基因工程(公開課)

1、選修 3專題1基因工程一、基因工程的概念理解一、基因工程的概念理解1.1.供體供體: :提供提供_;2._;2.操作環(huán)境操作環(huán)境:_;:_;3.3.操作水平操作水平:_;4.:_;4.原理原理:_;:_;5.5.受體受體: :表達目的基因表達目的基因;6.;6.本質本質: :性狀在性狀在_體內表達體內表達; ;7.7.優(yōu)點優(yōu)點(1)(1)與雜交育種相比與雜交育種相比: :克服了克服了_的障礙。的障礙。(2)(2)與誘變育種相比與誘變育種相比:_:_改造生物遺傳性狀。改造生物遺傳性狀。目的基因目的基因體外體外分子水平分子水平基因重組基因重組受體受體遠緣雜交不親和遠緣雜交不親和定向定向二、二、DN

2、ADNA重組技術的基本工具重組技術的基本工具1.1.限制性核酸內切酶限制性核酸內切酶( (簡稱簡稱:_):_)(1)(1)來源來源: :主要是從主要是從_生物中分離純化出來的。生物中分離純化出來的。(2)(2)作用作用: :識別特定的識別特定的_并切開相應兩個核苷酸之間并切開相應兩個核苷酸之間的的_。(3)(3)結果結果: :產生產生_或平末端?；蚱侥┒?。2.DNA2.DNA連接酶連接酶(1)(1)種類種類: :按來源可分為按來源可分為E EcoliDNAcoliDNA連接酶和連接酶和T T4 4DNADNA連接酶。連接酶。(2)(2)作用作用: :在兩個核苷酸之間形成磷酸二酯鍵以連接在兩個核

3、苷酸之間形成磷酸二酯鍵以連接_。限制酶限制酶原核原核核苷酸序列核苷酸序列磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵黏性末端黏性末端兩段兩段DNADNA片片段段3.3.載體載體(1)(1)種類種類:_:_、噬菌體的衍生物、動植物病毒等。噬菌體的衍生物、動植物病毒等。 能自我復制能自我復制(2)(2)質粒特點質粒特點 有一個至多個有一個至多個_ 有特殊的有特殊的_質粒質粒限制酶切割位點限制酶切割位點標記基因標記基因三、基因工程的基本操作程序三、基因工程的基本操作程序1.1.目的基因的獲取目的基因的獲取(1)(1)目的基因目的基因: :主要是指編碼蛋白質的主要是指編碼蛋白質的_。(2)(2)獲取方法獲取方法: : 從從_

4、中獲取目的基因中獲取目的基因 利用利用_擴增目的基因擴增目的基因 通過通過DNADNA合成儀用化學方法直接人工合成合成儀用化學方法直接人工合成基因基因基因文庫基因文庫PCRPCR技術技術2.2.基因表達載體的構建基因表達載體的構建基因工程的核心基因工程的核心(1)(1)基因表達載體的組成基因表達載體的組成:_:_、啟動子、終止子、啟動子、終止子、_。啟動子啟動子: :a.a.位置位置: :位于位于_。b.b.作用作用: :是是RNARNA聚合酶識別和結合的部位聚合酶識別和結合的部位, ,驅動基因驅動基因_,_,最終獲得所需要的蛋白質。最終獲得所需要的蛋白質。終止子終止子: :a.a.位置位置:

5、 :位于基因的尾端。位于基因的尾端。b.b.作用作用: :使使_在所需要的地方停止下來。在所需要的地方停止下來。目的基因目的基因標記標記基因基因基因的首端基因的首端轉錄出轉錄出mRNAmRNA轉錄轉錄(2)(2)構建目的構建目的: :使目的基因在使目的基因在_中穩(wěn)定存在中穩(wěn)定存在, ,并且可以遺傳給下一代并且可以遺傳給下一代; ;使使_能夠表達和發(fā)揮作用。能夠表達和發(fā)揮作用。受體細胞受體細胞目的基因目的基因3.3.將目的基因導入受體細胞將目的基因導入受體細胞(1)(1)轉化轉化: :目的基因進入受體細胞內目的基因進入受體細胞內, ,并且在受體細胞內維持并且在受體細胞內維持_的過程。的過程。(2

6、)(2)常用方法常用方法( (連線連線):):穩(wěn)穩(wěn)定和表達定和表達4.4.目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定方法方法檢測或鑒定目的檢測或鑒定目的水平水平DNADNA分子雜交技術分子雜交技術檢測目的基因的有無檢測目的基因的有無_水平水平分子雜交技術分子雜交技術_目的基因是否翻譯目的基因是否翻譯生物性狀的表達與否生物性狀的表達與否_個體水平個體水平目的基因是否轉錄目的基因是否轉錄抗原抗原- -抗體雜交技術抗體雜交技術目的基因是否表達目的基因是否表達分子分子四、基因工程的應用四、基因工程的應用1.1.轉基因植物轉基因植物植物基因工程技術主要用于提高農作物的抗逆能力植物基因工程技術主要用于提高農

7、作物的抗逆能力( (如抗除草如抗除草劑、抗蟲、抗病、劑、抗蟲、抗病、_和抗鹽堿等和抗鹽堿等),),以及改良以及改良_和利用植物和利用植物_等方面。等方面。2.2.轉基因動物轉基因動物動物基因工程在動物品種改良、建立動物基因工程在動物品種改良、建立_、器官移植、器官移植等方面顯示了廣闊的應用前景。等方面顯示了廣闊的應用前景?？垢珊悼垢珊缔r作物的品農作物的品質質生產藥物生產藥物生物反應器生物反應器3.3.基因工程藥物基因工程藥物(1)(1)來源來源: :轉基因的轉基因的_。(2)(2)成果成果: :細胞因子、抗體、疫苗、激素等。細胞因子、抗體、疫苗、激素等。(3)(3)作用作用: :用來預防和治療

