實(shí)驗(yàn)七_(dá)稀釋平板計(jì)數(shù)法及土壤中真菌的分離純化)

1、實(shí)驗(yàn)七實(shí)驗(yàn)七 稀釋平板計(jì)數(shù)法及土壤中真稀釋平板計(jì)數(shù)法及土壤中真菌的分離純化菌的分離純化一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康膌掌握活菌計(jì)數(shù)的基本原理及方法l掌握從樣品中分離目的微生物的原理及方法二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理-稀釋平皿計(jì)數(shù)法稀釋平皿計(jì)數(shù)法l將微生物細(xì)胞充分稀釋到單個(gè)分散，把這些單個(gè)分散的細(xì)胞均勻涂布在平皿培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后長(zhǎng)出的菌落肉眼可見(jiàn)，每個(gè)菌落都由原液中單個(gè)細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，計(jì)算菌落數(shù)，通過(guò)公式可以求出單位原樣品中的活菌數(shù)。l每ml(g)樣品中的活菌數(shù)=（每皿菌落數(shù)平均值/取樣體積）稀釋倍數(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理-土壤中真菌的分離純化土壤中真菌的分離純化l馬丁孟加拉紅-鏈霉素培養(yǎng)基馬丁培養(yǎng)基孟加

2、拉紅鏈霉素三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材（一）培養(yǎng)基1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基2、馬丁孟加拉紅-鏈霉素培養(yǎng)基（二）其他1、無(wú)菌培養(yǎng)皿2、無(wú)菌吸管3、無(wú)菌水（三）儀器1、超凈工作臺(tái)2、玻璃刮鏟3、酒精棉球四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟-稀釋平板計(jì)數(shù)法稀釋平板計(jì)數(shù)法1 1、熔化培養(yǎng)基、熔化培養(yǎng)基2 2、倒平皿、倒平皿3 3、梯度稀釋法稀釋原菌樣品、梯度稀釋法稀釋原菌樣品四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟4 4、涂平皿：、涂平皿： 選取選取1/101/106 6,1/10,1/107 7,1/10,1/108 8三個(gè)稀釋度計(jì)數(shù)，每皿取三個(gè)稀釋度計(jì)數(shù)，每皿取菌液菌液0.1ml0.1ml，用玻璃刮鏟涂布均勻，每個(gè)稀釋度做一，用玻

3、璃刮鏟涂布均勻，每個(gè)稀釋度做一個(gè)重復(fù)。個(gè)重復(fù)。5 5、3737倒置培養(yǎng)倒置培養(yǎng)2 2天天6 6、計(jì)數(shù)：、計(jì)數(shù)：每每ml原菌樣品中微生物的活細(xì)胞數(shù)（菌落形成數(shù)，原菌樣品中微生物的活細(xì)胞數(shù)（菌落形成數(shù)，CFU（同一稀釋度平板上菌落平均數(shù)（同一稀釋度平板上菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù)）稀釋倍數(shù)）/原菌樣品體積原菌樣品體積（ml）菌落計(jì)數(shù)規(guī)則：菌落計(jì)數(shù)規(guī)則：（一）選擇平均菌落數(shù)在（一）選擇平均菌落數(shù)在30300間的平板間的平板1、只有一個(gè)稀釋度符合，以該稀釋度的、只有一個(gè)稀釋度符合，以該稀釋度的平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；2、有兩個(gè)稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度的菌落數(shù)除以低稀

4、釋、有兩個(gè)稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度的菌落數(shù)除以低稀釋度的菌落數(shù)的值）：度的菌落數(shù)的值）： 1）若）若0.5比值比值2，以兩稀釋度的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)所得的值的均值報(bào)，以兩稀釋度的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)所得的值的均值報(bào)告。告。 2）若）若2比值或比值比值或比值 0.5，則取其中較少的菌落總數(shù)進(jìn)行報(bào)告。，則取其中較少的菌落總數(shù)進(jìn)行報(bào)告。（二）所有菌落數(shù)均不在（二）所有菌落數(shù)均不在30300間間以最接近以最接近30或或300的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)1、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均大于、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均大于300，則按稀釋倍數(shù)最高的平均菌，則按稀釋倍數(shù)最高的平均菌落數(shù)乘

5、以稀釋倍數(shù)報(bào)告；落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；2、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均小于、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均小于30，則按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落，則按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟-從土壤里分離真菌從土壤里分離真菌1 1、熔化培養(yǎng)基、熔化培養(yǎng)基2 2、倒平皿、倒平皿3 3、捻碎土樣，將土樣溶解在、捻碎土樣，將土樣溶解在90ml90ml無(wú)菌水三角瓶中無(wú)菌水三角瓶中4 4、梯度稀釋法稀釋土樣、梯度稀釋法稀釋土樣10g90ml10-110-210-310-410-54 4、涂平皿：、涂平皿： 每個(gè)稀釋度均需要涂布平皿，每皿取菌液每個(gè)稀釋度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml0.1ml，用玻璃刮鏟涂布均勻。用玻璃刮鏟涂布均勻。5 5、28倒置培養(yǎng)倒置培養(yǎng)37天天6 6、觀察并描述真菌菌落特征、觀察并描述真菌菌落特征五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析l稀釋平皿計(jì)數(shù)法：稀釋平皿計(jì)數(shù)法：稀釋倍數(shù)106107108菌落數(shù)每每ml原菌樣品中微生物的活細(xì)胞數(shù)（菌落形成數(shù)，原菌樣品中微生物的活細(xì)