乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義ppt課件

1、Partially double-stranded DNAA(n)附著和侵入？附著和侵入？(-)-DNA分泌？分泌？mRNAcccDNA的形成？的形成？DNA polRT核心包裝？核心包裝？HBV移行？移行？外外膜膜裝裝配配？ HBV的感染過程的感染過程Gene Therapy Research Center, BeijingGene Therapy Research Center, BeijingHBV的基因組結(jié)構(gòu) HBV基因組為部分雙鏈環(huán)狀基因組為部分雙鏈環(huán)狀DNA，長度長度3.2kbDR2DR1Gene CPreCPreS1PreS2Gene SRegion PRegion X+stra

2、nd-strandHBV基因型的定義 分型方法是根據(jù)HBsAg主蛋白基因或全基因組核苷酸序列差別性進(jìn)展的基因型分型，差別大于8%即被確定為另一基因型，按照這種分型方法，將HBV分為6種基因型，分別命名為A-F型，另有學(xué)者新定義了G、H型，尚待確定。 國內(nèi)流行病學(xué)資料 國內(nèi)主要的基因型為B、C兩型，臺灣省的研討資料提示除E型外，其他基因型均可在華人HBV感染者中檢出，B和C型占患者人群的85%。HBV HBV 的異質(zhì)性的異質(zhì)性 基因型基因型Chu CJ et al. Hepatology 2019; 35(5):1274問問題題型與準(zhǔn)種型與準(zhǔn)種 基因型基因型 不同個體之間不同個體之間 血清型血清

3、型 不同個體之間不同個體之間 準(zhǔn)準(zhǔn) 種種 單一個體單一個體 乙型肝炎病毒準(zhǔn)種的定義乙型肝炎病毒準(zhǔn)種的定義乙型肝炎病毒在長期復(fù)制過程乙型肝炎病毒在長期復(fù)制過程形狀稱為形狀稱為英文：英文：quasispeciesquasispecies為什么以前沒有留意？為什么以前沒有留意？方法比較方法比較既往方案：既往方案：搜集血清搜集血清提取血清中提取血清中HBV DNA設(shè)計(jì)重疊設(shè)計(jì)重疊PCR引物引物PCR擴(kuò)增擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序產(chǎn)物直接測序單一克隆序列單一克隆序列本研討方案本研討方案搜集血清搜集血清提取血清中提取血清中HBV DNA設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)PCR引物引物PCR擴(kuò)增擴(kuò)增 TA克隆入質(zhì)粒載體中克隆入質(zhì)粒載體中隨機(jī)選

4、擇單克隆測序隨機(jī)選擇單克隆測序多個克隆序列多個克隆序列Protocol of Human Somatic Gene Therapy S 基因全長基因全長 PCR, 1400 bp 1 2 3 4 M 5 6 71 400 bpHBVHBV全全S S基因基因RFLPRFLP結(jié)果結(jié)果遺傳樹分析E853-A3E845-A12E845-B4E845-A16E845-A8Renbao GanN19 E5N19 A3N19 A8N19 E19EJ1 B13 EJ1 A4E67 B5E67 A1E67 A8E67 B1E67 B8N19 E5EJ1 B6EJ1 A12EJ1 B16HBVHBV準(zhǔn)種特點(diǎn)分析準(zhǔn)

5、種特點(diǎn)分析 HBV DNA S Region HBV DNA S Region HBV DNA X Region HBV DNA X Region HBV DNA P Region HBV DNA P Region HBV DNA C Region HBV DNA C Region HBV DNA Pre-C HBV DNA Pre-C 區(qū)區(qū) HBV DNA HBV DNA 全長全長 HBV HBV DNADNAHBsAgHBsAg氨基酸序列氨基酸序列RT702 A3 MENTT-LFGGA-VPFAQWFAG-RT702A14 MENTT-LFGGA-VPFAQWFAG-RT702 B3 M

6、ENTT-LFGGA-VPFAQWFAG-RT702A10 MENTT-LFGGA-VPFAQWFAG-RT522 B7 MESTT-LFGGA-VPFVQWFVG-RT522 A5 MESTT-LFGGA-VPFVQWFVG-RT522B11 MESTT-LFGGA-VPFVQWFVG-RT XJ A2 MENTT-LFGEA-VPFVQWFVG-RT XJ A6 MENTT-LFGEA-VPFVQ*FVG-RT XJ B5 MENTT-LFGEA-VPFVQWFVG-RT XJ C4 MENTT-LFGEA-VPFVQWFVG-變異的一些特點(diǎn)逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)變異的一些特點(diǎn)逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)RT702 A

7、3 -SSNLSWLS-SHPIVLGF-VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT702A14 -SSNLSWLS-SHPIVLGF-VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT702 B3 -SSNLSWLS-SHPIVLGF-VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT702A10 -SSNLSWLS-SHPIVLGF-VIGSWGTLPQEHIVLKIK- RT522 B7 -SSNLTWLS-SHPIILGF-VIGSWGTLPQEHIVLKLK-RT522 A5 -SSNLTWLS-SHPIILGF-VIGSWGTLPQEHIVLKLK-RT522B11 -SSNLTWLS-SHPII

