高考生物三年真題專項匯編卷（2018-2020）考點二十五：基因工程和生物技術的安全性和倫理性問題.docx

1、高考生物三年真題專項匯編卷（2018-2020）考點二十五：基因工程和生物技術的安全性和倫理性問題（2018北京卷，5） I.用Xho I和/1兩種限制性核酸內(nèi)切懈分別處理同一 DNA片段，醉切位點及酶切產(chǎn)物分離結果如圖。以下敘述不正確的是（）Xho I Sal ISall Sal XhoAJ圖1酶切位點圖圖2電泳結果示意圖A.圖1中兩種酶識別的核昔酸序列不同B.圖2中酶切產(chǎn)物可用于構建重組DNAC.泳道中是用Sal I處理得到的酶切產(chǎn)物D.圖中被（W切的DNA片段是單鏈DNA （2019江蘇卷，16）2.下列生物技術操作對遺傳物質(zhì)的改造，不會遺傳給子代的是（）將胰島素基因表達載體轉入大腸桿萌

2、，篩選獲得基因工程萌A. 將花青素代謝基因導入植物體細胞，經(jīng)組織培養(yǎng)獲得花色變異的植株將腸乳糖酶基因導入奶牛受精卵，培育出產(chǎn)低乳糖牛乳的奶牛B. 將腺昔酸脫氨酶基因轉入白細胞后回輸患者體內(nèi)，進行基因治療 （2019天津卷，9） 3.B基因存在丁水稻基因組中，其僅在體細胞（2）和精子中正常表達,但在卵細胞中不轉錄。為研究B基因表達對卵細胞的影響，設計了如下實驗。水稻B基因編碼蛋白的序列血基因卡那毒素抗性基因終止子潮篝素 抗性基因B-&融合基因二T-DNAN表達T-DNA農(nóng)桿菌U水愈組稻傷織鑒定玲選水稻幼苗鑒定篇選可在水稻卵細胞中啟動轉錄的啟動子轉基因植株據(jù)圖回答:答案以及解析1. 答案：

3、D解析：本題結合電泳圖譜考查基因工程中限制酶的相關知識，包括限制酶的作用特點、功能、 作用對象等。不同的限制酶識別序列不同，A項正確；限制酶切割的產(chǎn)物可用于構建重組 DNA, B項正確；泳道顯示四個條帶，是SWI處理后的酶切產(chǎn)物的電泳結果，泳道顯 示三個條帶，是X/??！咎幚砗蟮拿盖挟a(chǎn)物的電泳結果，C項正確：限制酶的作用特點是識別 特定DNA序列，并在DNA兩條鏈特定部位切割產(chǎn)生黏性末端或平末端，D項錯誤。2. 答案：D解析：將腺昔酸脫氨前基因轉入白細胞后回輸患者體內(nèi)，進行基因治療，該基因只是導入了 體細胞中，所以不遺傳。其余三項均可以遺傳給子代。故選D。3. 答案：（1） D（2）精子：cD

4、NA（3）;（4）BCD（5）B基因表達能使卵細胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚解析：（1）B基因不能在水稻卵細胞中轉錄，若含B基因的染色體缺失或B基因突變，這 種變異只發(fā)生在少數(shù)細胞中，那么大部分的卵細胞中仍會有B基因的轉錄，A、C錯誤；DNA 聚合酶能催化DNA的合成，若失活則不能進行DNA的復制，不會影響轉錄過程，B錯誤; 若B基因啟動子無法啟動轉錄，則轉錄過程無法進行，D正確。（2）若要獲得B基因編碼蛋白的序列，可通過建立部分基因文庫（cDNA文庫）的方法， 從含有B基因轉錄產(chǎn)物mRNA的細胞中（即體細胞或精子中）獲取總RNA。（3）過程為重組質(zhì)粒導入農(nóng)桿菌，過程為含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染水稻細

