PCR檢測(cè)方法分析性能評(píng)價(jià)ppt課件

1、 PCR檢測(cè)系統(tǒng)分析性能驗(yàn)證檢測(cè)系統(tǒng)分析性能驗(yàn)證 相關(guān)規(guī)定 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和才干認(rèn)可準(zhǔn)那么在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)領(lǐng)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和才干認(rèn)可準(zhǔn)那么在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南域的指南CNAS-GL xx 5.5.2) CNAS-GL xx 5.5.2) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在運(yùn)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)之前驗(yàn)證所運(yùn)用的檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在運(yùn)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)之前驗(yàn)證所運(yùn)用的檢驗(yàn)方法和程序的分析性能方法和程序的分析性能. .對(duì)于定量檢測(cè)工程內(nèi)容至少包對(duì)于定量檢測(cè)工程內(nèi)容至少包括正確度、精細(xì)度、可報(bào)告括正確度、精細(xì)度、可報(bào)告( (或線性或線性) )范圍范圍. .對(duì)于定性檢對(duì)于定性檢測(cè)工程內(nèi)容應(yīng)包括靈敏度、特異性或符合率及反復(fù)性測(cè)工程內(nèi)容應(yīng)包括靈敏度

2、、特異性或符合率及反復(fù)性 上海市醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)審核方法上海市醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)審核方法 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室在技術(shù)審核前應(yīng)完成擬臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室在技術(shù)審核前應(yīng)完成擬開展檢測(cè)工程方法學(xué)驗(yàn)證。方法學(xué)驗(yàn)證明驗(yàn)應(yīng)包括但開展檢測(cè)工程方法學(xué)驗(yàn)證。方法學(xué)驗(yàn)證明驗(yàn)應(yīng)包括但不限于：精細(xì)度、正確度、檢測(cè)限、線性范圍、可報(bào)不限于：精細(xì)度、正確度、檢測(cè)限、線性范圍、可報(bào)告范圍、特異性實(shí)驗(yàn)告范圍、特異性實(shí)驗(yàn) 什么情況下要做性能驗(yàn)證 開展新工程開展新工程 改換檢測(cè)系統(tǒng)改換檢測(cè)系統(tǒng): :改換儀器或試劑改換儀器或試劑 分析性能驗(yàn)證工程分析性能驗(yàn)證工程 對(duì)配套系統(tǒng)對(duì)配套系統(tǒng), ,普通驗(yàn)證以下目的

3、普通驗(yàn)證以下目的 精細(xì)度精細(xì)度 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 可報(bào)告范圍可報(bào)告范圍 參考區(qū)間參考區(qū)間 對(duì)非配套系統(tǒng)除驗(yàn)證上述目的外對(duì)非配套系統(tǒng)除驗(yàn)證上述目的外 分析靈敏度分析靈敏度 分析特異性分析特異性 根據(jù)文件(CLSI 文件) EP5-A2:EP5-A2:定量丈量方法的精細(xì)度性能評(píng)價(jià)定量丈量方法的精細(xì)度性能評(píng)價(jià) EP6-A:EP6-A:定量丈量方法的線性評(píng)價(jià)定量丈量方法的線性評(píng)價(jià) EP7-A:EP7-A:臨床化學(xué)的干擾實(shí)驗(yàn)臨床化學(xué)的干擾實(shí)驗(yàn) EP9-A2:EP9-A2:用患者樣本進(jìn)展方法學(xué)比對(duì)及偏倚評(píng)價(jià)用患者樣本進(jìn)展方法學(xué)比對(duì)及偏倚評(píng)價(jià) EP12-A2:EP12-A2:定性實(shí)驗(yàn)方法評(píng)價(jià)用戶協(xié)議定性實(shí)驗(yàn)方法

