基礎微生物學革蘭氏染色原理ppt課件

1、G G菌：細胞壁厚，肽聚糖網狀分子形成一種透性障，當乙醇脫色菌：細胞壁厚，肽聚糖網狀分子形成一種透性障，當乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結晶紫時，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結晶紫- -碘復合物在細胞膜上。碘復合物在細胞膜上。呈紫色。呈紫色。G菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結構收縮，其脂菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結構收縮，其脂含量高含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結晶紫乙醇將脂溶解，縫隙加大，結晶紫-碘復合物溶出細胞壁，碘復合物溶出細胞壁，沙黃復染后呈紅色。沙黃復染后呈紅色。革蘭氏染色原理：革蘭氏染色原理：第一步：結晶紫使菌體著上紫色第一步：結晶紫使菌體著

2、上紫色第二步：碘和結晶紫形成脂溶性大分第二步：碘和結晶紫形成脂溶性大分子復合物，分子大，能被細胞壁阻留子復合物，分子大，能被細胞壁阻留在細胞內。在細胞內。第三步：酒精脫色，細胞壁成分和構第三步：酒精脫色，細胞壁成分和構造不同，出現(xiàn)不同的反應。造不同，出現(xiàn)不同的反應。第四步：沙黃復染，增加脫色菌與背第四步：沙黃復染，增加脫色菌與背景的反差并區(qū)別于未脫色菌。景的反差并區(qū)別于未脫色菌。溶菌酶對細胞壁的作用溶菌酶對細胞壁的作用可切斷可切斷NAMNAM和和NAGNAG之之間的間的11，4 4糖苷鍵，糖苷鍵，引起細菌裂解。引起細菌裂解。 對對GG菌，在菌，在EDTAEDTA存存在下，受溶菌酶作用。在下，受

3、溶菌酶作用。 溶菌酶處理后的菌溶菌酶處理后的菌細胞應保存在弱高滲細胞應保存在弱高滲0.1 0.2M0.1 0.2M蔗糖液蔗糖液中。中。青霉素對細菌細胞壁的作用青霉素對細菌細胞壁的作用 Penicillium Penicillium與轉肽酶結合，而使該酶失活，與轉肽酶結合，而使該酶失活，抑制了側鏈末端的丙氨酸與五肽橋的連接，破壞了抑制了側鏈末端的丙氨酸與五肽橋的連接，破壞了細菌細胞壁的完整性即抑制肽聚糖的合成），因細菌細胞壁的完整性即抑制肽聚糖的合成），因此，此， PenicilliumPenicillium僅對正在生長著的細菌，且主要僅對正在生長著的細菌，且主要是對是對G+G+菌有效。菌有效。

4、6周質空間周質空間periplasmic space）又稱壁膜空間。指位于細胞壁與細胞膜之又稱壁膜空間。指位于細胞壁與細胞膜之間的狹窄間隙，革蘭氏陽性細菌與陰性細間的狹窄間隙，革蘭氏陽性細菌與陰性細菌均有。內中含有多種蛋白質，例如蛋白菌均有。內中含有多種蛋白質，例如蛋白酶、核酸酶等各種解聚酶，運送某些物質酶、核酸酶等各種解聚酶，運送某些物質進入細胞的結合蛋白，以及趨化性的受體進入細胞的結合蛋白，以及趨化性的受體蛋白等。蛋白等。Table 8. Representative periplasmic proteins in E. coli. Binding proteins For amino a

5、cids (e.g. histadine, arginine) For sugars (e.g. glucose, maltose) For vitamins (e.g. thiamine, vitamin B12) For ions (e.g. phosphate, sulfate) Biosynthetic enzymes For murein assembly (e.g. transglycosylases, carboxypeptidases, transpeptidases) For fimbrial subunit secretion and assembly (e.g. chap

6、eronins) Degradative enzymes phosphatases proteases Detoxifying enzymes Beta-lactamases (e.g. penicillinase) Aminoglycoside-phosphorylating enzymes7細胞壁缺損型細菌細胞壁缺損型細菌原生質體原生質體protoplast球形體球形體spheroplastL型細菌型細菌L-form原生質體的特點：原生質體的特點：1、無細胞壁，為圓球形、無細胞壁，為圓球形 2、對環(huán)境敏感：滲透壓，震蕩，離心，易溶菌、對環(huán)境敏感：滲透壓，震蕩，離心，易溶菌 3、有鞭毛，而不

7、能運動、有鞭毛，而不能運動 4、不被噬菌體感染因為失去吸附位點）、不被噬菌體感染因為失去吸附位點）1.1.概念：細胞膜是緊概念：細胞膜是緊貼細胞壁內側包圍細貼細胞壁內側包圍細胞質的一層柔軟，富胞質的一層柔軟，富有彈性的半透明薄膜。有彈性的半透明薄膜。1972年Singer和Nicolson提出的細胞膜液態(tài)鑲嵌模型細胞膜液態(tài)鑲嵌模型細胞膜液態(tài)鑲嵌模型以為：膜是由球形蛋白以為：膜是由球形蛋白與磷脂按照二維排列方與磷脂按照二維排列方式構成的流體鑲嵌式，式構成的流體鑲嵌式，流動的脂類雙分子層構流動的脂類雙分子層構成了膜的連續(xù)體，而蛋成了膜的連續(xù)體，而蛋白質象孤島一樣無規(guī)則白質象孤島一樣無規(guī)則地漂流在磷

8、脂類的海洋地漂流在磷脂類的海洋當中。當中。Figure 10. Fluid mosaic model of a biological membrane. In aqueous environments membrane phospholipids arrange themselves in such a way that they spontaneously form a fluid bilayer. Membrane proteins, which may be structural or functional, may be permanently or transiently assoc

9、iated with one side or the other of the membrane, or even be permanently built into the bilayer, while other proteins span the bilayer and may form transport channels through the membrane. a) a) 控制細胞內外物質營養(yǎng)物質和代謝廢物的運送、控制細胞內外物質營養(yǎng)物質和代謝廢物的運送、交換；交換；b) b) 維持細胞內正常滲透壓的滲透屏障作用；維持細胞內正常滲透壓的滲透屏障作用；c) c) 合成細胞壁各種組分

10、合成細胞壁各種組分LPSLPS、肽聚糖、磷壁酸和莢、肽聚糖、磷壁酸和莢膜物質等大分子的場所；膜物質等大分子的場所；d) d) 進行氧化磷酸化或光合磷酸化的產能基地；進行氧化磷酸化或光合磷酸化的產能基地；e) e) 參與能量代謝，在細菌中，電子傳遞鏈和參與能量代謝，在細菌中，電子傳遞鏈和ATPATP合成酶合成酶均位于細胞膜；均位于細胞膜；f) f) 提供鞭毛的著生點并提供鞭毛運動所需能量。提供鞭毛的著生點并提供鞭毛運動所需能量。Table 6. Functions of the procaryotic plasma membrane. 1. Osmotic or permeability bar

11、rier 2. Location of transport systems for specific solutes (nutrients and ions) 3. Energy generating functions, involving respiratory and photosynthetic electron transport systems, establishment of proton motive force, and transmembranous, ATP-synthesizing ATPase 4. Synthesis of membrane lipids (inc

12、luding lipopolysaccharide in Gram-negative cells) 5. Synthesis of murein (cell wall peptidoglycan) 6. Assembly and secretion of extracytoplasmic proteins 7. Coordination of DNA replication and segregation with septum formation and cell division 8. Chemotaxis (both motility per se and sensing functions