專(zhuān)題二細(xì)胞工程測(cè)試題(基礎(chǔ)知識(shí)填空和高考題)剖析

1、專(zhuān)題二 細(xì)胞工程測(cè)試題第一部分：基礎(chǔ)知識(shí)填空細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法，通過(guò) 或 水平上的操作，按照人們的意愿來(lái)改變細(xì)胞內(nèi)的 或 的一門(mén)綜合科學(xué)技術(shù)。根據(jù)操作對(duì)象的不同，可分為 和 兩大領(lǐng)域。（一）植物細(xì)胞工程 1.理論基礎(chǔ)（原理）： 具有某種生物的 任何一個(gè)細(xì)胞，都具有 的潛能，也就是說(shuō)，每個(gè)生物細(xì)胞都具有 的特點(diǎn)。2.植物組織培養(yǎng)技術(shù)：是轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交培育植物新品種的最后一道工序（1）過(guò)程： 的植物器官、組織或細(xì)胞愈傷組織 試管苗植物體注：脫分化即 所需條件為 避光 ，細(xì)胞進(jìn)行 分裂 。再分化是指已經(jīng)脫分化的細(xì)胞，在一定條件下，分化出根和芽，形成完整植株

2、的過(guò)程。所需條件為 光照 ，細(xì)胞進(jìn)行 分裂和分化 。（2）條件： 、 、含有全部營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基、 光照、適宜pH等。 當(dāng)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素比例不同時(shí)，產(chǎn)生的效果不同。當(dāng)生長(zhǎng)素含量高于細(xì)胞分裂素時(shí)，誘導(dǎo)脫分化和 的形成； 當(dāng)生長(zhǎng)素含量低于細(xì)胞發(fā)裂素時(shí)，誘導(dǎo)再分化和 的形成；當(dāng)二者比例適中時(shí)，愈傷組織只分裂不分化（3）概念：植物組織培養(yǎng)就是在 和 條件下，將 的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工培植的培養(yǎng)基上，給予 ，誘導(dǎo)其產(chǎn)生 、 ，最終形成 。（此種繁殖方法為無(wú)性繁殖）植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B雜種細(xì)胞愈傷組織雜種植株3.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)（1）過(guò)程：（2）在進(jìn)行體細(xì)胞雜交之前，必須先利用 和 去除細(xì)胞

3、壁，獲得具有活力的 。植物體細(xì)胞雜交關(guān)鍵是誘導(dǎo) 的融合。此融合過(guò)程體現(xiàn)了細(xì)胞膜的 特點(diǎn)，即 。（3）誘導(dǎo)融合的方法：物理法包括 等?；瘜W(xué)法一般是用 作為誘導(dǎo)劑。（4）獲得雜種細(xì)胞后，利用 方法將雜種細(xì)胞培育成雜種植株。（5）概念：植物體細(xì)胞雜交就是將 的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成 ，并把 培育成新的植物體的技術(shù)。（此種繁殖方式為無(wú)性繁殖）（6）意義：克服了 的障礙，培育出自然界中沒(méi)有的、具有優(yōu)良品質(zhì)的新品種。4.植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用A 植物繁殖的新途徑微型繁殖：可以保持 的遺傳特性，高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的 。作物脫毒：采用 進(jìn)行組織培養(yǎng)來(lái)獲得脫毒苗（因?yàn)橹参锓稚鷧^(qū)附近的病毒極少或沒(méi)有）。人

