液相色譜檢測器的介紹實(shí)驗(yàn)室

1、12檢測器 是高效液相色譜儀的核心部件，他負(fù)責(zé)把色譜柱分離出來的各組分快速、準(zhǔn)確的檢測出來，實(shí)行定量、定性分析。3檢測器的分類1.紫外檢測器(UV)2.光電二極管陣列檢測器(PDA)3.熒光檢測器(FD)4.示差檢測器(RI)5.蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)6.納克級激光計數(shù)檢測器（NQAD）4用于HPLC的檢測器 沒有任何一種單獨(dú)的檢測器可以適應(yīng)所有的液相色譜分離！HPLCHPLC檢測器可以分為：檢測器可以分為： 溶質(zhì)性質(zhì)檢測器（選擇型） 對溶質(zhì)的物理或化學(xué)性質(zhì)響應(yīng)，一般不反應(yīng)流動相的變化（選擇型） 整體性質(zhì)檢測器（通用型） 不管是否有溶質(zhì)，對流動相任何物理性質(zhì)的變化作出響應(yīng)（通用型）5理想

2、的HPLC檢測器 高靈敏度；可忽略的基線噪音 寬的線性范圍 獨(dú)立于流動相及操作參數(shù)的響應(yīng) 對壓力、溫度及流速等變化不敏感 長時間操作的穩(wěn)定性 低死體積 非破壞性 選擇性6靈敏度：信噪比 靈敏度是信號與噪音的比值；即峰高與基線噪音的比值（S/N） 檢測限（LOD）：S/N = 3 定量限（LOQ）：S/N = 10 好的信噪比有利于： 更好的色譜峰確認(rèn) 更好的定量 更好地完成色譜峰純度/均一性6:1NS7選擇液相色譜的檢測器要考慮的因素：要考慮的因素： 你要分離的化合物/樣品的化學(xué)特性 化學(xué)結(jié)構(gòu)、分子量及紫外光譜等等 流動相的影響（溶劑、緩沖鹽改性劑等） 梯度還是等度 靈敏度需求 是否有雙檢測的

3、需求8紫外可見吸收檢測器 紫外可見吸收檢測器是HPLC分析中最常見的檢測器，幾乎所有的液相儀器都配有這種檢測器，屬于選擇性檢測器9紫外檢測原理原理：基于被分析組分對特定波長紫外光的選擇性吸收原理：基于被分析組分對特定波長紫外光的選擇性吸收優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：1 1）對溫度和流速不敏感）對溫度和流速不敏感 2 2）可用于梯度洗脫）可用于梯度洗脫 3 3）靈敏度較高，）靈敏度較高，ngng級檢測級檢測 4 4）費(fèi)用相對低廉）費(fèi)用相對低廉 5 5）易于操作，可靠性強(qiáng)）易于操作，可靠性強(qiáng)缺點(diǎn)：選擇性檢測器，僅適用于測定有紫外吸收的物質(zhì)缺點(diǎn)：選擇性檢測器，僅適用于測定有紫外吸收的物質(zhì)10紫外檢測的應(yīng)用大多數(shù)有機(jī)

4、化合物有一定程度的吸光度，可以測大多數(shù)有機(jī)化合物有一定程度的吸光度，可以測定大多數(shù)的化合物，是目前實(shí)驗(yàn)室中使用最多的定大多數(shù)的化合物，是目前實(shí)驗(yàn)室中使用最多的檢測器檢測器 -多數(shù)公司售出的檢測器中多數(shù)公司售出的檢測器中75%75%以上是吸光以上是吸光度檢測器（其中度檢測器（其中50%50%以上是紫外以上是紫外/ /可見檢測器，可見檢測器，2 25%5%是是PDAPDA）11光電二極管陣列檢測器（Photo Diode Array） 12原理：檢測器的接收是由一組光電二極管（數(shù)量由35-1024個不等）接收，并轉(zhuǎn)換為電信號。光電二極管的排列（數(shù)字分辨）和狹縫寬度（光學(xué)分析）決定了檢測器的全波長分

