項(xiàng)目三-第五組

1、氨基酸注射液的分析檢測組別：第五組組員：吳彩霞、楊青、楊雪、 王思雅、吳曉玲、曹宇氨基酸氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一類有機(jī)化合物的通稱。生物功能大分子蛋白質(zhì)的基本組成單位，是構(gòu)成動物營養(yǎng)所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)。是含有一個堿性氨基和一個酸性羧基的有機(jī)化合物。氨基連在-碳上的為-氨基酸。組成蛋白質(zhì)的氨基酸均為-氨基酸。氨基酸的性質(zhì)（一)1、無色晶體，熔點(diǎn)極高，一般在200以上。不同的氨基酸其味不同，有的無味，有的味甜，有的味苦，谷氨酸的單鈉鹽有鮮味，是味精的主要成分。各種氨基酸在水中的溶解度差別很大，并能溶解于稀酸或稀堿中，但不能溶于有機(jī)溶劑。通常酒精能把氨基酸從其溶液中沉淀析

2、出。氨基酸注射液的性質(zhì)（二）2 2、紫外吸收性質(zhì)、紫外吸收性質(zhì) 氨基酸的一個重要光學(xué)性質(zhì)是對光有吸收作用。氨基酸20種PrAA在可見光區(qū)域均無光吸收，在遠(yuǎn)紫外區(qū)（220nm）均有光吸收，在紫外區(qū)（近紫外區(qū)）（220nm300nm）只有三種AA有光吸收能力，這三種氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸，因?yàn)樗鼈兊腞基含有苯環(huán)共軛雙鍵系統(tǒng)。苯丙AA最大光吸收在259nm、酪AA在278nm、色AA在279nm，蛋白質(zhì)一般都含有這三種AA殘基，所以其最大光吸收在大約280nm波長處，因此能利用分光光度法很方便的測定蛋白質(zhì)的含量。分光光度法測定蛋白質(zhì)含量的依據(jù)是朗伯比爾定律。在280nm處蛋白質(zhì)溶液吸光值與

3、其濃度成正比?；痉磻?yīng)檢測1 1、茚三酮反應(yīng)（、茚三酮反應(yīng)（ninhydrinninhydrin reaction reaction） 試劑顏色及備注： 茚三酮（弱酸環(huán)境加熱） 紫色（脯氨酸、羥脯氨酸為黃色） （檢驗(yàn)氨基）2 2、坂口反應(yīng)、坂口反應(yīng) （SakaguchiSakaguchi reaction reaction）丙氨酸）丙氨酸 -萘酚+堿性次溴酸鈉紅色（檢驗(yàn)胍基 精氨酸有此反應(yīng)）3 3、米隆反應(yīng)（又稱米倫氏反應(yīng)）、米隆反應(yīng)（又稱米倫氏反應(yīng)） HgNO3+HNO3+熱 紅色 （檢驗(yàn)酚基 酪氨酸有此反應(yīng)，未加熱則為白色）4 4、Folin-CiocalteauFolin-Ciocalt

4、eau反應(yīng)（酚試劑反應(yīng)）反應(yīng)（酚試劑反應(yīng)）磷鎢酸-磷鉗酸 藍(lán)色 （檢驗(yàn)酚基 酪氨酸有此反應(yīng)）5 5、黃蛋白反應(yīng)、黃蛋白反應(yīng)濃硝酸煮沸 黃色 （檢驗(yàn)苯環(huán) 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應(yīng)）6 6、Hopkin-ColeHopkin-Cole反應(yīng)（乙醛酸反應(yīng)）反應(yīng)（乙醛酸反應(yīng)）加入乙醛酸混合后徐徐加入濃硫酸乙醛與濃硫酸接觸面處產(chǎn)生紫紅色環(huán) （檢驗(yàn)吲哚基 色氨酸有此反應(yīng)）7 7、EhrlichEhrlich反應(yīng)反應(yīng)P-二甲氨基苯甲醛+濃鹽酸 藍(lán)色 （檢驗(yàn)吲哚基 色氨酸有此反應(yīng)）8 8、硝普鹽試驗(yàn)、硝普鹽試驗(yàn) Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 紅色 （檢驗(yàn)巰基半胱氨酸有此反應(yīng)）9 9、S

5、ulliwanSulliwan反應(yīng)反應(yīng) 1，2萘醌、4磺酸鈉+Na2SO3 紅色 （檢驗(yàn)巰基半胱氨酸有此反應(yīng)） 10、Folin反應(yīng)1，2萘醌、4磺酸鈉在堿性溶液 深紅色 （檢驗(yàn)氨基酸） 肽鍵（peptide bond）:一個氨基酸的羧基與另一個氨基酸的氨基縮合，除去一分子水形成的酰胺鍵。氨基酸的鑒別復(fù)方氨基酸注射液定義：氨基酸類藥。用于蛋白質(zhì)攝入不足、吸收障礙等氨基酸不能滿足機(jī)體代謝需要的患者。亦用于改善手術(shù)后病人的營養(yǎng)狀況。成分：人體所須的全部氨基酸。藥理作用 氨基酸輸液在能量供給充足的情況下，可進(jìn)入組織細(xì)胞，參與蛋白質(zhì)的合成代謝，獲得正氮平衡，并生成酶類、激素、抗體、結(jié)構(gòu)蛋白等生理活性物