4、工種子：以植物組織培養(yǎng)得到的 、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經(jīng)人工薄膜包裝得到的種子。優(yōu)點(diǎn)：完全保持優(yōu)良品種的遺傳特性，不受季節(jié)的限制，方便儲(chǔ)藏和運(yùn)輸。B 作物新品種培育單倍體育種：優(yōu)點(diǎn)： 過(guò)程：植株（AaBb）通過(guò) 減數(shù)分裂 得到花粉（ 四種類(lèi)型）對(duì)花粉進(jìn)行 花藥離體培養(yǎng) （技術(shù)是植物組織培養(yǎng)）得到單倍體植株對(duì)其幼苗時(shí)期進(jìn)行 處理得到了正常的純合二倍體植株（ 四種類(lèi)型）。C突變體利用：在組織培養(yǎng)中會(huì)出現(xiàn)突變體，從有用的突變體中選育出新品種（如篩選抗病、抗鹽、含高蛋白的突變體）。處理方法是對(duì)植物的 進(jìn)行化學(xué)或物理的誘變處理。D 細(xì)胞產(chǎn)物的生產(chǎn)：通過(guò)能夠產(chǎn)生對(duì)人們有利的產(chǎn)物的細(xì)胞進(jìn)行組織培養(yǎng)，從

5、而讓它們能夠產(chǎn)生大量的細(xì)胞產(chǎn)物。細(xì)胞產(chǎn)物包括 、 、 、 、 、 等。（二）動(dòng)物細(xì)胞工程 1. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（1）概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的 ，將它分散成 ，然后放在適宜的 中，讓這些細(xì)胞 。（2）原理： 。（3）流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）剪碎分散成單個(gè)細(xì)胞（用 或 ）制成 轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行 細(xì)胞貼壁成單層細(xì)胞增殖鋪滿(mǎn)瓶壁 用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分瓶繼續(xù) 培養(yǎng)傳代1050代增殖緩慢繼續(xù)傳代其中少數(shù)細(xì)胞獲得不死性(發(fā)生突變),朝著等同于癌細(xì)胞的方向發(fā)展（4）細(xì)胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細(xì)胞很快就 ，稱(chēng)為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂

6、生長(zhǎng)到表面 時(shí)，細(xì)胞就會(huì) ，這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞的接觸抑制。（5）目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為 ，以保持細(xì)胞正常的 （6）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿(mǎn)足以下條件 ：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行 處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的 ，以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止 ：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入 等天然成分。 ：適宜溫度：哺乳動(dòng)物多是 ；pH： 。 ：95% 5% 。O2是 所必需的，CO2的主要作用是 。（7）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用：可以借助動(dòng)物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)生物制品，如 病毒疫苗 、干擾素 、 等。通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來(lái)培養(yǎng)基因工程常用的受體

7、細(xì)胞。培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞還可以用于檢測(cè) 有毒物質(zhì) ，判斷某種物質(zhì)的 毒性 。用于 生理 、 病理 、 藥理 等方面的研究。2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物（1）動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的 ，移入一個(gè)已經(jīng) 的 中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱(chēng)為 。哺乳動(dòng)物核移植可以分為 （比較容易）和 （比較難）。（2）原理： 。（3）選用去核卵母細(xì)胞的原因：卵母細(xì)胞比較大，容易操作；卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)多，營(yíng)養(yǎng)豐富，可提供胚胎發(fā)育所需營(yíng)養(yǎng)；含有使體細(xì)胞核表達(dá)出全能性所必需的 的物質(zhì)。（4）體細(xì)胞核移植的大致過(guò)程（課本48頁(yè)圖2-21）高產(chǎn)奶牛（提供體細(xì)胞

8、）細(xì)胞培養(yǎng) 注 發(fā)育 胚胎移植 分娩 顯微操作 入 重組細(xì)胞胚胎代孕動(dòng)物克隆動(dòng)物M中期的卵母細(xì)胞去核 克隆動(dòng)物需要用到 、 技術(shù)（5）體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用：加速家畜 遺傳改良 進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育；保護(hù) 瀕危 物種，增大存活數(shù)量；生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白；轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物細(xì)胞、組織和器官可以作為異種移植的 ；人的核移植胚胎肝細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)分化，形成相應(yīng)的組織、器官后，可以用于組織器官的移植等。（7）體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題：成功率非常 ；克隆動(dòng)物存在著 問(wèn)題，表現(xiàn)出 缺陷；對(duì)克隆動(dòng)物食品的安全性問(wèn)題也存有爭(zhēng)議等。3.動(dòng)物細(xì)胞融合（1）動(dòng)物細(xì)胞融合也稱(chēng) ，是指 動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成 細(xì)胞的過(guò)程。融合后形