8、人類腫瘤、心血管疾病、用來預防和治療人類腫瘤、心血管疾病、_、各種傳染病、糖尿病、類風濕等疾病。各種傳染病、糖尿病、類風濕等疾病。4.4.基因治療基因治療(1)(1)方法方法: :把把_導入病人體內導入病人體內, ,使該基因的表達產物發(fā)揮使該基因的表達產物發(fā)揮功能。功能。(2)(2)效果效果: :治療治療_的最有效的手段。的最有效的手段。(3)(3)分類分類:_:_和體外基因治療。和體外基因治療。工程菌工程菌遺傳病遺傳病正常基因正?；蜻z傳病遺傳病體內基因治療體內基因治療五、蛋白質工程五、蛋白質工程1.1.概念理解概念理解(1)(1)基礎基礎: :蛋白質分子的結構規(guī)律及其與生物功能的關系。蛋白

9、質分子的結構規(guī)律及其與生物功能的關系。(2)(2)操作操作:_:_或基因合成?；蚧蚝铣?。(3)(3)結果結果: :改造了現(xiàn)有蛋白質或制造出改造了現(xiàn)有蛋白質或制造出_。(4)(4)目的目的: :滿足人類的生產和生活的需求。滿足人類的生產和生活的需求。2.2.操作過程操作過程從預期的從預期的_出發(fā)出發(fā)設計預期的設計預期的_推測應推測應有的有的_找到相對應的找到相對應的_(_(基因基因)基基因表達因表達產生需要的蛋白質。產生需要的蛋白質?；蛐揎椈蛐揎椥碌牡鞍踪|新的蛋白質蛋白質功能蛋白質功能蛋白質結構蛋白質結構氨基酸序列氨基酸序列脫氧核苷酸序列脫氧核苷酸序列1.1.限制酶只能用于切割目的基因。限

10、制酶只能用于切割目的基因。( )( )【分析分析】限制酶既能用于切割目的基因限制酶既能用于切割目的基因, ,也能用于切割載體。也能用于切割載體。2. DNA2. DNA連接酶能將兩堿基間通過形成氫鍵連接起來。連接酶能將兩堿基間通過形成氫鍵連接起來。( )( )【分析分析】DNADNA連接酶連接的是兩個雙鏈連接酶連接的是兩個雙鏈DNADNA片段之間的磷酸二酯片段之間的磷酸二酯鍵。鍵。3.E3.EcoliDNAcoliDNA連接酶既可以連接平末端連接酶既可以連接平末端, ,又可以連接黏性末又可以連接黏性末端。端。( )( )【分析分析】E EcoliDNAcoliDNA連接酶只能將雙鏈連接酶只能將

11、雙鏈DNADNA片段的黏性末端連片段的黏性末端連接起來接起來, ,不能將雙鏈不能將雙鏈DNADNA片段的平末端進行連接。片段的平末端進行連接。4.4.質粒是小型環(huán)狀質粒是小型環(huán)狀DNADNA分子分子, ,是基因工程常用的載體。是基因工程常用的載體。( )( )【分析分析】質粒是具有復制能力的很小的雙鏈環(huán)狀質粒是具有復制能力的很小的雙鏈環(huán)狀DNADNA分子分子, ,是基是基因工程常用的載體。因工程常用的載體。5.5.運載體的作用是攜帶目的基因導入受體細胞中運載體的作用是攜帶目的基因導入受體細胞中, ,使之穩(wěn)定存在使之穩(wěn)定存在并表達。并表達。( )( )【分析分析】基因工程中利用載體將目的基因導入

12、受體細胞中并使基因工程中利用載體將目的基因導入受體細胞中并使之穩(wěn)定存在并表達。之穩(wěn)定存在并表達。6.6.蛋白質工程可按照人的意愿生產出自然界中不存在的蛋白蛋白質工程可按照人的意愿生產出自然界中不存在的蛋白質。質。( )( )【分析分析】蛋白質工程是指以蛋白質分子的結構規(guī)律及其與生理蛋白質工程是指以蛋白質分子的結構規(guī)律及其與生理功能的關系作為基礎功能的關系作為基礎, ,通過基因修飾或基因合成通過基因修飾或基因合成, ,對現(xiàn)有蛋白質對現(xiàn)有蛋白質進行改造進行改造, ,或制造一種新的蛋白質或制造一種新的蛋白質, ,以滿足人類的生產和生活的以滿足人類的生產和生活的需要。需要。7.7.蛋白質工程是在基因工

13、程的基礎上延伸出來的第二代基因工蛋白質工程是在基因工程的基礎上延伸出來的第二代基因工程。程。( )( )【分析分析】蛋白質工程包含多學科的綜合科技工程領域蛋白質工程包含多學科的綜合科技工程領域, ,但它是但它是在基因工程的基礎上延伸出來的第二代基因工程。在基因工程的基礎上延伸出來的第二代基因工程?？键c一考點一 基因工程的工具基因工程的工具 1.1.限制酶和限制酶和DNADNA連接酶的關系連接酶的關系(1)(1)限制酶和限制酶和DNADNA連接酶的作用部位都是磷酸二酯鍵。連接酶的作用部位都是磷酸二酯鍵。(2)(2)限制酶不切割自身限制酶不切割自身DNADNA的原因是原核生物中不存在該酶的識的原因

14、是原核生物中不存在該酶的識別序列或識別序列已經被修飾。別序列或識別序列已經被修飾。(3)(3)限制酶是一類酶限制酶是一類酶, ,而不是一種酶。而不是一種酶。(4)DNA(4)DNA連接酶起作用時連接酶起作用時, ,不需要模板。不需要模板。2.2.作為載體的條件作為載體的條件條件條件適應性適應性穩(wěn)定并能復制穩(wěn)定并能復制目的基因穩(wěn)定存在且數量可目的基因穩(wěn)定存在且數量可擴大擴大有一個至多個限制酶切割有一個至多個限制酶切割位點位點可攜帶多個或多種外源基因可攜帶多個或多種外源基因具有特殊的標記基因具有特殊的標記基因便于重組便于重組DNADNA的鑒定和選擇的鑒定和選擇【拓展延伸拓展延伸】與與DNADNA有

15、關的五種酶的比較有關的五種酶的比較 作用底物作用底物作用部位作用部位形成產物形成產物限制酶限制酶DNADNA分子分子磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵黏性末端或平黏性末端或平末端末端DNADNA連接酶連接酶DNADNA片段片段磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵重組重組DNADNA分子分子DNADNA聚合酶聚合酶脫氧核苷酸脫氧核苷酸磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵子代子代DNADNA解旋酶解旋酶DNADNA分子分子堿基對間堿基對間的氫鍵的氫鍵形成脫氧核苷形成脫氧核苷酸單鏈酸單鏈DNADNA( (水解水解) )酶酶DNADNA分子分子磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵游離的脫氧核游離的脫氧核苷酸苷酸【典例典例1 1】(2012(2012江蘇高考江蘇高

