SMP-QC-0030-00細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)程

1、標(biāo)題細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)程編寫部門頒發(fā)部門生效日期編碼質(zhì)量控制部質(zhì)量保證部日期：20年 月日SMP-QC-0030-00起草人：審核人：審核人：批準(zhǔn)人：日期：20年 月日日期：20年 月日日期：20年 月日日期：20年 月日分發(fā)部門及份數(shù)：質(zhì)量保證部（）份，質(zhì)量控制部（）份，生產(chǎn)技術(shù)部（）份，工程設(shè)備部（）份，綜合管理部（）份。1.0目的1.1建立細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢驗(yàn)試劑的管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2.0范圍2.1適用于公司細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑的采購(gòu)、接收、保存、使用、銷毀、去熱 原物品的存放、邕試劑靈敏度復(fù)核及工作標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)的標(biāo)定。3.0職責(zé)3.1質(zhì)量控制（QC）部對(duì)本操作規(guī)

2、程實(shí)施負(fù)責(zé)。4.0定義4.1 細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品系自大腸埃希菌提取精制而成，用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁邕試 劑靈敏度和標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)。4.2 細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定其效價(jià)，用于試 驗(yàn)中靈敏度的復(fù)核、干擾試驗(yàn)及各種陽性對(duì)照。4.3 細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)使用由中國(guó)藥品生物制品檢定所 統(tǒng)一發(fā)放的標(biāo)準(zhǔn)品。5.0規(guī)程5.1 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑的采購(gòu)5.1.1 細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品按一年的使用量做計(jì)劃。5.1.2 邕試劑、緩沖液、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、無熱原吸頭、無熱原安甑等按半年的使 用量做計(jì)劃，從可靠的

3、供應(yīng)商處購(gòu)買，如湛江安度斯生物有限公司、湛江博康海洋生 物有限公司。5.2 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑的接收5.2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑購(gòu)回后，由生測(cè)組組長(zhǎng)協(xié)同采購(gòu)管理人員驗(yàn)收。5.2.2 驗(yàn)收項(xiàng)目包括：運(yùn)輸條件、內(nèi)包裝、名稱、數(shù)量、規(guī)格、有效期、生產(chǎn)廠家及外 觀檢查等是否復(fù)核請(qǐng)購(gòu)要求或相應(yīng)規(guī)定，如購(gòu)買的是細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，則必須標(biāo)題細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑標(biāo)準(zhǔn)管理 規(guī)程編碼SMP-QC-0030-00有廠家提供的內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)分析證明書，驗(yàn)收不合格的試劑或標(biāo)準(zhǔn)品直接由采購(gòu)?fù)素浱幚砘虬聪嚓P(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程銷毀處理。5.2.3 試劑登記項(xiàng)目包括：試劑名稱、批號(hào)、數(shù)量、規(guī)格、有效

4、期、生產(chǎn)廠家、接收時(shí) 問等。5.3 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑的保存5.3.1 登記過的試劑才能進(jìn)行保存。5.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品、緩沖液于冰箱中冷藏保存，不得冷凍。邕試劑的保存見廠家的說明書。5.3.3 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、無熱原吸頭、無熱原安甑等應(yīng)存放在去熱原物品專柜中， 此柜僅存放已去熱原的物品。5.3.4 若使用的為細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，復(fù)溶后應(yīng)在瓶上貼上開口簽。標(biāo)明開口日期和使用人，封口，直立于冰箱中冷藏28c保存，一般不得過14天,或根據(jù)生產(chǎn)廠家的建議進(jìn)行保存。若為細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，為一次性使用。5.3.5 使用過的緩沖液、復(fù)溶后的邕試劑在瓶上標(biāo)明開瓶日期，用封口膜封口，保持直立，于

5、-20 C保存3個(gè)月，或根據(jù)生產(chǎn)廠家的建議進(jìn)行。5.4 邕試劑復(fù)核及工作標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)定5.4.1 邕試劑靈敏度的復(fù)核見細(xì)菌內(nèi)毒素凝膠檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。5.4.1.1 每購(gòu)入一批新的邕試劑應(yīng)進(jìn)行邕試劑靈敏度檢查，當(dāng)邕試劑靈敏度復(fù)核要求， 方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查試驗(yàn)。5.4.1.2 如果該批邕試劑靈敏度不符合要求，則換用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。5.4.1.3 換用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品后，邕試劑靈敏度符合要求，則認(rèn)為該批邕試劑符合要求。所 用到的工作標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)進(jìn)行銷毀，并將結(jié)果反饋給生產(chǎn)廠家。5.4.1.4 換用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品后，邕試劑靈敏度仍不符合要求，判該批邕試劑不符合要求，不得使用。與生產(chǎn)廠家聯(lián)系退貨處