9、成的具有原來(lái) 細(xì)胞遺傳信息的 細(xì)胞，稱(chēng)為 。（2）動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同，即 。誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類(lèi)似，常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇（PEG）、 、電刺激等。（3）動(dòng)物細(xì)胞融合的意義：克服了 ，利用細(xì)胞融合技術(shù)而發(fā)展起來(lái)的 ，為制造 開(kāi)辟了新途徑。4.單克隆抗體（1）抗體：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種 。從血清中分離出抗體的方法不僅 。（2）單克隆抗體的制備過(guò)程： 特定抗原注射小鼠漿細(xì)胞 融合 擇性培養(yǎng)基 克隆化培養(yǎng) 小鼠腹腔內(nèi) 骨髓瘤細(xì)胞 多種融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞分泌所需抗體 單克 抗體檢測(cè) 雜交瘤細(xì)胞 體外培養(yǎng) 隆抗體對(duì)小鼠注射特定的 （目的使小鼠產(chǎn)

10、生了 ）提取B淋巴細(xì)胞（即 ），同時(shí)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方法培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞并提取促使它們細(xì)胞融合在特定的選擇培養(yǎng)基上篩選出 然后對(duì)它進(jìn)行 和 ,篩選出能夠 的 最后將雜交瘤細(xì)胞在 做大規(guī)模培養(yǎng)或 ，從細(xì)胞培養(yǎng)液或 中可得到大量的單克隆抗體。（3）單克隆抗體制備過(guò)程所利用的技術(shù)有： 、 (4) 與植物原生質(zhì)體融合相比，特有的誘導(dǎo)方法是 。（5）雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能 ，又能 。（6）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)： 。（7）單克隆抗體的作用：作為 ，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。用于 和 ：主要用于 ，把抗癌細(xì)胞的單克隆抗體跟 、 或細(xì)胞毒素相結(jié)合，制成“ ”，注入體內(nèi)，借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用，能將藥物 帶

11、到 所在的位置，在 殺死癌細(xì)胞，是一種 、 的新型藥物。 第二部分：細(xì)胞工程專(zhuān)題高考題匯總（2013重慶卷）2題2圖是單克隆抗體制備流程的簡(jiǎn)明示意圖。下列有關(guān)敘述，正確的是A是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞B中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細(xì)胞的形成C同時(shí)具有脾臟細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的特性D是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群【答案】D【解析】是獲得已經(jīng)免疫的B細(xì)胞，A項(xiàng)錯(cuò)誤；胰蛋白酶使得組織塊分散為單個(gè)細(xì)胞，B項(xiàng)錯(cuò)誤；同時(shí)具有B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的特性，C項(xiàng)錯(cuò)誤；經(jīng)篩選后獲得能夠獲得分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，D項(xiàng)正確。【試題評(píng)價(jià)】本題考查單克隆抗體制備流程相關(guān)只是和考生的識(shí)圖能力

12、，屬理解層次，較易得分。（2013新課標(biāo)卷II）40.生物選修3：現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題（15分）甲、乙是染色體數(shù)目相同的兩種二倍體藥用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小組擬培育同時(shí)含有A和B的新型藥用植物。回答下列問(wèn)題：（1）為了培養(yǎng)該新型藥用植物，可取甲和乙的葉片，先用_酶和_酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的_，再用化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)二者融合。形成的融合細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)形成_組織，然后經(jīng)過(guò)_形成完整的雜種植株。這種培養(yǎng)技術(shù)稱(chēng)為_(kāi)。（2）上述雜種植株屬于多倍體，多倍體是指_。假設(shè)甲和乙有性雜交的后代是不育的，而上述雜種植株是可育的，造成這種差異的原因是_。（3）這種雜種植株可通過(guò)制作人工種子的方

