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1、1白細(xì)胞計(jì)數(shù)-Neubauer(牛鮑)板計(jì)數(shù)法長(zhǎng)治市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科:薛彬彬23 1、目的:掌握顯微鏡法白細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理 及方法。 2、原理:用白細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定 倍數(shù),同時(shí)破壞溶解紅細(xì)胞。將稀釋的血 液注入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積的白細(xì)胞數(shù),經(jīng)換算即可求出每升血液中的白細(xì)胞數(shù)量。 4 3、器材:顯微鏡、改良牛鮑計(jì)數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、吸頭等。 4、試劑:白細(xì)胞稀釋液:2%冰乙酸2ml, 10g/L結(jié)晶紫(或亞甲藍(lán))3滴,加蒸餾水到100ml。 5、標(biāo)本:新鮮 全血或末梢血。5 改良的牛鮑 計(jì)數(shù)板。 6 7操作步驟 1、加稀釋液:用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液 0.38ml
2、于小試管中。 2、吸取血液:用微量吸管吸取新鮮全血或 末梢血20ul,擦去管尖外部 余血。將吸管插入試管中白 細(xì)胞稀釋液的底部,輕輕放 出血液,并吸取上層白細(xì)胞 稀釋液清洗吸管2-3次。8 3、混勻:將試管中血液與稀釋液混勻,待 細(xì)胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?4、充池:再次將小試管中的細(xì)胞懸液混 勻,用微量吸管吸取7ul左右充 入改良牛鮑計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池中, 室溫靜置2-3分鐘,待白細(xì)胞完 全下沉。9 5、計(jì)數(shù):在低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4 個(gè)大方格的白細(xì)胞總數(shù)。 6、計(jì)算: WBC=N/41020106=N/20109 其中N為4個(gè)大方格的白細(xì)胞總數(shù)。107、細(xì)胞計(jì)數(shù)原則、細(xì)胞計(jì)數(shù)原則 大方格四邊壓大方格
3、四邊壓線細(xì)胞數(shù)左不線細(xì)胞數(shù)左不數(shù)右,數(shù)上不數(shù)右,數(shù)上不數(shù)下,數(shù)下, 弓形移動(dòng)弓形移動(dòng)118、考核評(píng)價(jià)、考核評(píng)價(jià) a. 常規(guī)考核標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)考核標(biāo)準(zhǔn) (RCS)RCS= 100%評(píng)價(jià):評(píng)價(jià): 白細(xì)胞白細(xì)胞 4.0109/L者,者, RCS30% 白細(xì)胞在(白細(xì)胞在(4.1-14.9)109/L者者 RCS20% 白細(xì)胞白細(xì)胞15.0 109/L者者 RCS15% 超過(guò)上述標(biāo)準(zhǔn)者為不合格超過(guò)上述標(biāo)準(zhǔn)者為不合格 b. 其他方法其他方法四大格所見白細(xì)胞最大值四大格所見白細(xì)胞最大值最小值最小值四大格所見白細(xì)胞數(shù)平均值四大格所見白細(xì)胞數(shù)平均值12注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)(1).稀釋液密封保存,防止污染,小試管、計(jì)稀釋
4、液密封保存,防止污染,小試管、計(jì)數(shù)板、蓋片均須清潔,以免雜質(zhì)、微粒等數(shù)板、蓋片均須清潔,以免雜質(zhì)、微粒等被誤認(rèn)為細(xì)胞。被誤認(rèn)為細(xì)胞。(2).采血時(shí)針刺深度必須適當(dāng),不能過(guò)度擠壓,采血時(shí)針刺深度必須適當(dāng),不能過(guò)度擠壓,防止組織液滲入或采血時(shí)間太長(zhǎng)引起血液防止組織液滲入或采血時(shí)間太長(zhǎng)引起血液凝固。凝固。(3).稀釋液和采血量要準(zhǔn)確,充分混勻,充液稀釋液和采血量要準(zhǔn)確,充分混勻,充液適量,無(wú)不足、外溢和氣泡,細(xì)胞分布均適量,無(wú)不足、外溢和氣泡,細(xì)胞分布均勻。勻。13 (4).白細(xì)胞總數(shù)在參考范圍內(nèi),大方格間白細(xì)胞總數(shù)在參考范圍內(nèi),大方格間的細(xì)胞數(shù)不得相差的細(xì)胞數(shù)不得相差10個(gè)以上,兩次重復(fù)計(jì)個(gè)以上,兩次重復(fù)計(jì)數(shù)誤差不得超過(guò)數(shù)誤差不得超過(guò)10。 (5).白細(xì)胞數(shù)量過(guò)高時(shí),可加大稀釋倍數(shù),白細(xì)胞數(shù)量過(guò)高時(shí),可加大稀釋倍數(shù),白細(xì)胞數(shù)量過(guò)低時(shí),可計(jì)數(shù)白細(xì)胞數(shù)量過(guò)低時(shí),可計(jì)數(shù)8個(gè)大方格的白個(gè)大方格的白細(xì)胞數(shù)或取雙倍血量。細(xì)胞數(shù)或取雙倍血量。14 (6).一些貧血患者血液中有核紅細(xì)胞增多,一些貧血患者血液中有核紅細(xì)胞增多,會(huì)計(jì)數(shù)在白細(xì)胞總數(shù)內(nèi),應(yīng)校正。會(huì)計(jì)數(shù)在白細(xì)胞總數(shù)內(nèi),應(yīng)校正。 校正公式:白細(xì)胞校正數(shù)校正公式:白細(xì)胞校正數(shù)/L=M(100/100+N) M為未校正前白細(xì)胞數(shù),為未校正前白細(xì)胞數(shù)
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