4、評(píng)價(jià)用戶協(xié)議 EP15-A2: EP15-A2: 用戶對(duì)精細(xì)度和準(zhǔn)確度核實(shí)實(shí)驗(yàn)用戶對(duì)精細(xì)度和準(zhǔn)確度核實(shí)實(shí)驗(yàn) EP17-A: EP17-A: 檢出限和定量檢出限確定方案檢出限和定量檢出限確定方案 C28-A2: C28-A2: 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間的定義和確定醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間的定義和確定 性能驗(yàn)證前的預(yù)備 應(yīng)熟習(xí)待驗(yàn)證的檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)熟習(xí)待驗(yàn)證的檢測(cè)系統(tǒng) 應(yīng)熟習(xí)驗(yàn)證方案的步驟應(yīng)熟習(xí)驗(yàn)證方案的步驟(PCR檢測(cè)工程本錢高、陽性標(biāo)檢測(cè)工程本錢高、陽性標(biāo)本來源困難本來源困難,精細(xì)度和正確度驗(yàn)證可以采用精細(xì)度和正確度驗(yàn)證可以采用EP15-A2 文文件件) 制定質(zhì)量保證措施制定質(zhì)量保證措施 確保足夠的樣本數(shù)量和

5、覆蓋較寬檢測(cè)范圍確保足夠的樣本數(shù)量和覆蓋較寬檢測(cè)范圍 確定比較方法確定比較方法 EP15-A2:精細(xì)度和準(zhǔn)確度性能的用戶驗(yàn)證 實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證方法的操作與廠家的聲明一致實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證方法的操作與廠家的聲明一致 為驗(yàn)證反復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精細(xì)度的聲明提供方案和數(shù)為驗(yàn)證反復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精細(xì)度的聲明提供方案和數(shù)據(jù)分析據(jù)分析 其他的其他的 CLSI CLSI 文件為廠家做出精細(xì)度文件為廠家做出精細(xì)度(EP5-A2)(EP5-A2)和準(zhǔn)確和準(zhǔn)確度度(EP9-A2)(EP9-A2)的聲明提供指南的聲明提供指南 精細(xì)度驗(yàn)證 反復(fù)性反復(fù)性: :指在一樣條件指在一樣條件 ( (時(shí)間、操作者、儀器時(shí)間、操作者、儀器) )下獲得

6、下獲得的精細(xì)度的精細(xì)度, ,也稱批內(nèi)精細(xì)度也稱批內(nèi)精細(xì)度 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精細(xì)度實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精細(xì)度: :同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，運(yùn)用一樣的設(shè)備同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，運(yùn)用一樣的設(shè)備, , 在在不同時(shí)間內(nèi)獲得的精細(xì)度不同時(shí)間內(nèi)獲得的精細(xì)度, ,也稱總精細(xì)度也稱總精細(xì)度.(.(不包括大的不包括大的設(shè)備維護(hù)、儀器校準(zhǔn)和改換試劑批號(hào)等設(shè)備維護(hù)、儀器校準(zhǔn)和改換試劑批號(hào)等) ) 實(shí)驗(yàn)要求 試劑試劑: :同一批號(hào)同一批號(hào) 實(shí)驗(yàn)樣本實(shí)驗(yàn)樣本 以前分析過的病人樣本以前分析過的病人樣本 其他知值的物質(zhì)其他知值的物質(zhì) 濃度要求濃度要求: : 醫(yī)學(xué)決議程度醫(yī)學(xué)決議程度 廠家闡明書精細(xì)度目的所用濃度廠家闡明書精細(xì)度目的所用濃度 內(nèi)容內(nèi)容 反復(fù)性反復(fù)性

7、 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精細(xì)度實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精細(xì)度 實(shí)驗(yàn)步驟 根據(jù)廠家聲明的精細(xì)度比例關(guān)系可分為根據(jù)廠家聲明的精細(xì)度比例關(guān)系可分為3 3種情況種情況: : 1) 1)假設(shè)假設(shè)批內(nèi)批內(nèi)2/3 2/3 2/3 總總: :每天分析每天分析1 1批次批次,2,2個(gè)濃度個(gè)濃度, ,每個(gè)濃度反復(fù)測(cè)定每個(gè)濃度反復(fù)測(cè)定3 3次次, ,延續(xù)延續(xù)3 3天天. . 3) 3)假設(shè)假設(shè)批內(nèi)與批內(nèi)與 總相對(duì)關(guān)系未知總相對(duì)關(guān)系未知: :每天分析每天分析1 1批批次次,2,2個(gè)濃度個(gè)濃度, ,每個(gè)濃度反復(fù)測(cè)定每個(gè)濃度反復(fù)測(cè)定4 4次次, ,延續(xù)延續(xù)5 5天天. . 每天做室內(nèi)質(zhì)控每天做室內(nèi)質(zhì)控, ,假設(shè)失控假設(shè)失控, ,剔除數(shù)據(jù)剔除數(shù)據(jù), ,