5、析能力。光電二極管陣列檢測器原理13光電二極管陣列檢測器特點(diǎn) 一種三維水平的吸光度檢測器-采集三維譜圖 兼顧紫外檢測器及可見分光光度計的信息在收集色譜圖的同時，得到光譜圖 提供許多有用的功能 -色譜峰的純度鑒定，色譜峰的確認(rèn) -可以發(fā)現(xiàn)單波長檢測時未測到的峰 -任意波長的色譜再處理 -光譜信息-光譜庫的建立檢索和擬合 14優(yōu)點(diǎn)：靈敏度比紫外檢測器高，噪音低，線性范圍寬，對流速和溫度的波動不靈敏，適用于梯度洗脫及制備色譜局限：對紫外吸收差的化合物靈敏度很低，紫外吸收大的溶劑不能做流動相15新增PDA檢測器16靈敏度更高！17通信相關(guān)p 網(wǎng)線連接：設(shè)置相對應(yīng)IP地址p 35900E: PDA信號通

6、過35900E傳送給電腦p 操作軟件：Ezchrom for Shiseido OpenLAB EE PDA18熒光（Fluorescence）檢測原理 原理：發(fā)熒光的化合物吸收光（UV或VIS）使其分子達(dá)到激發(fā)態(tài)，當(dāng)其返回到基態(tài)時發(fā)射光的現(xiàn)象即熒光 優(yōu)點(diǎn)： 1）熒光檢測器靈敏度高, pg級檢測 2）受流速溫度變化影響較小 缺點(diǎn)：1）不是所有化合物都有熒光，必要時需要衍生 2）線性范圍窄 3）衍生方法復(fù)雜 19熒光檢測器的應(yīng)用 環(huán)境中的污染物 多環(huán)芳烴(PAH)，多酚，氨基甲酸酯等 食品、飲料 食品中的毒素；例如：黃曲霉毒素 染料 維生素及衍生氨基酸 生物技術(shù)及制藥氨基甲酸酯類殺蟲劑OOOOO

7、OCH3黃曲霉毒素多環(huán)芳烴（PAH）OHCH3CH3CH3CH3CH3維生素OOONHCH3CH3CH320示差折光（Refractive Index）檢測 示差折光檢測器（RI）是第一個商品化的液相色譜檢測器（上世紀(jì)六十年代末、七十年代初） 通常被認(rèn)為是一種通用檢測器 檢測溶液中所有被溶解的溶質(zhì) 非特異性 任何光學(xué)介質(zhì)的折光率都被定義為光在該介質(zhì)中與真空中的速度之比值21 示差折光（RI ）檢測 的原理原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測定試原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測定試樣各組分濃度。樣各組分濃度。優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測器優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測器缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 1 1）對溫度壓力變化敏感）對溫度

8、壓力變化敏感 2 2）不能用于梯度檢測）不能用于梯度檢測 3 3）靈敏度低，）靈敏度低，ugug級檢測級檢測 4 4）平衡時間長）平衡時間長22示差檢測器的應(yīng)用示差折光檢測器是通用型檢測器,如果選擇合適的溶劑，幾乎所有的物質(zhì)都可以檢測特別適用于檢測沒有紫外吸收的化合物,例如糖類,醇類,酯類以及脂肪酸等高分子化合物GPC,GFC分析以及復(fù)雜樣品純化23蒸發(fā)光散射（ELSD）原理 用氮?dú)獍蚜鲃酉啻党杉?xì)霧狀 流動相的液滴通過一個預(yù)加熱的腔體后被蒸發(fā)掉 蒸發(fā)的溶劑被從檢測器中除去 溶質(zhì)的揮發(fā)性小于流動相，因此產(chǎn)生顆粒束與光束相交 被顆粒散射的光由光電倍增管（PMT）收集 PMT的輸出與溶質(zhì)的存在量呈比