16、考) )圖圖1 1表示含有目的基因表示含有目的基因D D的的DNADNA片段片段長度長度( (bpbp即堿基對即堿基對) )和部分堿基序列和部分堿基序列, ,圖圖2 2表示一種質粒的結構和表示一種質粒的結構和部分堿基序列?，F(xiàn)有部分堿基序列?，F(xiàn)有MspMsp、BamHBamH、MboMbo、Sma4Sma4種限制性種限制性核酸內切酶核酸內切酶, ,它們識別的堿基序列和酶切位點分別為它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C CCGGCGG、G GGATCCGATCC、GATCGATC、CCCCCCGGGGGG。請回答下列問題。請回答下列問題: :(1)(1)圖圖1 1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之

17、間依次由的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由連接。連接。(2)(2)若用限制酶若用限制酶SmaSma完全切割圖完全切割圖1 1中中DNADNA片段片段, ,產生的末端是產生的末端是_末端末端, ,其產物長度為其產物長度為。(3)(3)若圖若圖1 1中虛線方框內的堿基對被中虛線方框內的堿基對被T-AT-A堿基對替換堿基對替換, ,那么基因那么基因D D就突變?yōu)榛蚓屯蛔優(yōu)榛騞 d。從雜合子中分離出圖。從雜合子中分離出圖1 1及其對應的及其對應的DNADNA片段片段, ,用用限制酶限制酶SmaSma完全切割完全切割, ,產物中共有產物中共有種不同長度的種不同長度的DNADNA片段。片段。(

18、4)(4)若將圖若將圖2 2中質粒和目的基因中質粒和目的基因D D通過同種限制酶處理后進行連通過同種限制酶處理后進行連接接, ,形成重組質粒形成重組質粒, ,那么應選用的限制酶是那么應選用的限制酶是。在導入重。在導入重組質粒后組質粒后, ,為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌, ,一般需要用添加一般需要用添加_的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經檢測的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經檢測, ,部分含有重組質粒的大部分含有重組質粒的大腸桿菌菌株中目的基因腸桿菌菌株中目的基因D D不能正確表達不能正確表達, ,其最可能的原因是其最可能的原因是?！窘馕鼋馕觥?1)(1)兩條脫氧核苷酸鏈之間的堿基通過氫鍵相

19、連兩條脫氧核苷酸鏈之間的堿基通過氫鍵相連, ,一條脫一條脫氧核苷酸鏈中相鄰的堿基通過脫氧核糖氧核苷酸鏈中相鄰的堿基通過脫氧核糖- -磷酸磷酸- -脫氧核糖連接。脫氧核糖連接。(2)(2)根據限制酶根據限制酶SmaSma識別的堿基序列可知識別的堿基序列可知, ,限制酶限制酶SmaSma切割產生切割產生的末端為平末端。在圖的末端為平末端。在圖1 1序列中共有序列中共有2 2個個SmaSma的切割位點的切割位點, ,切割后切割后形成形成3 3種不同長度的產物種不同長度的產物, ,分別為分別為537 537 bpbp、790 790 bpbp、661 661 bpbp。(3)(3)圖圖1 1中有中有S

20、maSma的兩個識別序列的兩個識別序列, ,完全切割后產生完全切割后產生3 3個不同長度個不同長度的的DNADNA片段片段, ,若虛框中的堿基被若虛框中的堿基被T-AT-A替換替換, ,則產生則產生2 2個個DNADNA片段片段, ,其中其中1 1個個DNADNA片段與上次切割的相同片段與上次切割的相同, ,因此經完全切割后共產生因此經完全切割后共產生4 4種不同種不同長度的長度的DNADNA片段。片段。(4)(4)切割目的基因可選用限制酶切割目的基因可選用限制酶BamHBamH和限制酶和限制酶MboMbo,但限制但限制酶酶MboMbo可將質粒中的抗生素可將質粒中的抗生素A A抗性基因和抗生素

21、抗性基因和抗生素B B抗性基因都抗性基因都破壞破壞, ,而限制酶而限制酶BamHBamH只破壞抗生素只破壞抗生素A A抗性基因抗性基因, ,因此只能選用因此只能選用限制酶限制酶BamHBamH;重組質粒中含有抗生素重組質粒中含有抗生素B B抗性基因抗性基因, ,因此可在含因此可在含抗生素抗生素B B的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。答案答案: :(1)(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖(2)(2)平平537 537 bpbp、790 790 bpbp、661 661 bpbp(3)4(3)4(4)BamH(4)BamH抗生素抗生素B B同種限制酶切割形成的末端相同同種限制酶切

22、割形成的末端相同, ,部分部分目的基因目的基因D D與質粒反向連接與質粒反向連接【變式訓練變式訓練】據圖表回答問題據圖表回答問題: :幾種限制酶識別序列及切割位點表幾種限制酶識別序列及切割位點表限制酶限制酶SmaSmaEcoREcoRPstPst切割位點切割位點CCCGGGCCCGGGGGGCCCGGGCCCGAATTCGAATTCCTTAAGCTTAAGCTGCAGCTGCAGGACGTCGACGTC(1)(1)假設所用的限制酶均能將所識別的位點完全切開假設所用的限制酶均能將所識別的位點完全切開, ,采用采用EcoREcoR和和PstPst酶切含有目的基因的酶切含有目的基因的DNADNA片段

23、片段, ,能得到能得到種種DNADNA片段。如果將質粒和含目的基因的片段。如果將質粒和含目的基因的DNADNA片段只用片段只用EcoREcoR酶切酶切, ,酶酶切產物再加入切產物再加入DNADNA連接酶連接酶, ,其中由兩個其中由兩個DNADNA片段之間連接形成的片段之間連接形成的產物有產物有、。(2)(2)為了防止目的基因和質粒表達載體酶切后的末端任意連接為了防止目的基因和質粒表達載體酶切后的末端任意連接, ,酶切時應該選用的酶是酶切時應該選用的酶是、?！窘馕鼋馕觥?1)(1)含目的基因的含目的基因的DNADNA分子上含有分子上含有2 2個個EcoREcoR和和1 1個個PstPst的酶切位