8、LGF-VIGSWGTLPQEHIVLKLK-RT XJ A2 -SSNLSWLS-SHPIILGF-VIGCWGTLPQEHIVLKIK-RT XJ A6 -SSNLSWLS-SHPIILGF-VIGCWGTLPQEHIVLKIK-RT XJ B5 -SSNLSWLS-SHPIILGF-VIGCWGTLPQEHIVLKIK-RT XJ C4 -SSNLSWLS-SHPIILGF-VIGCWGTLPQEHIVLKIK-HBVHBV在慢性患者人群中的準(zhǔn)種景象在慢性患者人群中的準(zhǔn)種景象前前-S2-S2區(qū)缺失突變分析區(qū)缺失突變分析 總數(shù) 無缺失 缺失百分比HBeAg 陽性 36 23 1336%抗-

9、HBe 陽性 15 1 1493%合計(jì) 51 24 2752%前前-S2-S2區(qū)缺失突變位點(diǎn)分析區(qū)缺失突變位點(diǎn)分析 位點(diǎn)位點(diǎn) 范圍范圍 702-4 702-4 nt 43-66 nt 43-66 24 24 bpbp ZH-A6 ZH-A6 nt 52-66 nt 52-66 15 15 bpbp ZH-B4 ZH-B4 nt 37-66 nt 37-66 30 30 bpbp ZH-B12 ZH-B12 nt 37-66 nt 37-66 30 30 bpbp N314-5 N314-5 nt 25-66 nt 25-66 42 42 bpbp N314-7 N314-7 nt 25-66

10、nt 25-66 42 42 bpbp 811-B12 811-B12 nt 52-66 nt 52-66 15 15 bpbp不同病毒株突變位點(diǎn)adr MQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN702-1 -A-I-H702-4 -A-I-702-9 -G-A-T-I-702-10 -G-A-T-I-314-1 -T-Q-L-I-314-5 -L-314-7 -L-314-9 -T-Q-ZH-A6 -Q-ZH-B4 -ZH-B6 -ZH-B11 -ZH-B12 -142-A3 -142-A7 -142-A8 -H811-A7

11、 -811-A8 -811-B12 -本研討的一些重要發(fā)現(xiàn) 慢性乙肝患者體內(nèi)存在有慢性乙肝患者體內(nèi)存在有HBVHBV準(zhǔn)種群。準(zhǔn)種群。 HBVHBV準(zhǔn)種群中存有缺陷型病毒，即部分準(zhǔn)種群中存有缺陷型病毒，即部分ORFORF編碼序列經(jīng)突變終止了正常表達(dá)。編碼序列經(jīng)突變終止了正常表達(dá)。 前前C/CC/C區(qū)、區(qū)、X X區(qū)、前區(qū)、前-S2-S2區(qū)內(nèi)部存有缺失突變，區(qū)內(nèi)部存有缺失突變，尤其以后尤其以后2 2個區(qū)域多見。個區(qū)域多見。 HBVHBV變異存在個體化景象。變異存在個體化景象。 血液中發(fā)現(xiàn)了截短型外表抗原中蛋白血液中發(fā)現(xiàn)了截短型外表抗原中蛋白 關(guān)于準(zhǔn)種研討的一些問題關(guān)于準(zhǔn)種研討的一些問題 乙型肝炎病毒

12、的高變區(qū)與高保守區(qū)的界定？乙型肝炎病毒的高變區(qū)與高保守區(qū)的界定？ 乙型肝炎病毒準(zhǔn)種與感染慢性化的關(guān)系？乙型肝炎病毒準(zhǔn)種與感染慢性化的關(guān)系？ 乙型肝炎病毒準(zhǔn)種群的漂變規(guī)律與肝纖維化的關(guān)系？乙型肝炎病毒準(zhǔn)種群的漂變規(guī)律與肝纖維化的關(guān)系？ 乙型肝炎病毒準(zhǔn)種群的漂變規(guī)律與肝細(xì)胞癌的關(guān)系？乙型肝炎病毒準(zhǔn)種群的漂變規(guī)律與肝細(xì)胞癌的關(guān)系？ 干擾素治療與乙型肝炎病毒準(zhǔn)種群的漂變？干擾素治療與乙型肝炎病毒準(zhǔn)種群的漂變？ 拉米夫定治療與乙型肝炎病毒準(zhǔn)種群的漂變？拉米夫定治療與乙型肝炎病毒準(zhǔn)種群的漂變？ 耐藥株與準(zhǔn)種漂變規(guī)律的關(guān)系？耐藥株與準(zhǔn)種漂變規(guī)律的關(guān)系？ 需求多靶位的需求多靶位的“結(jié)合、序貫的治療？結(jié)合、序貫

13、的治療？拉米夫定對野生型拉米夫定對野生型HBV的抑制的抑制核苷類似物核苷類似物拉米夫定拉米夫定ss (-) DNA抑制抑制HBV 聚合酶聚合酶 (野生型野生型)高親和力高親和力MDYDY = 酪氨酸酪氨酸M = 蛋氨酸蛋氨酸D = 天門冬氨酸天門冬氨酸拉米夫定和拉米夫定和 YMDD 變異株變異株HBVY = 酪氨酸酪氨酸V = 纈氨酸纈氨酸D = 天門冬氨酸天門冬氨酸 I =異亮氨酸異亮氨酸核苷類似物核苷類似物拉米夫定拉米夫定ss - DNA弱抑制弱抑制HBV 聚合酶變異株聚合酶變異株親和力下降親和力下降VDYD在細(xì)胞培育體系中在細(xì)胞培育體系中YMDD變異株復(fù)制程度顯著低于野生株變異株復(fù)制程度顯著低于野生株 Melegari et al， Hepatolog