度控制在白色念珠菌的混懸液，菌液濃度控制在100-1000個(gè)菌個(gè)菌/mln分別加入菌懸液各分別加入菌懸液各0.1ml,每份至少每份至少2瓶（支）瓶（支）n培養(yǎng)：培養(yǎng)：30-35（枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌）（枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌）20-25（白色念珠菌）（白色念珠菌）n觀察：如果在觀察：如果在7天內(nèi)

22、，每種微生物培養(yǎng)據(jù)至少有天內(nèi)，每種微生物培養(yǎng)據(jù)至少有50%長菌，則可認(rèn)為培養(yǎng)基可用于無菌工藝驗(yàn)證。長菌，則可認(rèn)為培養(yǎng)基可用于無菌工藝驗(yàn)證。32灌裝體積與數(shù)量灌裝體積與數(shù)量灌裝體積灌裝體積每只容器的灌裝體積不少于總?cè)莘e的每只容器的灌裝體積不少于總?cè)莘e的1/3同樣，灌裝體積也不宜過大同樣，灌裝體積也不宜過大既要考慮到瓶倒轉(zhuǎn)或旋轉(zhuǎn)時(shí)，培養(yǎng)基能充分接觸到容器既要考慮到瓶倒轉(zhuǎn)或旋轉(zhuǎn)時(shí)，培養(yǎng)基能充分接觸到容器和密封件的內(nèi)表面，又要保證容器內(nèi)有足夠的氧氣支持和密封件的內(nèi)表面，又要保證容器內(nèi)有足夠的氧氣支持微生物生長。微生物生長。灌封數(shù)量灌封數(shù)量綜合考慮統(tǒng)計(jì)學(xué)要求和實(shí)際生產(chǎn)批量。綜合考慮統(tǒng)計(jì)學(xué)要求和實(shí)際生產(chǎn)批

23、量。FDA (5000瓶瓶)：如果正常生產(chǎn)的批次量低于：如果正常生產(chǎn)的批次量低于5000瓶，瓶，則培養(yǎng)基灌封至少應(yīng)為實(shí)際生產(chǎn)線的最大批次量。則培養(yǎng)基灌封至少應(yīng)為實(shí)際生產(chǎn)線的最大批次量。PIC (3000瓶瓶)：如果正常生產(chǎn)的批次量低于：如果正常生產(chǎn)的批次量低于3000瓶，瓶，則培養(yǎng)基灌封至少應(yīng)為實(shí)際生產(chǎn)線的最大批次量。則培養(yǎng)基灌封至少應(yīng)為實(shí)際生產(chǎn)線的最大批次量。33灌封時(shí)間與批次量控制灌封時(shí)間與批次量控制灌裝時(shí)間灌裝時(shí)間對于初始性驗(yàn)證，培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)應(yīng)安排在一周內(nèi)的不同對于初始性驗(yàn)證，培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)應(yīng)安排在一周內(nèi)的不同時(shí)間進(jìn)行。時(shí)間進(jìn)行。對于再驗(yàn)證，可選擇在一周結(jié)束或其它最差條件下進(jìn)行。對于再

24、驗(yàn)證，可選擇在一周結(jié)束或其它最差條件下進(jìn)行。灌封時(shí)間要涵蓋實(shí)際生產(chǎn)班次。灌封時(shí)間要涵蓋實(shí)際生產(chǎn)班次。批次量控制批次量控制初次驗(yàn)證，至少要連續(xù)成功灌封初次驗(yàn)證，至少要連續(xù)成功灌封3個(gè)批次。個(gè)批次。再驗(yàn)證至少需要成功灌封再驗(yàn)證至少需要成功灌封1個(gè)批次。個(gè)批次。34培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)FDA指南（指南（2004版）與版）與EU GMP 附件附件1標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一1.灌封量灌封量10000瓶時(shí)，若有瓶時(shí)，若有1瓶污染，需徹底調(diào)查；若瓶污染，需徹底調(diào)查；若有兩瓶污染，必須進(jìn)行徹底調(diào)查，并重新驗(yàn)證（有兩瓶污染，必須進(jìn)行徹底調(diào)查，并重新驗(yàn)證（3批）。批）。 注：歐盟標(biāo)準(zhǔn)將自注：歐

