上海地標-火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定

1、DB 31/20102012DB上 海 市 地 方 標 準DB 31/20102012食品安全地方標準 火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法 2012-10-26 發(fā)布2012-10-26 實施上海市食品藥品監(jiān)督管理局 發(fā) 布 前 言本標準的附錄A、附錄B為資料性附錄。食品安全地方標準火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法1 范圍本標準規(guī)定了火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的液相色譜-串聯(lián)質譜測定方法。本標準適用于火鍋醬料、湯料、調味油和固體類調味粉等火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因、蒂巴因的測定。 2

2、原理樣品用水或鹽酸溶液分散均勻、乙腈提取后，經鹽析分層，乙腈提取液用鍵合硅固相萃取吸附劑凈化，離心，液相色譜串聯(lián)質譜儀檢測，罌粟堿、那可丁和蒂巴因采用外標法定量，嗎啡和可待因采用內標法定量。3 試劑與材料除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。3.1 甲醇（CH3OH）：色譜純。3.2 乙腈（CH3CN）：色譜純。3.3 甲酸（HCOOH）：色譜純。3.4 鹽酸（HCl）。3.5 甲酸銨（HCOONH4）。3.6 氫氧化鈉（NaOH）。3.7 無水硫酸鎂（MgSO4）：研磨后在500 馬弗爐內烘5 h，200 時取出裝瓶，貯于干燥器中，冷卻后備用。

3、3.8 無水醋酸鈉（CH3COONa）。3.9 乙二胺-N- 丙基硅烷（PSA）填料：粒度4070 m。3.10 C18填料：粒度4050 m。3.11 鹽酸溶液（0.1 mol/L）：量取鹽酸（3.4）9 mL，加水至1 L ，搖勻備用。3.12 甲酸銨溶液（10 mmol/L）：準確稱取1.26 g甲酸銨（3.5）溶解于適量水中，定容至2 L，混勻后備用。3.13 甲酸甲醇溶液（0.5 ）：量取甲酸（3.3）1 mL，置于200 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻備用。3.14 氫氧化鈉溶液（1 mol/L）：準確稱取40 g氫氧化鈉（3.6）溶解于適量水中，定容至1 L，混勻后備

4、用。3.15 鹽酸罌粟堿、嗎啡、那可丁、磷酸可待因和蒂巴因標準品：純度不少于98。3.16 內標物質：嗎啡-D3，可待因-D3。3.17 標準儲備液（1.0 mg/mL）：精密稱取鹽酸罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和磷酸可待因標準品適量，用甲酸甲醇溶液（3.13）配制成罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和可待因的濃度均為1.0 mg/mL的溶液，作為標準儲備液。4避光保存，有效期三個月。3.18 混合標準品溶液：精密吸取濃度為1.0 mg/mL的罌粟堿、那可丁、蒂巴因儲備液各1.0 mL和濃度為1.0 mg/mL的嗎啡、可待因儲備溶液各5 mL于20 mL容量瓶中，用乙腈（3.2）定容至刻度，搖勻，即

5、得含罌粟堿、那可丁、蒂巴因濃度為50 µg/mL和嗎啡、可待因濃度為250 µg/mL的混合標準品溶液。4避光保存，有效期三個月。3.19 同位素內標工作溶液（5.0 g/mL）：分別精密吸取內標物質（3.16）適量，用甲醇（3.1）配制成嗎啡-D3，可待因-D3的濃度均為5.0 g/mL的溶液。4避光保存，有效期三個月。3.20 標準工作溶液的配制：分別精密吸取上述混合標準品溶液（3.18）和同位素內標工作溶液（3.19）適量，用乙腈（3.2）稀釋成罌粟堿、那可丁、蒂巴因濃度為1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng

6、/mL、50.0 ng/mL，嗎啡、可待因濃度為5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL的系列標準工作溶液，內標溶液濃度均為50.0 ng/mL。臨用新配。3.21 甲酸乙腈溶液（0.1 ）：量取甲酸（3.3）1 mL，加乙腈（3.2）稀釋至1 L，搖勻，過濾。3.22 甲酸甲酸銨溶液（0.1 ）：量取甲酸（3.3）1 mL，加甲酸銨溶液（3.12）稀釋至1 L，搖勻，過濾。3.23 濾膜：0.22 m（尼龍）。3.24 pH試紙：pH 114。4 儀器和設備4.1 液相色譜-串聯(lián)質譜儀：帶電噴霧離子源（ESI

7、）。4.2 分析天平：感量為0.00001 g和0.01 g。4.3 離心機：10 000 轉/分鐘。4.4 超聲波清洗器。4.5 渦旋混合器。5 分析步驟5.1 提取5.1.1 火鍋醬料、湯料、調味油稱取2 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入150 µL同位素內標工作液（3.19），再加入5 mL水，振搖使分散均勻（醬類樣品必要時可加10 mL水），加入15 mL乙腈（3.2），渦旋振蕩1 min，加入6 g無水硫酸鎂（3.7）和1.5 g無水醋酸鈉（3.8）的混合粉末（或以相當?shù)氖惺凵唐反妫杆僬駬u，渦旋振蕩1 min，以4000 轉/分鐘離