6、理。5.4.2 工作標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定5.4.2.1 以EU為單位的工作標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)化5.4.2.1.1 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品一支，輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上滑痕，75%酒精棉球擦拭后開啟，開啟過程中防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。開啟后按規(guī)格加入規(guī)定量的無熱源水溶解內(nèi)容物，用封口膜封嚴(yán)，置旋渦混合器上混懸 30min。然后進(jìn)行稀釋，制備標(biāo)題細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑標(biāo)準(zhǔn)管理 規(guī)程編碼SMP-QC-0030-00成2人、入、0.5入、0.25人四個(gè)濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每稀釋一步至少在旋渦混合器上混懸30秒。5.4.2.1.2 待標(biāo)化工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備取工作標(biāo)準(zhǔn)品4支，輕彈瓶壁使

7、粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上劃痕，75%酒精棉球擦拭后開啟，開啟過程中防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。開啟后按規(guī)格加入規(guī)定量的無熱 源水溶解內(nèi)容物，用封口膜封嚴(yán)，置旋渦混合器上混懸15min。然后分別進(jìn)行稀釋，制備成2卜 卜0.5卜0.25人四個(gè)濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素溶液，每稀釋一步至少在旋渦混合 器上混懸30秒。每次臨用前先將對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液混懸30秒。5.4.2.1.3 標(biāo)化工作標(biāo)準(zhǔn)品用邕試劑的準(zhǔn)備取規(guī)格為0.1ml/支的邕試劑84支，輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上滑痕，75%酒精棉球擦拭后開啟，開啟過程中防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。每支加入 0.1ml檢 查用水使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。如果邕試

8、劑規(guī)格不是0.1ml/支，取若干支按其標(biāo)示量加入檢查用水按 0.1ml/支的方法充分溶解后混合在一起，然后分裝到凝集 管（10mrK 75mm）中，每支凝集管分裝0.1ml。要求至少分裝84管備用。5.4.2.1.4 加樣將已充分溶解的邕試劑84支放在試管架上，排成21列（每列4支管），其中前4列 每列每支管分別加入0.1ml的2入、入、0.5入、0.25人的內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)溶液，第 5列以后每4列分別按每支工作標(biāo)準(zhǔn)品每列每支管分別加入0.1ml的2人入0.5人、0.25人待標(biāo)化工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液。第 21列4支管加如入0.1ml的檢查用水，然后用封口 膜封好凝集管管口，將該架子放回內(nèi)毒素檢查

9、儀上，同時(shí)調(diào)整每支凝集管的高度，使每支管內(nèi)的反應(yīng)混合液液面全部沒入37c土C水浴液面以下2厘米，保溫 60min及min后觀察結(jié)果。5.4.2.1.5 觀察結(jié)果將每支凝集管分別輕輕取出，避免振動(dòng)，緩緩倒轉(zhuǎn) 180。觀察：管內(nèi)形成凝膠，并且 凝膠不變形，不從管壁上脫落者為陽性，記錄為（+）;未形成凝膠或凝膠不能保持完整并從管壁上脫落者為陰性，記錄為（-）o5.4.2.1.6 試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算如果兩組最大濃度2.0人均為陽性，最低濃度0.25人均為陰性，陰性對(duì)照4管均為陰性 時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果才有效。此時(shí)按下式計(jì)算國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值標(biāo)題細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑標(biāo)準(zhǔn)管理 規(guī)程編碼SMP

10、-QC-0030-00Er和每個(gè)待標(biāo)化工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值Eci。然后再取4個(gè)待標(biāo)化工作標(biāo)準(zhǔn)品的平均值作為最終結(jié)果EC2。E R=lg-1 （EXr/4）E ci =lg-1 （EXc/4）式中Xr和Xc/分別國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值（lg）和待標(biāo)化工作標(biāo)準(zhǔn) 品溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值（lg）。反應(yīng)終點(diǎn)是系列遞減的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液中最后 一個(gè)呈陽性結(jié)果的濃度。5.4.2.1.7 試驗(yàn)結(jié)果的判定當(dāng)Er在0.5入2.0入（包括0.5人和2.0入）范圍內(nèi)時(shí)，且當(dāng)Ec2在0.5Er2.0 Er （包 括0.5Er和2.0 Er）時(shí)，則判定待標(biāo)定工作標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)化合格；否則判

