agilent-HPLC化學(xué)工作站操作培訓(xùn)ppt課件

1、Agilent 1100 Agilent 1100 化學(xué)工作站化學(xué)工作站操作培訓(xùn)操作培訓(xùn)20222022年年1 1月月2929日日Agilent 1100 化學(xué)工作站培訓(xùn)日程安排化學(xué)工作站培訓(xùn)日程安排第一天第一天 上午：上午： 1 歡送，相互介紹歡送，相互介紹 2 液相色譜基礎(chǔ)液相色譜基礎(chǔ) 3 HPLC儀器工作原理儀器工作原理下午：下午：1 Agilent 1100 硬件的結(jié)構(gòu)及特點硬件的結(jié)構(gòu)及特點 （真空脫氣機、泵、自動進(jìn)樣器、檢測器）（真空脫氣機、泵、自動進(jìn)樣器、檢測器） 2 Windows操作系統(tǒng)簡介操作系統(tǒng)簡介 3 化學(xué)工作站的重新安裝、配置及啟動化學(xué)工作站的重新安裝、配置及啟動 4

2、練習(xí)實驗一）練習(xí)實驗一）第二天第二天 上午：上午：1 化學(xué)工作站化學(xué)工作站View菜單介紹菜單介紹 2 方法的編輯、修改、存貯及運行方法的編輯、修改、存貯及運行 3 Agilent 各部件采集參數(shù)設(shè)置各部件采集參數(shù)設(shè)置 4 填寫樣品信息表、進(jìn)樣分析實驗二）填寫樣品信息表、進(jìn)樣分析實驗二）下午：下午：1 數(shù)據(jù)處理參數(shù)設(shè)置數(shù)據(jù)處理參數(shù)設(shè)置 （譜圖優(yōu)化、積分優(yōu)化）（譜圖優(yōu)化、積分優(yōu)化） 2 練習(xí)練習(xí) 3 譜圖處理、手動積分譜圖處理、手動積分 第三天第三天 上午：上午：1 各種定量方法原理及其優(yōu)缺點各種定量方法原理及其優(yōu)缺點 2 建立多級外標(biāo)校正曲線，用外標(biāo)法定量建立多級外標(biāo)校正曲線，用外標(biāo)法定量 3

3、 練習(xí)實驗三）練習(xí)實驗三）下午：下午：1 建立多級內(nèi)標(biāo)校正曲線，用內(nèi)標(biāo)法定量建立多級內(nèi)標(biāo)校正曲線，用內(nèi)標(biāo)法定量 2 再校正、設(shè)定報告類型再校正、設(shè)定報告類型 3 練習(xí)實驗四）練習(xí)實驗四） 4 高級功能簡介序列、高級功能簡介序列、DAD光譜功能光譜功能）第四天第四天 上午：上午：1 系統(tǒng)日常維護(hù)和保養(yǎng)系統(tǒng)日常維護(hù)和保養(yǎng) 2 工作站故障診斷功能的應(yīng)用工作站故障診斷功能的應(yīng)用 3 Agilent 1100泵的維護(hù)泵的維護(hù) （拆泵頭，更換泵頭消耗品）（拆泵頭，更換泵頭消耗品） 4 Agilent 1100檢測器的維護(hù)檢測器的維護(hù)VWD、DAD易耗品的易耗品的 更換，清洗流通池）更換，清洗流通池） 5

4、練習(xí)練習(xí) 結(jié)業(yè)午餐結(jié)業(yè)午餐 下午：下午：1 考試考試 2 發(fā)結(jié)業(yè)證發(fā)結(jié)業(yè)證 3 自由練習(xí)、討論自由練習(xí)、討論第一章第一章 色譜基礎(chǔ)色譜基礎(chǔ)本章內(nèi)容：本章內(nèi)容：液相色譜發(fā)展史液相色譜發(fā)展史液相色譜的基本概念液相色譜的基本概念影響峰形擴展的因素影響峰形擴展的因素歷史回顧歷史回顧0NNNNMgCHCH23CH3CH3H C30CH3CH3CH30CH300M.S. Tswett. Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24: 384-393 (1906)1906 - Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919)碳酸鈣吸附劑石油醚1940s - 分配色譜和紙色譜19

5、50s - 氣相, 薄層，凝膠過濾色譜 梯度洗脫色譜1960s - 商業(yè)高效液相色譜.柱色譜柱色譜裝載樣品裝載溶劑重力洗脫玻璃柱硅膠氧化鋁纖維素糖類粉末濾網(wǎng)1050100150Volume (mL)Time (hr)1.02.03.04.0高效液相色譜進(jìn)樣口檢測器色譜圖色譜柱溶劑泵混合器 (HPLC)液相色譜類型液相色譜類型Types of CompoundsSeparatedNeutralsWeak AcidsWeak BasesIonics, Bases, AcidsCompounds Insoluble inWater, Organic IsomersIonicsInorganic Io

6、nsHigh MW CompoundsPolymersModeReversed-PhaseIon-PairNormal-PhaseIon ExchangeSize ExclusionStationary PhaseC-18, C-8,C-18, C-8Silica, Amino, CyanoDiolAnion or Cation Exchange PolystyreneMobile PhaseWater/OrganicModifiersWater/OrganicIon-Pair ReagentOrganicsAqueous/BufferCounter IonGel Filtration-Aqu

7、eousGel Permeation-OrganicSilicaResinC-4, C-2色譜參數(shù)色譜參數(shù)Detector ResponseTimeABWWABInjectt0tR(A)tR(B)t = 保留時間 t = 死時間R W = 峰底寬度0 定性和定量tR(B) - tR(A)WA + WBR = 2tR(B) - tR(A)W1/2A + W1/2B = 1.176K=tR-t0 t0不同R值的峰重疊R=1.5可以得到基線分離0.40.50.60.70.81.001.25影響影響R值的因素值的因素tW=R =1/4Nx- 1xk1 + k容量因子選擇性柱效容量因子容量因子各組份的容