5、胞，過程 中的T-DNA能整合到植物的染色體DNA上；過程在培養(yǎng)時培養(yǎng)基中應加入R那霉素, 用于篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，不含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌由于沒有卡那霉素抗性基因，因此不 能在含卡那霉素的培養(yǎng)基中生長。（4）獲得轉基因植株的過程中，鑒定篩選方式有DNA分子雜交法、DNA-RNA分子雜交法、 抗原一抗體雜交法、個體接種實驗，故可以用B基因中編碼蛋白的序列制備探針進行DNA 分子雜交，因轉基因植株中只含有B基因中編碼蛋白的序列，故不能選用隨機斷裂的B基 因制備探針，A錯誤，C正確；轉基因植株中含有Lw基因所有序列，故可以匕血基因為模 板設計探針，B正確；熒光素是一種吸附指示劑，可對進入細胞中的外

6、來物質(zhì)進行檢測，若 卵細胞中含有外源基因片段即目的基因片段，則與其連接的基因表達產(chǎn)生的熒光素酶能 催化熒光素產(chǎn)生熒光，卵細胞就會發(fā)出熒光，D正確。（5）由題意可知，轉基因植株未受精的卵細胞"J.發(fā)育成胚，而正常植株未受精的卵細胞不 會發(fā)育為胚，可知轉入的B基因表達能使卵細胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚。4. 答案：（1）限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶；轉化（2）RNA聚合酶與啟動子的識別和結合；不發(fā)生；編碼直鏈淀粉合成酶的堿基序列中不含 啟動子（3）逆轉錄（或反轉錄）：引物是根據(jù)Wx基因的一段己知序列設計合成的（或引物能與 阪基因的cDNA特異性結合）（4）品系3：品系3的Wv mRNA最少

7、，控制合成的直鏈淀粉合成酶最少，直鏈淀粉合成 量最少，糯性最強解析：（1）限制性內(nèi)切核酸酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苜酸序列，并且使每 一條鏈中特定部位的兩個核昔酸之間的磷酸二酯鍵斷開；DNA連接酶能將DNA片段拼接 起來。將能表達出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構建重組載體時，需要限制性內(nèi) 切核酸酶和DNA連接酶的參與。轉化是指目的基因進入受體細胞內(nèi)，并且在受體細咆內(nèi)維 持穩(wěn)定和表達的過程。（2）啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出 inRNA<. Wx基因啟動子序列的改變影響了 RNA聚合酶與啟動子的識別和結合，從而改變了 Wx基因的轉錄水平，使直鏈淀

8、粉合成酶基因的表達量改變。根據(jù)題干信息可知，基因編輯 系統(tǒng)是對啟動子序列進行定點編輯，由于編碼直鏈淀粉合成酶的堿基序列中不含啟動于，所 以與野生型水稻相比，3個突變品系中Wx基因控制合成的直鏈淀粉合成酶的氨基酸序列沒 有發(fā)生變化。（3）用提取的各品系胚乳中的總RNA合成總cDNA的過程為逆轉錄，需要逆轉錄酶的參 與。由于引物能與Wx基因的cDNA特異性結合，故通過PCR技術可在總cDNA中專一性 地擴增出Wt基因的cDNAo（4）mRNA是蛋白質(zhì)合成的直接模板，根據(jù)題圖分析可知，4個品系中品系3的即t mRNA 量最低，控制合成的直鏈淀粉合成酶最少，直鏈淀粉合成量最少，糯性最強。5. 答案：（

9、1）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶；顯微注射；體外培養(yǎng)；胚胎移植（2）性別、年齡（3）相同；兩種上皮細胞都是體細胞，且來源于同一個受精卵（4）體外受精、胚胎移植解析：（1）步驟是基因表達載體的構建過程，該過程需要使用的工具酶有限制性核酸內(nèi) 切酶（限制酶）和DNA連接酶，用限制酶分別切割載體和目的基因，用DNA連接酶將目 的基因和載體連接起來。步驟和所代表的操作分別是顯微注射和體外培養(yǎng)。步驟是將 早期胚胎植入代孕母體內(nèi)，即胚胎移植。（2）乳腺生物反應器需要處于育齡的雌性動物，與乳腺生物反應器相比，用膀胱生物反應 器生產(chǎn)W的優(yōu)勢在于不受轉基因動物的性別和年齡的服制。（3）乳腺上皮細胞和膀胱上皮細胞