9、例關(guān)系24ELSD 優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用領(lǐng)域 通用型 比流動相揮發(fā)性小的物質(zhì)都能被檢測 可以作梯度實(shí)驗(yàn)； 檢測下限可到納克級水平(靈敏度大概是靈敏度大概是RIRI檢測器的十倍檢測器的十倍) ) 對環(huán)境條件不敏感；可以使用有強(qiáng)紫外吸收的溶劑作流動相 應(yīng)用領(lǐng)域： 碳水化合物 油脂及脂肪酸 未衍生的氨基酸 制藥行業(yè) 表面活性劑 天然產(chǎn)物25ELSD 缺點(diǎn) 不能使用不揮發(fā)性的流動相（例如：磷酸鹽） 要求使用霧化氣源（典型的是氮?dú)饣蚩諝猓?不同的色譜條件下霧化及除溶劑的參數(shù)需要重新優(yōu)化 破壞性技術(shù) 蒸發(fā)出的溶劑要引到戶外或通風(fēng)櫥里 對揮發(fā)性化合物的檢測不理想 一般得到的是非線性校正曲線 某些化合物的檢測靈敏度不如

10、其他檢測器26Corona電噴霧檢測器（CoronaCAD：Corona Charged Aerosol Detector） 加不揮發(fā)性物質(zhì)的微粒子正電， 檢測帶正電的粒子。 所有的物質(zhì)靈敏度基本都一樣。 靈敏度，比ELSD高一些。 動態(tài)檢測范圍寬 信號響應(yīng)一致27Corona電噴霧檢測器 和 蒸發(fā)光散射檢測器使用目的基本相同。價格也差不多（30-40萬RMB).不太適合對天然物質(zhì)和生物樣品的分析（選擇性不夠）。適合對化學(xué)產(chǎn)品的純度分析等，尤其是工業(yè)上的應(yīng)用。28新的通用型檢測器（Nano Quantity Analyte Detector）納克級（水凝粒子）激光計數(shù)檢測器一般來說，選澤性選澤

11、性和靈敏度靈敏度是檢測器最重要的兩個要素。NQAD是通用型、高靈敏度檢測器，適用于幾乎所有物質(zhì)（揮發(fā)性物質(zhì)除外）的檢測。 FL ECDUV (PDA)MS適用于：1) 沒有紫外吸收的物質(zhì)2) 離子化比較難的物質(zhì)3) 沒有電化學(xué)活性的物質(zhì)4) 性質(zhì)不明的物質(zhì)等能夠檢測所有不揮發(fā)性及半揮發(fā)性物質(zhì)ng級的高靈敏度從ng到g，寬的動態(tài)響應(yīng)范圍使用干燥空氣，更加環(huán)保操作簡便、外觀設(shè)計更加緊湊29的檢測原理?xiàng)食瞿s噴霧汽化使用空氣（或氮?dú)猓┩ㄟ^霧化器進(jìn)行噴霧。流動相和其他揮發(fā)性成分在蒸發(fā)器中汽化剩下的不揮發(fā)、難揮發(fā)物質(zhì)顆粒進(jìn)入到WCPC。在水蒸氣飽和環(huán)境下，以該顆粒為核，水分凝聚體生成，并長大到微米水平。激光計數(shù)器計數(shù)水分凝聚體。核物質(zhì)的性質(zhì)對靈敏度影響不大，信號響應(yīng)基本只與質(zhì)量濃度相關(guān)。（Water-based Condensation Particle Counter）（水凝聚粒子計數(shù)器）30檢測凝結(jié)噴霧汽化檢測荷電噴霧汽化檢測噴霧汽化激光電散射與同類（氣溶膠型）檢測器的比較-原理直接計數(shù)粒子CAD檢測粒子的電荷量（電霧式檢測器）ELSD檢測粒子造成的光散射量（蒸發(fā)光散射檢測器）31LC上廣泛使用的各種檢測器與NQAD的比較對于沒有紫外吸收的化合物，通常使用示差折光檢測器（RI）來進(jìn)行檢測。RI的優(yōu)點(diǎn)