24、點的酶切位點, ,三個切點全部切開三個切點全部切開, ,則形成則形成4 4種種DNADNA片段。質粒與含片段。質粒與含目的基因的目的基因的DNADNA片段都用片段都用EcoREcoR切割切割, ,目的基因兩端和質粒的切目的基因兩端和質粒的切口處的黏性末端相同口處的黏性末端相同, ,只考慮兩個只考慮兩個DNADNA片段相連片段相連, ,則會形成三種連則會形成三種連接產物接產物, ,即質粒與質粒相連、質粒與目的基因相連、目的基因與即質粒與質粒相連、質粒與目的基因相連、目的基因與目的基因相連。目的基因相連。(2)(2)為了防止自連為了防止自連, ,可選用可選用EcoREcoR和和SmaSma兩種酶兩

25、種酶同時切割同時切割, ,因為質粒和因為質粒和DNADNA片段均有這兩種酶存在。片段均有這兩種酶存在。答案答案: :(1)4(1)4質粒質粒質粒連接物目的基因質粒連接物目的基因目的基因連接物目的基因連接物質粒質粒目的基因連接物目的基因連接物(2)EcoR(2)EcoRSmaSma考點二考點二 基因工程的基本操作程序和應用基因工程的基本操作程序和應用 1.1.基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序(1)(1)目的基因的獲取目的基因的獲取: :直接分離直接分離人工化學合成人工化學合成: :適用于分子較小的基因。適用于分子較小的基因。從基因文庫中獲取從基因文庫中獲取利用利用PCRPCR技術擴增

26、技術擴增(2)(2)基因表達載體的構建基因表達載體的構建: : 啟動子、終止子啟動子、終止子基因表達載體的組成基因表達載體的組成 標記基因標記基因 目的基因目的基因基因表達載體的構建步驟基因表達載體的構建步驟: :(3)(3)將目的基因導入受體細胞將目的基因導入受體細胞: :生物種類生物種類植物植物動物動物微生物微生物常用方法常用方法農桿菌轉化法農桿菌轉化法顯微注射技術顯微注射技術感受態(tài)細胞法感受態(tài)細胞法受體細胞受體細胞體細胞體細胞受精卵受精卵原核細胞原核細胞轉化過程轉化過程將目的基因插將目的基因插入到入到TiTi質粒的質粒的T-DNAT-DNA上上轉入轉入農桿菌農桿菌導入導入植物細胞植物細胞

27、整整合到受體細胞合到受體細胞的染色體的染色體DNADNA上上表達表達將含有目的基將含有目的基因的表達載體因的表達載體提純提純取卵取卵( (受精卵受精卵)顯顯微注射微注射受精受精卵發(fā)育卵發(fā)育獲得獲得具有新性狀的具有新性狀的動物動物CaCa2+2+處理細胞處理細胞感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞重組表達載體重組表達載體DNADNA分子與感受分子與感受態(tài)細胞混合態(tài)細胞混合感受態(tài)細胞吸感受態(tài)細胞吸收收DNADNA分子分子(4)(4)目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定: :2.2.基因工程的應用基因工程的應用(1)(1)乳腺生物反應器與工程菌生產藥物的比較乳腺生物反應器與工程菌生產藥物的比較: :比較項目比較

28、項目乳腺生物反應器乳腺生物反應器工程菌工程菌基因結構基因結構動物基因的結構與人動物基因的結構與人類基因的結構基本相類基因的結構基本相同同細菌或酵母菌等生物基因細菌或酵母菌等生物基因的結構與人類基因的結構的結構與人類基因的結構有較大差異有較大差異基因表達基因表達合成的藥物蛋白與天合成的藥物蛋白與天然蛋白質相同然蛋白質相同細菌細胞內沒有內質網、細菌細胞內沒有內質網、高爾基體等細胞器高爾基體等細胞器, ,產生的產生的藥物蛋白可能沒有活性藥物蛋白可能沒有活性受體細胞受體細胞動物的受精卵動物的受精卵微生物細胞微生物細胞比較項目比較項目乳腺生物反應器乳腺生物反應器工程菌工程菌導入目導入目的基因的基因的方式

29、的方式顯微注射法顯微注射法感受態(tài)細胞法感受態(tài)細胞法生產條件生產條件不需嚴格滅菌不需嚴格滅菌, ,溫度溫度等外界條件對其影響等外界條件對其影響不大不大需嚴格滅菌需嚴格滅菌, ,嚴格控制工程嚴格控制工程菌所需的溫度、菌所需的溫度、pHpH、營養(yǎng)、營養(yǎng)物質濃度等外界條件物質濃度等外界條件藥物提取藥物提取從動物乳汁中提取從動物乳汁中提取從微生物細胞中提取從微生物細胞中提取(2)(2)基因治療與基因診斷基因治療與基因診斷: :原理原理操作過程操作過程進展進展基因基因治療治療基因基因表達表達利用正?；驅胗谢蛉毕堇谜；驅胗谢蛉毕莸募毎械募毎? ,以表達出正常性狀來以表達出正常性狀來治療治

30、療臨床臨床實驗實驗基因基因診斷診斷堿基互堿基互補配對補配對制作特定制作特定DNADNA探針與病人樣品探針與病人樣品DNADNA混合分析雜交帶情況混合分析雜交帶情況臨床臨床應用應用【高考警示高考警示】(1)(1)限制酶剪切目的基因與質粒的次數不同限制酶剪切目的基因與質粒的次數不同: :獲取一個目的基因獲取一個目的基因需限制酶剪切需限制酶剪切2 2次次, ,共產生共產生4 4個黏性末端或平末端個黏性末端或平末端, ,切割質粒則只切割質粒則只需要限制酶剪切需要限制酶剪切1 1次次, ,因為質粒是環(huán)狀因為質粒是環(huán)狀DNADNA分子分子, ,而目的基因在而目的基因在DNADNA分子鏈上。分子鏈上。(2)