25、盟標(biāo)準(zhǔn)將自2009年年3月起執(zhí)行。月起執(zhí)行。35培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)2009年年3月以前歐盟通用標(biāo)準(zhǔn)：污染率低于月以前歐盟通用標(biāo)準(zhǔn)：污染率低于0.1%計(jì)算公式：實(shí)際污染率計(jì)算公式：實(shí)際污染率 = (95%置信限值置信限值)/(灌封容器數(shù)灌封容器數(shù)) 100%污染瓶數(shù)與污染瓶數(shù)與95%置信限值間的關(guān)系置信限值間的關(guān)系污染污染瓶數(shù)瓶數(shù)01234567891095%置信置信限值限值34.746.37.759.1510.51 11.8413.1514.4315.7116.9636培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)SFDA 化學(xué)藥品注射劑基本技術(shù)要求（試行）化學(xué)

26、藥品注射劑基本技術(shù)要求（試行）培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的批量與判斷合格的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的批量與判斷合格的標(biāo)準(zhǔn)批量（瓶）批量（瓶）3000475063007760允許污染的數(shù)量（瓶）允許污染的數(shù)量（瓶）0 1 2 337主題主題4:特殊劑型的培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證方法特殊劑型的培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證方法38凍干制劑對培養(yǎng)基灌封的要求凍干制劑對培養(yǎng)基灌封的要求凍干制劑的典型生產(chǎn)流程凍干制劑的典型生產(chǎn)流程配制配制灌裝灌裝凍干凍干加塞加塞軋蓋軋蓋第一種方式，模擬裝載/卸載過程，縮短放置時(shí)間（首選）容器內(nèi)灌封好培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)凍干機(jī)內(nèi)部分抽真空（500mbar），在室溫放置一定的時(shí)間，不得冷凍。用無菌空氣破真空

27、（不使用惰性氣體），全壓塞軋蓋 缺點(diǎn):真空度不能過高，不能照成培養(yǎng)基沸騰。注意，若所使用的容器透明度不高，應(yīng)將內(nèi)容物倒出進(jìn)行檢查。凍干制劑培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)的特殊性凍干制劑培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)的特殊性對產(chǎn)品在凍干機(jī)內(nèi)放置步驟的模擬對產(chǎn)品在凍干機(jī)內(nèi)放置步驟的模擬39凍干制劑對培養(yǎng)基灌封的要求凍干制劑對培養(yǎng)基灌封的要求第二種方式，模擬凍干時(shí)間第二種方式，模擬凍干時(shí)間半壓塞產(chǎn)品在凍干機(jī)腔室內(nèi)的放置時(shí)間同于正常工藝。半壓塞產(chǎn)品在凍干機(jī)腔室內(nèi)的放置時(shí)間同于正常工藝。缺點(diǎn)：耗時(shí)長缺點(diǎn)：耗時(shí)長第三種方式，以經(jīng)稀釋的培養(yǎng)基模擬凍干過程容器內(nèi)灌封好經(jīng)稀釋的培養(yǎng)基（diluted medium），以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)模擬

28、凍干過程，直到容器內(nèi)的培養(yǎng)基大致達(dá)到正常濃度（full strength）為止。缺點(diǎn)：耗時(shí)長，需開發(fā)特殊的凍干程序，營養(yǎng)支持性不均一，影響微生物的存活力。40粉針劑對培養(yǎng)基灌封的要求粉針劑對培養(yǎng)基灌封的要求第一種方法第一種方法在灌裝線上直接灌裝液體培養(yǎng)基，灌裝后壓塞在灌裝線上直接灌裝液體培養(yǎng)基，灌裝后壓塞-軋蓋或軋蓋或熔封。熔封。第二種方法第二種方法先灌裝干粉培養(yǎng)基，再加入注射用水先灌裝干粉培養(yǎng)基，再加入注射用水第三種方法第三種方法先灌裝惰性劑，再加入液體培養(yǎng)基先灌裝惰性劑，再加入液體培養(yǎng)基要點(diǎn)要點(diǎn)采用第二、三種方法時(shí)，所用惰性劑或干粉培養(yǎng)基需采用第二、三種方法時(shí)，所用惰性劑或干粉培養(yǎng)基需事先