8、量因子K）隨溶劑洗脫強度的變化增大或縮小增加流動相的洗脫強度，降低了洗脫物的容量因子對于反相色譜，增加10的有機組成等于降低每個色譜峰的K值的1/2 到2/3。溶劑洗脫強度弱溶劑洗脫強度強246810110070030010060% AcetonitrileTime (min.)mAU20001600600080% AcetonitrileTime (min.)mAU100040% Water20% Water246810分離選擇性分離選擇性改用不同的流動相改變流動相的組成改變流動相pH值改變柱溫應(yīng)用特殊的化學(xué)效應(yīng)改變固定相()改變分離選擇性改變分離選擇性的方法的方法t 0 = 1 =kkBA

9、AB23AB12AB12=1.641.58=1.04=1.150.85=1.35=0.950.63=1.50kkBA溫度對分離選擇性溫度對分離選擇性的影響的影響40 601005Time in Minutes柱效柱效Detector ResponseInjectTime高柱效低柱效InjecttRWWTimeN = 16= 5.54HETP = tRW2tR2LN1/2W1/2BB計算柱效擴散h = A + C uBu.HETP BuC.uA線速度A = 渦流擴散B = 自由分子擴散C = 傳質(zhì)阻力范德姆特方程 The Van Deemter Equation+初始帶寬最終帶寬AA = 渦流擴

10、散多徑擴散仔細(xì)填充柱子使用均一的載體線 速 度HETP擴散擴散擴散擴散BB = 自由分子擴散縱向擴散在液相中影響小在低流速中影響大線速度HETP擴散擴散滯流的流動相流動相固定相C.uC = 傳質(zhì)阻力在低流速下可以降低傳質(zhì)阻力使用小顆粒載體可以降低傳質(zhì)阻力HETP線速度擴散h = A + C uBu.HETP BuC.uA線速度A = 渦流擴散B = 自由分子擴散C = 傳質(zhì)阻力范德姆特方程 The Van Deemter Equation+柱外效應(yīng)柱外效應(yīng)樣品體積 I.連接管路的體積色譜柱進(jìn)口設(shè)計色譜柱出口設(shè)計檢測池體積 ( 0.01M時，使用時，使用Seal Wash可以減小密封墊的磨損。可

11、以減小密封墊的磨損。l對于對于Agilent 1100系列泵為可選件系列泵為可選件。l用用10%異丙醇水溶液沖洗異丙醇水溶液沖洗WasherSupport seal assemblySeal帶有帶有Seal Wash的泵頭結(jié)構(gòu)圖的泵頭結(jié)構(gòu)圖123Agilent 1100系列四元泵系列四元泵G1354A; 真空脫氣機為標(biāo)準(zhǔn)配置真空脫氣機為標(biāo)準(zhǔn)配置!建議建議 .使用使用2，4，8mm內(nèi)徑的柱子內(nèi)徑的柱子流量范圍從流量范圍從 0.2 到到 10 ml/min應(yīng)用于研究和常規(guī)分析應(yīng)用于研究和常規(guī)分析特征特征/優(yōu)點優(yōu)點四通路四通路/低壓混合能靈活地進(jìn)行恒梯度或梯低壓混合能靈活地進(jìn)行恒梯度或梯度洗脫。度洗

12、脫。無需消耗昂貴的無需消耗昂貴的He而能進(jìn)行高性能真空脫而能進(jìn)行高性能真空脫氣。氣。自動沖程調(diào)節(jié)，混合非常均勻，降低基線噪自動沖程調(diào)節(jié)，混合非常均勻，降低基線噪音。音。對于高鹽流動相，可選擇對于高鹽流動相，可選擇Seal Wash清洗清洗密封墊。密封墊。Agilent 1100系列四元泵系列四元泵G1354A包括真空脫氣機包括真空脫氣機溶劑柜溶劑柜真空脫氣機真空脫氣機 G1322A四元泵四元泵 G1311A四元泵工作原理Authoring Division Name File NameSecurity Notice (if required) Vacuum ChamberMCGVAIVOBVD

13、amperPurge ValveWasteto injection devicefrom solventbottlesMCGV 比例閥AIV 主動閥OBV 單向閥Agilent 1100系列二元泵系列二元泵G1312A建議建議 .使用使用4mm內(nèi)徑柱子內(nèi)徑柱子流量范圍從流量范圍從 0.5 到到5 ml/min優(yōu)點優(yōu)點/特征特征高壓混合，無需脫氣。高壓混合，無需脫氣。對于有強紫外吸收的流動相，使用靜態(tài)混合器可以降低基線噪音。對于有強紫外吸收的流動相，使用靜態(tài)混合器可以降低基線噪音?？梢赃x擇溶劑切換閥自動進(jìn)行溶劑切換可以選擇溶劑切換閥自動進(jìn)行溶劑切換對于高鹽流動相，可選擇對于高鹽流動相，可選擇Se

14、al Wash清洗清洗Seal。增加真空脫氣機增加真空脫氣機,流量范圍可擴展至流量范圍可擴展至 0.05 5 ml/min推薦使用推薦使用1，2，4mm內(nèi)徑的柱子。內(nèi)徑的柱子。二元泵工作原理二元泵工作原理DamperPurge valveMixerABInlet valveOutlet valveWasteInlet valveOutlet valve帶有溶劑切換閥的二元泵帶有溶劑切換閥的二元泵ABMixerRestriction CapillaryMixing CapillaryClampDamperSolvent Selection ValveA1A2B1B2閥: 二元泵Outlet Ba

15、ll Valve(unique to the binary pumpdue to the presence of thesieve)Purge Valve(common to all)SieveActive Inlet Valve(common to all except 1050)Cartridgenew styleold styleHP 1100 Series Pumping Systems Flow Ranges OverviewIsocratic pumpG1310AIsocratic pump with degasserG1310AG1322AQuaternary pumpG1354

