核黃素測定實驗報告

1、竭誠為您提供優(yōu)質(zhì)文檔 /雙擊可除第 1 頁共 14 頁核黃素測定實驗報告篇一：實驗報告 2 熒光分光光度法測定維生素b2 的含量實驗項目：熒光分光光度法測定維生素b2 的含量【實驗題目】熒光分光光度法測定維生素 b2 的含量【實驗?zāi)康摹?、 掌握標準曲線法定量分析維生素b2 的基本原理。2、了解熒光分光光度計的基本原理、結(jié)構(gòu)及性能，掌握其基本操作?！緦嶒炘怼烤S生素 b2（又叫核黃素，Vb2）是橘黃色無臭的針狀結(jié)晶。其結(jié)構(gòu)式為：由于分子中有三個芳香環(huán)，具有平面剛性結(jié)構(gòu)，因此它能夠發(fā)射熒光。維生素 b2 易溶于水而不溶于乙醚等 有機溶劑，在中性或酸性溶液中穩(wěn)定，光照易分解，對熱第2頁共 14 頁

2、維生素 b2 溶液在 430440nm 藍光的照射下，發(fā)出綠 色熒光，熒光峰在 535nm 附近。維生素 b2 在 ph = 67 的溶液中熒光強度最大，而且其熒光強度與維生素b2 溶液濃度呈線性關(guān)系，因此可以用熒光光譜法測維生素 b2 的含量。維生素 b2 在堿性溶液中經(jīng)光線照射會發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為另一物質(zhì)-光黃素，光黃素也是一個能發(fā)熒光的物質(zhì)，其熒光比維生素 b2 的熒光強得多，故測維生素b2 的熒光時溶液要控制在酸性范圍內(nèi)，且在避光條件下進行。在稀溶液中，熒光強度F 與物質(zhì)的濃度 c 有以下關(guān)系：F= 2.303 I0 & be當(dāng)實驗條件一定時，熒光強度與熒光物質(zhì)的濃度呈線性 關(guān)系

3、：F=Ke這是熒光光語法定量分析的依據(jù)。【主要儀器與試劑】主要儀器：F-2500hiTachi 熒光分光光度計；1em 石英 皿；50mL 容量瓶；5mL 移液管；燒杯；膠頭滴管試劑：維生素 b2 標準溶液：未知液 4 【實驗內(nèi)容及步驟】1、系列標準溶液的制備第3頁共 14 頁取維生素 b2 標準溶液（10.0 卩 g/mL）1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL 分別置于 50mL 的容量瓶中，各加入去離子水稀釋至刻度， 搖勻。 標記為的一系列 維生素 b2 標準溶液。待測。2、待測液制備取 5.00mL 未知液 4 置于 50mL 容量瓶中，加入去離子水 稀釋

4、至刻度，搖勻。待測。3、激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜的繪制設(shè)置入 em= 540nm 為發(fā)射波長，在 250500nm 范圍內(nèi)掃描標準溶液，記錄熒光發(fā)射強度和激發(fā)波長的關(guān)系曲線，便得到激發(fā)光譜。從激發(fā)光譜圖上找出其最大激發(fā)波長入 ex。在此激發(fā)波長下，在 400600nm 范圍內(nèi)掃描，記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。從熒光發(fā)射光譜上找出其最大熒光發(fā)射波長入 em。4、標準溶液及樣品的熒光測定將激發(fā)波長固定在最大激發(fā)波長入 ex，熒光發(fā)射波長固定在最大熒光發(fā)射波長處入 em。掃描蒸餾水和上述 5 個標準液的熒光發(fā)射強度。數(shù)據(jù)記錄于表1 中。以溶液的熒光發(fā)射第 4 頁共 14 頁

5、強度為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，制作標準曲線。在同樣條件下測定未知溶液的熒光強度，并由標準曲線 確定未知試樣中維生素 b2 的濃度，計算待測樣品溶液中的 維生素 b2 的含量?！緮?shù)據(jù)記錄與結(jié)果分析】1、維生素 b2 激發(fā)光譜圖：最大激發(fā)波長 入 ex=373nm2、維生素 b2 熒光發(fā)射光譜圖：最大熒光發(fā)射波長處入 em=524nm3表 1:標準溶液及待測溶液的濃度和熒光強度數(shù)據(jù)記 錄：4、系列標準溶液濃度與熒光發(fā)射強度的標準曲線圖：由計算機處理得標準曲線方程為y=112.49x-1.7769相關(guān)系數(shù) r=則待測溶液的濃度 c=0.907 卩 g/mL【問題討論】1、試解釋熒光光度法較吸收