29、經(jīng)過輻射滅菌。事先經(jīng)過輻射滅菌。常用惰性劑有聚乙二醇常用惰性劑有聚乙二醇8000、羧甲基纖維素、乳糖。、羧甲基纖維素、乳糖。41混懸劑混懸劑/半固體制劑對培養(yǎng)基灌封的要求半固體制劑對培養(yǎng)基灌封的要求懸浮劑懸浮劑需要模擬攪拌或循環(huán)流動(dòng)的過程。需要模擬攪拌或循環(huán)流動(dòng)的過程。如果有無菌添加過程，也應(yīng)進(jìn)行模擬。如果有無菌添加過程，也應(yīng)進(jìn)行模擬。半固體制劑半固體制劑需要將液體培養(yǎng)基增稠到適當(dāng)粘度。需要將液體培養(yǎng)基增稠到適當(dāng)粘度?？蛇x用瓊脂或羧甲基纖維素作為增稠劑，也可選用其可選用瓊脂或羧甲基纖維素作為增稠劑，也可選用其它試劑，但要證明其沒有抑制細(xì)菌或真菌的作用。它試劑，但要證明其沒有抑制細(xì)菌或真菌的作用

30、。在培養(yǎng)結(jié)束后，需將培養(yǎng)基從塑料或金屬管中擠出檢在培養(yǎng)結(jié)束后，需將培養(yǎng)基從塑料或金屬管中擠出檢查其混濁度和真菌菌落，也可進(jìn)行無菌檢查實(shí)驗(yàn)。查其混濁度和真菌菌落，也可進(jìn)行無菌檢查實(shí)驗(yàn)。如果選擇顯色培養(yǎng)基遇到污染物變色的方法，則需要如果選擇顯色培養(yǎng)基遇到污染物變色的方法，則需要對其進(jìn)行驗(yàn)證。對其進(jìn)行驗(yàn)證。42主題主題5：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證設(shè)計(jì)、執(zhí)行與文件編制：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證設(shè)計(jì)、執(zhí)行與文件編制43制訂培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)方案的考慮因素（一）制訂培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)方案的考慮因素（一）生產(chǎn)線最長運(yùn)行時(shí)間及其造成的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)生產(chǎn)線最長運(yùn)行時(shí)間及其造成的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)干預(yù)的次數(shù)、類型和復(fù)雜程度干預(yù)的次數(shù)、類型和復(fù)雜程度是否有凍

31、干工序是否有凍干工序設(shè)備的無菌裝配設(shè)備的無菌裝配總?cè)藬?shù)和所從事的操作總?cè)藬?shù)和所從事的操作無菌加入和無菌轉(zhuǎn)移的次數(shù)無菌加入和無菌轉(zhuǎn)移的次數(shù)班次更換、暫停和必要的更衣班次更換、暫停和必要的更衣無菌設(shè)備的拆卸與連接無菌設(shè)備的拆卸與連接環(huán)境監(jiān)測環(huán)境監(jiān)測44制訂培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)方案的考慮因素（二）制訂培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)方案的考慮因素（二）生產(chǎn)線的配置和運(yùn)行速度生產(chǎn)線的配置和運(yùn)行速度產(chǎn)品重量檢查產(chǎn)品重量檢查容器容器/密封系統(tǒng)密封系統(tǒng)與無菌操作相關(guān)的各種特殊規(guī)定與無菌操作相關(guān)的各種特殊規(guī)定總?cè)藬?shù)和所從事的操作總?cè)藬?shù)和所從事的操作n總的原則n綜合考慮生產(chǎn)線可能造成污染的各種因素 n盡可能模擬實(shí)際生產(chǎn)的無菌操作 n可