31、(2)目的基因的插入位點不是隨意的目的基因的插入位點不是隨意的: :基因表達需要啟動子與終基因表達需要啟動子與終止子的調控止子的調控, ,所以目的基因應插入到啟動子與終止子之間的部所以目的基因應插入到啟動子與終止子之間的部位。位。(3)(3)基因工程操作過程中只有第三步基因工程操作過程中只有第三步( (將目的基因導入受體細胞將目的基因導入受體細胞) )沒有堿基互補配對現(xiàn)象沒有堿基互補配對現(xiàn)象: :第一步存在逆轉錄法獲得第一步存在逆轉錄法獲得DNA,DNA,第二步第二步存在黏性末端連接現(xiàn)象存在黏性末端連接現(xiàn)象, ,第四步存在檢測分子水平雜交。第四步存在檢測分子水平雜交。(4)(4)并非所有個體都

32、可作為乳腺生物反應器并非所有個體都可作為乳腺生物反應器: :操作成功的應該是操作成功的應該是雌性個體雌性個體, ,個體本身的繁殖速度較高個體本身的繁殖速度較高, ,泌乳量、蛋白含量等都是泌乳量、蛋白含量等都是應該考慮的因素。應該考慮的因素?！镜淅淅? 2】(2013(2013靖江模擬靖江模擬) )許多大腸桿菌的質粒上含有許多大腸桿菌的質粒上含有l(wèi)acZlacZ基因基因, ,其編碼的產物其編碼的產物-半乳糖苷酶在半乳糖苷酶在X-galX-gal和和IPTGIPTG存在下存在下, ,可以可以產生藍色沉淀產生藍色沉淀, ,使菌落呈現(xiàn)藍色使菌落呈現(xiàn)藍色, ,否則菌落呈現(xiàn)白色?；蚬こ谭駝t菌落呈現(xiàn)白色

33、。基因工程中常利用該原理從導入質粒的受體細胞中篩選出真正導入重組中常利用該原理從導入質粒的受體細胞中篩選出真正導入重組質粒的細胞質粒的細胞, ,過程如圖所示。請據圖回答過程如圖所示。請據圖回答: :(1)(1)基因工程中基因工程中, ,構建基因表達載體的目的是構建基因表達載體的目的是。(2)(2)限制酶限制酶EcoREcoR的識別序列和切割位點是的識別序列和切割位點是-G-GAATTC-,AATTC-,SmaSma的的識別序列和切割位點是識別序列和切割位點是-CCC-CCCGGG-GGG-。圖中目的基因被切割下來和。圖中目的基因被切割下來和質粒連接之前質粒連接之前, ,需在目的基因的右側連接相

34、應的末端需在目的基因的右側連接相應的末端, ,連接的末連接的末端序列是端序列是, ,連接過程中需要的基本工具是連接過程中需要的基本工具是。(3)(3)轉化過程中轉化過程中, ,大腸桿菌應先用大腸桿菌應先用 處理處理, ,使其處于能吸收周使其處于能吸收周圍圍DNADNA的狀態(tài)。的狀態(tài)。(4)(4)菌落顏色為白色的是菌落顏色為白色的是, ,原因是原因是。(5)(5)菌落中的目的基因是否表達菌落中的目的基因是否表達, ,可采用的檢測辦法是可采用的檢測辦法是?！窘馕鼋馕觥?1)(1)基因工程中基因工程中, ,構建基因表達載體的目的是使目的基構建基因表達載體的目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在因在受體

35、細胞中穩(wěn)定存在, ,能遺傳給后代能遺傳給后代, ,并表達和發(fā)揮作用。并表達和發(fā)揮作用。(2)(2)根據限制酶根據限制酶EcoREcoR和和SmaSma的識別序列和切割位點和圖解判的識別序列和切割位點和圖解判斷斷, ,圖中目的基因被切割下來和質粒連接之前圖中目的基因被切割下來和質粒連接之前, ,需在目的基因的需在目的基因的右側連接相應的末端右側連接相應的末端, ,連接的末端序列是連接的末端序列是-TTAA,-TTAA,連接過程中需連接過程中需要的基本工具是要的基本工具是DNADNA連接酶。連接酶。(3)(3)轉化過程中轉化過程中, ,大腸桿菌應先用大腸桿菌應先用CaCa2+2+處理處理, ,使其

36、處于能吸收周圍使其處于能吸收周圍DNADNA的狀態(tài)。的狀態(tài)。(4)(4)由于由于lacZlacZ標記基因區(qū)插入外源基因后被破壞標記基因區(qū)插入外源基因后被破壞, ,不能表達出不能表達出-半乳糖苷酶半乳糖苷酶, ,故菌落為白色菌落。故菌落為白色菌落。(5)(5)可采用抗原可采用抗原- -抗體雜交的辦法檢測菌落中的目的基因是抗體雜交的辦法檢測菌落中的目的基因是否表達。否表達。答案答案: :(1)(1)使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在, ,能遺傳給后代能遺傳給后代, ,并并表達和發(fā)揮作用表達和發(fā)揮作用(2)-TTAA(2)-TTAADNADNA連接酶連接酶(3)Ca(3)C

37、a2+2+(4)(4)菌落菌落lacZlacZ標記基因區(qū)插入外源基因后被破壞標記基因區(qū)插入外源基因后被破壞, ,不能表達不能表達出出-半乳糖苷酶半乳糖苷酶, ,故菌落為白色故菌落為白色(5)(5)抗原抗原- -抗體雜交抗體雜交【變式訓練變式訓練】乳腺生物反應器是基于轉基因技術平臺乳腺生物反應器是基于轉基因技術平臺, ,將外源將外源基因導入動物基因組中并定位表達于動物乳腺基因導入動物基因組中并定位表達于動物乳腺, ,利用動物乳腺利用動物乳腺能夠天然、高效合成分泌蛋白。如圖為利用生物工程技術讓羊能夠天然、高效合成分泌蛋白。如圖為利用生物工程技術讓羊生產治療心臟病藥物生產治療心臟病藥物tPAtPA的

38、大致過程。請據圖分析回答的大致過程。請據圖分析回答: :(1)(1)圖中表示基因表達載體的構建圖中表示基因表達載體的構建, ,該載體的組成通常有外源基該載體的組成通常有外源基因、因、等。等。(2)(2)圖中過程選擇受精卵作為圖中過程選擇受精卵作為tPAtPA基因受體細胞的主要原因是基因受體細胞的主要原因是。(3)(3)圖中表示檢測與篩選過程圖中表示檢測與篩選過程, ,通常采用的方法是通常采用的方法是、。(4)(4)除利用乳腺、膀胱等生物反應器外除利用乳腺、膀胱等生物反應器外, ,人們還可以利用人們還可以利用、等方法來生產上述物質等方法來生產上述物質, ,而傳統(tǒng)生產上述藥品是而傳統(tǒng)生產上述藥品是

