微生物質量文檔

1、臨床微生物檢驗是人體的各種物質進行微生物學檢驗，為臨床診斷和治療提供依據(jù)。整個檢驗過程包括病人樣品的采集、運送、處理，樣品中致病微生物的分離、培養(yǎng)、鑒定，藥物敏感試驗，出具檢驗報告。 檢驗地帶網為了保證檢驗結果準確無誤，應對分析前、分析中、分析后三個階段實行全面質量管理。質量控制是全面質量管理內容的一部分，主要針對分析中這一階段，通過采取各種措施來確保檢驗結果正確。影響分析中階段的因素很多，現(xiàn)就其主要因素和我們采取的質量控制要求分析如下： 一、人員的資格及操作熟練程度 由于臨床微生物檢驗的所有試驗都是中度或高度復雜的試驗，其特點為不能完全脫離手工；以定性試驗為主；主觀判斷機會較多。在操作過程的

2、每一個環(huán)節(jié)都會出現(xiàn)變化，因而人的資歷、專業(yè)經驗、檢驗能力、操作熟練程度尤為重要。 CLIA 88 曾對不同實驗室檢驗人員做出規(guī)定：中度復雜實驗室的檢驗人員應經過訓練，能進行檢驗，并有標本收集、合理使用儀器以及評價檢驗結果有效性的能力；高度復雜實驗室的檢驗人員必須是檢驗專業(yè)畢業(yè)的學士、碩士或博士，是有資格的、接受過培訓并能進行相應檢驗的人員。國內對不同技術職稱人員提出的要求是高級職稱人員應掌握國內外先進技術，及時了解專業(yè)發(fā)展的前沿狀況，獨立解決重大關鍵性技術問題，有較強的處理復雜工作的能力，能正確解釋檢驗結果的臨床意義，組織參與危重病人搶救，參與會診、技術咨詢、儀器試劑的選擇和論證；中級人員應熟

3、悉同內外先進技術，及時了解專業(yè)發(fā)展的前沿狀況，獨立解決一些關鍵技術問題，有處理復雜工作的能力，能正確解釋檢驗結果的臨床意義，參與危重病人搶救、會診、技術咨詢；初級人員應了解國內先進技術、專業(yè)發(fā)展的前沿狀況，在上級人員指導下解決一般技術問題，能正確解釋檢驗結果的臨床意義，參與技術咨詢。 檢驗地帶網 為了保證檢驗質量，對接受過一定專業(yè)理論、專業(yè)技術教育與培訓的上崗人員要進行定期的考核， 以測試他們的檢驗能力及操作熟練程度?？己说姆绞接卸喾N，一種是明確地告訴操作人員，讓其有思想準備；另一種是不通知對方，將考核樣品混同日常檢驗樣品作為常規(guī)工作?？己藘热菘舍槍z驗項目的某一環(huán)節(jié)。考核樣品可以是商品化的質

4、控品，也可由實驗室制備。無論采取哪種形式，哪種樣品，重要的是不得將考核樣品作“特殊對待”，而應當作常規(guī)工作處理。每個檢驗人員都要接受繼續(xù)教育，接受新的專業(yè)理論，學習新的專業(yè)技術、掌握新型儀器的操作使用和維護，不斷提高檢驗水平。 二、操作手冊 ( 作業(yè)指導書 ) 檢驗地帶網實驗室應具備一本包括所有檢驗項目操作方法與質控方法的操作手冊，由高年資人員編寫。不同級別的醫(yī)院應根據(jù)各自實驗室的條件與所開展項目，制定切合實際的操作手冊。編寫時盡可能參照國家標準、行業(yè)標準、地方標準、國際標準、國內外參考文獻中的相應部分，使方法標準化、規(guī)范化。操作手冊生成后應經室主任批準簽字，注明日期，并放置在工作場所，以便翻

5、閱。手冊中任何改變均應有科主任批準簽字注明日期。一旦科室領導更換應由現(xiàn)科室主任批準簽字，注明日期。停止使用的操作手冊副本應保留二年后再予銷毀。作為臨床微生物檢驗操作手冊至少應包括以下內容： (1) 樣品采集、運送與處理， (2) 樣品檢驗流程， (3) 檢驗方法與質控方法 ( 細菌分離、培養(yǎng)、鑒定與藥物敏感試驗 ) ， (4) 臨床意義， (5) 報告方式， (6) 儀器操作手冊， (7) 試劑質量鑒定， (8) 質控控制， (9) 實驗室管理的各項規(guī)章制度 ( 生物安全制度、內務管理制度、樣品管理制度等 ) 。 三、儀器設備的質控 臨床微生物實驗室最常用的儀器設備是光學顯微鏡、溫箱、二氧化碳