16、ABinary pumpG1312ABinary pump with degasserG1312AG1322A0.5-10 ml/min0.05-5 ml/min0.2-10 ml/min0.5-5 ml/min0.2-10 ml/min價格價格/性能性能系統(tǒng)延遲體積的比較系統(tǒng)延遲體積的比較泵 不帶混合器 帶混合器 混合器自動進(jìn)樣器 規(guī)范 旁路柱溫箱 規(guī)范 旁路1090 1050 1100 四元泵四元泵 1100 二元泵二元泵300-5001050-1250750V (loop)N/A4.1 or 8.20180-480600-900420300 + V (inj)6.23 or 60800-

17、1100n/an/a300 + V (inj)6.23 or 60800-1100n/an/a327 + V (inj)815 0min RangeMax Range304-5041058-1258189-489906-12061203-14061242-1442(單位：L)第六章第六章 Agilent 1100 自動進(jìn)樣器自動進(jìn)樣器00.10.20.30.40.50.6Precision 10 25 50 100Agilent 1100 系列自動進(jìn)樣系列自動進(jìn)樣器器 推薦推薦 進(jìn)樣體積從進(jìn)樣體積從0.1L到到1.8 ml 最多可容納最多可容納100個樣品個樣品瓶瓶 自動樣品前處理自動樣品前處

18、理性能性能/優(yōu)點優(yōu)點 進(jìn)樣體積重復(fù)性高進(jìn)樣體積重復(fù)性高 (典型典型 0.5% RSD) 進(jìn)樣動態(tài)范圍寬進(jìn)樣動態(tài)范圍寬 連續(xù)沖洗流路并有洗針功能降低樣連續(xù)沖洗流路并有洗針功能降低樣品殘留品殘留所有驅(qū)動均采用電子驅(qū)動所有驅(qū)動均采用電子驅(qū)動 可以容納不同規(guī)格的樣品瓶可以容納不同規(guī)格的樣品瓶靈活的進(jìn)樣程序編制可以進(jìn)行樣品前靈活的進(jìn)樣程序編制可以進(jìn)行樣品前處理處理 （例如柱前衍（例如柱前衍生）生） 使用旁路可以降低延遲體積使用旁路可以降低延遲體積Agilent 1100 系列自動進(jìn)樣器擴展進(jìn)樣范圍選擇系列自動進(jìn)樣器擴展進(jìn)樣范圍選擇推薦推薦 大體積進(jìn)樣大體積進(jìn)樣 標(biāo)準(zhǔn)和帶加熱的自動進(jìn)樣器標(biāo)準(zhǔn)和帶加熱的自動

19、進(jìn)樣器 新的或現(xiàn)有系統(tǒng)新的或現(xiàn)有系統(tǒng)性能性能/優(yōu)點優(yōu)點 非常靈活的擴展動態(tài)非常靈活的擴展動態(tài)范圍范圍 進(jìn)樣量準(zhǔn)確進(jìn)樣量準(zhǔn)確 可以從現(xiàn)有系統(tǒng)升級可以從現(xiàn)有系統(tǒng)升級 自動進(jìn)樣器管路連接自動進(jìn)樣器管路連接From pumpTo column compartmentAgilent 1100 系列自動進(jìn)樣器結(jié)系列自動進(jìn)樣器結(jié)構(gòu)構(gòu)帶機器手帶機器手的傳輸臂的傳輸臂樣品盤樣品盤計量泵計量泵樣品管樣品管進(jìn)樣閥進(jìn)樣閥100 x 2ml 樣品盤樣品盤15 x 6ml 樣品盤樣品盤40 x 2ml 樣品盤樣品盤標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣過程標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣過程 .Metering device6-port valveSampling unit

20、From pumpTo columnTo waste準(zhǔn)備位置準(zhǔn)備位置調(diào)用樣品瓶調(diào)用樣品瓶吸樣品吸樣品進(jìn)樣和運行位置進(jìn)樣和運行位置00.10.20.30.40.50.6RSD (%)Injection Vol. ( l) 1 3 5 7 9 10 25 50 100不同進(jìn)樣體積下的峰面積精度不同進(jìn)樣體積下的峰面積精度Agilent 1100 系列自動進(jìn)樣器進(jìn)樣測試系列自動進(jìn)樣器進(jìn)樣測試min05101520253035mAU020406080100#1#10#5#8Repetitive 1 l injections from 10 l sample10002000020406080100Inje

21、ction Volume (L)Area CountsCorrelation: 0.999995Agilent 1100 系列自動進(jìn)樣器進(jìn)樣線性系列自動進(jìn)樣器進(jìn)樣線性Agilent 1100 系列自動進(jìn)樣器系列自動進(jìn)樣器樣品容量樣品容量l100 x 2 ml vials in 1 trayl40 x 2 ml vials in 1/2 trayl15 x 6 ml vials in 1/2 trayl117 x 2 ml vials with external traylMicro vials for small volumes進(jìn)樣量進(jìn)樣量lStandard:0.1-100 l lUp to

22、1.8 ml using multi draw option lExpanded injection range: 0.1-900 l 精度精度l5-100 ltypically 0.5% RSDl1-5 ltypically 1% RSD 殘留殘留lWithout needle washtypically 0.1%lWith needle washtypically 0.05%延遲體積延遲體積lStandard300 l+injection volumelIn bypass mode 6.2 ll洗針洗針l 把樣品殘留降低到最小限度把樣品殘留降低到最小限度l多次吸液多次吸液用于進(jìn)樣量大于用于

23、進(jìn)樣量大于100Ll旁路旁路減小延遲體積減小延遲體積l進(jìn)樣程序進(jìn)樣程序l 非常靈活地執(zhí)行進(jìn)樣系列非常靈活地執(zhí)行進(jìn)樣系列Agilent 1100系列自動進(jìn)樣器特殊功能系列自動進(jìn)樣器特殊功能Impact of Needle Wash on Carry- Over with Capped and Uncapped Wash VialsCarry -over (%)Injection volume (L)0.10.51500.050.10.150.20.250.30.350.10.515PrimidoneCarry- over (%)Injection volume (L)0.10.51500.050