32、能時(shí)，應(yīng)包括最差條件的模擬測試45驗(yàn)證開始前的準(zhǔn)備工作驗(yàn)證開始前的準(zhǔn)備工作設(shè)備確認(rèn)設(shè)備確認(rèn)通風(fēng)系統(tǒng)（通風(fēng)系統(tǒng)（HVAC）的確認(rèn)）的確認(rèn)設(shè)備的在線清洗和滅菌設(shè)備的在線清洗和滅菌CIP,SIP滅（除）菌工藝驗(yàn)證滅（除）菌工藝驗(yàn)證濕熱、干熱滅菌工藝濕熱、干熱滅菌工藝除菌過濾除菌過濾空氣過濾器的完好性檢測空氣過濾器的完好性檢測容器容器/膠塞密封完好性測試膠塞密封完好性測試人員培訓(xùn)人員培訓(xùn)潔凈室環(huán)境達(dá)到設(shè)計(jì)要求潔凈室環(huán)境達(dá)到設(shè)計(jì)要求46培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)方案的內(nèi)容舉例培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)方案的內(nèi)容舉例定義被模擬的工藝定義被模擬的工藝定義使用的房間，灌封線和定義使用的房間，灌封線和設(shè)備設(shè)備使用的容器和密封件的類型使

33、用的容器和密封件的類型灌裝線的速度灌裝線的速度灌封數(shù)量灌封數(shù)量模擬過程中的干擾和中斷的模擬過程中的干擾和中斷的數(shù)目和類型數(shù)目和類型參與的人員數(shù)目參與的人員數(shù)目使用的培養(yǎng)基使用的培養(yǎng)基灌封到容器內(nèi)培養(yǎng)基的體積選擇的最差條件及其原理培養(yǎng)條件，培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)時(shí)間所進(jìn)行的環(huán)境監(jiān)測批記錄復(fù)印件職責(zé)說明所有工作的合格標(biāo)準(zhǔn)列舉最終報(bào)告中需要的文件本次模擬的持續(xù)時(shí)間47方案的執(zhí)行與記錄（一）方案的執(zhí)行與記錄（一）培養(yǎng)基灌封的日期和時(shí)間培養(yǎng)基灌封的日期和時(shí)間使用的房間和設(shè)備使用的房間和設(shè)備容器膠塞的型號(hào)和尺寸容器膠塞的型號(hào)和尺寸培養(yǎng)基種類和滅菌方式培養(yǎng)基種類和滅菌方式每容器中的灌裝體積每容器中的灌裝體積灌裝速度

34、灌裝速度灌封的瓶數(shù)，燈檢丟棄的瓶數(shù)和原因灌封的瓶數(shù)，燈檢丟棄的瓶數(shù)和原因培養(yǎng)的瓶數(shù)，陽性的數(shù)量培養(yǎng)的瓶數(shù)，陽性的數(shù)量培養(yǎng)時(shí)間和溫度培養(yǎng)時(shí)間和溫度48方案的執(zhí)行與記錄（二）方案的執(zhí)行與記錄（二）環(huán)境監(jiān)測的數(shù)據(jù)環(huán)境監(jiān)測的數(shù)據(jù)參與培養(yǎng)基灌封的人員參與培養(yǎng)基灌封的人員培養(yǎng)基靈敏度檢查的結(jié)果培養(yǎng)基靈敏度檢查的結(jié)果有無陽性結(jié)果。如有，要給出有無陽性結(jié)果。如有，要給出微生物鑒定的結(jié)果。微生物鑒定的結(jié)果。如發(fā)生異常情況，需給出調(diào)查如發(fā)生異常情況，需給出調(diào)查報(bào)告。報(bào)告。49培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)中的環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)中的環(huán)境監(jiān)測環(huán)境監(jiān)測按照相應(yīng)的規(guī)程進(jìn)行，包括：環(huán)境監(jiān)測按照相應(yīng)的規(guī)程進(jìn)行，包括：空氣粒子數(shù)空氣粒子數(shù)

35、沉降碟沉降碟浮游菌浮游菌表面監(jiān)測表面監(jiān)測人員監(jiān)測人員監(jiān)測n對無菌生產(chǎn)區(qū)環(huán)境的評估對無菌生產(chǎn)區(qū)環(huán)境的評估50培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)中的靈敏度檢查實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)中的靈敏度檢查實(shí)驗(yàn)n培養(yǎng)基靈敏度檢查實(shí)驗(yàn)：培養(yǎng)基靈敏度檢查實(shí)驗(yàn)： 使用完成使用完成14天培養(yǎng)的灌封前期培養(yǎng)基樣品天培養(yǎng)的灌封前期培養(yǎng)基樣品n用枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠球菌、銅綠假用枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠球菌、銅綠假單胞菌、黑曲霉和環(huán)境菌作為陽性菌單胞菌、黑曲霉和環(huán)境菌作為陽性菌n將每個(gè)菌種準(zhǔn)備含將每個(gè)菌種準(zhǔn)備含100cfu/0.1ml的菌液，每個(gè)菌種接種的菌液，每個(gè)菌種接種2支培養(yǎng)基樣品，同時(shí)并平板計(jì)數(shù)（雙份）支培