6、培養(yǎng)箱、冰箱與低溫冰箱、壓力蒸汽滅菌器等。這些儀器設備的質量控制標準見表 1 。 檢驗地帶網 表 1 臨床微生物實驗室常用儀器設備的質量控制 檢驗地帶網 儀器設備名稱 控制標準 允許范圍 監(jiān)控方法和頻率 檢驗地帶網光學顯微鏡     每年 4 次或需要時，作清潔與調試 檢驗地帶網 培養(yǎng)箱 35 ± 1 每天觀察記錄溫度 二氧化碳培養(yǎng)菌     每天觀察記錄溫度和 檢驗地帶網 溫度 35 ± 1 檢驗地帶網二氧化碳濃度 氣體 5%-10% <10% 檢驗地帶網  冰箱 檢驗地帶網   檢驗地帶網  檢

7、驗地帶網每天觀察記錄溫度 檢驗地帶網冷藏室 4 ± 2 檢驗地帶網  檢驗地帶網冷凍室 檢驗地帶網-5 ± 1 檢驗地帶網  低溫冰箱 -20 ± 5 檢驗地帶網 每天觀察記錄溫度 檢驗地帶網 壓力蒸汽滅菌器 檢驗地帶網 121 檢驗地帶網 121 檢驗地帶網使用時觀察并記錄溫度、壓力，每周用嗜熱芽孢菌或每次用化學方法測試滅菌效果 隨著醫(yī)學檢驗學科的不斷發(fā)展，許多自動化儀器和微量生化反應系統(tǒng)相繼進入微生物實驗室。給細菌、真菌的培養(yǎng)、鑒定與藥敏試驗帶來快速準確的結果。對于這些儀器設備的質量控制，可根據(jù)廠商說明書推薦的方法去做，確保測試系統(tǒng)的靈敏度

8、和精密度。 四、培養(yǎng)基的質量控制 用于各種臨床標本中微生物分離、鑒定的培養(yǎng)基種類很多。以前，都由實驗室自配，現(xiàn)在已有成品供應。無論成品培養(yǎng)基還是自制培養(yǎng)基，其質量好壞直接影響微生物檢驗結果的準確性，因此必須對培養(yǎng)基作以下三方面質控。 檢驗地帶網 1 一般性狀 培養(yǎng)基的一般性狀包括外觀、厚度、 pH 值等。剛配制的液體培養(yǎng)基，其外觀應透明、清亮、無混濁、無沉淀，顏色符合要求。新鮮的固體培養(yǎng)基應具有特定的顏色，表面濕潤但無水汽、平整、光潔無凹坑和氣泡。整塊平板厚薄均勻，一般厚度在 3mm ，但 MH 平板的厚度不得小于 4mm 。斜面的長度不得超過試管長度的 2 3 。應經常觀察貯存培養(yǎng)基的質量是

9、否合格。若試管內液體培養(yǎng)基液面降低，表明水分蒸發(fā)，培養(yǎng)基濃縮。當固體培養(yǎng)基發(fā)生顏色改變，表面干燥，出現(xiàn)裂紋或邊緣的瓊脂與平板或試管分離時，應不再使用。培養(yǎng)基的 pH 是細菌生長的重要條件之一，一般而言合格培養(yǎng)基的 pH 應在規(guī)定值上下 0.2 的范圍內。 檢驗地帶網 2 無菌試驗 新制備的培養(yǎng)基要按批號隨機抽取一定數(shù)量的樣品作無菌試驗。對于壓力蒸氣滅菌后傾注的固體培養(yǎng)基，抽樣后放 35 ± 1 溫箱培養(yǎng) 24-48h ；滅菌后經無菌操作分裝的液體培養(yǎng)基要全部放入 35 ± 1 溫箱內培養(yǎng) 24h ；對有些無需高壓滅菌只需煮沸消毒的選擇性培養(yǎng)基要取部分瓊脂，放入無菌肉湯管培養(yǎng)

10、 24h ：上述試驗證實無細菌生長時才算合格。若有細菌生長，說明培養(yǎng)基制備過程中已受雜菌污染，除了尋找原因外，應不再使用3 細菌生長試驗 所有的培養(yǎng)基在使用前除了做無菌試驗外還必須做細菌生長試驗以測定培養(yǎng)基性能是否符合要求。要用已知的標準菌株按照 NCCLS 推薦的方法作質控。質控所需的標準菌株分 2 種：一種是已知的可在某種培養(yǎng)基上生長并產生典型生物學性狀的，對培養(yǎng)基中的某種物質產生陽性反應的菌株；另一種是用已知的不能在某種培養(yǎng)基上生長或對培養(yǎng)基中的某種物質產生陰性生化反應的菌株。表 2 列出 10 種常用固體培養(yǎng)基的質量鑒定標準及所需標準菌株。 檢驗地帶網無論是廠家的成品培養(yǎng)基還是實驗室自

