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文檔簡(jiǎn)介
1、食品檢測(cè)培訓(xùn)課件二、開(kāi)展微生物檢測(cè)所需的基本條件n無(wú)菌室(含紫外燈等消毒設(shè)備的隔離空間);n恒溫培養(yǎng)箱;n微生物檢測(cè)設(shè)備、器皿、試劑等;n高壓滅菌鍋;(滅菌是否徹底)n具備以上設(shè)備和無(wú)菌操作概念即可進(jìn)行檢測(cè)了。滅菌徹底與否指示n滅菌指示膠帶(3M)n生物指示(嗜熱脂肪芽孢桿菌 121.1)紫外燈相關(guān)n強(qiáng)度:對(duì)室內(nèi)空氣的消毒,直接照射法:采用室內(nèi)懸吊式紫外線消毒時(shí),室內(nèi)安裝紫外線消毒燈(30紫外燈,在1.0m 處的強(qiáng)度 70W/cm2)的數(shù)量為平均每立方米不少于 1.5W,照射時(shí)間不少于30min。n更換頻率:紫外線燈使用過(guò)程中其輻照強(qiáng)度逐漸降低,故應(yīng)定期測(cè)定消毒紫外線的強(qiáng)度,一旦降到要求的強(qiáng)度
2、以下時(shí),應(yīng)及時(shí)更換。 紫外線消毒燈的使用壽命,即由新燈的強(qiáng)度降低到70W/cm2 的時(shí)間(功率30W),或降低到原來(lái)新燈強(qiáng)度的 70%(功率 30)的時(shí)間,應(yīng)不低于 1000h。紫外線燈管有高硼玻璃和石英玻璃之分,由于高硼玻璃的UV254nm紫外線透過(guò)率只有50%左右,一般只有1000小時(shí);石英是紫外線透過(guò)率最高的材料,普通石英可以透過(guò)UV254的80%以上,石英玻璃紫外線燈壽命一般大于6000小時(shí),進(jìn)口的紫外線燈可以到8000h以上,部分廠家可以達(dá)到1200小時(shí)。 n紫外線強(qiáng)度計(jì)至少1年標(biāo)定1次 。紫外線輻照時(shí)間計(jì)算n照射劑量和時(shí)間:不同種類的微生物對(duì)紫外線的敏感性不同,用紫外線消毒時(shí)必須使
3、用照射劑量達(dá)到殺滅目標(biāo)微生物所需的照射劑量。殺滅一般細(xì)菌繁殖體時(shí),應(yīng)使照射劑量達(dá)到10 000W.s/cm2;殺滅細(xì)菌芽孢時(shí)應(yīng)達(dá)到100 000W.s/cm2;病毒對(duì)紫外線的抵抗力介于細(xì)菌繁殖體和芽胞之間;真菌孢子的抵抗力比細(xì)菌芽孢更強(qiáng),有時(shí)需要照射到600 000W.s/cm2,但一般致病性真菌對(duì)紫外線的抵抗力比細(xì)菌芽胞弱;在消毒的目標(biāo)微生物不詳時(shí),照射劑量不應(yīng)低于100 000W.s/cm2。輻照劑量是所用紫外線燈在照射物品表面處的輻照強(qiáng)度和照射時(shí)間的乘積。因此,根據(jù)紫外線光源的輻照強(qiáng)度,可以計(jì)算出需要照射的時(shí)間。例如,用輻照強(qiáng)度為 70W/cm2 的紫外線表面消毒器近距離照射物品表面,選
4、擇的輻照劑量是 100 000W.s/cm2,則需照射的時(shí)間是:100 000W.s/cm2 70W/cm2 = 1429 s 60s 24min。1、概念的理解n無(wú)菌是指物體中沒(méi)有活的微生物存在。n防止微生物進(jìn)入人體或物體的操作方法,稱為無(wú)菌技術(shù)或無(wú)菌操作。n關(guān)鍵點(diǎn):n人:操作前洗手更衣等n物:試劑器械n環(huán)境:無(wú)菌室三、 無(wú)菌操作和注意事項(xiàng)四、 革蘭氏染色n革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法,1884年由丹麥醫(yī)師、細(xì)菌學(xué)家 Christain Gram創(chuàng)立。n步驟: a. 將涂片在火焰上固定,滴加結(jié)晶紫染液,染1min,水洗。nb. 滴加革蘭氏碘液,作用lmin,水洗。nc. 滴
5、加95%乙醇脫色約15-30s,直至染色液被洗掉,不要過(guò)分脫色,水洗。nd. 滴加復(fù)染液,復(fù)染lmin,水洗、待干、鏡檢。n原理:細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色,而經(jīng)碘液媒染后,用酒精脫色,在一定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去,有的可被脫去,因此可把細(xì)菌分為兩大類,前者叫做革蘭氏陽(yáng)性菌(G+),后者為革蘭氏陰性菌( G )。G菌:細(xì)胞壁厚,肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障,當(dāng)乙醇脫色時(shí),肽聚糖脫水而孔障縮小,故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上。呈紫色。 G菌:肽聚糖層薄,交聯(lián)松散,乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮,其脂含量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁,番紅染液復(fù)染后呈紅色。n革蘭氏陽(yáng)性菌:
