R2A瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查方案

1、R2A 瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查方案文件編號：VP-QC-2015-05起草人：審核人：批準人：批準日期：年月日目錄1概述12驗證目的及范圍13驗證小組人員組成及職責14驗證依據(jù)25驗證前準備26驗證的實施27偏差處理58驗證數(shù)據(jù)及評估59驗證報告及評審510再驗證及周期511驗證文件及歸檔512附件51驗證目的及范圍2015版中華人民共和國藥典中規(guī)定純化水的微生物限度檢查采用的培養(yǎng)基為R2A瓊脂培養(yǎng)基。 為了保證純化水微生物限度檢查的準確性和可靠性， 需對該R2A瓊脂培養(yǎng)基進行適用性檢查實驗。2驗證方法照2015版藥典非無菌產(chǎn)品產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）中“計數(shù)培養(yǎng)基適用性

2、檢查”的胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查方法進行，試驗菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽抱桿菌，應(yīng)符合規(guī)定。3.驗證小組人員組成及職責：3.1驗證小組由以下部門人員組成：質(zhì)量部、QG生產(chǎn)部。3.2驗證小組組成及職責列表組成職責QC1.%2.負責起草驗證方案的起草2.%2.負責本方案的培訓3.%2.儀器儀表校驗確認4.%2.負責驗證的實施5.%2.負責數(shù)據(jù)的收集和整理6.%2.負責數(shù)據(jù)分析7.%2.負責完成驗證報告質(zhì)量部1.%2.%3.負責驗證方案、驗證報告的審核與批準2.%2.%3.負責驗證現(xiàn)場的監(jiān)督審查生產(chǎn)部6.負責保障設(shè)備、器具的完好7.負責動力系統(tǒng)的保障4驗證接受標準被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)

3、與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.52范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較，試驗菌應(yīng)生長良好。1 .驗證前準備驗證人員培訓：驗證報告起草人有責任在方案批準后（且在驗證實施前）對本次驗證相關(guān)人員進行培訓。培訓人員記錄見附件1。將所有的平皿和稀釋劑都應(yīng)該嚴格按照相關(guān)的滅菌程序消毒，以確保其對試驗的結(jié)果沒有影響。確認儀器儀表設(shè)施經(jīng)過確認和校驗，并填寫確認記錄。相關(guān)文件廳 P相關(guān)文件文件編號1DHG 型電熱恒溫鼓風干燥箱操作規(guī)程WI-1002BSC-100-II-B2 生物安全柜操作和維護保養(yǎng)規(guī)程WI-1013WXQI-S-18SI 自動手提式滅菌

4、器使用和維護保養(yǎng)規(guī)程WI-1034DK 型電熱恒溫水浴鍋操作規(guī)程WI-1045HWS 型恒溫恒濕箱操作規(guī)程WI-1056JA2003N 電子天平操作及維護保養(yǎng)規(guī)程WI-1067PHS-3C 型 PH 計操作及維護保養(yǎng)規(guī)程WI-1088SHP-3C 型低溫生化培養(yǎng)箱操作及維護保養(yǎng)規(guī)程WI-1099YJ-875SDB 型凈化操作臺的操作及維護保養(yǎng)規(guī)程WI-11310培養(yǎng)基管理規(guī)程WI-762 .驗證的實施實驗材料6.1.1培養(yǎng)基類別培喬基名稱廠家批號驗證培喬基A2R瓊月日培力基對照培養(yǎng)基胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)埴儀器設(shè)備DHG型電熱恒溫鼓風干燥箱、BSC-100-II-B2生物安全柜、WXQI-S-18

5、SI自動手提式滅菌器、DK型電熱恒溫水浴鍋、HWS型恒溫恒濕箱（3035C）、JA2003N電子天平、PHS-3c型PH計、SHP-3c型低溫生化培養(yǎng)箱（2025C）、YJ-875SDB型凈化操作臺。稀釋劑：PH無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液計數(shù)用培養(yǎng)基胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基驗證用菌株銅綠假單胞菌CMCC(B)10104枯草芽抱桿菌CMCC(B)63501滅菌前調(diào)節(jié)PH溶液：10%碳酸鈉溶液或1mol/L氫氧化鈉溶液/15%冰醋酸溶液或1mol/L鹽酸溶液。驗證內(nèi)容培養(yǎng)基的配制滅菌過程將分裝包裝好的培養(yǎng)基分別放入滅菌器中121c滅菌15分鐘后取出。取1管已滅菌的培養(yǎng)基，放冷至25c測定pH值，應(yīng)在7.