10、都是體細胞。一般來說，在同一動物個體中，體細胞都 是由同個受精卵分裂、分化而來的，細胞在分裂、分化過程中，細胞核中染色體DNA所 含的遺傳信息一般是不變的，因此兩種上皮細胞的染色體DNA所含的遺傳信息相同。（4）據(jù)題述流程可知，胚胎工程中所用到的主要技術有體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移 植等。6. 答案：（1）基因組文庫；cDNA文庫（2）解旋酶；加熱至90-95°C；氫鍵（3）7hg酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活解析：（1）基因工程中的基因文庫包括基因組文庫和cDNA文庫。（2）DNA解旋破壞的是氫鍵，但體內(nèi)和體外解旋的方式不同，前者依靠解旋酶，后者依靠 加熱至

11、90-95°C的高溫。（3）Taq醵又稱熱穩(wěn)定DNA聚合酶，與大腸桿菌體內(nèi)提取的DNA聚合（W相比，Tag懈熱 穩(wěn)定性好，高溫下不易失活。7. 答案：（1）體外重組的質(zhì)?？梢赃M入受體細胞；真核生物基因可在原核細胞中表達（2）轉化；外殼蛋白（或噬菌體蛋白）；細菌（3）蛋白酶缺陷型；蛋白酶解析：（1）兩位科學家將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導入大腸桿菌細胞中并進 行了表達，因此，該研究可以證明：質(zhì)?？梢宰鳛檩d體，真核細胞的基因在原核細胞中也可 以表達（不同生物共用一套密碼子）、體外重組的質(zhì)?？梢赃M入受體細胞等。（2）目的基因進入受體細胞內(nèi)，并且在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程稱為轉

12、化，將質(zhì) 粒導入大腸桿菌時，常用的轉化方法是首先用Ca2+處理大腸桿萌細胞，使其處于感受態(tài)。 噬菌體DNA沒有侵染能力，體外重組的噬菌體DNA通常需與外殼蛋白組裝成完整噬菌體 才能完成侵染過程。噬菌體多寄生在細菌中，但不能寄生在心肌細胞和葉肉細胞中。（3）若要使蛋白質(zhì)不被降解，則大腸桿菌體內(nèi)不能存在蛋白酶，因此，實驗中應選用蛋白 酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細胞。同理，在蛋白質(zhì)純化過程中，也不能使蛋白質(zhì)降解，因 此，應添加蛋白酶抑制劑。8. 答案：（1）平（2）胸腺嗜味（T） ； DNA連接（3）B； A類菌落含有PO； C類菌落未轉入質(zhì)粒（4）乙、丙；目的基因反向連接解析：（1） EcoRV酶

13、切位點在酶所識別序列的中心軸線處，產(chǎn)生的是平末端。（2）DNA連接酶對平末端的連接效率較低，因此通常要將平末端改造成黏性末端后再進行 連接。由于目的基因片段的兩端各自帶一個腺嘿吟脫氧核昔酸，根據(jù)堿基互補配對原則，處 理后的質(zhì)粒兩端需要各添加一個堿基為胸腺嗜嚏的脫氧核甘酸;要將處理后的質(zhì)粒與目的基 因連接起來，需要用DNA連接酶。（3）由于四環(huán)素抗性基因中含有EcoR V酶識別的序列及切割位點，所以形成的重組質(zhì)粒 中四環(huán)素抗性基因已經(jīng)被破壞，而氨節(jié)育霉素抗性基因正常。根據(jù)表中結果可知，A【新落抗 氨茉青霉素和四環(huán)素，說明A菌落中導入的是P0質(zhì)粒：B菌落抗氨節(jié)青霉素而不抗四環(huán)素, 說明B菌落中導入

