中藥血清藥理學研究方法應用現(xiàn)狀及展望

1、中藥血清藥理學研究方法應用現(xiàn)狀及展望摘要：近年來中藥血清藥理學研究取得了可喜的成績，隨著中藥血清藥理學所存在的問題的逐步解決、方法更進一步的成熟和完善，它將更廣泛地應用于：（1）復方藥物的評價，具有直接的、快速的、敏感的、準確的作用等特點；（2）復方藥物的機制研究，血清藥理學是復方藥物的機制研究主要研究方法之一，隨著化學分析手段的的完善，復方藥物中有效成分的逐步確認，其藥理學機制也終將被揭開；（3）老年癡呆等慢性病及微生物學、分子生物學、藥理學和生理學、免疫學等學科的研究。關鍵詞：血清藥理學；研究方法；綜述中藥血清藥理學是近年來逐漸發(fā)展起來的研究中藥藥效較為科學的一種方法。它是由日本學者田代真

2、一于1988年首次提出的，該方法就是將動物灌服給予中藥或復方制劑后，在一定時間采集血液、分離血清進行體外藥效實驗。 1990年，姜廷良教授1將它引入我國，之后國內(nèi)許多學者和專家進行了大量的研究工作，取得了可喜的成績，積累了一定的經(jīng)驗，為中藥作用機制和物質(zhì)基礎的深入研究奠定了基礎。我國已將它列入國家自然科學基金資助范圍2，現(xiàn)就其研究應用現(xiàn)狀作一綜述。1 中藥血清藥理學方法在我國的應用現(xiàn)狀1.1 對中藥解熱作用的研究 楊奎等34研究含黃芩、藿香、羌活勝濕湯和九味羌活湯的血清對單核細胞內(nèi)DNA合成、Ca2+內(nèi)流的影響，發(fā)現(xiàn)：含黃芩血清能明顯抑制單核細胞內(nèi)DNA合成，抑制Ca2+內(nèi)流，因而能阻止內(nèi)生致

3、熱原的合成；而含藿香、羌活勝濕湯和九味羌活湯的血清對單核細胞的合成的抑制作用依次增強，含香薷血清呈明顯量效遞增性抑制作用，含羌活勝濕湯和九味羌活湯的血清兩者在大劑量時卻呈促進作用；對單核細胞內(nèi)流的影響，香薷的作用較九味羌活湯弱，但均呈量效遞增性抑制作用，而羌活勝濕湯則與此相反，在較大劑量時翻轉(zhuǎn)為促進Ca2+內(nèi)流作用；時效關系表明，九味羌活丸對內(nèi)流的抑制作用在給藥后90min達高峰，對DNA合成的抑制作用在給藥后30min和90min間較明顯，對蛋白質(zhì)合成的影響在給藥后120min內(nèi)呈輕微促進作用。該實驗表明采用中藥血清藥理學方法進行中藥時效關系研究，有較大的優(yōu)勢。1.2 對中藥抗腫瘤作用的研究

4、 楊振江5等研究表明：含髓清丸中劑量組和高劑量組血清活細胞百分率均較對照組低，OD值明顯低于對照組，中劑量組和高劑量組細胞毒活性均大于20%，高劑量含藥血清組G1期DNA含量明顯低于對照組，中劑量組凋亡細胞百分率較高。髓清丸能抑制HEL細胞的增殖，并有一定的誘導HEL細胞分化、凋亡的作用。張建軍等6研究發(fā)現(xiàn)：富硒綠茶藥物血清對人肝癌細胞株能抑制生長，抑制克隆，減少AFP和GT的合成和分泌，促進ALB的合成，且呈現(xiàn)一定的濃度、時間依賴關系，對人肝癌細胞株惡性表型有逆轉(zhuǎn)作用，可誘導癌細胞向正常方向分化。王力倩7等應用中藥血清藥理學方法觀察了含苦參、仙鶴草的血清及其煎劑對腫瘤細胞體外生長的影響，結(jié)果