24、.10.150.20.250.30.350.10.515PhenacetineWithout needle washWith needle wash, wash vial uncappedWith needle wash, wash vial capped使用洗針程序可以降低樣品殘留使用洗針程序可以降低樣品殘留min510mAU04Sample:0.01 M 咖啡因咖啡因, 普里米酮普里米酮 , 非那西汀非那西汀Injection volume:1L Blank injection (1L) with needle washBlank injection (1L) without needle

25、 wash 樣品殘留峰lInjection range: 0.1 - 900LlUp to 1800L with Multi-draw kit 900L metering deviceSamplingunitTo wasteFrom pumpTo columnloop extension for multi-draw900L needle900 l loop extension 帶有多次吸樣裝置的自動進(jìn)樣器帶有多次吸樣裝置的自動進(jìn)樣器Agilent 1100 自動進(jìn)樣器進(jìn)樣程自動進(jìn)樣器進(jìn)樣程序序l用于樣品衍生或樣品前處理用于樣品衍生或樣品前處理l進(jìn)樣量從進(jìn)樣量從 0.5 到到 5 lMeter

26、ing deviceSampling unitTo wasteFrom pumpTo columnSampleReagent使用多次吸樣可以擴展進(jìn)樣量Agilent 1100 系列帶加熱的自動進(jìn)樣器系列帶加熱的自動進(jìn)樣器推薦推薦 . 對于熱依賴性的樣品使用對于熱依賴性的樣品使用 (生化生化)制藥行業(yè)制藥行業(yè) 臨床實驗室臨床實驗室性能性能/優(yōu)點優(yōu)點 半導(dǎo)體控制，可以非常方便、準(zhǔn)確的升半導(dǎo)體控制，可以非常方便、準(zhǔn)確的升溫和降溫溫和降溫 控溫范圍控溫范圍: 4- 40(室溫為室溫為25) 可容納可容納100個樣品瓶個樣品瓶 (冷卻冷卻)可更換樣品盤可更換樣品盤 自動進(jìn)樣器加熱原理自動進(jìn)樣器加熱原理室

27、溫空氣入口熱空氣出口加熱 / 冷卻部件熱交換器半導(dǎo)體部件l維護(hù)情況維護(hù)情況: l更換針更換針l更換針座更換針座l更換機器臂更換機器臂 l對機器臂定位對機器臂定位l分步命令分步命令自動進(jìn)樣器測試功能自動進(jìn)樣器測試功能第七章第七章 Agilent 1100 柱溫箱柱溫箱TCC柱溫箱的特征及優(yōu)點柱溫箱的特征及優(yōu)點推薦推薦 .溫度控制范圍：溫度控制范圍： 低于室溫低于室溫1080保留時間的再現(xiàn)性需要穩(wěn)定保留時間的再現(xiàn)性需要穩(wěn)定 的溫度的溫度如果需要在高于或低于室溫如果需要在高于或低于室溫 進(jìn)行分離操作時，需要使用進(jìn)行分離操作時，需要使用 柱溫箱柱溫箱特征特征/優(yōu)點優(yōu)點大空間，可以容納三根大空間，可以容

28、納三根30cm長色譜長色譜柱柱更換柱子非常方便更換柱子非常方便降溫非常方便降溫非常方便安裝柱識別可以記錄進(jìn)樣次數(shù)安裝柱識別可以記錄進(jìn)樣次數(shù)使用切換閥可以進(jìn)行柱切換使用切換閥可以進(jìn)行柱切換(可選可選)兩個單獨的加熱區(qū)可以分別控制溫度兩個單獨的加熱區(qū)可以分別控制溫度可以進(jìn)行程序升溫可以進(jìn)行程序升溫內(nèi)部死體積小內(nèi)部死體積小(左側(cè)左側(cè)3L，右側(cè)，右側(cè)6L)HP 1100 HP 1100 柱柱 恒恒 溫溫 與與 普普 通通 柱柱 溫溫 箱箱 比比 較較 Column:250 x 1 mm Vydac TP 218; Eluent: Water/Acetonitrile + TFA RT fluctuat

29、ions of peptide peak over a sequence of 10 consecutive tryptic myoglobin maps.70.4070.5070.6070.7070.8070.9071.0071.1071.2071.3012345678910Hoursretention timedaynightdayconventional column ovenHP1100 column thermostatwith Peltier heating and cooling 室室 溫溫 下下 的的 柱柱 溫溫 控控 制制 性性 能能SamplePNA EPA Standar

30、dColumn250 x 2.1 mm PAH, 5 mColumn Temp 18Flow rate 0.4 ml/minMobile Phase A: water B: acetonitrileGradient 50 to 95 %B in 22.5 min123456min510152025mAU051015202530789101112131415EnvironmentalApplicationPeakCompound%RSD of RT 1Naphthalene0.122Acenaphthene0.173Fluorene0.094Phenanthrene0.095Anthracene

31、0.086Fluoranthene0.087Pyrene0.088Benz(a)anthrac0.099Chrysene0.1010Benzo(b)fluor.0.1011Benzo(k)fluor.0.1012Benz(a)pyrene0.0813Dibenz(a)an0.1014Benz(ghi)pery0.1115Indeno(123)py0.10PNAs/PAHs improveat sub-ambient!PNAs分析條件優(yōu)化柱溫分析條件優(yōu)化柱溫SamplePNA EPA StandardColum 250 x 2.1 mm PAHMobile phaseWater/Acetonit

32、rile 50:50Flow rate0.4 ml/minGradientfrom 50 to 95 %B in 22.5 minColumn Temp:18, 25 and 30 Cmin510152025mAU0102030213546978101112141315161718C25C30CColumnTempPeak#Compound1Naphthalene2Anthrachinone3Acenaphthene4Fluorene5Phenanthrene6Anthracene7Fluoranthene8Pyrene9Benz(a)anthrac10Chrysene11Benzo(b)fl

