微生物革蘭氏染色法和芽孢染色法PPT學(xué)習(xí)教案

1、會計學(xué)1微生物革蘭氏染色法和芽孢染色法微生物革蘭氏染色法和芽孢染色法第1頁/共12頁第一步：初染第一步：初染: :結(jié)晶紫使菌體著上藍(lán)紫結(jié)晶紫使菌體著上藍(lán)紫色；色；第二步：媒染第二步：媒染: :碘和結(jié)晶紫形成大碘和結(jié)晶紫形成大分子復(fù)合物，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)分子復(fù)合物，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)；第三步：酒精脫色第三步：酒精脫色: :細(xì)胞壁成分和構(gòu)細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)G G+ +菌：菌：細(xì)細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫藍(lán)色；胞不能被酒精脫色，仍呈紫藍(lán)色；G G- -菌菌：酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色；酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色；第四步第四步: :番紅復(fù)染番紅復(fù)染， G

2、G- -菌呈紅色，菌呈紅色， G G+ +菌呈紫藍(lán)菌呈紫藍(lán)色。色。第2頁/共12頁革蘭氏染色法革蘭氏染色法第3頁/共12頁混合涂片法涂片、干燥、固定混合涂片法涂片、干燥、固定 結(jié)晶紫初染結(jié)晶紫初染1min1min，水洗，水洗 碘液媒染碘液媒染1min1min，水洗，水洗 用濾紙吸去殘水后，將玻片傾斜，在白色背景下，用用濾紙吸去殘水后，將玻片傾斜，在白色背景下，用95%95%乙醇脫色，直至流出的乙醇無色時，立即水洗乙醇脫色，直至流出的乙醇無色時，立即水洗 番紅復(fù)染番紅復(fù)染2min2min，水洗，水洗 干燥后，鏡檢干燥后，鏡檢注：注：乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，脫色不足，陰性菌被染成陽性菌

3、；脫色過度，陽性菌被染成陰性菌乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，脫色不足，陰性菌被染成陽性菌；脫色過度，陽性菌被染成陰性菌革蘭氏染色法第4頁/共12頁 陽性菌（藍(lán)紫色）陽性菌（藍(lán)紫色） 陰性菌（紅色）陰性菌（紅色）第5頁/共12頁第6頁/共12頁芽孢染色法原理 用弱堿性染料孔雀綠在用弱堿性染料孔雀綠在加熱條件加熱條件下染色，使染下染色，使染料不僅進(jìn)入菌體，也可進(jìn)入芽孢內(nèi)。進(jìn)入菌體料不僅進(jìn)入菌體，也可進(jìn)入芽孢內(nèi)。進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色后難的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色后難以被水洗脫，當(dāng)用對比度大的復(fù)染劑染色后，以被水洗脫，當(dāng)用對比度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍保留初染劑

4、的顏色，而菌體被染成復(fù)染芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體被染成復(fù)染劑的顏色，使芽孢和菌體易于區(qū)分。劑的顏色，使芽孢和菌體易于區(qū)分。第7頁/共12頁第8頁/共12頁1 1）改良的）改良的Schaeffer-FultonSchaeffer-Fulton氏染色法氏染色法制備菌懸液制備菌懸液 孔雀綠染液孔雀綠染液(2(2滴滴) )水浴加熱染色水浴加熱染色15-20 min 15-20 min 取取1 1小滴，涂片，固定小滴，涂片，固定 水洗水洗 番紅染液復(fù)染番紅染液復(fù)染2-3min2-3min，傾去染液，水洗，傾去染液，水洗 鏡檢鏡檢2 2）Schaeffer-FultonSchaeffer-Fulton氏染色法氏染色法涂片固定涂片固定 孔雀綠染液在微火上加熱染色孔雀綠染液在微火上加熱染色5min 5min 水洗水洗 番紅染液復(fù)染番紅染液復(fù)染2min 2min