11、制的培養(yǎng)基，都應經過上述三方面的檢驗才能證實其質量是否合格。廠家應將所做的試驗內容形成書面的質量鑒定送交客戶保存。實驗室自行配制過程中應對上述鑒定內容有明確記載。此外還應對培養(yǎng)基配制原料的性狀、批號、失效期以及配制過程各個環(huán)節(jié)的操作形成記錄。表 2 12 種常用培養(yǎng)基的質量鑒定表 2 12 種常用培養(yǎng)基的質量鑒定 培養(yǎng)基名稱 質控菌株 ATCC 鑒定標準 血平板 檢驗地帶網 金黃色葡萄球菌化膿性鏈球菌肺炎鏈球菌大腸埃希菌 2592319615630525922 檢驗地帶網 中度到大量生長生長， - 溶血生長，溶血生長 巧克力平板 檢驗地帶網流感嗜血桿菌腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌 檢驗地帶網 102

12、111309043096 檢驗地帶網生長生長生長 伊紅美藍平板 鼠傷寒沙門菌大腸埃希菌糞腸球菌 140282592229212 檢驗地帶網生長，無色到琥珀色菌落生長，藍黑菌落，金屬光澤部分抑制 檢驗地帶網 麥康凱平板 檢驗地帶網 大腸埃希菌奇異變形桿菌鼠傷寒沙門菌糞腸球菌 檢驗地帶網25922124531402829212 生長，紅色菌落生長， 無色菌落，遷徒現(xiàn)象部分抑制生長，無色菌落部分抑制 SS 平板 鼠傷寒沙門菌福氏志賀菌糞腸球菌大腸埃希菌 14028120222921225922 生長，無色菌落，有或無黑心生長，無色菌落全部抑制部分或全部抑制 TCBS 平板 檢驗地帶網 霍亂弧菌副溶血

13、弧菌大腸埃希菌 檢驗地帶網 94591780225922 生長，黃色菌落生長，藍色菌落部分或全部抑制 檢驗地帶網營養(yǎng)瓊脂平板沙保弱平板 福氏志賀菌白色念珠菌大腸埃希菌 120221023125922 檢驗地帶網中度到大量生長生長部分或全部抑制 羅氏培養(yǎng)基 結核分枝桿菌 H37R大腸埃希菌 2517725922 檢驗地帶網生長部分或全部抑制 檢驗地帶網淋病選擇性培養(yǎng)基 檢驗地帶網淋病奈瑟菌奇異變形桿菌表皮葡萄球菌 檢驗地帶網 430964307112228 生長部分抑制部分抑制 檢驗地帶網五 . 試劑質控 臨床微生物實驗室常用的試劑包括染色液、診斷血清以及各種生化反應試劑等。 檢驗地帶網1. 染

14、色液質控細菌室最常用的染色液是革蘭染色液和抗酸染色液。對自制的染色液，要求將整個配制過程的操作步驟形成記錄并保存。配好的染色液應貼上寫有染色液名稱、配制日期、配制人的標簽。初次使用時必須用革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌標準株作質量鑒定，以證實染色液配制無誤。商品化染色液應對品牌、試劑名稱、批號、存放條件、失效期。廠家應向客戶提供染色液鑒定的質量保證書。按照 CLIA88 的規(guī)定，染色液應每周作一次質量控制。用金黃色葡萄球菌 (ATCC25923) 。大腸埃希菌 (ATCC 25922) 作革蘭染色液的室內質控。用結核分枝桿菌 H37Ra(ATCC 25177) 對抗酸染色液進行質量鑒定。過期的染色

15、液應不再使用。 2. 常用生化試劑的質控 檢驗地帶網 隨著細菌鑒定儀和快速微量生化鑒定板條的普及，臨床微生物檢驗常用的生化試劑種類日趨減少，對這些試劑的質控要求見表 3 。此外應注意在用試劑在貯存時的避光、冷藏等要求，保證試劑的穩(wěn)定性。不要使用過期的試劑。 檢驗地帶網 3. 診斷血清的質控 檢驗地帶網 診斷血清是一種重要的細菌鑒定的試劑，應從有資質的生產單位購買。驗收時必須看清生產批號、血清效價、透明度與色澤。初次使用時應注意：工作濃度并與原用的診斷血清對照比較后再用于病人樣品的測試。試驗中應注意無菌操作，避免細菌污染。要經常檢查貯存在 4 冰箱中的各種血清，若發(fā)現(xiàn)混濁，出現(xiàn)絮狀，應停止使用。