33、uor.12Benzo(k)fluor.13Benz(a)pyrene14Dibenz(gh)an15Benz(ghi)an16Benz(ghi)pery17Indeno(123)py柱溫箱前視圖柱溫箱前視圖 .From AutosamplerTo Flow Cell Inlet Capillary柱識別系統(tǒng)柱識別系統(tǒng)Product number79916OD-552Serial number951001Batch number1675Geometry mm100 x2.1Stationary phaseODS HypersilParticle size10 mNumber of inject

34、ions999Maximum pressure allowed bar400Maximum temperature recommended 鳦70Maximum pH recommended12 柱識別必須安裝在距離識別天線2mm范圍之內(nèi)，且柱識別上HP的圖標(biāo)朝上。柱切換閥柱切換閥 (可選可選)(Rheodyne 7750)Electronic ActuatorCeramic statorVespel rotor seal (6-port)第八章第八章 Agilent 1100 檢測檢測器器VWD/DADAgilent 1100 VWD檢測檢測器器推薦推薦 產(chǎn)品開發(fā)及質(zhì)量控制產(chǎn)品開發(fā)及質(zhì)量控制

35、應(yīng)用需要高靈敏度檢測器應(yīng)用需要高靈敏度檢測器性能性能/優(yōu)點優(yōu)點.從從190600nm波長范圍，噪音小，基波長范圍，噪音小，基線穩(wěn)定線穩(wěn)定 (0.75x10-5 AU)可變波長檢測，可以對不同物質(zhì)的檢測獲可變波長檢測，可以對不同物質(zhì)的檢測獲取最大靈敏度。取最大靈敏度。更換氘燈及清洗檢測池非常方便更換氘燈及清洗檢測池非常方便內(nèi)置鈥玻璃可以非?？焖俜奖愕剡M(jìn)行波長內(nèi)置鈥玻璃可以非?？焖俜奖愕剡M(jìn)行波長校準(zhǔn)。校準(zhǔn)。根據(jù)不同需要選擇不同的流動池。根據(jù)不同需要選擇不同的流動池。Front Elements-VWDlamp流動池的后壓非常重要，使用正流動池的后壓非常重要，使用正確的出口連接管。確的出口連接管。光

36、學(xué)單元光學(xué)單元 - VWD光路光路氘燈氘燈光源透鏡光源透鏡濾光片鈥玻璃濾光片鈥玻璃/遮光）遮光）入射狹縫入射狹縫反射鏡反射鏡1反射鏡反射鏡2光柵光柵分光器分光器參比光電二極管參比光電二極管數(shù)模轉(zhuǎn)換板數(shù)模轉(zhuǎn)換板樣品光電二極管樣品光電二極管數(shù)模轉(zhuǎn)換板數(shù)模轉(zhuǎn)換板流通池流通池VWD 檢檢 測測 器器 靈靈 敏敏 度度min012345AU 00.000050.00010.000150.00020.000250.0003Signal: 0.23 mAUBaseline noise: 1x10-5AUSampleAnthracene standardColumn100 x 2.1 mm ODSMobile

37、 phaseWater/Acetonitrile 30:70Flow rate0.4 ml/min10 pg Anthracene多組份分析多組份分析min024681012141618mAU050010001500200025003000254nm370nm204nmGinko Biloba extractQuercetinIsohamnetinKaempferolMonitoring impuritiesat 204, 254 nmSensitive quantitationof active compoundsat 370 nm選擇性和靈敏度min02468101214mAU020040

38、060080010001200204nm254nm368nmHydroxybenzotriazoleTrimethoprimFurazolidoneChloramphenicolNalidixic AcidQuantitation of antibioticsVWD流通池Standard and MicroHigh Pressure高性能的高性能的Agilent 1100 DADAgilent 1100 二極管陣列檢測器二極管陣列檢測器推薦推薦 . 研究及方法開發(fā)研究及方法開發(fā) 多波長檢測多波長檢測 峰純度檢查峰純度檢查 峰確認(rèn)定性）峰確認(rèn)定性） 性能性能/優(yōu)點優(yōu)點.靈敏度高靈敏度高 (1x1

39、0-5AU)。 兩個燈，波長檢測范圍寬兩個燈，波長檢測范圍寬190950 nm）。）。1024個二極管個二極管 和和 1 nm 狹縫狹縫 。可變狹縫?？勺儶M縫。根據(jù)不同需要選擇流動池。根據(jù)不同需要選擇流動池?？梢赃M(jìn)行自動峰檢索可以進(jìn)行自動峰檢索 。利用紫外譜圖進(jìn)行峰確認(rèn)利用紫外譜圖進(jìn)行峰確認(rèn)Front Elements - DAD 進(jìn)口管可以直接連接到色譜柱出口進(jìn)口管可以直接連接到色譜柱出口氘燈流通池室 鎢燈DAD光路鎢燈鎢燈耦合透鏡耦合透鏡氘燈氘燈光源透鏡光源透鏡(消色差透鏡消色差透鏡)氧化鈥濾光片氧化鈥濾光片支撐透鏡支撐透鏡Flow cell光譜透鏡光譜透鏡光柵光柵陣列陣列狹縫狹縫 二極管

40、陣列檢測器與傳統(tǒng)二極管陣列檢測器與傳統(tǒng)紫外掃描檢測器比較紫外掃描檢測器比較Conventional Scanning DetectorDiode-array DetectorSourceEntranceslitConcave gratingDiode-arraydetectorFlowcellSourceEntranceslitExitslitFlowcellDetectorConcave gratingDAD流通池Micro-High PressureStd. and Semi-Micro可編程光路狹縫可編程光路狹縫-超微機械設(shè)計超微機械設(shè)計MotorSlit 可可 編編 程程 光光 路路