14、的是重組質(zhì)粒；C菌落既不抗氨茉青霉素，也不抗四環(huán)素，說明C菌落 中沒有導入質(zhì)粒。（4）由于處理后的P0質(zhì)粒的兩個末端都含一個胸腺嗜喧的脫氧核昔酸，而目的基因片段 的兩端各自帶一個腺嗦吟脫氧核苜酸，所以目的基因在和P0質(zhì)粒連接時可能會出現(xiàn)兩種情 況：正向連接和反向連接。分析圖2可知，理論上可以選擇的引物組合有甲和丙、乙和丙兩 種情況。如果選擇甲和丙這對引物，則無論目的基因是否正確插入，擴增的片段都是50 bp+300 bp+100 bp=450 bp,不符合要求；如果選擇乙和丙這對引物，正向連接和反向連接后 所得結果不同，所以應選擇乙和丙這對引物進行PCR鑒定。如果目的基因和P0質(zhì)粒反向連 接，

15、此時若加入引物甲和乙，則可以擴增出300 bp+100 bp=400 bp的片段。9. 答案：（1）限制性內(nèi)切核酸（或限制）；核苜酸序列（2）磷酸二酯鍵；DNA單鏈；以DNA為模板的DNA鏈的延伸（3）B 解析：（1）根據(jù)題圖可知，步驟I是獲取目的DNA片段，所用的酶EcoR I是一種限制酶, 其能識別特定的核昔酸序列，并使每一條鏈中特定部位的兩個核昔酸之間的磷酸二酯鍵斷 開。（2）步驟II是將目的DNA片段連接成環(huán)狀，其中DNA連接酶的作用是催化相鄰核昔酸之 間的3七羥基和5，-磷酸間形成磷酸二酯鍵。PCR循環(huán)中，升高溫度到95。是為了打開氫鍵 使雙鏈解旋，獲得DNA單鏈，7hq DNA聚合

16、酶的作用是催化游離的脫氧核甘酸連接到引物 3,端，合成DNA子鏈。（3）引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3,端開始延伸DNA子鏈，因為DNA的合 成方向總是從子鏈的5,端向3,端延伸，故為擴增未知序列，選擇的與模板鏈相結合的引物應 為 5'-TCATGAGCGCATAGTT-3'（引物）和 5'-GCAATGCGTAGCCTC3'（引物）。（4）分析題意可知，片段F的兩端為限制酶EcoR I切割后產(chǎn)生的黏性末端，因此其5,端序 列應為AATT-, 3,端序列應為-AATT, B正確。10. 答案：（l）EI和E4；甲的完整；甲和載體正確連接（2）轉錄：翻譯

17、（3）細胞核；去核卵母細胞（4）核 DNA解析：本題主要考查基因工程和細咆工程的相關知識。（1）據(jù)圖示信息分析：將L1-GFP融合基因（甲）插入質(zhì)粒時使用酶E1和E4進行酶切， 既能保證L-GFP融合基因的完整，又能保證LI-GFP融合基因與載體的正確連接。（2）目的基因在受體細胞中的表達包括轉錄和翻譯兩個過程。（3）將體外培養(yǎng)的含有目的基因的動物體細胞核移入該動物的去核卵母細胞中，經(jīng)過體外 胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術可獲得轉基因動物。（4）檢測目的基因是否存在于克隆牛的不同組織細胞中，采用PCR技術鑒定時，應以該牛 不同組織細胞中的核DNA作為PCR模板。11. 答案：基因組DNA（2）5，；

18、使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連；（4）8； 13（5）pH 為 8.5,緩沖液為 50 mmol/L Tris-HCl解析：本題考查基因工程的相關知識。(1) 利用PCR技術擴增a-淀粉酶基因前，需先獲得細菌的基因組DNA。(2) 構建重組DNA分子時，需用限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體，故需要在引物 的5,端添加限制性酶識別序列，且常在兩條引物上設計添加不同的限制性酶切位點，這樣可 以使DNA片段按照定方向插入表達載體，防止目的基因或載體自身的黏性末端之間相互 連接以及目的基因與載體反向連接。(3) 利用PCR技術進行擴增時，退火溫度的設定是成敗的關鍵，退火溫度過高會使引物無