6、質(zhì)，促進(jìn)組織愈合，恢復(fù)正常生理功能。復(fù)方氨基酸注射液（復(fù)方氨基酸注射液（3-AA） 標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)拼音名：Fufang Anjisuan Zhusheye(3AA)英文名：Compound Amino Acid Injection(3AA)書頁號：E6-78本品為3種氨基酸配制而成的滅菌水溶液。含各種氨基酸均應(yīng)為標(biāo)示量的90.0110.0。【處方】L-纈氨酸(C5H11NO2) 12.6gL-亮氨酸(C6H13NO2) 16.5gL-異亮氨酸(C6H13NO2) 13.5g注射用水 適量全量 1000 ml【性狀】本品為無色或幾乎無色的澄明液體。【鑒別】(1)取本品1ml，加水10ml，搖勻,加茚三

7、酮約3mg,加熱,溶液顯藍(lán)紫色。 (2)在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中,各種氨基酸峰的保留時(shí)間應(yīng)與各相應(yīng)的對照品峰的保留時(shí)間一致。【檢查】pH值 應(yīng)為6.08.0(中國藥典1995年版二部附錄 )。 透光度取本品，照分光光度法（中國藥典1995年版二部附錄 ）,在430nm的波長處測定透光率，不得低于97.0。 不溶性微粒取本品1瓶，依法檢查(中國藥典1995年版二部附錄),應(yīng)符合規(guī)定。 異常毒性取本品，依法檢查（中國藥典1995年版二部附錄），按靜脈注射法給藥，應(yīng)符合規(guī)定。 熱原取本品，依法檢查（中國藥典1995年版二部附錄），劑量按家兔體重每1kg緩緩注射10ml，應(yīng)符合規(guī)定。 其他應(yīng)符合注

8、射劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（中國藥典1995年版二部附錄）?！竞繙y定】氨基酸取本品，用適宜的氨基酸分析儀或高效液相色譜儀進(jìn)行分離測定；另取相應(yīng)的氨基酸對照品，制成相應(yīng)濃度的對照品溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算各種氨基酸的含量?！咀饔门c用途】氨基酸類藥?？筛纳瓢被崾Ш猓龠M(jìn)蛋白質(zhì)合成和減少蛋白質(zhì)分解。用于肝性腦病的防治?！居梅ㄅc用量】靜脈滴注 一日250500ml或用適量510葡萄糖注射液混合后緩慢滴注【注意】滴注速度控制每分鐘不超過40滴，使用時(shí)應(yīng)注意水和電解質(zhì)平衡，本品遇冷有結(jié)晶析出，宜微溫?zé)崛芙夂笤儆?。【?guī)格】250ml:10.65g(總氨基酸)【貯藏】密閉，置涼暗處保存。有效期2年

9、。茚三酮顯色法測定氨基酸含量一、實(shí)訓(xùn)目的 學(xué)習(xí)茚三酮顯色法測定氨基酸含量的方法。二、實(shí)訓(xùn)原理 茚三酮溶液與氨基酸共熱，生成氨。氨與茚三酮和還原性茚三酮反應(yīng)，生成紫色化合物。化合物顏色的深淺與氨基酸的含量成正比，可通過測定570nm 處的光密度，測定氨基酸的含量。三、試劑與材料（1）標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液：配制成0.3mmol/L 溶液。（2）pH5.4，2mol/L 醋酸緩沖液：量取86mL 2mol/L 醋酸鈉溶液，加入14mL 2mol/L乙酸混合而成。用pH 檢查校正。（3）茚三酮顯色液：稱取85mg 茚三酮和15mg 還原茚三酮，用10mL 乙二醇甲醚溶解。 茚三酮若變?yōu)槲⒓t色，則需按下法重結(jié)

10、晶：稱取5g 茚三酮溶于1525mL 熱蒸餾水中，加入0.25g 活性炭，輕輕攪拌。加熱30min 后趁熱過濾，濾液放入冰箱過夜。次日析出黃白色結(jié)晶，抽濾，用1mL 冷水洗滌結(jié)晶，置干燥器干燥后，裝入棕色玻璃瓶保存。還原型茚三酮按下法制備：稱取5g 茚三酮，用125mL 沸蒸餾水溶解，得黃色溶液。 將5g 維生素C 用250mL 溫蒸餾水溶解，一邊攪拌一邊將維生素C 溶液滴加到茚三酮溶液中，不斷出現(xiàn)沉淀。滴定后繼續(xù)攪拌15min，然后在冰箱內(nèi)冷卻到4，過濾、沉淀用冷水洗滌3 次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，備用。乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去過氧化物：在500mL 乙二醇甲醚中加入5

11、g 硫酸亞鐵，振蕩12h，過濾除去硫酸亞鐵，再經(jīng)蒸餾，收集沸點(diǎn)為121125的餾分，為無色透明的乙二醇甲醚。（4）60乙醇。（5）樣品液：每毫升含0.550g 氨基酸。（6）分光光度計(jì)。（7）水浴鍋。四、操作步驟1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作分別取0.3mmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL 于試管中，用水補(bǔ)足至1mL。各加入1mL pH5.4、2mol/L 醋酸緩沖液；再加入1mL 茚三酮顯色液，充分混勻后，蓋住試管口，在100水浴中加熱15min，用自來水冷卻。放置5min 后，加入3mL60乙醇稀釋，充分搖勻，用分光光度計(jì)測定OD570nm。（脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)呈黃色，應(yīng)測定OD440nm）。以O(shè)D570nm 為縱坐標(biāo)，氨基酸含