8、心5 min，取上清液待凈化。5.1.2 固體類調味粉稱取2 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入150 µL同位素內標工作液（3.19），再加入5 mL鹽酸溶液（3.11）溶液，超聲處理30分鐘，用氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值呈中性，加入15 mL乙腈（3.2），渦旋振蕩1 min，加入6 g無水硫酸鎂（3.7）和1.5 g無水醋酸鈉（3.8）的混合粉末（或以相當?shù)氖惺凵唐反妫?，迅速振搖，渦旋振蕩1 min，以4000 轉/分鐘離心5 min，取上清液待凈化。5.2 凈化稱取50 mg（±5 mg）PSA（3.9），100 mg（±5

9、 mg）無水硫酸鎂（3.7），100 mg（±5 mg）C18粉末（3.10）置于2 mL聚四氟乙烯具塞離心管中(或以相當?shù)氖惺凵唐反妫?，移?.5 mL上清液（5.1）至此離心管中，渦旋混合1 min，以10 000轉/分鐘離心2 min，移取上清液，0.22 m濾膜（3.23）過濾，取濾液待測。6 測定6.1 參考液相色譜條件a) 色譜柱：BEH HILIC（粒徑1.7µm，2.1×100mm），或相當者；b) 進樣量：5 L；c) 柱 溫：40 ；d) 流 速：0.3 mL/min；e）流動相：A相（3.21）：含0.1%甲酸的乙腈，B相（3.22）：含0

10、.1 %甲酸的10 mmol/L甲酸銨溶液，按表1進行梯度洗脫。表1 梯度洗脫程序時間/minA相/%B相/%0.0090100.3090101.0080202.5080203.0090106.0090106.2 參考質譜條件a) 離子化方式：電噴霧電離；b) 掃描方式：正離子掃描；c) 檢測方式：多反應監(jiān)測（MRM）；霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮氣；使用前應調節(jié)各參數(shù)使質譜靈敏度達到檢測要求，參考條件見附錄A。6.3 定性測定在相同實驗條件下測定標準溶液和樣品溶液，如果樣品溶液中檢出的色譜峰的保留時間與標準溶液中的某種組分色譜峰的保留時間一致，樣品溶液的定性離子相對豐度比與濃度相

11、當標準溶液的定性離子相對豐度比進行比較時，相對偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在該組分。表2 定性確定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/%5020501020<10允許的相對偏差/%±20±25±30±506.4 定量測定在儀器最佳狀態(tài)下，對標準工作液進樣，以罌粟堿、那可丁和蒂巴因的色譜峰面積為縱坐標，罌粟堿、那可丁和蒂巴因的濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，外標法定量；以嗎啡和可待因的峰面積與相應內標物峰面積的比值為縱坐標，嗎啡和可待因的濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，內標法定量。在上述色譜和質譜條件下，7種化合物的標準物質提取離子（

12、定量）質譜圖參見附錄B。6.5 空白試驗除不稱取樣品外，按5.1、5.2步驟進行后測定。7 分析結果的表述樣品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴的含量按下式計算： X=c×Vm (1) 式中：X 試樣中各待測物的含量，單位為微克每千克（g/kg）；c 從標準曲線中讀出的供試品溶液中各待測物的濃度，單位為微克每升（µg/L）；V 樣液的提取體積，此處為15，單位為毫升（mL）；m 試樣的質量，單位為克（g）。計算結果保留三位有效數(shù)字。8 方法精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20 。9 方法檢出限和定量限本標準罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待

13、因和蒂巴因的檢出限分別為8 g/kg、40 g/kg、8 g/kg、40 g/kg、8 g/kg。定量限分別為25 g/kg、125 g/kg、25 g/kg、125 g/kg、25 g/kg。10 方法準確度罌粟堿、那可丁和蒂巴因添加濃度范圍為25 g/kg250 g/kg，嗎啡、可待因添加濃度范圍為125 g/kg1250 g/kg時，回收率為70 110 。附 錄 A(資料性附錄)質譜/質譜測定參考條件5種生物堿及2個內標化合物的定性離子對、定量離子對、去簇電壓（DP）及碰撞氣能量（CE）見表A.1。表A.1 7種化合物的定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞氣能量組分名稱定性離子對（m

14、/z）定量離子對（m/z）去簇電壓（DP）/V碰撞氣能量（CE）/eV罌粟堿340.4/202.2340.4/202.29238340.4/171.149嗎啡286.0/181.3286.0/181.39750286.0/165.350那可丁414.4/220.5414.4/220.59530414.4/353.334可待因300.4/215.2300.4/215.29034300.4/165.455蒂巴因312.3/58.3312.3/58.35238312.3/249.122嗎啡-D3289.4/185.2289.4/185.29540289.4/165.253可待因-D3303.5/215.3303.5/215.38035303.5/165.260附 錄 B(資料性附錄)罌粟堿 m/z 340.4/202.2嗎啡 m/z 286.0/181.3那可丁m/z 414.4/220.5可待因m/z 300.4/215.2蒂巴因m/z 3