6、光度法靈敏度高的原因？答：原因是由于現(xiàn)代電子技術(shù)具有檢測十分微弱光信號 的能力，并且熒光強度與激發(fā)光強度成正比，提高激發(fā)光強 度也可以增大熒光強度，使測定的靈敏度提高；而吸收光度 法測定的是吸光度，不管是增大入射光強度，還是提高檢測 器的靈敏度，都會使透射光信號與入射光信號以同樣的比例 增大，吸光度值不會改變，因此靈敏度不能提高。2、維生素 b2 在 ph=67 時熒光最強，本實驗為何在酸 性溶液中測定？第5頁共 14 頁答：因為維生素 b2 在堿性溶液中經(jīng)光線照射，會發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，后者的熒光比維生素b2 的熒光強的多。因此，測量時溶液要控制在酸性范圍內(nèi)進行。篇二：實驗五食物中核黃素

7、含量測定實驗五食物中核黃素含量測定(熒光法)()目的意義核黃素是機體的物質(zhì)代謝和能量代謝中不可缺少的物 質(zhì)。通過測定食物中核黃素含量，可了解人體核黃素攝入情 況。(二) 原理核黃素受到波長為 440500nm 的光照射后能產(chǎn)生光黃 素(luniflavin ),此物質(zhì)能產(chǎn)生較強的熒光。在稀溶液中 其熒光強度與核黃素濃度成正比。試液中再加人低亞硫酸鈉(na2s2o4),將熒光素還原為無熒光物質(zhì)。然后再測定試液 中殘余熒光物質(zhì)的熒光強度，兩者之差即為食品中核黃素所 產(chǎn)生的熒光強度。(三) 儀器與試劑1.熒光光度計2. 高壓消毒鍋3. 錐形燒瓶，核黃素吸附柱（如圖 6- 1）4.1.0mol / L

8、 鹽酸溶液吸取分析純濃鹽酸83.3ml 于 1L容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度。第6頁共 14 頁5.0.lmol / L 鹽酸溶液將上液按 1: 10 稀釋。6. 4%氫氧化鈉溶液，0.4 %氫氧化鈉溶液。7. 3 %高錳酸鉀溶液。& 3 %過氧化氫溶液。9. 核黃素儲備液（23ug/ ml）精確稱取已干燥過的核 黃素（在干燥器中放置 24h） 25mg,加少量蒸餾水溶解后倒 入 1L 容量瓶，加蒸餾水 500ml，加入 2.4ml 冰醋酸，將其放 在溫水中搖動使顆粒完全溶解，冷卻后稀釋至刻度，加入少 量甲苯，避光冷藏備用。10. 核黃素工作液（0ug / ml）吸取上液 1.0ml，

9、加水 稀釋至 250ml。避光，貯于 4C冰箱中可保存 1 周。11.20 %低亞硫酸鈉溶液用時現(xiàn)配，保存在冰水浴中， 4h 內(nèi)有效。12.0.04 %溴甲酚綠指示劑稱取 0.1g 溴甲酚綠于小研缽中，力口 1.4m10.4 %氫氧化鈉溶液研磨，加少許水繼續(xù)研磨直至完全溶解，加水稀釋至 250ml。13.2.5mol / L 無水乙酸鈉溶液使用時現(xiàn)配制。14.10%木瓜蛋白酶溶液使用前用 2.5mol /L 無水乙酸鈉溶液配制。15. 10%淀粉酶溶液使用前用 2.5mol /L 無水 乙酸鈉溶液配制。16.洗脫液丙酮：冰酷酸：水（5: 2: 9）。（四）操作步驟整個操作過程需避光進行。1. 樣品前處理稱取 210g 樣品（約含 10200ug 核黃素）于 100ml 錐形瓶中，加人 50m10.1mol/L 鹽酸，攪拌使第7頁共 14 頁樣品顆粒分散均勻后，置于高壓鍋內(nèi)，在10.3x104pa 高壓下水解樣品 30min。水解液冷卻后，加人 4%氫氧化鈉調(diào) ph至 4.5（取少許水解液用溴甲酚綠檢驗呈草綠色，ph 即為 4.5 ）。2. 酶解（1） 含有淀粉樣品的水解液加入 3ml10 %淀粉酶溶液，于 3740C保溫約 16h。（2） 含有高蛋白樣品的水解液加人 3ml10