13、法來(lái)大量繁殖。經(jīng)植物組織培養(yǎng)得到的_等材料用人工薄膜包裝后可得到人工種子。【答案】：（1）纖維素酶 果膠酶 原生質(zhì)體 愈傷 再分化（或分化） 植物體細(xì)胞雜交 （2）體細(xì)胞中含有三個(gè)或三個(gè)以上染色體組的個(gè)體 在減數(shù)分裂過(guò)程中，前者染色體聯(lián)會(huì)異常，而后者染色體聯(lián)會(huì)正常 （3）胚狀體、不定芽、頂芽、腋芽【解析】：本題考查植物體細(xì)胞雜交。（1）為了培養(yǎng)新型藥用植物，可取甲和乙的葉片，先用纖維素酶和果膠酶處理，獲得具有活力的原生質(zhì)體A、B，再用化學(xué)誘導(dǎo)劑聚乙二醇誘導(dǎo)融合形成雜種細(xì)胞，進(jìn)一步培養(yǎng)形成愈傷組織，經(jīng)過(guò)再分化形成根、芽，長(zhǎng)成完整植株，以上獲得雜種植株的方法叫植物體細(xì)胞雜交，能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的

14、障礙。（2）植物A、B體細(xì)胞雜交形成的雜種植株是四倍體，且該雜種植株減數(shù)分裂能形成正常配子，理論上是可育的；但如果將甲和乙有性雜交形成的二倍體，減數(shù)分裂由于不存在同源染色體無(wú)法聯(lián)會(huì)，無(wú)法形成正常配子，不可育。（3）在植物組織培養(yǎng)至胚狀體階段，可包裹上人工種皮制備人工種子。（2013天津卷）9.（15 分）花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定劑量的紫外線(xiàn)處理黑芥原生質(zhì)體可使其染色體片段化，并喪失再生能力。再利用此原生質(zhì)體作為部分遺傳物質(zhì)的供體與完整的花椰菜原生質(zhì)體融合，以獲得抗黑腐病雜種植株。流程如下圖。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：（1）過(guò)程所需的酶是 。（2）過(guò)程后，

15、在顯微鏡下觀察融合的活細(xì)胞中有供體的 存在，這一特征可作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。（3）原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇以保持一定的滲透壓，其作用是 。原生質(zhì)體經(jīng)過(guò) 再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。（4）若分析再生植株的染色體變異類(lèi)型，應(yīng)剪取再生植株和 植株的根尖，通過(guò) 、 、染色和制片等過(guò)程制成裝片，然后在顯微鏡下觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。（5）采用特異性引物對(duì)花椰菜和黑芥基因組DNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，得到兩親本的差異性條帶，可用于雜種植株的鑒定。下圖是用該引物對(duì)雙親及再生植株14 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增的結(jié)果。據(jù)圖判斷，再生植株14 中一定是雜種植株的有 。（6）對(duì)雜種植株進(jìn)行

16、接種實(shí)驗(yàn)，可篩選出具有高抗性的雜種植株?！敬鸢浮浚?）纖維素酶和果膠酶（2）葉綠體（3）保持原生質(zhì)體完整性細(xì)胞壁（4）雙親（或花椰菜和黑芥） 解離漂洗（5）1、2、4 （6）黑腐病菌【解析】（1）過(guò)程表示原生質(zhì)體的制備，要用纖維素酶和果膠酶去掉植物細(xì)胞的細(xì)胞壁（2）用于融合的兩個(gè)細(xì)胞，一個(gè)是黑芥苗的葉肉細(xì)胞，一個(gè)是花椰菜的根部細(xì)胞，其中供體細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)是葉綠體，可通過(guò)觀察葉綠體的有無(wú)作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。（3）原生質(zhì)體沒(méi)有細(xì)胞壁的保護(hù)，需要加入適宜濃度的甘露醇以保證滲透壓的穩(wěn)定，以避免原生質(zhì)體吸水或失水破壞原生質(zhì)體的完整性；原生質(zhì)體通過(guò)細(xì)胞壁雜聲形成雜種細(xì)胞，進(jìn)而形成愈傷組織。（4）分

