清毒湯治療急性肝損傷大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的實(shí)驗(yàn)研究

1、清毒湯治療急性肝損傷大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的實(shí)驗(yàn)研究                 作者：高連印 付修文 譚 勇 杜宇瓊 車念聰 【摘要】【關(guān)鍵詞】  清毒湯 藥效學(xué) 內(nèi)毒素血癥 大鼠清毒湯是由傷寒論中的小承氣湯化裁而來。該方具有清熱燥濕解毒、活血涼血育陰的功效。經(jīng)臨床驗(yàn)證清毒湯治療慢性肝病腸源性內(nèi)毒素癥安全有效，用后可以迅速改善癥狀，抑制內(nèi)毒素（ET）的產(chǎn)生，提高機(jī)體清除ET的能力，是重癥肝病治療過程中重要的輔助治療藥物1。為了進(jìn)一步

2、研究清毒湯的作用機(jī)制，我們采用硫代乙酰胺所致肝損傷模型進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。   1   材料與儀器   1.1   動(dòng)物  選用SD大鼠38只，體重200220 g，雌雄兼用，清潔級(jí)。由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（京）-2006-0003。   1.2   藥物  清毒湯，常規(guī)水煎制，生藥含量為1.1 g/ml。   1.3   試劑  硫代乙酰胺，由北京化學(xué)試劑公司提供，批號(hào)01

3、0629；戊巴比妥鈉，北京通縣育才精細(xì)化工廠生產(chǎn)，批號(hào)950427；鱟試劑盒，由上海伊化臨床醫(yī)學(xué)科技公司（上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所）提供；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）試劑盒，由Roche公司提供； 腫瘤壞死因子-（TNF-）放免試劑盒，由北京北方生物技術(shù)研究所提供。   1.4   儀器  Reicheit-Jung 2040切片機(jī)德國(guó)產(chǎn)；BH-2光學(xué)顯微鏡，Olympus，日本；Qwin圖像分析系統(tǒng)，Leica德國(guó)產(chǎn)；752C紫外可見分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠產(chǎn)品；GC-911 放射免疫計(jì)數(shù)器，中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)

4、業(yè)總公司產(chǎn)品；日立7170全自動(dòng)生化分析儀，日本產(chǎn)。   2   方法   2.1   分組及處理   將28只大鼠隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組10只，模型組9只，清毒湯組9只。 清毒湯組按照1   ml/100 g 體重給予灌胃，1 h后腹腔注射硫代乙酰胺（TAA）600 mg/kg體重，分別于6，12h后再次灌胃給予清毒湯；模型組灌胃給予同容積的蒸餾水，1 h后腹腔注射TAA，劑量同清毒湯組，分別于6，12 h后再次灌胃給予相應(yīng)等量的蒸餾水；正常對(duì)照組灌胃相應(yīng)等量的蒸餾水和腹

5、腔注射相應(yīng)等量的生理鹽水。注射24 h后，將各組大鼠以45 mg/kg體重的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，于腹主動(dòng)脈無菌取血，分離血清、血漿，分別用于ALT，AST，TNF-以及內(nèi)毒素含量的測(cè)定。取肝臟，用10%福爾馬林固定。   2.2   指標(biāo)測(cè)定   2.3   統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以±s表示，采用方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)。            3  結(jié)果   3.1  

6、; 病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果    圖3  清毒湯組   進(jìn)一步的圖像分析結(jié)果顯示，清毒湯組的肝臟損傷面積百分比明顯低于模型組。見表1。表1  各組大鼠肝臟的損傷情況模型組比較，P0.05, P0.01   3.2   各組大鼠血清中ALT,AST活性濃度的影響   結(jié)果見表2。表2  各組大鼠血清中ALT,AST活性濃度的變化與正常對(duì)照組比較，*P0.05, *P0.01;與模型組比較，P0.01   3.3   各組大

7、鼠血清中TNF-含量的影響結(jié)果見表3。表3  各組大鼠血清中TNF-含量的變化（與模型組比較，P0.05, P0.01；與模型組比較，P0.01   3.4  各組大鼠血漿中內(nèi)毒素含量的影響   見表4。表4  各組大鼠血漿中內(nèi)毒素含量的變化 與正常對(duì)照組比較，*P0.01； 與模型組比較， P0.01   4  討論   內(nèi)毒素存在于革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁外膜中,以脂多糖(LPS)為其主要成分。正常情況下腸道中的ET少量被腸道吸收，經(jīng)門靜脈進(jìn)入肝臟后迅速被枯否細(xì)胞清除。肝病時(shí)

8、，由于肝功能障礙，膽汁分泌減少可引起腸道菌群失調(diào)，革蘭氏陰性菌細(xì)胞代謝增快，腸道內(nèi)革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁LPS成分增多，也即ET增多，由于此時(shí)肝臟功能受損，不能完全清除過量的ET而使其在循環(huán)系統(tǒng)含量升高，同時(shí)腸道屏障結(jié)構(gòu)破壞，ET過量易位，最終導(dǎo)致腸源性內(nèi)毒素血癥(IETM)2。   對(duì)IETM的治療，目前仍然是改善腸道環(huán)境，減少內(nèi)毒素的產(chǎn)生和吸收，促進(jìn)排泄，適當(dāng)應(yīng)用抗生素，調(diào)節(jié)腸道菌群等，療效并不滿意。在目前西醫(yī)對(duì)內(nèi)毒素血癥無特效藥的情況下，以清熱解毒方劑為代表的中藥無疑有舉足輕重的作用3。實(shí)驗(yàn)證明大承氣湯對(duì)急性肝損傷IETM生物學(xué)效應(yīng)具有明顯阻斷作用，對(duì)IETM具有干預(yù)作用

9、，對(duì)急性肝損傷大鼠具有防治作用4。   清毒湯是由傷寒論中的小承氣湯化裁而來。該方具有清熱燥濕解毒、活血涼血育陰的功效，臨床驗(yàn)證取得了較好的療效；本實(shí)驗(yàn)研究也證實(shí)清毒湯具有清除ET、降低TNF-含量、保護(hù)肝細(xì)胞的作用，光鏡下觀察到清毒湯組病理所見與模型組相似，但點(diǎn)灶狀壞死、中央帶狀壞死及橋連狀壞死均較模型組為輕，進(jìn)一步的圖像分析結(jié)果顯示清毒湯組的肝臟損傷面積明顯低于模型組。這一結(jié)果提示清毒湯能使ET含量降低是其對(duì)TAA所致的肝損傷具有防護(hù)作用的機(jī)制之一。【參考文獻(xiàn)】  1 王融冰劉軍民吳云忠，等.清毒湯治療肝病腸源性內(nèi)毒素癥臨床觀察J .中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2004,14(3):135.2 朱寧川,陳 寧.腸道菌群失調(diào)與腸源性內(nèi)毒素血癥J.中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志, 2006, 16 (1): 61.3 余林中