5、發(fā)現(xiàn)，除含仙鶴草血清外，其余都可明顯抑制S180細胞的生長。初步證明苦參對腫瘤細胞體外生長確有細胞毒作用，而含仙鶴草血清與其煎劑出現(xiàn)了不同的實驗結(jié)果，可能與中藥粗顆粒制劑干擾因素或與動物體內(nèi)代謝過程及血清影響有關。1.3 對呼吸系統(tǒng)的作用的研究 小柴胡湯：研究發(fā)現(xiàn)，小柴胡湯濃縮液直接加入到細胞培養(yǎng)基中有致有絲分裂作用，而用小柴胡湯的血清則無此作用。小柴胡湯的致有絲分裂作用，可能是由一些不能從胃腸道吸收的大分子物質(zhì)產(chǎn)生，或因有效成分經(jīng)消化道或肝臟代謝失效所致。小青龍湯：黃堅8等法研究發(fā)現(xiàn)，服用小青龍湯煎劑的豚鼠血清，具有顯著抗組織胺引起的離體豚鼠氣管平滑肌收縮作用，且呈良好的量效關系，與用煎劑直

6、接進行的離體藥理實驗的藥理效應相似。1.4 對心血管系統(tǒng)的作用研究 邱幸生等9通過實驗表明：益氣通絡方低、中、高劑量含藥血清處理組心肌細胞bcl2陽性表達比例均較單純?nèi)毖踉俳o氧組（HR組）有顯著增高，提示 bcl2具有保護心肌細胞的作用。隋因10等觀察灌胃給予紅花提取物的家兔的含藥血清對豚鼠離體的心臟的作用，發(fā)現(xiàn)灌胃給予紅花提取物5、10、 20g-1后，含藥血清均能顯著增加豚鼠離體心臟冠脈流量，增強心搏幅度及減慢心率。并在灌胃給予紅花提取物后60min所采血清的指紋譜中出現(xiàn)一些新的峰。陳長勛11等采用中藥血清藥理學方法觀察了附子對離體豚鼠左心房收縮力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，口服附子粗顆粒制劑后的動

7、物血清與未服藥的動物血清比較，具有明顯增強心肌收縮力和加快心肌收縮速度的作用，且于給藥后2h血清作用達到高峰，從而證明附子強心有效成分能經(jīng)胃腸道吸收入血，且不會一經(jīng)吸收而失活，說明附子口服有效。張群豪12等研究表明：血府逐瘀煎劑濃縮液和含藥血清對實驗性動脈粥樣硬化家兔主動脈平滑肌細胞（SMC）增殖有抑制作用，并呈劑量依賴性，且煎劑濃縮液作用強于含藥血清，而空白血清則無此作用，該實驗為血府逐瘀的臨床應用提供了科學依據(jù)。1.5 對免疫功能的影響作用的研究 梁春敏13等研究發(fā)現(xiàn)：玉屏風散試驗血清在灌胃后30min2h時對小鼠脾淋巴細胞增殖、小鼠IL2產(chǎn)生均有明顯促進作用，其中以1h時作用最強，1h時

8、對小鼠免疫功能有顯著增強作用。曾南14等觀察了灌服雪蓮蟲草精大鼠的抗凝血對NK細胞活性的影響。結(jié)果表明給藥物抗凝血可明顯增強NK細胞活性，給藥動物血清1.25g/kg劑量組能增強IL-2活性，但7.5g/kg劑量組作用不明顯，而3.75g/kg劑量組則出現(xiàn)抑制作用，這可能與血清的稀釋度與內(nèi)容物有關。1.6 對中藥抗菌作用的研究 楊奎15等應用中藥血清藥理學方法進行了中藥體外抗菌實驗，發(fā)現(xiàn)含藿香正氣水、藿香正氣液及黃芩的血清分別具有明顯的抑菌作用，抑菌率在70%以上。該研究發(fā)現(xiàn)：一些含中藥血清卻表現(xiàn)為促進細菌繁殖作用；同時中藥復方、單味中藥均可出現(xiàn)多個抑菌高峰，提示中藥抗菌成分復雜，其吸收高峰時

9、間不一致，有利于抑制細菌繁殖。這說明中藥血清藥理學可用于檢測或反映中藥不良反應。1.7 對中藥抗炎的作用的研究 研究中藥赤芍、黃連、牡丹皮、生姜、黃精、黃芩對花生四烯酸生物轉(zhuǎn)化的影響時發(fā)現(xiàn)，含黃連、赤芍的血清可抑制花生四烯酸的生物轉(zhuǎn)化，而其煎劑則無此作用。與此相反，生姜、牡丹皮、黃芩、黃精煎劑有抑制作用，而其含藥血清則無效。1.8 對骨骼系統(tǒng)的作用的研究 韓立民16等以淫羊藿給大鼠灌胃和肌注連續(xù)7天，末次給藥90min后股動脈無菌取血滅活、進行成骨細胞（OB）培養(yǎng)。研究表明：服淫羊藿后的大鼠血清堿性磷酸酶活性顯著增高，細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量增高，成骨細胞的數(shù)量增多，培養(yǎng)基中鈣含量明顯降低，劑量與作用