36、養(yǎng)基樣品，同時(shí)并平板計(jì)數(shù)（雙份）n對真菌對真菌在在20-25 C下培養(yǎng)，對細(xì)菌在下培養(yǎng)，對細(xì)菌在30-35 C下培養(yǎng)，每下培養(yǎng)，每天檢查，天檢查，5天內(nèi)需有生長跡象天內(nèi)需有生長跡象51再驗(yàn)證與增補(bǔ)性驗(yàn)證的要求再驗(yàn)證與增補(bǔ)性驗(yàn)證的要求再驗(yàn)證再驗(yàn)證對每條生產(chǎn)線，每年進(jìn)行兩次再驗(yàn)證，間隔時(shí)間為對每條生產(chǎn)線，每年進(jìn)行兩次再驗(yàn)證，間隔時(shí)間為5-7個(gè)個(gè)月月 。人員至少每年參加一次再驗(yàn)證，以進(jìn)行資格再確認(rèn)。人員至少每年參加一次再驗(yàn)證，以進(jìn)行資格再確認(rèn)。每條生產(chǎn)線輪流使用最大和最小規(guī)格的容器，變換生產(chǎn)線每條生產(chǎn)線輪流使用最大和最小規(guī)格的容器，變換生產(chǎn)線的速度。的速度。增補(bǔ)性驗(yàn)證增補(bǔ)性驗(yàn)證根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)程度決定培養(yǎng)基

37、灌封實(shí)驗(yàn)的批數(shù)。通常為根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)程度決定培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的批數(shù)。通常為1-3批。批。52培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的總結(jié)報(bào)告培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的總結(jié)報(bào)告最終報(bào)告中應(yīng)包括以下內(nèi)容最終報(bào)告中應(yīng)包括以下內(nèi)容模擬的最差條件模擬的最差條件事件清單事件清單環(huán)境監(jiān)測結(jié)果環(huán)境監(jiān)測結(jié)果微生物鑒別結(jié)果微生物鑒別結(jié)果培養(yǎng)基的營養(yǎng)檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果培養(yǎng)基的營養(yǎng)檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果培養(yǎng)條件、結(jié)果讀取日、結(jié)果讀取人、每位參與者的灌裝瓶培養(yǎng)條件、結(jié)果讀取日、結(jié)果讀取人、每位參與者的灌裝瓶數(shù)等信息。數(shù)等信息。結(jié)論（結(jié)果是否可以接受）結(jié)論（結(jié)果是否可以接受）合格證書合格證書工藝驗(yàn)證工藝驗(yàn)證/再驗(yàn)證合格證書再驗(yàn)證合格證書人員資格確認(rèn)證書人員資格確認(rèn)證書53培養(yǎng)基

38、灌封實(shí)驗(yàn)陽性結(jié)果的調(diào)查培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)陽性結(jié)果的調(diào)查 (一一)n調(diào)查的范圍應(yīng)包括調(diào)查的范圍應(yīng)包括環(huán)境微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)，空氣懸浮粒子監(jiān)測數(shù)據(jù)環(huán)境微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)，空氣懸浮粒子監(jiān)測數(shù)據(jù)CIP設(shè)備，清潔、消毒程序的執(zhí)行情況設(shè)備，清潔、消毒程序的執(zhí)行情況培養(yǎng)基、設(shè)備和零件的滅菌工藝，滅菌釜的校正情況培養(yǎng)基、設(shè)備和零件的滅菌工藝，滅菌釜的校正情況高效過濾器檢測高效過濾器檢測 (空氣懸浮粒子水平，過濾器檢漏，空氣懸浮粒子水平，過濾器檢漏，風(fēng)速測量，密封系統(tǒng)檢查，使用年限等風(fēng)速測量，密封系統(tǒng)檢查，使用年限等)除菌過濾器完好性除菌過濾器完好性房間氣流型式與壓差房間氣流型式與壓差人員操作技術(shù)培訓(xùn)情況人員操作技術(shù)培訓(xùn)情