16、為保證血清凝集反應結果準確，應每 3 個月對血清進行一次質控。不要使用過期的血清。 檢驗地帶網表 3 常用試劑的質量鑒定 檢驗地帶網 試劑名稱 檢驗地帶網 陽性對照菌種 陰性對照菌種 檢驗地帶網監(jiān)控頻率 檢驗地帶網 凝固酶血漿 檢驗地帶網 金黃色葡萄球菌 檢驗地帶網表皮葡萄球菌 檢驗地帶網每天 檢驗地帶網 桿菌肽 A 群鏈球菌 B 群鏈球菌 檢驗地帶網每周 檢驗地帶網 Optochin 紙片 肺炎鏈球菌   檢驗地帶網 每周 檢驗地帶網10% 去氧膽酸鈉 肺炎鏈球菌 檢驗地帶網  每周 三氯化鐵（馬尿酸鈉試驗） B 群鏈球菌 檢驗地帶網 A 群鏈球菌 每次 檢驗地帶網 過氧

17、化氫 檢驗地帶網金黃金葡萄球菌 A 群鏈球菌 每天 檢驗地帶網氧化酶 銅綠假單胞菌 檢驗地帶網 大腸埃希菌 每天 檢驗地帶網甲基紅試劑 檢驗地帶網大腸埃希菌 檢驗地帶網產氣腸桿菌 檢驗地帶網 每周 檢驗地帶網VP 試劑 產氣腸桿菌 大腸埃希菌 每周 三氯化鐵（苯丙氨酸脫氫酶試驗） 奇異變形桿菌 大腸埃希菌 每周 檢驗地帶網“ X ”因子條狀物 嗜沫嗜血桿菌 檢驗地帶網副流感嗜血桿菌 每周 檢驗地帶網 “ V ”因子條狀物 檢驗地帶網副流感嗜血桿菌 流感嗜血桿菌 檢驗地帶網 每周 檢驗地帶網“ X+V ”因子條狀物 流感嗜血桿菌副流感嗜血桿菌 檢驗地帶網   檢驗地帶網每周

18、檢驗地帶網 芽管血清 檢驗地帶網白色念珠菌 檢驗地帶網 熱帶念珠菌 每次 六、抗微生物藥物敏感試驗的質控 藥物敏感試驗是臨床微生物檢驗的重要步驟之一。其結果正確與否涉及治療效果的好壞，病人住院時間的長短及其對服務質量是否滿意。常用的試驗方法有紙片法和稀釋法。影響藥敏試驗的因素很多，如 0.5 號麥氏濁度標準管未搖勻或變質；接種的菌懸液太淡或太濃；紙片在取用或貯存的過程中失效； MH 培養(yǎng)基的質量不合格；平板孵育的時間、溫度、氣體偏離標準；操作人員的技術不夠熟練等，這些影響因素均可通過藥敏試驗室內質控結果發(fā)現(xiàn)問題。藥敏試驗的室內質控開始時必須建立一個質控系統(tǒng)。在滿足上述條件后，用各種藥物與標準菌

19、株配成不同組合，同一組合測連續(xù) 30 d 抑菌圈 ( 紙片法 ) 直徑或 MIC 值 ( 稀釋法 ) 。在 30 個數(shù)據(jù)中只能允許 3 個數(shù)據(jù)失控。這時可將每日質控改為每周質控，每周質控時，若有一個數(shù)據(jù)失控，應立即查找原因。找到原因后連續(xù)做 5 d 質控，若 5 d 數(shù)據(jù)均在控，說明原因已找到，可改為每周質控；若連續(xù) 5 d 數(shù)據(jù)中出現(xiàn)一個數(shù)據(jù)失控說明尚未找到真正的原因，應繼續(xù)查找。在恢復每周質控前仍應有連續(xù) 30 d 質控數(shù)據(jù)支持。 質控系統(tǒng)包括： (1) 經過正規(guī)培訓，掌握藥敏試驗操作方法的人員； (2) 要有標準操作規(guī)程，其中包括藥敏試驗方法、標準菌株種類及應用、藥敏試驗的質控方法及允許范圍、藥物種類選擇與判斷標準等； (3) 有試驗所需的質控菌株 ( 藥物敏感試驗中所需標準菌株名稱與實際應用見表 4) ； (4) 使用質量合格的消耗性檢驗材料； (5) 儀器設備運轉正常控制標準在允許范圍內。 質控系統(tǒng)健全后