中山大學人類X染色質標本的制備與觀察報告

1、人類X染色質標本的制備與觀察張皓予15335203一、實驗目的1 .掌握人體口腔黏膜上皮細胞制備的方法。2 .正確識別巴氏小體的特征及其所在位置。3 .說明人體細胞中核內X染色體的數目和性染色體數目之間存在的關系。二、實驗原理X染色質呈現于女性體細胞間期細胞核內。在口腔黏膜細胞、羊水脫落細胞、皮膚結締組織等細胞中均可檢出。用苯酚品紅改良染液染色后，便可觀察到染色較濃，多位于核膜內側緣，呈凸平形、卵圓形、扁平或三角形，直徑約1師大小的小體。女性細胞核中出現率為40%60%。Barr和Bertram首先(1949)在雌性貓的神經細胞核中發(fā)現，在多數核中部有一個小的深染的小體，而在雄性貓的同樣細胞中

2、只能偶而觀察到這種小體，此后許多人的研究指出這種與性別有關的兩型現象在有袋類、偶蹄類、食肉類和靈長類等動物的多數組織細胞中存在，而在噬齒類中只在少數組織中可以觀察到。這種染色質小體現在稱為“性染色質”(sexchromatin),或稱為"巴氏小體"(Barrbody)。這種小體常位于核膜的內表面，呈Feulgen陽性反應，表明是DNA的成分，有證據表明，性染色質的存在是由于在雌性哺乳動物核中存在兩個X染色體，其中一個X染色體處于失活狀態(tài)。雄性個體只有一個X染色體。因此原則上男性不應有性染色質。但如果一個男人有XXY染色體，那就會有一個性染色質，雖然表現為男性。同樣，XXX的

3、三體應當有兩個巴氏小體。因此，性染色質實質上是一個失活的X染色體。為什么失活的X染色體會以巴氏小體的形式顯示出來？目前，已有許多證據證明，在雌性個體中那根失活的X染色體已經異染質化，成為功能性異染質。使用放射自顯S期是晚影的方法已經證明，失活的X染色體的固縮周期與其它染色體是不同步的，它在復制的。此外，人們也已發(fā)現，晚復制的這根X染色體常位于核的邊緣，這個位置也正好是巴氏小體出現的位置。三、實驗儀器與試劑1 .儀器與用具顯微鏡，水浴鍋，牙簽，載玻片，蓋玻片，鐐子，吸水紙。2 .試劑95%乙醇，1mol/L鹽酸，改良苯酚品紅染色液四、實驗材料男性和女性人體口腔黏膜細胞。五、實驗步驟1 .受檢者用

4、水漱口，用牙簽刮取受檢者口腔頰部黏膜，把第一次刮取物棄去，然后再次用牙簽刮取黏膜，將第二次刮取物均勻涂布到干凈的載玻片上，晾干。2 .將涂片放入95%的乙醇中固定20min,取出晾干。3 .將涂片放入1MHCl中37攝氏度下水解20min,取出后自來水緩緩沖洗。4 .用改良品紅染液染色8min,不干燥，輕輕蓋上蓋玻片，用吸水紙蓋住輕輕壓片。5 .鏡檢，從低倍鏡到高倍鏡依次觀察。六、實驗結果圖1、2、3女性口腔上皮細胞被染色的細胞核與巴氏小體（箭頭）圖4男性口腔上皮細胞被染色的細胞核如圖1、2所示，可在染成淡紫色的女性上皮細胞細胞核的邊緣較清楚地觀察到一顆染色較深的小體，即巴氏小體。圖3右下角的

5、有一不明顯的深色斑塊，可能是巴氏小體。圖4為染成紫色的男性上皮細胞細胞核，沒有觀察到明顯的巴氏小體。50個女性細胞有21個有巴氏小體，占42%;經觀察男性、女性細胞個五十個發(fā)現：50個男性細胞有0個有巴氏小體。七、討論1、鏡檢時發(fā)現女性上皮細胞標本中的細胞數較少，密度低較分散（圖3對比圖4）?？赡苁怯捎谕科瑫r不夠均勻，大部分涂在玻片邊緣導致在后續(xù)固定、沖洗、染色、壓片等步驟時有細胞流失。也有可能是染色時間不夠或者刮取細胞時刮得太少所致。2、觀察發(fā)現女性上皮細胞當中的巴氏小體形態(tài)多有些模糊，且染色較淺，可能是由于染色時間較短導致。本實驗染色時間為8min,后續(xù)實驗可以適當延長染色時間（>1

6、0min）以使實驗效果更加明顯。八、思考題1、男性沒有巴氏小體的理論基礎為維持雌雄兩性生物基因表達一致，細胞中存在一種劑量補償效應，使細胞中只含有一份有活性的X染色體，而多余的染色體失活形成巴氏小體，雌性的兩個X染色體所攜帶的兩份基因的遺傳效應即可與雄性一個X染色體所具有的一份基因的遺傳效應基本相當。而由于男性本身就只有一條X染色體，所以不需要使多出的X染色體失活，從而也就沒有巴氏小體。2、男變女的變性手術后，該女性有無巴氏小體？沒有，因為變性手術只是改變了個體的外在表型如個別器官的形狀和功能等，不能改變其細胞內染色體的構成，故該個體仍只有一條X染色體，不可能形成巴氏小體。3、鑒定巴氏小體有什么臨床意義？巴氏小體的臨床意義在于能夠用來鑒別性別。例如可以通過對胎兒羊水中取得的脫落的細胞的檢查判斷性別，如有巴氏小體，胎兒為女性，如果細胞中無巴氏小體，胎兒為男性。原男性變性運動員參加女子項目，可通過檢查其白細胞中有無巴氏小體而確定其性別。通過巴氏小體檢查可確定胎兒性別和查出性染色體異常的患者，如克氏(Klinefelter's)綜合征患者外貌為男性，但有一個巴氏小體，可判定患者的核型