10、呈正相關性，表明該藥是抗骨疏松癥的理想藥物之一。任光友17等用血清藥理學方法，在新生大鼠頭骨成骨細胞培養(yǎng)液中，分別加入不同濃度的老年大鼠含羊藍合劑（YLM）血清，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中、高劑量組含羊藍合劑（YLM）血清對成骨細胞增殖率、成骨細胞ALP活性、成骨細胞BGP分泌，均有明顯增長作用，說明老年大鼠含YLM血清對成骨細胞的增殖和分化功能具有增強作用。1.9 對中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用的研究 李翠屏等18用Daniel方法建立神經(jīng)元缺氧凋亡模型，加入益氣通絡方藥物血清，應用碘化丙啶采染色法經(jīng)流式細胞儀檢測神經(jīng)元凋亡率，分光光度法檢測MDA、NO濃度，免疫組化法檢測bcl2表達，研究表明：益氣通絡方能顯著抑制缺

11、氧導致的神經(jīng)元凋亡，并減少神經(jīng)元缺氧過程NO、OFR的生成，上調(diào) bcl-2基因的表達。聶偉19等運用血清藥理學方法觀察六味地黃湯（LW）及其活性組分（CA4、CA4-3）含藥血清對原代培養(yǎng)胚胎大鼠海馬神經(jīng)元的保護作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：LW及CA4、CA4-3含藥血清均可不同程度地提高海馬神經(jīng)元的存活率，并且與穩(wěn)定線粒體膜電位與其神經(jīng)保護作用具有密切關系。其作用機制有待進一步深入研究。而老年癡呆患者與中樞能量缺乏、神經(jīng)元數(shù)目減少與其線粒體功能障礙密切相關，提示該方法可用于老年癡呆的研究。1.10 對消化系統(tǒng)的作用的研究 劉成海20等研究表明，含扶正化瘀方的血清能明顯抑制肝貯脂細胞增殖，與藥物劑量及血

12、清濃度呈正相關性，而且對貯脂細胞內(nèi)外膠原也有一定的抑制作用。曹宜21等通過觀察CC14、DGaIN+LPS和BCG+LPS誘導小鼠肝損傷茵陳蒿湯醇提物的氯仿、乙酸乙酯萃取部位及剩余乙醇提取物降低 ALT活性的作用，發(fā)現(xiàn)茵陳蒿湯醇提物的氯仿再提取部位的小鼠血清對DGaIN誘導大鼠的原代肝細胞ALT活性水平表現(xiàn)出穩(wěn)定的降低作用。李平22等研究發(fā)現(xiàn)：軟肝沖劑藥物血清對傳代的HSC增殖有明顯抑制作用，能顯著抑制HSC分泌TGF1，其作用與秋水仙堿相仿，可能是通過抑制細胞DNA合成及其有絲分裂，或抑制PDF1的產(chǎn)生及其受體表達，阻斷其信號傳導，減少TGF1的分泌，下調(diào)I型膠原的基因登錄來實現(xiàn)抗肝纖維化的

13、機制的。1.11 對生殖系統(tǒng)的作用的研究 夏譽薇23等以50例不孕患者作受試對象（中藥組40例和西藥組10例），利用雞胚絨毛尿囊膜（CAM）模型評價女貞孕育湯的血管生成活性和促進血管生成的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在中藥組和西藥組治療前后卵泡期、排卵前、經(jīng)前期血清的比較，均有顯著性差異。王明軍24研究發(fā)現(xiàn)：用傅氏生化湯的水提濃縮液、水提醇沉物、揮發(fā)油、醇提濃縮液分別給小鼠灌胃，在一定時間內(nèi)取其血清經(jīng)過滅活后，以各給藥組滅活后的灌胃給藥血清供試液代替藥物供試液，結(jié)果表明，水提醇沉物具有促子宮收縮的作用，而且強于離體實驗的結(jié)果。2 中藥血清藥理學研究方法的優(yōu)勢和存在的問題2.1 中藥血清藥理學研究方法的優(yōu)勢