39、況54培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)陽性結(jié)果的調(diào)查培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)陽性結(jié)果的調(diào)查 (二二)n調(diào)查的范圍還應(yīng)包括調(diào)查的范圍還應(yīng)包括以往產(chǎn)品無菌檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果以往產(chǎn)品無菌檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果人員衛(wèi)生狀況監(jiān)測數(shù)據(jù)人員衛(wèi)生狀況監(jiān)測數(shù)據(jù)培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)中的干預(yù)方式分析培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)中的干預(yù)方式分析該區(qū)域近期是否有過維修活動(dòng)，生產(chǎn)線的改造情該區(qū)域近期是否有過維修活動(dòng)，生產(chǎn)線的改造情況況該生產(chǎn)線培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)歷史數(shù)據(jù)該生產(chǎn)線培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)歷史數(shù)據(jù)已滅菌物品的儲(chǔ)存條件已滅菌物品的儲(chǔ)存條件培養(yǎng)基灌封過程中的異常事件培養(yǎng)基灌封過程中的異常事件陽性污染菌與環(huán)境監(jiān)測污染菌的鑒別陽性污染菌與環(huán)境監(jiān)測污染菌的鑒別55培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)陽性結(jié)果的調(diào)查培養(yǎng)基

40、灌封實(shí)驗(yàn)陽性結(jié)果的調(diào)查 (三三)調(diào)查結(jié)論與風(fēng)險(xiǎn)評估調(diào)查結(jié)論與風(fēng)險(xiǎn)評估培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效暫停生產(chǎn)，直至確定污染來源并采取有效的糾偏措施。再驗(yàn)證合格后，產(chǎn)品方可放行。對培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)后和此前所生產(chǎn)的產(chǎn)品，進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效重新進(jìn)行培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)重新進(jìn)行培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)條件條件1無菌灌裝區(qū)的物理?xiàng)l件不滿足要求無菌灌裝區(qū)的物理?xiàng)l件不滿足要求條件條件2人員未按照正常生產(chǎn)程序操作人員未按照正常生產(chǎn)程序操作56污染污染 率率灌裝過程灌裝過程(時(shí)間或灌裝量時(shí)間或灌裝量)在灌裝過程中污染率上升 這表明污染可能來源于液體培養(yǎng)基 (如與培養(yǎng)基貯罐非無菌連

41、接，在循環(huán)管路中受到污染)。很重要的是，在灌裝結(jié)束后，保持培養(yǎng)基貯罐處于無菌狀態(tài)，當(dāng)?shù)鹊脚囵B(yǎng)基灌裝結(jié)果時(shí)，可以核實(shí)這樣的假設(shè)。57污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時(shí)間或灌裝量時(shí)間或灌裝量) 在灌裝過程中污染率下降這表明污染發(fā)生于生產(chǎn)設(shè)備中（ 膠塞容器/ 軌道, 計(jì)量泵 / 針頭)，在灌裝過程中污染被部分或全部“清洗掉”。58污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時(shí)間或灌裝量時(shí)間或灌裝量)在灌裝過程中污染率出現(xiàn)尖峰一個(gè)尖峰（在短時(shí)段的一些產(chǎn)品被污染）可能與在灌裝過程中不正確操作導(dǎo)致的關(guān)鍵失誤有關(guān)。對于這個(gè)原因，很關(guān)鍵的是必須知道被污染產(chǎn)品灌裝的準(zhǔn)確時(shí)間，以及當(dāng)時(shí)實(shí)施的干預(yù)措施（灌裝操作過程的錄像是非常有用

42、的）59污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時(shí)間或灌裝量時(shí)間或灌裝量)污染率出現(xiàn)尖峰后，呈上升趨勢 與前面的例子相同，但如果錯(cuò)誤的干預(yù)措施能夠影響到液體的管路/回路時(shí)（如培養(yǎng)基貯罐的變化，泵或針的替換）60污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時(shí)間或灌裝量時(shí)間或灌裝量)孤立事件(試驗(yàn)中少數(shù)污染)不幸的是，這些現(xiàn)象是最普通的，也是最難調(diào)查的。如果這種現(xiàn)象在多次試驗(yàn)中反復(fù)出現(xiàn)，可能說明這個(gè)工藝存在“環(huán)境噪聲”，所以需要根本的措施（如 更衣/著裝、消毒劑和氣流模式的改變)61主題主題6：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證的關(guān)鍵點(diǎn)分析：培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證的關(guān)鍵點(diǎn)分析62培養(yǎng)基灌封后的生產(chǎn)培養(yǎng)基灌封后的生產(chǎn)n培養(yǎng)基灌封后可以進(jìn)行生產(chǎn)，但要等