41、狹狹 縫縫 lReplaces three conventional slitslExtends slit width to 1 and 16 nmlFor fast optimization of resolution, sensitivity and linearitylDocuments slit width for GLP traceabilityHP 1050 DADHP 1100 Series three fixed slitsfor 2, 4 and 8 nmone programmable slitfor 1, 2, 4, 8 and 16 nm選擇不同狹縫選擇不同狹縫-靈敏度

42、與分辨率靈敏度與分辨率nm23024025026027028000.10.20.30.40.50.60.7 mAU 1 nm 2 nm 4 nm8 nm1 nm slit2 nm slit1.2）正常拖尾正常拖尾小峰在大峰后洗脫出來柱頭有污染物堆積原因：原因：部分峰拖尾部分峰拖尾二次保留效應(yīng)殘留硅醇的相互作用重金屬反應(yīng)所有峰均拖尾所有峰均拖尾柱外效應(yīng)柱子失效拖尾因子拖尾因子t =A+B2AABExcellentt = 1.0 - 1.05Acceptablet = 1.2Unacceptablet = 2Awfult = 4正常前伸4前伸峰前伸峰原因：柱子過載小峰在大峰之前洗脫出來拖尾因子拖尾

43、因子 0.95負(fù)峰負(fù)峰溶解樣品的溶劑通過柱子時平衡被破壞原因樣品吸收比流動相吸收小。RID中最常見正常負(fù)峰壓力問題壓力問題壓力問題壓力問題壓力過高壓力過高壓力過低壓力過低壓力波動壓力波動壓力過高壓力過高 柱子進(jìn)口過濾芯被污染柱子進(jìn)口過濾芯被污染 PURGE閥過濾芯被污染閥過濾芯被污染 色譜柱被污染色譜柱被污染 連接管路，尤其是針座毛細(xì)管堵塞連接管路，尤其是針座毛細(xì)管堵塞 進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)密封閥被堵塞進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)密封閥被堵塞 進(jìn)樣針或針座被阻塞進(jìn)樣針或針座被阻塞 壓力測量壓力測量使用此閥使用此閥分割系統(tǒng)分割系統(tǒng)監(jiān)測高壓監(jiān)測高壓l溶劑進(jìn)口過濾芯堵塞l連接管路泄漏或其它備件泵密封墊）l溶劑或流速改變l 主動

44、閥失靈l四元比例閥失靈l 單向出口閥失靈l色譜柱失效 (固定相) 壓力測量壓力測量壓力過低壓力過低溶劑進(jìn)口溶劑進(jìn)口過濾芯過濾芯監(jiān)測低壓監(jiān)測低壓壓力波動壓力波動 溶劑進(jìn)口過濾芯堵塞溶劑進(jìn)口過濾芯堵塞 溶劑未脫氣溶劑未脫氣 泵的密封墊老化泵的密封墊老化 出口單向閥失效出口單向閥失效 主動閥失效主動閥失效*通常是：泵內(nèi)有氣泡通常是：泵內(nèi)有氣泡溶劑進(jìn)口溶劑進(jìn)口過濾芯過濾芯監(jiān)測壓力變化監(jiān)測壓力變化監(jiān)測壓力波動是非?？旖莸姆绞絹砼袛啾玫男阅堋４酥祽?yīng)非常穩(wěn)定。監(jiān)測壓力變化監(jiān)測壓力變化附錄：高級功能簡介附錄：高級功能簡介序列功能簡介如何建立序列表如何執(zhí)行自動再校正如何作循環(huán)再校正數(shù)據(jù)文件如何命名如何使用 Se

45、quence SummaryDAD高級功能如何優(yōu)化色譜條件、提取色譜圖如何提取吸收光譜、創(chuàng)建譜庫如何進(jìn)行峰純度檢測編輯序列進(jìn)行自動分析編輯序列進(jìn)行自動分析1進(jìn)入 Method and Run Control 界面。2.從 Sequence 菜單，選擇 New Sequence。3 編輯 Sequence Parameters.4.編輯Sequence Table.5.選擇Sequence Output.6. 存貯序列。7. 從RunControl菜單或從Sequence Table運行序列。編輯編輯Sequence Parameters序列數(shù)據(jù)文件格式序列數(shù)據(jù)文件格式自動進(jìn)樣格式: 003-0

46、101003 樣品瓶號 (Vial Number) 01 序列號(Sequence Line)01 進(jìn)樣次數(shù)(Replicate)前綴(Prefix)Prefix01Prefix02, etc. 共8個字符。循環(huán)標(biāo)樣格式: C1-02019C 表明使用循環(huán)標(biāo)樣1 標(biāo)樣號02 序列號001 進(jìn)樣次數(shù) 序列表中再校正序列表中再校正循環(huán)再校正循環(huán)再校正Bracketed 序列序列使用使用 Insert Vial Ranges填寫校正表填寫校正表序列輸出序列輸出通過序列的Summary Report，您可以選擇簡單的一頁Summary報告或復(fù)雜的Summary報告，包括交叉樣品的統(tǒng)計報告。編輯編輯Se

47、quence Summary標(biāo)準(zhǔn)或擴展統(tǒng)計擴展統(tǒng)計擴展統(tǒng)計存貯序列文件存貯序列文件存貯當(dāng)前的序列存貯當(dāng)前的序列運行序列運行序列從RunControl菜單 選擇Run Sequence 或按F6鍵從Sequence Table運行部分序列及預(yù)覽模式部分序列及預(yù)覽模式Partial Sequence自動進(jìn)樣器圖標(biāo)顯示自動進(jìn)樣器圖標(biāo)顯示顯示序列表中樣品瓶的位置及序列表的運行狀態(tài)，顯示序列表中樣品瓶的位置及序列表的運行狀態(tài)，單擊此圖標(biāo)建立序列表。單擊此圖標(biāo)建立序列表。 從從 View菜單選擇菜單選擇Sampling Diagram.Display Options顯示紫外譜圖顯示紫外譜圖DAD高級功能高