17、析再生植株染色體變異類(lèi)型，需要將再生植株細(xì)胞染色體和黑芥苗與花椰菜細(xì)胞中的染色體制片觀察進(jìn)行比較，制片的基本程序是解離、漂洗、染色、制片。（5）根據(jù)圖譜，花椰菜含有堿基對(duì)為300 和600 的DNA 片段，黑芥還有堿基對(duì)為1000、1300 和1500 的片段，再生植株3,只含有長(zhǎng)度為300 和600 的片段，與花椰菜一致，1、2、4 既含有花椰菜DNA 片段，又含有黑芥DNA 片段，為雜種植株。（6）對(duì)雜種植株接種黑腐病菌，能正常生長(zhǎng)的即為具有高抗性的雜種植株?！驹囶}評(píng)價(jià)】本題以抗黑腐病花椰菜的培育為信息載體，綜合考查了植物細(xì)胞工程、細(xì)胞分裂裝片的制作觀察、PCR 圖譜的識(shí)別等相關(guān)內(nèi)容，同時(shí)

18、也考查了考生識(shí)圖獲取信息的能力，具有一定難度。（2013山東卷）35.（8分）【生物現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題】科學(xué)家通過(guò)誘導(dǎo)黑鼠體細(xì)胞去分化獲得誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（iPS），繼而利用iPS細(xì)胞培育出與黑鼠遺傳特性相同的克隆鼠，流程如下：（1）從黑鼠體內(nèi)獲得體細(xì)胞后，對(duì)其進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱(chēng)為 ，培養(yǎng)的細(xì)胞在貼壁成長(zhǎng)至充鏈滿(mǎn)培養(yǎng)皿底時(shí)停止分裂，這種現(xiàn)象稱(chēng)為 （2）圖中2細(xì)胞胚胎可用人工方法從灰鼠輸卵管內(nèi)獲得，該過(guò)程稱(chēng)為 ，也可從灰鼠體內(nèi)取出卵子，通過(guò) 后進(jìn)行早期胚胎培養(yǎng)獲得。（3）圖中重組囊胚通過(guò) 技術(shù)移入白鼠子宮內(nèi)繼續(xù)發(fā)育，暫不移入的胚胎可使用 方法保存。（4）小鼠胚胎干細(xì)胞（ES）可由囊胚的 分離培養(yǎng)獲得

19、，iPS與ES細(xì)胞同樣具有發(fā)育全能性，有望在對(duì)人類(lèi)iPS細(xì)胞進(jìn)行定向 后用于疾病的細(xì)胞治療。【答案】（1）原代培養(yǎng) 接觸抑制 （2）沖卵 體外受精 （3）胚胎移植 冷凍（或低溫）（4）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞 誘導(dǎo)分化【解析】（1）原代培養(yǎng)指將動(dòng)物組織用酶處理成單個(gè)細(xì)胞后進(jìn)行的初次培養(yǎng)。接觸抑制指貼壁的細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止裂增殖的現(xiàn)象。（2）將早期胚胎從母牛子宮中沖洗出來(lái)的方法叫沖卵。  （3）暫不進(jìn)行胚胎移植的胚胎可放入196的液氮中冷凍保存。  （4）胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱(chēng)ES或EK細(xì)胞，是由早期胚胎或原始性腺分離出來(lái)的一類(lèi)細(xì)胞。iPS與ES細(xì)胞一樣，可通過(guò)誘導(dǎo)定向分

20、化修補(bǔ)某些功能異常的細(xì)胞來(lái)治療疾病。（2013海南卷）31.【生物選修3：現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題】（15分）單純皰疹病毒型（HSV-）可引起水皰性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV-的單克隆抗體可快速檢測(cè)HSV-?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）在制備抗HSV-的單克隆抗體的過(guò)程中，先給小鼠注射一種純化的HSV-蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗 的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，說(shuō)明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了 反應(yīng)，再?gòu)男∈蟮?中獲取B淋巴細(xì)胞。將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的 細(xì)胞融合，再經(jīng)過(guò)篩選、檢測(cè)，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是 。（2）若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的 中使其增殖，再?gòu)?中提