43、培養(yǎng)基灌封合培養(yǎng)基灌封后可以進(jìn)行生產(chǎn)，但要等培養(yǎng)基灌封合格后產(chǎn)品才能放行（產(chǎn)品有報(bào)廢的風(fēng)險(xiǎn)）。格后產(chǎn)品才能放行（產(chǎn)品有報(bào)廢的風(fēng)險(xiǎn)）。n無效的培養(yǎng)基灌封后可以進(jìn)行生產(chǎn)，但所生產(chǎn)的批無效的培養(yǎng)基灌封后可以進(jìn)行生產(chǎn)，但所生產(chǎn)的批次要在成功培養(yǎng)基灌封后方可放行。次要在成功培養(yǎng)基灌封后方可放行。n培養(yǎng)基灌封失敗培養(yǎng)基灌封失敗 生產(chǎn)線不能用來生產(chǎn)，根據(jù)調(diào)查結(jié)果決定培養(yǎng)基灌生產(chǎn)線不能用來生產(chǎn)，根據(jù)調(diào)查結(jié)果決定培養(yǎng)基灌封的次數(shù)和數(shù)量，培養(yǎng)基灌封合格后，才能生產(chǎn)。封的次數(shù)和數(shù)量，培養(yǎng)基灌封合格后，才能生產(chǎn)。63討論：最差條件討論：最差條件 Worst Case最差條件高于或低于正常范圍的條件限度，與正常生產(chǎn)條高

44、于或低于正常范圍的條件限度，與正常生產(chǎn)條件相比最有可能造成工藝或生產(chǎn)失敗的條件。件相比最有可能造成工藝或生產(chǎn)失敗的條件。注意如果某些做法會(huì)帶來污染的風(fēng)險(xiǎn)，則不允許用培如果某些做法會(huì)帶來污染的風(fēng)險(xiǎn)，則不允許用培養(yǎng)基灌封的結(jié)果為它的不合理的進(jìn)行辯護(hù)養(yǎng)基灌封的結(jié)果為它的不合理的進(jìn)行辯護(hù) 64最差條件的設(shè)計(jì)（最差條件的設(shè)計(jì)（1）儲(chǔ)存時(shí)間儲(chǔ)存時(shí)間Holding timen灌封設(shè)備、灌封部件、儲(chǔ)罐、無菌物料、藥液在實(shí)際灌封灌封設(shè)備、灌封部件、儲(chǔ)罐、無菌物料、藥液在實(shí)際灌封前能夠放置的最長時(shí)間前能夠放置的最長時(shí)間n1. 灌封設(shè)備、灌封部件、儲(chǔ)罐、無菌物料需要再滅菌灌封設(shè)備、灌封部件、儲(chǔ)罐、無菌物料需要再滅菌

45、（除菌）的時(shí)間間隔（除菌）的時(shí)間間隔nWorst case: 用超出保存時(shí)間的灌封設(shè)備、灌封部件、用超出保存時(shí)間的灌封設(shè)備、灌封部件、儲(chǔ)罐、無菌物料參與培養(yǎng)基灌封儲(chǔ)罐、無菌物料參與培養(yǎng)基灌封n2. 產(chǎn)品從無菌過濾到灌封加塞完成所需要的時(shí)間產(chǎn)品從無菌過濾到灌封加塞完成所需要的時(shí)間nWorst case：無菌過濾后存放在儲(chǔ)罐內(nèi)的培養(yǎng)基模擬：無菌過濾后存放在儲(chǔ)罐內(nèi)的培養(yǎng)基模擬實(shí)際生產(chǎn)時(shí)產(chǎn)品的最大儲(chǔ)存時(shí)間后再灌封實(shí)際生產(chǎn)時(shí)產(chǎn)品的最大儲(chǔ)存時(shí)間后再灌封n產(chǎn)品在灌裝后的儲(chǔ)存時(shí)間應(yīng)在培養(yǎng)基灌封中驗(yàn)證產(chǎn)品在灌裝后的儲(chǔ)存時(shí)間應(yīng)在培養(yǎng)基灌封中驗(yàn)證65最差條件的設(shè)計(jì)（最差條件的設(shè)計(jì)（2）灌封的持續(xù)時(shí)間灌封的持續(xù)時(shí)間D

