實驗測定指標及儀器

1、1總糖的測定(手持糖量儀GB/T 12295-1990)采用GB T6194 1986 斐林試劑法測定總糖含量。1）試劑菲林試劑甲液：稱取69.3g硫酸銅晶體，用蒸餾水溶解，定容至1000ml菲林試劑乙液：稱取346g酒石酸鉀鈉，100g氫氧化鈉，用蒸餾水溶解定容至1000ml次甲基藍溶液：1g次甲基藍溶于100ml水葡萄糖6mol/L鹽酸溶液。甲基紅指示劑：0.1%（體積分數(shù)）乙醇溶液。稱取0.1g甲基紅溶于100ml 60%（體積分數(shù)）乙醇中。200g/L（體積分數(shù)）氫氧化鈉溶液2）儀器水浴鍋，pH計2 測定原理在沸熱條件下，用還原糖溶液滴定一定量的費林試劑時將費林試劑中的二價銅還原為一價

2、銅，以亞甲基藍為指示劑，稍過量的還原糖立即使藍色的氧化型亞甲基藍還原為無色的還原型亞甲基藍。3 儀器設(shè)備a. 告速組織搗碎機；b. 電熱恒溫水浴；c. 1000W調(diào)溫電爐；d. 玻璃儀器：200ml容量瓶；50ml堿式滴定管。4 試劑配制4.1 費林試劑甲：稱取硫酸銅（CUSO4 .5H2O, 分析純）34.6g溶于水中，稀釋至500ml,過濾，貯于棕色瓶內(nèi)。4.2 費林試劑乙：稱取氫氧化鈉50g和酒石酸鉀納（ 分析純 ）138g溶于水中，稀釋至500ml，用石棉墊漏斗抽濾。4.3 轉(zhuǎn)化糖標準溶液：稱取9.5蔗糖（分子純）用水溶解后轉(zhuǎn)入1000ml容量中，加入6MHCl（分析純）10ml，加水

3、至100ml。在20250C下放置三天或在250C保溫24h，然后用水定溶（此為酸化的1%轉(zhuǎn)化糖液，可保存34個月）測定時，取1%轉(zhuǎn)化糖液25.00ml放入250ml容量瓶中，加入甲基紅指試劑一滴，用1MnaOH溶液中和后用水定溶，即為1ml/ml轉(zhuǎn)化糖標準溶液。4.4 亞甲基藍溶液：稱取0.5g亞甲基藍(分析純)溶于100ml水中。4.5 乙酸鋅溶液：稱取21.9g乙酸鋅Zn(OAC)2 . 2H2O,分析純?nèi)苡谒?，加冰乙?ml,稀釋至100ml。4.6 亞鐵氫化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氫化鉀K4Fe(CN)6 .3H2O,分析純?nèi)苡谒?，稀釋?00ml。5 樣品提取液制備取待側(cè)樣品適

4、量，洗凈，用不銹鋼刀將可食部分切成適當小塊充分混合后，按四分法取樣。稱取100g鮮樣加入等重量的水，放入組織搗碎機中搗成1：1勻漿，有些材料勻漿比例可適當調(diào)整，多汁果蔬類可直接搗漿。稱取勻漿25.0或50.0g（相當于樣品12.5或25.0g）放入150ml燒杯中，含有機酸較多的材料加0.52.0g粉狀CaCO3調(diào)至中性（廣泛試紙檢試）。用水將樣液全部轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中，并調(diào)整體積約為200ml。置80±20C水浴保溫30min,其間搖動數(shù)次，取出加入乙酸鋅溶液及亞鐵氫化鉀溶液各25ml,冷卻至室溫后，用水定溶，過濾備用。6 還原糖測定6.1 費林試劑的標定取費林試劑甲、乙各5.

5、00ml或在測定前先等體積混合后取10.00ml混合液于250ml錐形瓶中，放入玻璃住45粒，先加入比預(yù)測（按6.2進行預(yù)測）僅少0.5ml的1ml/ml轉(zhuǎn)化糖標準液。將此混合液置1000W電爐上加熱，使其在2min左右沸騰，準確煮沸2min,此時不離開電爐，立即加入0.5%亞甲基藍指示劑6滴，并繼續(xù)以每45s的滴速滴加標準糖液的毫升數(shù)V1標準糖濃液mg/ml,即得10ml費力試劑所相當?shù)奶堑暮量藬?shù)。注：無色的還原型亞甲基藍極易被空氣的氧所氧化，應(yīng)調(diào)節(jié)電爐溫度使瓶內(nèi)溶液始終保持沸騰狀態(tài)，液面覆蓋水蒸氣不與空氣接觸。整個滴定過程錐形瓶不能離開電爐隨意搖動。6.2 預(yù)測取費林試劑甲、乙各5.00m

6、l或10.00ml混合液于250ml錐形瓶中，有滴定管加入待定測糖液約15ml,在電爐上加熱至沸，約費15s后迅速滴加待測糖液，至呈現(xiàn)極輕微的藍色為止，此時加入0.5%亞加基藍指示劑6滴，繼續(xù)滴加待測糖液，直至溶液藍色褪盡為止，記下待測糖液的用量V2(毫升數(shù))。6.3 準確測定取沸林試劑甲、乙各5.00ml或10.00ml混合液加入錐形瓶中，由滴定管加入比預(yù)測僅少0.5ml的待定測糖液，并補加V1-V2毫升數(shù)（標定沸林試劑所消耗的標準糖液毫升數(shù)V1減去預(yù)測消耗的待測糖液毫升數(shù)V2，即為應(yīng)補加水的毫升數(shù)），使其與標定沸林試劑時的反應(yīng)體積一致。以下按沸林試劑標定同樣操作，繼續(xù)滴至終點。前后沸熱時間