19、法與模板的堿基配對，所以退火溫度的設定與引物有關；延伸時間的設定與擴增片段的長度 有關。(4) 密碼子由mRNA上相鄰的3個堿基組成，所以該片段的24個堿基包含8個密碼子。 該片段后面的第-個堿基為U,所以后面的密碼子最多可能有4x4=16 (種),根據(jù)題干信 息及題中給出的mRNA序列可知，虛線框后第一個密碼子不可能是終止密碼子，所以實際 最多有13種密碼子。(5) 由表格數(shù)據(jù)可知，該a-淀粉酶活性最高的條件是pH為8.5,緩沖液為5()mmol/LTris-HClo12.答案：(l)PCR；多肽(或蛋白質(zhì))載體；總RNA(2) 非天然氨基酸(Uaa) ； D細胞解析：本題考查基因工程的基本

20、操作程序以及免疫等知識。(1) 在基因工程中，通過逆轉錄產(chǎn)生的DNA可以通過PCR技術擴增。若基因內(nèi)個別編碼 氨基酸的序列被替換成編碼終止密碼子的序列，則會導致翻譯時肽鏈合成提前終止，因此改 造后的基因表達時不能合成完整長度的多肽鏈。(2) 將合成特殊tRNA的基因導入宿主細咆前需構建基因表達載體，因此需將該基因與載 體連接。要鑒定宿主細胞中tRNA基因是否導入，需提取宿主細胞的總RNA,用標記的目 的基因作探針，進行分子雜交，若出現(xiàn)雜交帶，說明【RNA基因轉錄產(chǎn)生了 tRNAo(3) 據(jù)(2)中信息，設計的特殊IRNA基因轉錄產(chǎn)生的tRNA能攜帶一個非天然氨基酸， 因此需將宿主細胞在含有這種

21、非天然氨基酸的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，以便該特殊IRNA基因轉 錄產(chǎn)生的tRNA能夠與非天然氨基酸結合。特殊IRNA基因轉錄需要RNA聚合酶參與，識 別其啟動子的酶是宿主的RNA聚合酶。（4）病毒活疫苗能夠侵入宿主細胞，引起機體的細胞免疫，因此與滅活疫苗相比，病毒活 疫苗的優(yōu)勢之一是其可以引起細胞免疫，增強免疫保護效果。（1）B基因在水稻卵細胞中不轉錄，推測其可能的原因是卵細胞中 （單選）。A.含B基因的染色體缺失B.DNA聚合酶失活C.B基因發(fā)生基因突變D.B基因的啟動子無法啟動轉錄（2）從水稻體細胞或中提取總RNA,構建文庫，進而獲得B基因編碼蛋白的序列。將該序列與基因（表達的熒光素酶能催化熒光

22、素產(chǎn)生熒光）連接成融合基因（表達的蛋白質(zhì)能保留兩種蛋白質(zhì)各自的功能），然后構建重組表達載體。（3）在過程、轉化篩選時，過程中T-DNA整合到受體細胞染色體DNA上，過程在培養(yǎng)基中應加入卡那霉素。（4）獲得轉基因植株過程中，以下鑒定篩選方式正確的是 （多選）。A. 將隨機斷裂的B基因片段制備成探針進行DNA分子雜交以Luc基因為模板設計探針進行DNA分子雜交B. 以B基因編碼蛋白的序列為模板設計探針與從卵細胞提取的mRNA雜交檢測加入熒光素的卵細胞中是否發(fā)出熒光（5）從轉基因植株未成熟種子中分離出胚，觀察到細胞內(nèi)僅含一個染色體組，判定該胚是 由未受精的卵細咆發(fā)育形成的，而一般情況下水稻卵細胞在未