48、級功能紫外譜圖顯示紫外譜圖顯示紫外譜圖和參比譜圖紫外譜圖和參比譜圖扣除背景的紫外譜圖扣除背景的紫外譜圖譜圖處理工具圖標(biāo)光譜選項選擇色譜圖上任意一點紫外譜圖選擇峰頂紫外譜圖平均譜圖選擇一組紫外譜圖選擇第一個參比選擇第二個參比峰選擇峰純度譜圖處理工具譜圖處理工具光譜選項光譜選項 -紫外譜圖紫外譜圖l 自動扣除背景l(fā) 平滑譜圖l 使用導(dǎo)數(shù)譜圖光譜選項光譜選項提出色譜峰上的吸收光譜光譜圖與譜庫中光譜比較打印出匹配系數(shù)Match: 998選擇某一色譜峰250 300W a v e l e n g t h (nm)250 300W a v e l e n g t h (nm)紫外譜庫紫外譜庫: 原理原理紫

49、外譜圖不特征。紫外譜圖依賴于流動相的變化而變化。未分離開的峰會給出錯誤結(jié)論。重疊峰會給出錯誤結(jié)論。沒有商業(yè)譜庫。紫外譜庫紫外譜庫: 當(dāng)前的局限性當(dāng)前的局限性狹縫寬度步徑保留時間窗口吸收閾值背景噪音譜圖噪音導(dǎo)數(shù)譜圖 影響譜圖匹配的因素影響譜圖匹配的因素創(chuàng)建譜庫創(chuàng)建譜庫輸入譜庫名稱及描述輸入譜庫名稱及描述提取化合物光譜圖提取化合物光譜圖把譜圖加入譜庫把譜圖加入譜庫 工作站自動標(biāo)出物質(zhì)的最大吸收和最小吸收波長。波長表波長表譜圖管理譜圖管理存貯譜庫文件存貯譜庫文件開始譜圖檢索開始譜圖檢索 - 打開譜庫打開譜庫 可以打開自己工作站中的譜庫，也可以通過網(wǎng)絡(luò)調(diào)用網(wǎng)上的譜庫。檢索模板檢索模板 檢索譜圖檢索譜圖

50、檢索結(jié)果檢索結(jié)果編輯譜庫標(biāo)題信息打印譜庫中譜圖退出當(dāng)前譜庫編輯譜庫中譜圖向譜庫添加光譜進(jìn)行譜庫檢索編輯譜庫檢索條件 譜圖處理工具 調(diào)用譜庫 保存譜庫檢索工具檢索工具峰純度峰純度在峰的洗脫過程中，通過比較所記錄的吸收光譜圖來評估色譜峰是否包含不純的物質(zhì)。光譜處理工具圖標(biāo)峰純度檢測等高圖3-D 顯示峰純度信息峰純度分析窗口峰純度分析窗口閾值曲線模擬曲線SpectralOverlay峰純度信息峰純度信息 -純峰純峰峰純度信息峰純度信息 - 不純峰不純峰差譜 - 純峰差譜 - 不純峰附加信息附加信息 - 差譜差譜l化合物特征。l媒介化合物溶劑的吸收。l噪音大小。 l化合物的波譜范圍。 影響峰純度的因素

51、影響峰純度的因素:優(yōu)化條件優(yōu)化條件:l使用光強度大的光源，對檢測器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)。l選擇合適的流動池和狹縫。l采集足夠的數(shù)據(jù)點。lPeakwidth設(shè)置值合理。l樣品濃度應(yīng)在檢測器的線性范圍內(nèi)。峰純度性能峰純度性能等高圖等高圖Isoabsorbance Plot ） 吸收強度、波長和保留時間作為等吸收吸收強度、波長和保留時間作為等吸收的曲線圖。的曲線圖。選擇最大吸收波長選擇最大吸收波長Cursor Quick View Zoom Signal Spectrum 等高圖等高圖 （Isoabsorbance Plot）黑色色譜圖表示當(dāng)前波長下的色譜圖3D Plot實驗一：重新安裝化學(xué)工作站實驗一：重

52、新安裝化學(xué)工作站 如果您的化學(xué)工作站在操作過程中被誤刪某些執(zhí)行程序或使用其它軟件與化學(xué)工作站發(fā)生沖突，致使化學(xué)工作站不能正常運行，那么就需要對化學(xué)工作站軟件進(jìn)行重新安裝。重新安裝化學(xué)工作站分四步進(jìn)行：拷貝：拷貝有用的文件包括數(shù)據(jù)文件，方法文件及序列文件。數(shù)據(jù)文件在 C:HPCHEM1DATA子目錄下；方法文件在 C:HPCHEM1METHODS子目錄下；序列文件在 C:HPCHEM1SEQUENCE子目錄下?？截怶innt子目錄下win.ini文件。刪除：刪除HPCHEM子目錄及子目錄下所有文件。修改Winnt子目錄下win.ini文件：刪除win.ini文件中以PCS, PCS1 為標(biāo)題的

53、程序段。刪除所有的包括桌面、菜單中的快捷方式。裝置：運行光盤上的Setup.exe文件；選擇需要安裝的軟件并輸入其序列號，執(zhí)行安裝。配置：選擇儀器的工作狀態(tài)；配置儀器的IP地址。修改完畢，存貯并退出win.ini編輯。修改修改win.ini文件文件把化學(xué)工作站軟件CD-ROM盤放入光驅(qū)，用鼠標(biāo)單擊Start鍵，選擇Run命令，在Run對話框Open右側(cè)空白欄中輸入D:setup.exe假設(shè)D為光驅(qū)后用鼠標(biāo)單擊OK鍵，進(jìn)行化學(xué)工作站的安裝。計算機啟動工作站安裝程序，進(jìn)入工作站安裝畫面。單擊Add/Change鍵，選擇需要安裝的軟件名稱。安裝軟件安裝軟件 選擇G2170AA LC ChemStat