39、_中提中提取的取的, ,存在的缺點是存在的缺點是。【解析解析】(1)(1)重組重組DNADNA分子除應該含有標記基因方便篩選外分子除應該含有標記基因方便篩選外, ,還還應該含有外源目的基因表達所必需的啟動子和終止子等調控序應該含有外源目的基因表達所必需的啟動子和終止子等調控序列。列。(2)(2)受精卵細胞質基質中含有很多個體發(fā)育所需的營養(yǎng)物質受精卵細胞質基質中含有很多個體發(fā)育所需的營養(yǎng)物質, ,容容易產生完整的個體易產生完整的個體, ,全能性最高。全能性最高。(3)(3)考查目的基因的檢測和表達考查目的基因的檢測和表達: :用用DNADNA分子雜交技術檢測轉基分子雜交技術檢測轉基因生物的染色體

40、因生物的染色體DNADNA上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因; ;用分子雜交技術檢用分子雜交技術檢測目的基因是否轉錄出了測目的基因是否轉錄出了mRNA,mRNA,即用標記的目的基因作探針與即用標記的目的基因作探針與mRNAmRNA雜交雜交; ;用抗原用抗原- -抗體雜交技術檢測目的基因是否翻譯成蛋白抗體雜交技術檢測目的基因是否翻譯成蛋白質質, ,即從轉基因生物中提取蛋白質即從轉基因生物中提取蛋白質, ,用相應的抗體進行抗原用相應的抗體進行抗原- -抗抗體雜交體雜交, ,有時還需進行個體生物學水平的鑒定有時還需進行個體生物學水平的鑒定, ,通過生物性狀表通過生物性狀表達與否來檢測基因工程的

41、成功與否。達與否來檢測基因工程的成功與否。(4)(4)乳腺生物反應器和膀胱生物反應器是轉基因動物生產藥物乳腺生物反應器和膀胱生物反應器是轉基因動物生產藥物的新方法的新方法, ,傳統(tǒng)生產多以微生物發(fā)酵工程或動物細胞工程為主傳統(tǒng)生產多以微生物發(fā)酵工程或動物細胞工程為主要方法要方法, ,但由于受操作條件相對較苛刻等的限制但由于受操作條件相對較苛刻等的限制, ,所以價格較高。所以價格較高。答案答案: :(1)(1)啟動子標記基因終止子啟動子標記基因終止子(2)(2)受精卵發(fā)育的全能性最容易表達受精卵發(fā)育的全能性最容易表達(3)(3)分子雜交個體生物學水平鑒定分子雜交個體生物學水平鑒定DNADNA分子雜

42、交抗原分子雜交抗原抗抗體雜交體雜交( (答對任意兩種即可答對任意兩種即可) )(4)(4)工程菌培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)直接從生物組織、細胞或血工程菌培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)直接從生物組織、細胞或血液由于受操作條件相對較苛刻等的限制液由于受操作條件相對較苛刻等的限制, ,價格十分昂貴價格十分昂貴考點三考點三 蛋白質工程與基因工程蛋白質工程與基因工程 1.1.區(qū)別區(qū)別項目項目蛋白質工程蛋白質工程基因工程基因工程過程過程預期蛋白質功能預期蛋白質功能設計預期設計預期的蛋白質結構的蛋白質結構推測應有的推測應有的氨基酸序列氨基酸序列找到相對應的找到相對應的脫氧核苷酸序列脫氧核苷酸序列獲取目的基因獲取目的基因構建基因表構

43、建基因表達載體達載體將目的基因導入受將目的基因導入受體細胞體細胞目的基因的檢測與目的基因的檢測與鑒定鑒定實質實質定向改造或生產人類所需的定向改造或生產人類所需的蛋白質蛋白質定向改造生物的遺傳特性定向改造生物的遺傳特性, ,以獲得人類所需的生物類型以獲得人類所需的生物類型或生物產品或生物產品結果結果可生產自然界沒有的蛋白質可生產自然界沒有的蛋白質只能生產自然界已有的蛋白只能生產自然界已有的蛋白質質2.2.聯(lián)系聯(lián)系(1)(1)蛋白質工程是在基因工程的基礎上蛋白質工程是在基因工程的基礎上, ,延伸出來的第二代基因延伸出來的第二代基因工程。工程。(2)(2)基因工程中所利用的某些酶需要通過蛋白質工程進

44、行修飾、基因工程中所利用的某些酶需要通過蛋白質工程進行修飾、改造。改造。【拓展延伸拓展延伸】蛋白質組計劃和人類基因組計劃的比較蛋白質組計劃和人類基因組計劃的比較項目項目蛋白質組計劃蛋白質組計劃人類基因組計劃人類基因組計劃啟動啟動時間時間20032003年正式啟動年正式啟動19901990年正式啟動年正式啟動主要主要內容內容“肝臟蛋白質肝臟蛋白質”和和“血漿蛋白質血漿蛋白質”的研的研究究測定人類基因組測定人類基因組2424條染條染色體上全部色體上全部DNADNA序列序列參加參加國家國家1616個國家個國家,80,80多個實驗多個實驗室室6 6個國家個國家, ,中國是惟一的中國是惟一的發(fā)展中國家發(fā)

45、展中國家項目項目蛋白質組計劃蛋白質組計劃人類基因組計劃人類基因組計劃我國承我國承擔任務擔任務牽頭執(zhí)行牽頭執(zhí)行“人類肝臟人類肝臟蛋白質組計劃蛋白質組計劃”承擔承擔1%1%的測序工作的測序工作意義意義揭示并確認肝臟揭示并確認肝臟( (血漿血漿) )蛋白質蛋白質, ,為重大疾病預為重大疾病預防、診斷、治療以及防、診斷、治療以及新藥研發(fā)提供科學基新藥研發(fā)提供科學基礎礎; ;推動支持蛋白質工推動支持蛋白質工程程遺傳病的診斷和治療遺傳病的診斷和治療, ,揭揭示基因表達的機理示基因表達的機理【典例典例3 3】現(xiàn)代生物技術并不是各自獨立的現(xiàn)代生物技術并不是各自獨立的, ,而是相互聯(lián)系、相而是相互聯(lián)系、相互滲透

