暗視場和相差顯微鏡

1、1暗視場顯微鏡及相差暗視場顯微鏡及相差顯微鏡的使用顯微鏡的使用2實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康恼莆瞻狄晥鲲@微鏡及相差顯微鏡的掌握暗視場顯微鏡及相差顯微鏡的原理、構(gòu)造及使用方法原理、構(gòu)造及使用方法 。3實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容一一 暗視場顯微鏡暗視場顯微鏡 1 實驗原理實驗原理 2 結(jié)構(gòu)特點結(jié)構(gòu)特點 3 使用方法使用方法 4 注意事項注意事項 二二 相差顯微鏡相差顯微鏡 1 實驗原理實驗原理 2 結(jié)構(gòu)特點結(jié)構(gòu)特點 3 使用方法使用方法三三 觀察動植物細胞的胞質(zhì)運動和胞質(zhì)環(huán)流觀察動植物細胞的胞質(zhì)運動和胞質(zhì)環(huán)流4一一 暗視場顯微鏡暗視場顯微鏡（一（一 ）實驗原理）實驗原理 暗視野顯微鏡是以丁達爾效應(yīng)為基礎(chǔ)，通過暗視野顯微

2、鏡是以丁達爾效應(yīng)為基礎(chǔ)，通過特殊的聚光器，使照射樣品的直射光不能進入物特殊的聚光器，使照射樣品的直射光不能進入物鏡，只有被照樣品表面反射或衍射的散射光進入鏡，只有被照樣品表面反射或衍射的散射光進入物鏡，因而在黑暗的視野中形成物體明亮的像。物鏡，因而在黑暗的視野中形成物體明亮的像。5圖1 暗視野聚光器工作原理6（二）（二） 結(jié)構(gòu)特點結(jié)構(gòu)特點1.丁達爾效應(yīng)：光通過渾濁媒質(zhì)時丁達爾效應(yīng)：光通過渾濁媒質(zhì)時 ,渾濁媒質(zhì)所渾濁媒質(zhì)所呈現(xiàn)的光的強烈散射現(xiàn)象呈現(xiàn)的光的強烈散射現(xiàn)象,通常稱為丁達爾效應(yīng)通常稱為丁達爾效應(yīng)2.暗視野照明方法暗視野照明方法（1）暗視場光擋）暗視場光擋（2）暗視場聚光器）暗視場聚光器

3、拋物面聚光器拋物面聚光器 心形聚光器心形聚光器7（三（三 ）使用方法）使用方法 1. 換上暗視野聚光器換上暗視野聚光器2. 聚光器和載玻片之間加香柏油并貼緊（或聚光器和載玻片之間加香柏油并貼緊（或直接用干燥系聚光器）直接用干燥系聚光器）3. 聚光器光路合軸聚光器光路合軸4. 更換需用的高倍物鏡進行鏡檢觀察更換需用的高倍物鏡進行鏡檢觀察8（四）應(yīng)用價值及注意事項（四）應(yīng)用價值及注意事項觀察活細胞結(jié)構(gòu)觀察活細胞結(jié)構(gòu) ,細胞器運動等分子布朗運細胞器運動等分子布朗運動動 .觀察超微質(zhì)點位移觀察超微質(zhì)點位移(0.20.004微米微米)提高分辨力提高分辨力50倍倍由于是散射光成像和實體有差別由于是散射光成

4、像和實體有差別 ,僅有結(jié)構(gòu)的僅有結(jié)構(gòu)的光輪廓，不能分辨內(nèi)部改造光輪廓，不能分辨內(nèi)部改造9 觀察原生動物的結(jié)構(gòu)，細胞器，觀察原生動物的結(jié)構(gòu)，細胞器，細胞質(zhì)中超微質(zhì)點的運動，存在方式，細胞質(zhì)中超微質(zhì)點的運動，存在方式，觀察植物細胞器，細胞質(zhì)運動。觀察植物細胞器，細胞質(zhì)運動。（五）（五） 鏡檢鏡檢10二二 相差顯微鏡相差顯微鏡（一）實驗原理（一）實驗原理 相差顯微鏡是利用特殊的相差裝置 ,通過光的衍射和干涉效應(yīng)把光波通過樣品的相位差變?yōu)檎穹钜栽龃笸该魑矬w的明暗反差 ,從而可以用來觀察未染色的活體組織和細胞結(jié)構(gòu)的一種儀器11 相位相位: 是指在某一時間上，光的波動所能達到的位置 . 相差相差: 是指