46、uration of runsn最保守的設(shè)計(jì)：在培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)中，模擬用時(shí)最長的瓶最保守的設(shè)計(jì)：在培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)中，模擬用時(shí)最長的瓶子滿批量生產(chǎn)所需要的時(shí)間，其中包括正常的干擾時(shí)間子滿批量生產(chǎn)所需要的時(shí)間，其中包括正常的干擾時(shí)間（換班、設(shè)備維修）。（換班、設(shè)備維修）。n其他的設(shè)計(jì)：其他的設(shè)計(jì)：1.在生產(chǎn)完成后接著進(jìn)行培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)在生產(chǎn)完成后接著進(jìn)行培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)2.為了減少灌封瓶數(shù)，在每批實(shí)驗(yàn)剛開始及結(jié)束前均灌裝為了減少灌封瓶數(shù)，在每批實(shí)驗(yàn)剛開始及結(jié)束前均灌裝培養(yǎng)基，中間空運(yùn)行灌封機(jī)以達(dá)到所需要的時(shí)間培養(yǎng)基，中間空運(yùn)行灌封機(jī)以達(dá)到所需要的時(shí)間n在任何情況下模擬了與實(shí)際生產(chǎn)不相同的情況，都要有

47、在任何情況下模擬了與實(shí)際生產(chǎn)不相同的情況，都要有記錄，并解釋原因記錄，并解釋原因n在正常生產(chǎn)過程中所需的最長時(shí)間，包括可能發(fā)生的事在正常生產(chǎn)過程中所需的最長時(shí)間，包括可能發(fā)生的事件，人員的換班等，應(yīng)予以模擬件，人員的換班等，應(yīng)予以模擬66最差條件的設(shè)計(jì)（最差條件的設(shè)計(jì)（3）灌封數(shù)量灌封數(shù)量n灌封數(shù)量沒必要總是滿批量灌封數(shù)量沒必要總是滿批量n慣例：小批量，至少要滿批量慣例：小批量，至少要滿批量 大批量，一般至少大批量，一般至少5000瓶瓶n在模擬無菌生產(chǎn)時(shí)間時(shí)會(huì)超過在模擬無菌生產(chǎn)時(shí)間時(shí)會(huì)超過5000瓶瓶67最差條件的設(shè)計(jì)（最差條件的設(shè)計(jì)（4）灌封速度與瓶子規(guī)格灌封速度與瓶子規(guī)格n灌封速度和瓶子規(guī)

48、格的關(guān)系灌封速度和瓶子規(guī)格的關(guān)系n最慢的速度，最大的瓶子規(guī)格最慢的速度，最大的瓶子規(guī)格n最小的瓶子規(guī)格，最快的速度最小的瓶子規(guī)格，最快的速度68最差條件的設(shè)計(jì)（最差條件的設(shè)計(jì)（5）人員人員n培養(yǎng)基灌封時(shí)模擬無菌區(qū)可能容納最多的人數(shù)培養(yǎng)基灌封時(shí)模擬無菌區(qū)可能容納最多的人數(shù)n無菌區(qū)工作人員至少每年參與一次培養(yǎng)基灌封無菌區(qū)工作人員至少每年參與一次培養(yǎng)基灌封n不是每個(gè)人員都要參與最差條件的模擬不是每個(gè)人員都要參與最差條件的模擬n看，不是參與看，不是參與69最差條件的設(shè)計(jì)（最差條件的設(shè)計(jì)（6）設(shè)備裝配設(shè)備裝配n動(dòng)作多動(dòng)作多n對灌封區(qū)環(huán)境產(chǎn)生直接影響對灌封區(qū)環(huán)境產(chǎn)生直接影響70最差條件的設(shè)計(jì)（最差條件的設(shè)計(jì)（7）