54、ion軟件，單擊右上方的Add鍵，然后在New License Number框輸入G2170AA軟件的登錄號，再單擊右側(cè)的Add鍵； 如果有DAD檢測器，在完成上述操作后，再選擇G2180AA Spectra Evaluation軟件，單擊右上方的Add鍵，然后在 New License Number框輸入G2180AA軟件登錄號，再單擊右側(cè)的Add鍵。右上方的Add 鍵右側(cè)的Add 鍵選擇需要安裝的軟件輸入登錄號選擇完畢，單擊OK。單擊Install鍵進(jìn)行安裝。儀器配置儀器配置待軟件安裝完畢進(jìn)行儀器配置。單擊OK，確認(rèn)GPIB卡類型(舊的通訊方式，現(xiàn)在很少使用).選擇 Configurati

55、on Editor界面中 Configure菜單下Instrument選項，進(jìn)入儀器選擇界面。VWD：選Modular LC System；DAD：選Modular 3D LC System。選擇完畢，單擊OK。儀器選擇界面Configuration Editor界面1對于使用網(wǎng)絡(luò)(LAN)連接進(jìn)行通訊的儀器，需要選擇LAN通訊方式，然后單擊Add鍵，在Device Address設(shè)置界面選擇Identify by IP Address，在IP Address右側(cè)框輸入IP地址后，單擊OK2) 對于使用HP82341c卡進(jìn)行通訊的儀器，需要選擇GPIB通訊方式，在GPIB Address右側(cè)框

56、輸入GPIB地址，然后單擊Add鍵。GPIB地址的選擇取決于計算機與1100哪一個部件連接。例如：計算機與四元泵連接通訊，則GPIB地址選擇22。有關(guān)1100 HPIB地址的詳細(xì)信息見下表。舊的通訊方式，現(xiàn)在很少使用。3無論以哪一種方式進(jìn)行通訊，按1)或2)步驟設(shè)置完畢，存貯設(shè)置結(jié)果后退出 Configuration Editor界面。 當(dāng)安裝完工作站，第一次啟動當(dāng)安裝完工作站，第一次啟動Instrument 1 Online時，工作站自動時，工作站自動檢測哪些部件已經(jīng)成功地進(jìn)行通訊。如果通訊成功，在左側(cè)方框中被檢測哪些部件已經(jīng)成功地進(jìn)行通訊。如果通訊成功，在左側(cè)方框中被檢測到的部件圖標(biāo)為綠色

57、。雙擊左側(cè)方框中所有綠色圖標(biāo)后，綠色圖檢測到的部件圖標(biāo)為綠色。雙擊左側(cè)方框中所有綠色圖標(biāo)后，綠色圖標(biāo)移到右側(cè)方框中。至此，工作站地安裝徹底完成。標(biāo)移到右側(cè)方框中。至此，工作站地安裝徹底完成。左側(cè)方框右側(cè)方框?qū)嶒灦悍椒ň庉嫾皵?shù)據(jù)采集實驗二：方法編輯及數(shù)據(jù)采集 目的：掌握分析參數(shù)的設(shè)置，方法的編輯、存貯。熟悉一個樣品分析 的全過程。實驗條件：泵：四元泵、二元泵進(jìn)樣器：自動進(jìn)樣器、手動進(jìn)樣器柱溫箱：（可選組件）檢測器：可變波長檢測器VWD、二極管陣列檢測器DAD色譜柱：ODS 0.5um, 1004.6mm流動相比例：A.水15，B.甲醇85進(jìn)樣量: 10L 柱溫：Not control 檢測波長

58、：254nm 流動相流量：0.5ml/min 實驗步驟 打開計算機，進(jìn)入Windows操作系統(tǒng)。 開啟1100各部件電源開關(guān)。 待1100各部件自檢完畢，且通訊成功后，在計算機上啟動Online化學(xué)工作站 在Method & Run Control界面下，單擊Method 菜單，選擇菜單中Edit Entire Method進(jìn)入Method 編輯狀態(tài)。單擊OK進(jìn)入Method Information: Instrument 1 編輯界面，在Method Comments下方框中輸入對Method 的描述。輸入完畢單擊OK。 在泵參數(shù)設(shè)置界面，按要求輸入泵參數(shù)。設(shè)置完畢，單擊OK。 在自

59、動進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)置界面，選擇標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣方式(Standard Injection)，并輸入進(jìn)樣量。輸入完畢，單擊OK。（如果沒有自動進(jìn)樣器，此界面不會出現(xiàn)）。 檢測器參數(shù)設(shè)置。DAD參數(shù)設(shè)置：輸入樣品檢測波長、樣品譜帶寬度、參比波長、 參比譜帶寬度及響應(yīng)時間(PeakWidth)。VWD參數(shù)設(shè)置：輸入樣品檢測波長及響應(yīng)時間(PeakWidth)。 DAD參數(shù)設(shè)置請選中StoreVWD參數(shù)設(shè)置在柱溫箱參數(shù)設(shè)置界面，選擇Not Controlled。然后單擊OK。 在Signal Details: Instrument 1編輯界面，單擊OK。 在積分參數(shù)設(shè)置界面，單擊OK。 在Specify Repo

60、rt: Instrument 1編輯界面，單擊OK。 以上三項均屬數(shù)據(jù)分析參數(shù)，在此實驗中均不設(shè)置。 在運行時間表中(Run Time Checklist)編輯界面，選擇Data Acquisation 和Standard Data Analysis。 參數(shù)選擇完畢，單擊參數(shù)選擇完畢，單擊OKOK，整個分析方法編輯完成。，整個分析方法編輯完成。 方法存貯。方法編輯完畢，單擊方法存貯。方法編輯完畢，單擊MethodMethod菜單，選擇菜單，選擇Save Method AsSave Method As，輸入存盤方法文件名。輸入存盤方法文件名。 運行樣品 打開Purge閥，進(jìn)行系統(tǒng)初始化。 運行Instr