8、重新進(jìn)展測(cè)定重新進(jìn)展測(cè)定 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處置實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處置: :批內(nèi)規(guī)范差、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)規(guī)范差批內(nèi)規(guī)范差、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)規(guī)范差 結(jié)果判別 反復(fù)性驗(yàn)證: 批內(nèi)規(guī)范差廠家聲明,那么經(jīng)過計(jì)算驗(yàn)證值進(jìn)展差別的顯著性檢驗(yàn), 批內(nèi)規(guī)范差驗(yàn)證值驗(yàn)證經(jīng)過 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精細(xì)度驗(yàn)證: 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)規(guī)范差廠家聲明,那么經(jīng)過計(jì)算驗(yàn)證值進(jìn)展差別的顯著性檢驗(yàn), 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)規(guī)范差驗(yàn)證值,驗(yàn)證經(jīng)過 準(zhǔn)確度與正確度、精細(xì)度的關(guān)系 正確度驗(yàn)證正確度驗(yàn)證 比對(duì)方法比對(duì)方法: :用臨床病人樣本進(jìn)展方法學(xué)比對(duì)用臨床病人樣本進(jìn)展方法學(xué)比對(duì), ,類似類似EP9- EP9- A2A2文件文件 參考物質(zhì)參考物質(zhì) 兩種方法間病人標(biāo)本結(jié)果的比較 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)

9、設(shè)計(jì): : 1) 1)搜集搜集2020份病人樣本份病人樣本, ,其濃度分布整個(gè)線性范圍其濃度分布整個(gè)線性范圍, ,不不使使 用超出線性范圍的標(biāo)本用超出線性范圍的標(biāo)本 2) 2)在在3-43-4天時(shí)間內(nèi)天時(shí)間內(nèi), ,每天用實(shí)驗(yàn)和比對(duì)方法測(cè)定每天用實(shí)驗(yàn)和比對(duì)方法測(cè)定5-75-7份份樣本樣本 3) 3)每天做室內(nèi)質(zhì)控每天做室內(nèi)質(zhì)控, ,假設(shè)失控假設(shè)失控, ,剔除剔除, ,問題糾正后重新問題糾正后重新測(cè)定該批標(biāo)本測(cè)定該批標(biāo)本 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處置 計(jì)算每個(gè)標(biāo)本兩種方法間結(jié)果的差別計(jì)算每個(gè)標(biāo)本兩種方法間結(jié)果的差別 偏倚偏倚bi=bi=實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果i-i-比較方法結(jié)果比較方法結(jié)果i i 偏倚偏倚%=1

10、00%(%=100%(實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果i-i-比較方法結(jié)果比較方法結(jié)果i)/i)/比較方法結(jié)果比較方法結(jié)果I I畫出每個(gè)標(biāo)本兩種方法結(jié)果的偏倚或百分比偏倚圖畫出每個(gè)標(biāo)本兩種方法結(jié)果的偏倚或百分比偏倚圖, ,比較兩種方法間在檢測(cè)的濃度范圍內(nèi)標(biāo)本結(jié)果差別能否一致比較兩種方法間在檢測(cè)的濃度范圍內(nèi)標(biāo)本結(jié)果差別能否一致計(jì)算兩種方法間的平均偏倚計(jì)算兩種方法間的平均偏倚計(jì)算偏倚或百分比偏倚的規(guī)范差計(jì)算偏倚或百分比偏倚的規(guī)范差 結(jié)果判別 假設(shè)偏倚假設(shè)偏倚 廠家目的廠家目的( (實(shí)驗(yàn)室目的實(shí)驗(yàn)室目的),),那么經(jīng)過計(jì)算驗(yàn)證那么經(jīng)過計(jì)算驗(yàn)證值進(jìn)展差別的顯著性檢驗(yàn)值進(jìn)展差別的顯著性檢驗(yàn), , 在驗(yàn)證限范圍內(nèi)