21、取、純化獲得。（3）通過(guò)上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識(shí)別這種HSV-蛋白，其原因是該抗體具有 和 等特性?！窘馕觥浚?）由題意可知，單純皰疹病毒型可引起水泡性口炎，病毒蛋白HSV-可以作為一種抗原刺激機(jī)體通過(guò)免疫反應(yīng)產(chǎn)生特異性抗體。在單克隆抗體的制備過(guò)程中，首先應(yīng)注射純化的HSV-蛋白作為抗原，一段時(shí)間后對(duì)小鼠血清進(jìn)行檢測(cè)，如果抗HSV-蛋白的抗體檢測(cè)為陽(yáng)性，說(shuō)明小鼠體內(nèi)通過(guò)體液免疫產(chǎn)生了特異性抗體。此時(shí)可以從小鼠的免疫器官中，如脾臟、骨髓、淋巴結(jié)等部位獲取已免疫的B淋巴細(xì)胞，與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)過(guò)篩選檢測(cè)獲得能穩(wěn)定的產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。已免疫的B淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生特異性抗體的

22、特點(diǎn)，而骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖，因此獲得的雜交瘤細(xì)胞具有既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體（抗HSV-蛋白的抗體）的特點(diǎn)。（2）獲得大量單克隆抗體途徑有兩種：體外培養(yǎng)和體內(nèi)培養(yǎng)。體外培養(yǎng)即通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得大量的雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生大量的單克隆抗體；體內(nèi)培養(yǎng)即將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的腹腔中增殖，最后從小鼠的腹水中提取、純化單克隆抗體。（3）單克隆抗體是通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)單一的B淋巴細(xì)胞核雜交瘤細(xì)胞融合而獲得的，因此融合后的細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體，所制備的單克隆抗體具有特異性強(qiáng)，靈敏度高的特點(diǎn)?！驹囶}點(diǎn)評(píng)】本題以皰疹病毒為素材切入，綜合考查了學(xué)生對(duì)單克隆抗體的制備原理、過(guò)程及其特點(diǎn)的理解。旨在

23、考查學(xué)生的理解和應(yīng)用能力。（課標(biāo)卷）40.生物選修3：現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題（15分）某研究者用抗原（A）分別免疫3只同種小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測(cè)定各小鼠血清抗體的效價(jià)（能檢測(cè)出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù)），結(jié)果如下圖所示。若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞（染色體數(shù)目40條），并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞（染色體數(shù)目60條）按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測(cè)，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時(shí)，所用免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過(guò) 次

24、免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是 小鼠，理由是 。（2）細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有 ，體系中出現(xiàn)多種類(lèi)型細(xì)胞的原因是 。（3）雜交瘤細(xì)胞中有 個(gè)細(xì)胞核，染色體數(shù)目最多是 條。（4）未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是 ?！敬鸢浮浚?）四 Y Y小鼠的抗體效價(jià)最高（2）B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞 細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%（3）1 100（4）不能無(wú)限增殖【解析】（1）據(jù)圖分析，第四次注射后X、Y、Z小鼠的血清抗體效價(jià)均達(dá)到160

25、00以上，小鼠Y的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體效價(jià)最高，最適用于制備單克隆抗體。（2）融合體系中除了未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞之外，還有骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的自身融合產(chǎn)物，由于細(xì)胞膜具有流動(dòng)性，且誘導(dǎo)之后的細(xì)胞融合不具有特異性，故體系中會(huì)出現(xiàn)多種類(lèi)型的細(xì)胞。（3）雜交瘤細(xì)胞形成后，小鼠的免疫B淋巴細(xì)胞核與其骨髓瘤細(xì)胞核會(huì)融合形成一個(gè)細(xì)胞核。小鼠的B淋巴細(xì)胞（染色體數(shù)目40條）和骨髓瘤細(xì)胞（染色體數(shù)目60條）融合后，染色體可達(dá)100條。（4）未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后，仍然不是能惡性增殖的細(xì)胞，同時(shí)正常細(xì)胞的分裂次數(shù)是有限的。（江蘇卷）29.（9分）為了獲得植物次生代謝產(chǎn)物，先用植物外植體獲得愈傷