23、受精時不進行發(fā)育，由此表明（2020,全國新高考I卷，25） 4.水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉，直鏈淀粉所占比例越 小糯性越強?？蒲腥藛T將能表達出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉入水稻，實現(xiàn)了對直鏈淀粉 合成酶基因（也1基因）啟動子序列的定點編輯，從而獲得了 3個突變品系。（1）將能表達出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構建重組載體時，所需的皆是，重組載體進入水稻細胞并在細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程稱為。（2）根據(jù)啟動子的作用推測，Wx基因啟動子序列的改變影響了,從而改變了 Wx基因的轉錄水平。與野生型水稻相比，3個突變品系中心基因控制合成的直鏈淀粉合成酶 的氨基酸序列（填“發(fā)生"或“

24、不發(fā)生”）改變，原因是。（3）為檢測啟動子變化對I四基因表達的影響，科研人員需要檢測1四基因轉錄產(chǎn)生的mRNA （1四mRNA）的量。檢測時分別提取各品系胚乳中的總RNA,經(jīng)過程獲得總cDNA。通過PCR技術可在總cDNA中專一性的擴增出I吸基因的cDNA,原因是（4）各品系I誑mRNA量的檢洲結果如圖所示，據(jù)圖推測糯性最強的品系為,原因是:1.51.00.5野生型品系1品系2品系3（2020全國III卷，38） 5.W是一種具有特定功能的人體蛋白質(zhì)。某研究小組擬仿照制備乳腺生物反應器的研究思路，制備一種膀胱生物反應器來得W,基本過程如圖所示。腺生物反應器的研究思路，制備一種膀胱生物反應器來得

25、W,基本過程如圖所示?；卮鸩妨袉栴}：（1）步驟中需要使用的工具酶有。步驟和所代表的操作分別是和。步驟稱為。（2）與乳腺生物反應器相比，用膀胱生物反應器生產(chǎn)W的優(yōu)勢在于不受轉基因動物的 （答出2點即可）的限制。（3）-般來說，在同一動物個體中，乳腺上皮細胞與膀胱上皮細胞的細胞核中染色體DNA所含的遺傳信息 （填“相同”或“不同"），原因是°（4）從上述流程可知，制備生物反應器涉及胚胎工程，胚胎工程中所用到的主要技術有（答出2點即可）。（2019全國I卷，38） 6.基因工程中可以通過PCR技術擴增目的基因?；卮鹣铝袉栴}。（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因

26、文庫中獲得?；蛭膸彀ê?。（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了 DNA雙鏈分子中的°（3）目前在PCR反應中使用酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是（2018全國I卷,38） 7.回答下列問題:（1）博耶（H.Boyer）和科恩（S.Coben）將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導入大腸桿菌細胞中進行了表達，該研究除證明了質(zhì)?？梢宰鳛檩d體外，還證明了 （答出兩點即可）o（2）體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^Ca2+參與的方法導入大腸桿菌細胞；而體外重組

27、的噬菌體DNA通常需與組裝成完整噬菌體后，才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNA導入宿主細胞，在細菌、心肌細胞、葉肉細胞中，可作為重組噬菌體宿主細胞的是（3）真核生物基因（目的基因）在大腸桿菌細胞內(nèi)表達時，表達出的蛋白質(zhì)可能會被降解, 為防止蛋白質(zhì)被降解，在實驗中應選用的大腸桿菌作為受體細胞，在蛋白質(zhì)純化的過程中應添加的抑制劑。（2019江蘇卷，33）8.圖I是某基因工程中構建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因（*）和氨節(jié)青霉素抗性基因Camp1）。請回答下列問題：圖1.GATl ATC（1）EcoR V酶切位點為 E八，EcoR V酶切出來的線性載體Pl為.CTA TAG.