14、 中藥血清藥理學是在以往體外實驗的基礎上加以改進而形成的，即以含藥血清代替中藥粗提物進行實驗，因而它最大的優(yōu)點是：條件可控性強、揭示藥物作用機制較為深入、重復性好、使用材料少、更接近藥物在體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥效的真實過程等。其主要優(yōu)勢具體如下：（1）采用含藥血清培養(yǎng)細胞可直接觀察中藥的藥物學效應，便于應用細胞學和分子生物學手段，從基因、基因產(chǎn)物、藥物受體和酶活性等諸方面闡述藥理機制。（2）使現(xiàn)代科學技術與傳統(tǒng)醫(yī)學有了一個可行的切合點，有利于應用現(xiàn)代生命科學的技術手段和理論揭示中藥復方配伍的實質(zhì)，從而推動中醫(yī)藥的科技進步。（3）便于觀察和追蹤藥物吸收和代謝的過程，消除體外實驗各種干擾因素的影響，以便

15、于較為清楚地認識復方藥物中主要藥物的有效成分及活性部位，為進一步開發(fā)藥物提供依據(jù)。2.2 血清藥理學研究方法存在的問題 中藥血清藥理學本身是一門方法學，從它引進到我國到現(xiàn)在只有短短的十多年的時間，因而存在不少有待進一步改進之處：（1）血清學本身是一門方法學，其自身組分的復雜性至今尚未完全清楚，血清本身復雜的成分會影響體外實驗的結(jié)果，而中藥復方組分也是一個未知體系，兩個未知體系的疊加使原本復雜的體系更加復雜；而就目前的技術手段，尚不能分析復方血清中所有的單一成分，即無法詳盡地比較分析每一單一元素在復方中所起的作用，這無形中限制了中藥血清藥理學在中藥復方中的應用范圍。（2）藥物血清的制備中，規(guī)范動

16、物給藥方案和采血時間，確立藥物的時效關系和量效關系一直是中藥藥理研究的焦點。而且由于實驗動物種屬的不同或種屬相同年齡性別的不同，都能引起實驗動物對藥物敏感程度的差異以及對復方藥物中不同組分的吸收、轉(zhuǎn)化、作用靶點的相異，因此實驗動物的種屬和年齡性別的選擇有待規(guī)范。（3）在體外培養(yǎng)體系中，不可能添加100%濃度的血清，而且不是所有的中藥都通過血液起作用，有的是對消化道直接作用，有的是通過局部起作用，這是血清藥理學難以解決的。（4）辨證論治是中醫(yī)診斷疾病的方法和特點，盡管實驗醫(yī)學已經(jīng)有人將實驗與證型相結(jié)合，但在實驗學中卻往往忽視中醫(yī)內(nèi)涵，如何將辨病論治與辨證論治結(jié)合是血清藥理學需要解決的問題。3 對

17、中藥血清藥理學的展望 盡管中藥血清藥理學的應用、方法存在不少問題，但作為一門新興方法學，它在復方藥理學研究中具有不可代替的作用。隨著中藥血清藥理學所存在的問題的逐步解決、方法更進一步的成熟和完善，它將更廣泛地應用于：（1）復方藥物的評價，具有直接的、快速的、敏感的、準確的作用等特點；（2）復方藥物的機制研究，血清藥理學是復方藥物的機制研究主要研究方法之一，隨著化學分析手段的的完善，復方藥物中有效成分的逐步確認，其藥理學機制也終將被揭開；（3）老年癡呆等慢性病及微生物學、分子生物學、藥理學和生理學、免疫學等學科的研究?！緟⒖嘉墨I】 1 陰赪宏.中藥血清藥理學研究方法及其應用.中國實驗學方劑雜志J

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19、參、仙鶴草的抗腫瘤作用J.中國中醫(yī)藥科技，1995，2（5）：199.8 黃堅.用血清實驗法觀察小青龍湯對離體豚鼠氣管平滑肌的作用J.中藥藥理與臨床，1995，11（6）：12.9 邱幸生.益氣通絡方對缺氧再給氧心肌細胞bcl-2基因表達影響的血清藥理學研究J.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，2001，7（3）：3840.10隋因.運用血清藥理學方法研究紅花對豚鼠離體心臟的作用J.沈陽藥科大學學報，2003，20（5）：373376.11陳長勛.用血清藥理學實驗方法觀察附子的強心作用J.中國中醫(yī)藥科技，1996，3（3）：12.12張群豪.用藥物血清學方法觀察血俯逐瘀濃縮丸對實驗性動脈粥樣硬化家兔主動脈平滑肌細胞增殖的影響J.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，16（3）：156.13梁春敏.玉屏風散對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的血清藥理學研究J.上海免疫學雜志