26、組織，然后在液體培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）外植體經(jīng)誘導(dǎo)后形成愈傷組織的過(guò)程稱(chēng)為 。（2）在愈傷組織懸浮培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞干重、蔗糖濃度和pH的變化如右圖所示。細(xì)胞干重在12d后下降的原因有 ；培養(yǎng)液中蔗糖的作用是 、 。（3）多倍體愈傷組織細(xì)胞產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物量常高于二倍體。二倍體愈傷組織細(xì)胞經(jīng) 處理，會(huì)產(chǎn)生染色體加倍的細(xì)胞。為檢測(cè)愈傷組織細(xì)胞染色體數(shù)目，壓片前常采用纖維素酶和 酶解離愈傷組織。若愈傷組織細(xì)胞（2n）經(jīng)誘導(dǎo)處理后，觀察到染色體數(shù)為8n的細(xì)胞，合理的解釋是 、 。（4）為了更好地獲得次生代謝產(chǎn)物，生產(chǎn)中采用植物細(xì)胞的固定化技術(shù)，其原理與酵母細(xì)胞固定化類(lèi)似。下列說(shuō)法正確的

27、有 （填序號(hào)）。選取旺盛生長(zhǎng)的愈傷組織細(xì)胞包埋 必須在光照條件下培養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程中需通空氣 固定化后植物細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)變慢【答案】（9分）（1）脫分化 （2）蔗糖濃度下降，pH降低 提供能源 調(diào)節(jié)滲透壓（3）秋水仙素（低溫） 果膠 經(jīng)加倍到4n的細(xì)胞處于有絲分裂后期 經(jīng)加倍到8n的細(xì)胞處于有絲分裂中期 （4）【解析】本題考查的是植物組織培養(yǎng)、染色體變異及細(xì)胞固定化。（1）外植體在人工、無(wú)菌條件下，經(jīng)脫分化可形成愈傷組織。（2）由圖蔗糖濃度下降，可知外植體離體培養(yǎng)過(guò)程中需要消耗蔗糖，12天后蔗糖濃度變化不大；pH下降會(huì)影響酶的活性，愈傷組織細(xì)胞對(duì)物質(zhì)的合成小于分解，細(xì)胞干重下降。植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，蔗糖

28、既能維持一定的滲透壓，又能提供植物細(xì)胞生命活動(dòng)必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（能量）。（3）一定濃度的秋水仙素或低溫都可抑制紡錘體的形成，使子染色體不能移向兩極，從而使細(xì)胞中染色體數(shù)目加倍。植物細(xì)胞間的成分主要是纖維素和果膠，可通過(guò)纖維素酶、果膠酶破壞細(xì)胞間的物質(zhì)，從而使愈傷組織細(xì)胞分離。在培養(yǎng)過(guò)程中，各個(gè)細(xì)胞所處時(shí)期不同，在用秋水仙素或低溫處理后，一定時(shí)間內(nèi)不同時(shí)期細(xì)胞分裂次數(shù)不同，從而會(huì)出現(xiàn)染色體為2n、4n、8n等的細(xì)胞，4n的細(xì)胞在有絲分裂后期著絲點(diǎn)分裂染色體數(shù)目加倍至8n；8n的細(xì)胞在有絲分裂中期能清晰看出8n條染色體。（4）為了更好地獲得次生代謝產(chǎn)物，應(yīng)選用生長(zhǎng)旺盛的愈傷組織。愈傷組織不能進(jìn)行光合作用，因此要通入無(wú)菌空氣確保其正常的生命活動(dòng)。細(xì)胞的固定通常使用包埋法，由于包埋材料的影響，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的擴(kuò)散都受到一定的限制，所以固定化細(xì)胞