7、須在3min左右。待測糖液消耗量應(yīng)控制在1550ml 范圍內(nèi)，不能大于標定沸林試劑所用標準糖液體積V1。否則應(yīng)增減稱樣量重新制備待測液。7 可溶性總糖測定取已經(jīng)制備的待溶液100ml于200ml容量瓶中，加6MHCl10ml。在80±20C水于加熱10min,放入冷水槽中冷卻后，加甲基紅指示劑二滴用6MnaOH溶液中和，用水定溶。以下步驟同6.2、6.3。8 結(jié)果計算8.1 計算式a. 還原糖（%）按式（1）計算：還原糖（% ，以轉(zhuǎn)化糖計）=b. 可溶性總糖（%）按式（2）計算：可溶性總糖（%）以轉(zhuǎn)化糖計）=式中：W-樣品稱重，g;G-10ml沸林試劑相當?shù)霓D(zhuǎn)化糖，ml；V-準確滴定

8、時所用待測液的體積，ml;A-稀釋倍數(shù)；250-容積體積，ml;1000-有毫克換算為克。c. 非還原糖（%）按式（3）計算：非還原糖（%）以蔗糖計）=（可溶性總糖還原糖）×0.95（3）式中：0.95-由轉(zhuǎn)化糖換算成蔗糖的因數(shù)。8.2 結(jié)果表示測定結(jié)果計算到小數(shù)點后二位，兩次平均試驗結(jié)果相對相差：含量在5%以下的不超過3%；含量在510%的不超過2%；含量在10%以上的不超過1%。鮮洋以鮮基表示，風(fēng)干樣以風(fēng)干基表示。注：還原糖及可溶性總糖也可用葡萄糖表示，沸林試劑須另用葡萄糖標定，非還原糖用轉(zhuǎn)化糖換算成蔗糖形勢表示。2.Vc 含量測定2,6-二氯酚靛酚(GB/T5009.159-2

9、003)1)2，6二氯酚靛酚染料，配制成每毫升所含維生素C的毫克數(shù)（T值）；2%草酸2000ml；1%草酸2000ml2）組織攪碎機；10m量筒1個；5ml移液管2根；酸式滴定管1個；50ml燒杯兩個；50ml三角燒瓶4個；漏斗2個；漏斗架1個；濾紙2張；洗耳球1個；玻璃棒（所有儀器使用前清洗，烘干備有）實驗步驟：1. 取300500g新鮮水果，置于1000ml燒杯內(nèi)，稱重，精確至0.01g2 將樣品倒入組織攪碎機，加入等量2%草酸（w/v），加蓋旋緊，勻漿25min3 取出勻漿物質(zhì)（以上統(tǒng)一進行）4. 用50ml燒杯稱取20g勻漿物質(zhì)，精確度1%，編號，記錄。5. 將稱取的勻漿物質(zhì)倒入具塞量

10、筒，用1%草酸反復(fù)洗滌燒杯（3次），其洗滌液倒入具塞量筒，并用1%草酸定容到100ml。6. 加塞后將勻漿物質(zhì)與1%草酸充分混合，靜置10min。7. 取上液過濾。8. 用5ml移液管吸取5ml濾液置于三角燒瓶內(nèi)，加入5ml1%草酸（2個平行樣品）；用5ml移液管吸取5ml蒸餾水，加入5ml1%草酸（2個空白對照）。9. 2，6二氯酚靛酚染料滴定至終點（淡粉紅色，15s不褪色），記錄染料消耗量。10. 計算每100g樣品中維生素C的含量（ml）及平行樣品誤差范圍，公式如下：維生素C含量（ml/100g）=（V1-V2）×TW×1003.總酸的測定采用GB T12456-20

11、08 酸堿滴定的指示劑法測定總酸含量。1） 儀器堿式滴定管 250mL錐形瓶 25mL移液管2） 試劑1% 酚酞乙醇溶液 稱取1g酚酞,用95%乙醇溶解并定容到100mL.0.1mol/L NaOH標準溶液 稱取4g NaOH,加水約100mL,溶解后移入1000mL容量瓶中,用蒸餾水定容到刻度,貯存于橡膠塞試劑瓶中.4 呼吸強度的測定:靜置法0.4N氫氧化鈉、0.3N草酸、飽和氯化鋇溶液、酚酞指示劑、凡士林。干燥器、滴定管架、鐵夾、25ml滴定管、150ml三角瓶、500ml燒杯、8cm培養(yǎng)皿、小漏斗、10ml移液量管、洗耳球、100ml容量瓶、萬用試紙、天平。用移液管吸取0.4N的NaOH

12、20ml放入培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿放進呼吸室，放置隔板，放入1斤左右果蔬，封蓋，測定1小時左右（要記錄測量具體時間，放置到快要下課為止）取出培養(yǎng)皿把堿液移入錐心瓶中（沖洗35次），加飽和BaCl25ml和酚酞指示劑2滴，用0.3N草酸滴定，用同樣方法作空白滴定5 失水率失水率/ % = (失重質(zhì)量/ 原質(zhì)量) ×1006 好果率好果率/ % = (完好果數(shù)/ 檢查總果數(shù)) ×1007.可溶性固形物的含量步驟：吸取試液10.00于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。（國標法：重量法）吸取上述稀釋液5.00ml置于已烘至恒重的稱量瓶中移入（103±2）電熱恒溫干燥箱中，將瓶蓋斜置于瓶邊。4h后，將瓶蓋蓋好，取出，移入干燥箱內(nèi)，冷卻至室溫（約需0.5h），稱重。再烘0.5h，冷卻，稱量，直至兩次稱量不超過1mg即為恒重。計算：樣品中可溶性固形物的含量按下式計算