11、在驗(yàn)證限范圍內(nèi), ,驗(yàn)證經(jīng)過驗(yàn)證經(jīng)過 選擇廠家聲明中運(yùn)用的比較方法為本方案的比較方法選擇廠家聲明中運(yùn)用的比較方法為本方案的比較方法 如兩種方法在檢測(cè)的濃度范圍內(nèi)標(biāo)本結(jié)果差別不一致如兩種方法在檢測(cè)的濃度范圍內(nèi)標(biāo)本結(jié)果差別不一致,應(yīng)參考應(yīng)參考EP9-A2文件文件(用病人標(biāo)本進(jìn)展方法學(xué)比對(duì)和偏用病人標(biāo)本進(jìn)展方法學(xué)比對(duì)和偏倚評(píng)價(jià)倚評(píng)價(jià))來進(jìn)展實(shí)驗(yàn)來進(jìn)展實(shí)驗(yàn) 運(yùn)用參考物質(zhì)的正確度方案 參考物質(zhì)參考物質(zhì) 1) 1)新穎冰凍人血清或其他一些未摻入成分的人體物新穎冰凍人血清或其他一些未摻入成分的人體物質(zhì)質(zhì): : 已用參考方法或決議性方法定值已用參考方法或決議性方法定值 2) 2)從才干比對(duì)實(shí)驗(yàn)中獲得的參考物從

12、才干比對(duì)實(shí)驗(yàn)中獲得的參考物 3) 3)廠家提供的正確度確認(rèn)物或質(zhì)控物廠家提供的正確度確認(rèn)物或質(zhì)控物 4) 4)實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)物被眾多的實(shí)驗(yàn)室分析實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)物被眾多的實(shí)驗(yàn)室分析, ,他們的均他們的均值可用于評(píng)價(jià)一致性值可用于評(píng)價(jià)一致性 5) 5)由第三方提供的已用一些不同方法定值的物質(zhì)由第三方提供的已用一些不同方法定值的物質(zhì) 實(shí)驗(yàn)步驟 至少至少2 2個(gè)物質(zhì)個(gè)物質(zhì), ,濃度為可報(bào)告范圍中高和低的丈量范圍濃度為可報(bào)告范圍中高和低的丈量范圍 在在3-53-5天內(nèi)每天測(cè)定一次天內(nèi)每天測(cè)定一次, ,每次反復(fù)每次反復(fù)2 2次次 將結(jié)果與設(shè)定要求進(jìn)展比較將結(jié)果與設(shè)定要求進(jìn)展比較, ,比如與才干比對(duì)實(shí)驗(yàn)組織

13、比如與才干比對(duì)實(shí)驗(yàn)組織者的接受規(guī)范或醫(yī)學(xué)允許總誤差來比較者的接受規(guī)范或醫(yī)學(xué)允許總誤差來比較定量檢出限的驗(yàn)證(EP17-A) 概念 能可靠檢出分析物的最低實(shí)踐濃度能可靠檢出分析物的最低實(shí)踐濃度, ,并在該濃度下的總并在該濃度下的總誤差符合準(zhǔn)確度要求誤差符合準(zhǔn)確度要求 總誤差目的來源總誤差目的來源: :實(shí)驗(yàn)室的需求、室間質(zhì)評(píng)結(jié)果、廠家實(shí)驗(yàn)室的需求、室間質(zhì)評(píng)結(jié)果、廠家的聲明的聲明 實(shí)驗(yàn)樣本 低濃度參考物質(zhì)低濃度參考物質(zhì) 知濃度或活性的樣品適當(dāng)稀釋成知濃度或活性的樣品適當(dāng)稀釋成3-5個(gè)低濃度實(shí)驗(yàn)樣品個(gè)低濃度實(shí)驗(yàn)樣品 實(shí)驗(yàn)步驟 至少至少2525個(gè)反復(fù)丈量個(gè)反復(fù)丈量 每個(gè)樣品反復(fù)丈量的結(jié)果與該樣品的參考值