46、的。如圖表示利用乳腺生物反應器生產某種動物蛋白的互滲透的。如圖表示利用乳腺生物反應器生產某種動物蛋白的流程示意圖流程示意圖, ,請分析回答請分析回答: :(1)(1)該生產流程中應用到的現(xiàn)代生物技術有該生產流程中應用到的現(xiàn)代生物技術有、。( (寫出其中兩種寫出其中兩種) )(2)(2)圖中圖中A A、B B分別表示分別表示、。(3)(3)為提高培育成功率為提高培育成功率, ,進行過程之前進行過程之前, ,對早期胚胎的處理是對早期胚胎的處理是取其部分細胞用目的基因探針進行取其部分細胞用目的基因探針進行檢測檢測, ,對受體動物對受體動物的處理是用的處理是用進行同期發(fā)情處理。進行同期發(fā)情處理。(4)

47、(4)蛋白質工程中蛋白質工程中, ,要對蛋白質結構進行設計改造要對蛋白質結構進行設計改造, ,必須通過基必須通過基因修飾或基因合成來完成因修飾或基因合成來完成, ,而不直接改造蛋白質而不直接改造蛋白質, ,原因是原因是?！窘馕鼋馕觥?1)(1)由圖分析知該生產流程中應用到的現(xiàn)代生物技術由圖分析知該生產流程中應用到的現(xiàn)代生物技術有蛋白質工程、基因工程、胚胎移植技術等。有蛋白質工程、基因工程、胚胎移植技術等。(2)(2)圖中圖中A A、B B分別表示推測應有的氨基酸序列、基因表達載體。分別表示推測應有的氨基酸序列、基因表達載體。(3)(3)為提高培育成功率為提高培育成功率, ,進行過程之前進行過程

48、之前, ,對早期胚胎的處理是對早期胚胎的處理是取其部分細胞用目的基因探針進行取其部分細胞用目的基因探針進行DNADNA分子雜交分子雜交, ,對受體動物的對受體動物的處理是用促性腺激素進行同期發(fā)情處理。處理是用促性腺激素進行同期發(fā)情處理。(4)(4)由于改造后的基因能夠遺傳由于改造后的基因能夠遺傳( (且改造基因易于操作且改造基因易于操作),),因此蛋因此蛋白質工程中白質工程中, ,要對蛋白質結構進行設計改造要對蛋白質結構進行設計改造, ,必須通過基因修飾必須通過基因修飾或基因合成來完成或基因合成來完成, ,而不直接改造蛋白質。而不直接改造蛋白質。答案答案: :(1)(1)蛋白質工程基因工程胚胎

49、移植技術蛋白質工程基因工程胚胎移植技術( (任寫兩種任寫兩種) )(2)(2)推測應有的氨基酸序列基因表達載體推測應有的氨基酸序列基因表達載體(3)DNA(3)DNA(核酸核酸) )分子雜交促性腺激素分子雜交促性腺激素(4)(4)改造后的基因能夠遺傳改造后的基因能夠遺傳( (且改造基因易于操作且改造基因易于操作) )【變式訓練變式訓練】胰島素可以用于治療糖尿病胰島素可以用于治療糖尿病, ,但是胰島素被注射但是胰島素被注射到人體后到人體后, ,會堆積在皮下會堆積在皮下, ,要經過較長的時間才能進入血液要經過較長的時間才能進入血液, ,而而進入血液的胰島素又容易分解進入血液的胰島素又容易分解, ,

50、因此因此, ,治療效果受到影響。如圖治療效果受到影響。如圖是用蛋白質工程設計速效胰島素的生產過程是用蛋白質工程設計速效胰島素的生產過程, ,請據圖回答有關請據圖回答有關問題問題: :(1)(1)構建新的蛋白質模型是蛋白質工程的關鍵構建新的蛋白質模型是蛋白質工程的關鍵, ,圖中構建新的胰圖中構建新的胰島素模型的主要依據是島素模型的主要依據是。(2)(2)通過通過DNADNA合成形成的新基因應與合成形成的新基因應與結合后轉移到結合后轉移到_中才能得到準確表達。中才能得到準確表達。(3)(3)若要利用大腸桿菌生產速效胰島素若要利用大腸桿菌生產速效胰島素, ,需用到的生物工程有需用到的生物工程有、和發(fā)

51、酵工程。和發(fā)酵工程。(4)(4)圖中從新胰島素模型到新的胰島素基因合成的基本思路是圖中從新胰島素模型到新的胰島素基因合成的基本思路是什么什么? ? 。【解析解析】(1)(1)蛋白質工程首先要根據人們對蛋白質功能的特定蛋白質工程首先要根據人們對蛋白質功能的特定需求需求, ,對蛋白質的結構進行分子設計對蛋白質的結構進行分子設計, ,因此因此, ,圖中構建新的胰島圖中構建新的胰島素模型的主要依據是預期胰島素的功能素模型的主要依據是預期胰島素的功能, ,即速效胰島素的功能。即速效胰島素的功能。(2)(2)合成的目的基因應與載體結合合成的目的基因應與載體結合, ,構建基因表達載體后導入受構建基因表達載體

52、后導入受體細胞中才能表達。體細胞中才能表達。(3)(3)利用蛋白質工程生產速效胰島素利用蛋白質工程生產速效胰島素, ,需合成新的胰島素基因需合成新的胰島素基因, ,改造好的目的基因需要通過基因工程轉入受體細胞改造好的目的基因需要通過基因工程轉入受體細胞, ,并在生產并在生產中要借助工程菌中要借助工程菌, ,所以還需要發(fā)酵過程所以還需要發(fā)酵過程, ,因此因此, ,此過程涉及蛋白此過程涉及蛋白質工程、基因工程和發(fā)酵工程。質工程、基因工程和發(fā)酵工程。(4)(4)由新的蛋白質模型到構建新的基因由新的蛋白質模型到構建新的基因, ,其基本思路是其基本思路是: :根據新根據新的胰島素模型中氨基酸的序列的胰島