11、為不合格。5.4.3 標(biāo)示單位為ng的工作標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)化所有的處理程序和以 EU為單位的工作標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)化操作基本相同，只有結(jié)果判定如 下差異：以凝膠法確定了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和待標(biāo)化工作標(biāo)準(zhǔn)品的終點(diǎn)，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品以 EU/ml為單 位，工作標(biāo)準(zhǔn)品以ng/ml為單位，并且以4支工作標(biāo)準(zhǔn)品作為實(shí)驗(yàn)的幾何平均值為結(jié) 果。然后進(jìn)行相應(yīng)的換算。舉例：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和工作標(biāo)準(zhǔn)品的凝膠終點(diǎn)濃度分別為0.3EU/ml和0.018ng/ml ,每ng相當(dāng)?shù)腅U單位數(shù)計(jì)算如下：0.3EU/ml/0.018ng/ml=16.7 EU/ ng5.5 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑的使用5.5.1 使用前5.5.1.1 根據(jù)試驗(yàn)所需的各試

12、劑的量向生測(cè)組組長(zhǎng)領(lǐng)取，并在其對(duì)應(yīng)的記錄上登記各試 劑的領(lǐng)取數(shù)量。5.5.1.2 冷凍保存的試劑平衡至室溫后才能用于試驗(yàn)。5.5.1.3 檢查試劑是否澄清，如出現(xiàn)渾濁或絮狀物等現(xiàn)象，應(yīng)廢棄或銷毀，不得使用過 期的試劑。5.5.2 使用過程中如出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的灑落，馬上使用1N氫氧化鈉溶液來擦拭污染區(qū)域，再用自來水擦拭。5.5.3 使用過的吸頭、未使用完的無熱原水均直接廢棄。標(biāo)題細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑標(biāo)準(zhǔn)管理 規(guī)程編碼SMP-QC-0030-005.6 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品的銷毀5.6.1 對(duì)過期的或不可用的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行銷毀。5.6.2 以不可見形式存在(如吸附于瓶壁上)的標(biāo)準(zhǔn)品，鋁箔封口，

13、直接經(jīng) 250c下1 小時(shí)除熱原程序，進(jìn)行銷毀。5.6.3 以干粉形式存在的標(biāo)準(zhǔn)品，加少量水溶解后于60c烘干，再按5.6.2銷毀。5.6.4 以溶液形式存在的標(biāo)準(zhǔn)品，于 60c烘干，按5.6.2銷毀。5.6.5 銷毀的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品須在其接收與發(fā)放記錄上予以記錄。5.7 去熱原物品的存放5.7.1 取備用的試管、鋁箔于不銹鋼飯盒內(nèi)，鋁箔包裝后，置電熱恒溫干燥箱，用經(jīng)驗(yàn)證的除熱原程序250 c干烤1小時(shí)去除熱原，自然冷卻。5.7.2 取出已除熱原的物品，做好標(biāo)識(shí)，存放于貼有去熱原物品存放柜”的區(qū)域內(nèi)。5.7.3 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、無熱原吸頭、無熱原試管等也存放在去熱原物品專柜中。此柜僅存放

14、已去熱原的物品。5.7.4 試驗(yàn)結(jié)束后，所有用過的試管均須用重銘酸鉀洗液清洗，用自來水沖洗至中性， 用純化水清洗三次。烘干，備用。如使用的是無熱原安甑，試驗(yàn)結(jié)束后可直接棄去。5.7.5 開封后未使用完的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水廢棄處理。5.7.6 未使用的試管放置24小時(shí)后重新去熱原處理。5.7.7 未使用的已剪開封口袋的吸頭，直接廢棄。5.7.8 已到保存期的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、無熱原吸頭直接廢棄。6.0附錄無7.0相關(guān)的記錄7.1 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品驗(yàn)收記錄(SMP-QC-0030-01 )7.2 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品接收與發(fā)放記錄(SMP-QC-0030-02 )7.3 邕試劑接收與發(fā)放記錄(SMP-QC-0030-03 )7.4 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水接收與發(fā)放記錄(SMP-QC-003