14、比較每個(gè)樣品反復(fù)丈量的結(jié)果與該樣品的參考值比較, ,以確以確定能否超出目的誤差定能否超出目的誤差, ,超越誤差目的的結(jié)果數(shù)量可用于超越誤差目的的結(jié)果數(shù)量可用于評(píng)價(jià)此方法在該濃度能否適宜評(píng)價(jià)此方法在該濃度能否適宜. .20-1000個(gè)檢測(cè)值符合超出LoB預(yù)期95%比例的下限 分析丈量范圍:概念 分析丈量范圍分析丈量范圍( (線性范圍線性范圍):):指患者樣本未經(jīng)任何處置指患者樣本未經(jīng)任何處置( (稀釋、濃縮或其他預(yù)處置稀釋、濃縮或其他預(yù)處置),),由檢測(cè)系統(tǒng)直接丈量得到由檢測(cè)系統(tǒng)直接丈量得到的可靠結(jié)果范圍的可靠結(jié)果范圍, ,在此范圍內(nèi)一系列不同樣本分析物的在此范圍內(nèi)一系列不同樣本分析物的丈量值與

15、其實(shí)踐濃度丈量值與其實(shí)踐濃度( (真值真值) )呈線性比例關(guān)系呈線性比例關(guān)系. . 臨床可報(bào)告范圍臨床可報(bào)告范圍: :指定量檢測(cè)工程向臨床能報(bào)告的檢測(cè)指定量檢測(cè)工程向臨床能報(bào)告的檢測(cè)范圍范圍, ,患者樣本可經(jīng)稀釋、濃縮或其他預(yù)處置患者樣本可經(jīng)稀釋、濃縮或其他預(yù)處置. . 線性線性: :檢測(cè)樣本時(shí)檢測(cè)樣本時(shí), ,在一定范圍內(nèi)可以直接按比例關(guān)系在一定范圍內(nèi)可以直接按比例關(guān)系得出分析物含量的才干得出分析物含量的才干. . 實(shí)驗(yàn)樣品預(yù)備 選擇與臨床樣本同樣的基質(zhì)選擇與臨床樣本同樣的基質(zhì), ,不含干擾物質(zhì)不含干擾物質(zhì); ; 或廠家引薦的產(chǎn)品或廠家引薦的產(chǎn)品 數(shù)量數(shù)量 驗(yàn)證明驗(yàn)驗(yàn)證明驗(yàn):5-7:5-7個(gè)不

16、同濃度的樣本個(gè)不同濃度的樣本, ,高值樣本應(yīng)高高值樣本應(yīng)高于線性上限于線性上限30%,30%,低值樣本低于線性下限低值樣本低于線性下限, , 實(shí)驗(yàn)方法 上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5 5種濃度種濃度, ,按試按試劑闡明書操作劑闡明書操作, ,將每一濃度樣本反復(fù)檢測(cè)將每一濃度樣本反復(fù)檢測(cè)2 2次次, ,計(jì)算線性計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)相關(guān)系數(shù) 結(jié)果判別 線性范圍應(yīng)符合制造商規(guī)定的要求線性范圍應(yīng)符合制造商規(guī)定的要求, ,且線性相且線性相關(guān)系數(shù)關(guān)系數(shù)|r|0.97|r|0.97定性檢測(cè)工程的性能驗(yàn)證 兩種方法 診斷明確的定性檢測(cè)性能評(píng)價(jià)診斷明確的定性檢測(cè)性能評(píng)價(jià): :靈敏度、特異性靈敏度、特異性 診斷不明確的定性檢測(cè)性能評(píng)價(jià)診斷不明確的定性檢測(cè)性能評(píng)價(jià): :結(jié)果的一致性結(jié)果的一致性, , Kappa Kappa值表示值表示 診斷明確的定性檢測(cè) 比較方法比較方法: :目前正在運(yùn)用的、目前正在運(yùn)用的、金規(guī)范金規(guī)范方法、某種定方法、某種定量方法或臨床診斷量方法或臨床診