6、葡萄球菌屬(主要是金黃色葡萄球菌)、蠟樣芽孢桿菌、單增李斯特氏菌等;革蘭氏陰性菌:埃希氏菌屬、沙門氏菌屬、志賀氏菌屬(痢疾桿菌等)、霍亂弧菌、副溶血性弧菌等。 五、BSL簡(jiǎn)介nbiology security level (BSL):生物安全水平n 根據(jù)所用病原微生物的危害程度、對(duì)人和動(dòng)物的易感性、氣溶膠傳播的可能性、預(yù)防和治療的可行性等因素,其實(shí)驗(yàn)室生物安全水平共分為四級(jí),一級(jí)最低,四級(jí)最高。 n一級(jí)生物安全水平(BSL-1):能夠安全操作,對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員和動(dòng)物無(wú)明顯致病性的,對(duì)環(huán)境危害程度微小的,特性清楚的病原微生物的生物安全水平。 n二級(jí)生物安全水平(BSL-2):能夠安全操作,對(duì)實(shí)驗(yàn)
7、室工作人員和動(dòng)物致病性低的,對(duì)環(huán)境有輕微危害的病原微生物的生物安全水平。如:大腸埃希氏菌 n 三級(jí)生物安全水平(BSL-3):能夠安全地從事國(guó)內(nèi)和國(guó)外的,可能通過(guò)呼吸道感染,引起嚴(yán)重或致死性疾病的病原微生物工作的生物安全水平。如:炭疽芽孢桿菌、鼠疫桿菌、結(jié)核分枝桿菌、狂犬病毒 n四級(jí)生物安全水平(BSL-4):能夠安全地從事國(guó)內(nèi)和國(guó)外的,能通過(guò)氣溶膠傳播,實(shí)驗(yàn)室感染高度危險(xiǎn),嚴(yán)重危害人和動(dòng)物生命和環(huán)境的,沒(méi)有特效預(yù)防和治療方法的微生物工作的生物安全水平。與上述相近的或有抗原關(guān)系的,但尚未完全認(rèn)識(shí)的病原體也應(yīng)在此種水平條件下進(jìn)行操作,直到取得足夠的數(shù)據(jù)后,才能決定是繼續(xù)在此種安全水平下工作還是在
8、低一級(jí)安全水平下工作。如:埃博拉病毒、馬爾堡病毒、天花病毒 六、提高檢測(cè)速度的一些方法一、設(shè)備更新:n移液管、吸球/移液器n普通高壓蒸汽滅菌器/全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌器n攪拌器或勻漿機(jī)/拍擊式均質(zhì)器n二、采用快速檢測(cè)方法進(jìn)行粗篩n紙片法n快速檢測(cè)試劑盒測(cè)試片檢測(cè)結(jié)果圖像七、常見(jiàn)微生物檢測(cè)設(shè)備Biolog微生物鑒定數(shù)據(jù)庫(kù)容量是目前世界上最大的,可鑒定包括細(xì)菌、酵母和絲狀真菌在內(nèi)總計(jì)19731973種種微生物,涵蓋了所有的人類、動(dòng)物、植物病原菌以及食品和部分環(huán)境微生物,其中細(xì)菌234個(gè)屬,1 226個(gè)種。Biolog全自動(dòng)快速微生物鑒定儀 原理:原理: Biolog自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)主要根據(jù)細(xì)菌等95
9、95種碳種碳源源的利用情況,配合四唑類顯色物質(zhì)進(jìn)行鑒定。分子生物學(xué)細(xì)菌鑒定n1. 16S rRNA分析 n2. 特異片段擴(kuò)增n3.DNA指紋技術(shù) (RFLPDNA的限制 性片段長(zhǎng)度多態(tài)性 , RAPD-隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 )PCR儀BD Phoenix System“鳳凰”全自動(dòng)細(xì)菌/鑒定藥敏系統(tǒng) 1概況1998年Becton Dickinson and Company公司Phonenix全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏系統(tǒng)原理 采用熒光增強(qiáng)原理與傳統(tǒng)酶、底物生化呈色反應(yīng)結(jié)合。(菌種庫(kù)270種細(xì)菌)MicroScan微生物自動(dòng)鑒定及藥敏系統(tǒng)n概況 MicroScan自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)包括半自動(dòng)系列AutoScan
10、-4以及全自動(dòng)系列Walkaway 40/96 。是美國(guó)美國(guó)最普遍使用的鑒定系列之一。 n原理 將熒光物質(zhì)均勻地混在培養(yǎng)基中,菌種接種到鑒定板,通過(guò)檢測(cè)熒光底物的水解、底物被利用后的pH變化,特殊代謝產(chǎn)物的生成和某些代謝產(chǎn)物的生成率來(lái)進(jìn)行菌種鑒定。n原理:采用傳統(tǒng)生化反應(yīng),8進(jìn)位數(shù)碼鑒定及熒光分析相結(jié)合。熒光分析是用熒光標(biāo)記細(xì)菌表面特異酶的底物,經(jīng)細(xì)菌水解底物產(chǎn)生熒光來(lái)判斷結(jié)果Sensititre (自動(dòng)熒光法微生自動(dòng)熒光法微生物鑒定藥敏分析系統(tǒng)物鑒定藥敏分析系統(tǒng) )AutoReaderARIS(可以自動(dòng)孵育)(可以自動(dòng)孵育)VITEK VITEK-ATB(半自動(dòng)微生物鑒定和藥敏系統(tǒng))Vitek-AMS(全自動(dòng)細(xì)菌鑒定和藥敏分析系統(tǒng) ) Vitek II VIDAS原理:VIDAS(bioMerieux Vitek公司)是應(yīng)用酶酶聯(lián)免疫熒光聯(lián)免疫熒光試驗(yàn)(ELFA)檢測(cè)
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