28、末端。（2）用Taq DNA聚合能進行PCR擴增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺喋吟脫氧核苜酸。載體PI用酶處理，在兩端各添加了一個堿基為的脫氧核苜酸，形成P2； P2和目的基因片段在酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。（3）為篩選出含有重組質(zhì)粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板進行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長情況如下表（“ + ”代表生長，代表不生長）。根據(jù)表中結果判斷, 應選擇的菌落是 （填表中字母）類，另外兩類菌落質(zhì)粒導入情況分別是、f'*、菌落類型平板類型ABC無抗生素+氫苯青霉素+-四環(huán)素+.-氨節(jié)青霉素+四環(huán)素+.-（4）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基

29、因的重組質(zhì)粒，擬設計引物進行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應位置，PCR鑒定時應選擇的一對引物是。某學生嘗試用圖中另外一對引物從某一菌落的質(zhì)粒中擴增出了400 bp片段，原因是o（2020江蘇卷，33）9.如果己知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡捷地分析出己知序列兩側的序列，具體流程如圖（以EcoR 酶切為例）：I KW混合的DNA片段未知序列染色體DNA GA ATTC C TTAA；qJ未如序列3'5'環(huán)狀l）、Ani擴增| 7曲I）、A聚合的II連接1 DNA連接醵 已知序列PCR引物EcoRW灣序、分析PCR產(chǎn)物3,片段F的完整序

30、列請據(jù)圖回答問題:（I）步驟【用的EcoR I是種.酶,它通過識別特定的.切割特定位點。（2）步驟【用的DNA連接酶催化相鄰核昔酸之間的3，-羥基與5七磷酸間形成.PCR循環(huán)中，升溫到95 °C是為了獲得.;Taq DNA聚合酶的作用是催化（3）若如表所列為已知的DNA序列和設計的一些PCR引物，步驟III選用的PCR引物必須是 （從引物®中選擇，填編號）。DNA序列（虛線處省略了部分核昔酸序列）己知序列5Z -AACTATGCGCTC ATGA-GCAATGCGTAGCCTCT-3' HI 1 Hill Hill Illi III IIIIIH 3'-TT

31、GATACGCGAGTACTCGT TACGCATCGGAGA-5 ,PCR引物 5 七 AACTATGCGCTCATGA-3， 5,-GCAATGCGTAGCCTCT-3,(3)5,-AGAGGCTACGCATTGC-3, 5'-TCATGAGCGCATAGTT-3'（4）對PCR產(chǎn)物測序，經(jīng)分析得到了片段F的完整序列。卜冽DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核甘酸序列)，結果正確的是。A.5' - AACTATGCG -AGCCCTT -3' B.5' _ AATTCCATG CTGAATT -3'C. 5' - GCAATGCGT T

32、CGGGAA - 3' D.5' _ TTGATACGC CGAGTAC - 3'（2018全國II卷，38） 10.某種熒光蛋白（GFP）在紫外光或藍光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光， 這-特性可用于檢測細胞中目的基因的表達。某科研團隊將某種病毒的外殼蛋白（L1）基 因連接在GPP基因的5,末端，獲得了 L1-GFP融合基因（簡稱為甲），并將其插入質(zhì)粒P0, 構建了真核表達載體P】，其部分結構和酶切位點的示意圖如卜，圖中E1E4四種限制酶產(chǎn) 生的黏性末端各不相同。啟動子L基因CFP基因終止子11 '"t 11問答下列問題：（1）據(jù)圖推斷，該團隊在將甲插入質(zhì)粒P

33、0時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是。使用這兩種酶進行酶切是為了保證，也是為了保證。（2）將P1轉入體外培養(yǎng)的牛皮膚細胞后，若在該細胞中觀察到了綠色熒光，則說明ZJ基因在牛的皮膚細胞中完成了和過程。（3）為了獲得含有甲的牛，該團隊需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細胞的移入牛的中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細胞中，某同學用PCR方法進行鑒定，在鑒定時應分別以該牛不同組織細胞中的（填“niRNA” “總RNA”或“核DNA” ）作為PCR模板。（2018江蘇卷，32） 11.為生產(chǎn)具有特定性能的a-淀粉酶，研究人員從某種海洋細菌中克隆 了 a-淀粉酶基因（1 656個堿基對），利用基因工程大量制備a-淀粉酶，實驗流程如圖。請回 答下列問題：利用PCR技術擴增Q-淀粉酶基因前，需先獲得細菌的o(1) 為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接，