5、相同波長的光線經(jīng)過折射率不同的介質(zhì)，其相位發(fā)生變化而產(chǎn)生的位差，相差一般不為肉眼所分辨，而相位的變化是由光程的差別造成的。 光程光程: 是指媒質(zhì)的折射率和媒質(zhì)厚度的乘積。 衍射衍射: 光在不均一的媒質(zhì)中傳播，其方向發(fā)生彎曲變化，形成衍射光，此為衍射現(xiàn)象。衍射光和直射光比較有1/4 的相位差，振幅亦弱 。 干涉干涉: 直射光和衍射光相遇會發(fā)生迭加現(xiàn)象造成振幅的變化，或明或暗。12圖2 光波通過不同介質(zhì)時產(chǎn)生的相位差13圖3 直射光及衍射光的產(chǎn)生與波動14圖4 相差顯微鏡的光路圖15（二（二 ） 相差顯微鏡的結(jié)構(gòu)特相差顯微鏡的結(jié)構(gòu)特 1. 用環(huán)狀光闌代替可變光闌：把直射光所成的像從衍射旁像中分出來

6、。 2. 用相差物鏡(內(nèi)含相板)代替普通物鏡相板結(jié)構(gòu) 共軛面:環(huán)狀，通過直射光 補償面:非環(huán)狀，通過衍射光相板作用:將直射光和衍射光分別加以相位調(diào)整 及強度削弱 . 相板類型:明相差或負相差 ,暗相差或 正相差 . 3. 用中心望遠鏡合軸調(diào)中 4. 光源和濾色鏡：強光低熱和綠色濾色鏡16圖5 相板結(jié)構(gòu)示意圖17圖6 光的干涉及明暗相差形成的圖解18相差裝置的安裝 相差物鏡的調(diào)換安裝 轉(zhuǎn)盤聚光器的調(diào)換安裝 把綠色濾色鏡放入鏡座的濾色鏡架上 聚光器的調(diào)中 相板圓環(huán)與環(huán)狀光闌圓 ,薄則環(huán)的合軸調(diào)中 相差物鏡與環(huán)狀光闌的匹配 把CT放入目鏡筒 明環(huán)和暗環(huán)的聚焦 明環(huán)和暗環(huán)的調(diào)中重疊 回裝觀察目鏡 （三

7、）（三） 使用方法使用方法19圖7 相差聚光器及合軸望遠鏡20圖8 光環(huán)與相板的合軸過程a 未調(diào)整狀態(tài) b 近調(diào)整狀態(tài) c 正常態(tài)21 字母 反差 應(yīng) 用 P 正觀察細胞和細胞核的內(nèi)部結(jié)構(gòu) N 負觀察微小的物體 ,如孢子 ,鞭毛和活的樣品等 H 高當(dāng)樣品反差較低時 L 低當(dāng)樣品反差較高時 M 中當(dāng)樣品反差為中等時四四 相差物鏡的選擇相差物鏡的選擇22（五）觀察（五）觀察:培養(yǎng)的草履蟲裝片及其它原生動物鴨趾草下表皮（質(zhì)點顫動）鴨趾草雄蕊毛（胞質(zhì)環(huán)流）注意事項注意事項:制片愈薄愈好（20微米以下）必須加蓋片，否則圓環(huán)和亮環(huán)不重合，反差不好。玻片無傷，均勻，平整，以免亮環(huán)發(fā)生歪斜，制片厚度不超過 1.0