6、260.2范圍內(nèi)。6.2.1.4外觀性狀滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)對其外觀性狀仔細檢查，如發(fā)現(xiàn)色澤異常、渾濁、橡膠塞被培養(yǎng)基沾染等，均應(yīng)挑出棄去。將制備好的培養(yǎng)基保存在225C、避光的環(huán)境中，在存放2周后，培養(yǎng)基外觀應(yīng)色澤正常，澄清透明。菌液制備接種銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的培養(yǎng)物至胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基上，30?35c培養(yǎng)18?24小時。菌液計數(shù)(每種菌液接種2個)分別取上述制備的銅綠假胞菌、枯草芽抱桿菌(50100cfu/ml)各1ml加入無菌培養(yǎng)皿，立即注入不超過45c胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基1520ml,混勻，凝固，置3035c培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，計數(shù)每株試驗菌平行制備2個平

7、皿。培養(yǎng)基適用性檢查分別取上述制備的銅綠假胞菌、枯草芽抱桿菌各1ml加入培養(yǎng)皿，每種菌液平行做2皿，立即注入不超過45c胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基1520ml,混勻，凝固，置3035c培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時；分別計數(shù)。同時取相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。取每管裝量為9ml的胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基7支,分別接種小于(50100cfu/ml)的銅綠假胞菌、 枯草芽抱桿菌1ml各2支，另1支不接種作為空白對照，置3035c培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，逐日觀察結(jié)。同時取相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。結(jié)果判定：被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.52范圍內(nèi)，且菌落

8、形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較，試驗菌應(yīng)生長良好。.偏差處理驗證的數(shù)據(jù)產(chǎn)生的任何偏差，應(yīng)及時進行偏差調(diào)查，按照化驗室偏差管理規(guī)程進行處理并如實記錄，給出合理的偏差處理措施，并上報驗證領(lǐng)導(dǎo)小組，記錄備案，并且根據(jù)處理措施進行相應(yīng)的處理，并對處理的過程、結(jié)果進行記錄與跟蹤。驗證小組根據(jù)數(shù)據(jù)分析，做出相應(yīng)的評定與結(jié)論，報請驗證委員會批準。8驗證數(shù)據(jù)及評估驗證小組對驗證檢測數(shù)據(jù)進行評估，并對結(jié)果進行評價結(jié)果評價：評價人：日期：.驗證報告及評審驗證小組依據(jù)本方案實施驗證，編寫驗證報告。驗證小組組織專業(yè)人員對驗證報告進行評審。QA對驗證報告給出結(jié)論，驗證合格發(fā)放驗證

9、合格證。.再驗證及周期純化水微生物限度檢查用的A2R瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查驗證,其再驗證周期一般為三年，以證實確認培養(yǎng)基的可靠性。當藥典中純化水微生物限度檢查法發(fā)生變更時，需進行再驗證；當所用到的檢驗設(shè)備出現(xiàn)故障進行重大維修，尤其是關(guān)鍵部件的維修；儀器的性能發(fā)生了明顯的偏移，已不能再滿足檢驗產(chǎn)品質(zhì)量的要求時，均需要對該檢驗方法進行重新確認，以證明變更對已經(jīng)確認的效果無影響。.驗證文件歸檔驗證結(jié)束，全部驗證文件（驗證方案、驗證報告、驗證記錄、驗證合格證等）歸檔質(zhì)量部。.附件驗證小組組成及職責驗證前確認記錄驗證結(jié)果評估記錄驗證合格證驗證前確認記錄、驗證前儀器儀表確認廳 P名稱編號上次校驗時間是否在

10、有效期內(nèi)12345確認人：日期：試驗材料表一、計數(shù)用培養(yǎng)基胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基：批號：來源：三、驗證用菌種菌種類型菌種代數(shù)批號來源銅綠假單胞菌CMCC(B)10104枯抱的CMCC(B)63501四、滅菌前調(diào)節(jié)pH溶液溶液名稱配制批號配制日期有效期至配制人10%碳酸鈉溶液1mol/l氫氧化鈉溶液15%冰醋酸溶液1mol/l鹽酸溶液檢查人：日期:復(fù)核人：日期：附表 2培養(yǎng)基的pH值珞加生名稱配制批號火菌前 pH 值滅菌后 pH 值判定結(jié)果檢查人：日期:復(fù)核人：日期：附表 3外觀性狀,白笠廣丕名布卜批號火菌后外觀檢查保存 2 周后外觀檢查結(jié)果判定日期：日期：檢查人：日期:復(fù)核人：日期：培養(yǎng)基無菌性檢查表培養(yǎng)基名稱管數(shù)培養(yǎng)時間（天）溫度123456789101112131412345結(jié)論檢查人/日期：復(fù)核人/日期：注：“+”為生長，“-”為不生長。附表7菌種計數(shù)表計數(shù)培養(yǎng)基培療溫度（C）培療時問（h）稀釋級數(shù)菌落數(shù)（cfu/ml）平皿1平皿2平均值胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基枯草芽抱桿菌銅綠假單胞菌結(jié)果評價查人/日期：復(fù)核人/日期：菌落計數(shù)結(jié)果（cfu/ml）試驗次數(shù)10-5稀釋10-6稀釋10-7稀釋123123123金黃色葡錮球菌枯草芽抱桿菌卬杭州沸創(chuàng)醫(yī)療科技有限公司驗證合格證書驗證方案名稱：無菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案驗證方案編號：VP-Q