53、素模型中氨基酸的序列, ,推測出其基因中的脫氧核苷酸推測出其基因中的脫氧核苷酸序列序列, ,然后利用然后利用DNADNA合成儀來合成出新的胰島素基因。合成儀來合成出新的胰島素基因。答案答案: :(1)(1)預期胰島素的功能預期胰島素的功能(2)(2)載體受體細胞載體受體細胞(3)(3)蛋白質工程基因工程蛋白質工程基因工程(4)(4)根據新的胰島素模型中氨基酸的序列根據新的胰島素模型中氨基酸的序列, ,推測出其基因中的脫推測出其基因中的脫氧核苷酸序列氧核苷酸序列, ,然后利用然后利用DNADNA合成儀來合成出新的胰島素基因合成儀來合成出新的胰島素基因1.(20121.(2012新課標全國卷新課標

54、全國卷) )根據基因工程的有關知識根據基因工程的有關知識, ,回答下列回答下列問題問題: :(1)(1)限制性核酸內切酶切割限制性核酸內切酶切割DNADNA分子后產生的片段分子后產生的片段, ,其末端類型其末端類型有有和和。(2)(2)質粒載體用質粒載體用EcoR R切割后產生的片段如下切割后產生的片段如下: : AATTC AATTCG G G GCTTAACTTAA為使載體與目的基因相連為使載體與目的基因相連, ,含有目的基因的含有目的基因的DNADNA除可用除可用EcoR R切切割外割外, ,還可用另一種限制性核酸內切酶切割還可用另一種限制性核酸內切酶切割, ,該酶必須具有的特該酶必須具

55、有的特點是點是 。(3)(3)按其來源不同按其來源不同, ,基因工程中所使用的基因工程中所使用的DNADNA連接酶有兩類連接酶有兩類, ,即即DNADNA連接酶和連接酶和DNADNA連接酶。連接酶。(4)(4)反轉錄作用的模板是反轉錄作用的模板是, ,產物是產物是。若要在體。若要在體外獲得大量反轉錄產物外獲得大量反轉錄產物, ,常采用常采用技術。技術。(5)(5)基因工程中除質粒外基因工程中除質粒外, ,和和也可作為載體。也可作為載體。(6)(6)若用重組質粒轉化大腸桿菌若用重組質粒轉化大腸桿菌, ,一般情況下一般情況下, ,不能直接用未處不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞理的大腸桿菌作為

56、受體細胞, ,原因是原因是。【解題指南解題指南】解答本題需掌握以下關鍵點解答本題需掌握以下關鍵點: :(1)(1)限制性核酸內切酶的作用和特點。限制性核酸內切酶的作用和特點。(2)DNA(2)DNA連接酶的種類。連接酶的種類。(3)(3)載體的類型。載體的類型。(4)(4)受體細胞的選擇原理。受體細胞的選擇原理?！窘馕鼋馕觥?1)(1)當限制性核酸內切酶在它識別序列的中心軸線兩當限制性核酸內切酶在它識別序列的中心軸線兩側將側將DNADNA的兩條鏈分別切開時的兩條鏈分別切開時, ,產生的是黏性末端產生的是黏性末端, ,而當限制性而當限制性核酸內切酶在它識別序列的中心軸線處切開時核酸內切酶在它識別

57、序列的中心軸線處切開時, ,產生的是平末產生的是平末端。端。(2)(2)為使載體與目的基因相連為使載體與目的基因相連, ,不同的限制性核酸內切酶應該切不同的限制性核酸內切酶應該切出相同的黏性末端。出相同的黏性末端。(3)DNA(3)DNA連接酶根據其來源的不同可分為兩類連接酶根據其來源的不同可分為兩類, ,一類是從大腸桿一類是從大腸桿菌中分離得到的菌中分離得到的, ,稱為稱為E EcoliDNAcoliDNA連接酶連接酶, ,另一類是從另一類是從T T4 4噬菌體噬菌體中分離出來的中分離出來的, ,稱為稱為T T4 4DNADNA連接酶。連接酶。(4)(4)反轉錄是指以反轉錄是指以RNARNA

58、為模板在逆轉錄酶的作用下合成為模板在逆轉錄酶的作用下合成DNADNA的過的過程程, ,可以在體外短時間內大量擴增可以在體外短時間內大量擴增DNADNA的技術叫的技術叫PCR(PCR(聚合酶鏈式聚合酶鏈式反應反應) )。(5)(5)基因工程中可以作為載體的除質粒外基因工程中可以作為載體的除質粒外, ,還有還有噬菌體的衍生噬菌體的衍生物、動植物病毒等。物、動植物病毒等。(6)(6)大腸桿菌細胞有細胞壁和細胞膜大腸桿菌細胞有細胞壁和細胞膜, ,能阻止質粒能阻止質粒( (外源外源DNA)DNA)等等物質的進入物質的進入, ,只能通過只能通過CaCa2+2+處理細胞處理細胞, ,使細胞處于一種能吸收周使

59、細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中圍環(huán)境中DNADNA分子的生理狀態(tài)分子的生理狀態(tài)( (這種細胞稱為感受態(tài)細胞這種細胞稱為感受態(tài)細胞) )才能才能作為受體細胞。作為受體細胞。答案答案: :(1)(1)黏性末端平末端黏性末端平末端(2)(2)切割產生的切割產生的DNADNA片段末端與片段末端與EcoREcoR切割產生的相同切割產生的相同(3)E(3)EcolicoliT T4 4(4)mRNA(4)mRNA(或或RNA)RNA)cDNAcDNA( (或或DNA)DNA)PCRPCR(5)(5)噬菌體的衍生物動植物病毒噬菌體的衍生物動植物病毒(6)(6)未處理的大腸桿菌吸收質粒未處理的大腸桿菌吸收質粒(

60、 (外源外源DNA)DNA)的能力極弱的能力極弱2.(20122.(2012福建高考福建高考) )肺細胞中的肺細胞中的let-7let-7基因表達減弱基因表達減弱, ,癌基因癌基因RASRAS表達增強表達增強, ,會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術將會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術將let-let-7 7基因導入肺癌細胞實現(xiàn)表達基因導入肺癌細胞實現(xiàn)表達, ,發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖該基因工程技術基本流程如圖1 1所示。所示。請回答請回答: :(1)(1)進行過程時進行過程時, ,需用需用酶切開載體以插入酶切開載體以插入let-7l