微生物取樣方法

1、微生物取樣方法舉例一： 一、 空氣采樣及檢驗方法1 培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂平板，按中條配制2 采樣（空氣沉降法）布點：面積小于30 平方米的車間，設(shè)一對角線，在線上取3 點，即中心一點，兩端在距墻1米處各取一點；面積大于30 平方米的車間，設(shè)東、西、南、北、中5 個點，其中東、西、南、北點均距墻1 米。采樣高度：與地面垂直高度80-150 厘米。采樣方法；用直徑為9 厘米的普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點上暴露20 分鐘蓋上送檢培養(yǎng)。3 培養(yǎng)：于37培養(yǎng)24 小時。4 檢測頻率：每周空氣質(zhì)量標準：生車間、熟車間、成品車間：低于100 個半成品庫、成品庫：低于10 個二、設(shè)備的采樣與檢驗方法根據(jù)生產(chǎn)過程所

2、要求的重點衛(wèi)生部位，實驗室對其進行涂抹采樣，進行細菌總數(shù)檢驗。1 采樣方法涂抹法（適用于表面平坦的設(shè)備和工器具產(chǎn)品接觸面）取經(jīng)過滅菌的鋁片框（框內(nèi)面積為50 平方厘米）放在需檢查的部位上，用無菌棉球蘸上無菌生理鹽水擦拭鋁片中間方框部分，擦完后立即將棉球投入盛有10 毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5 平方厘米。貼紙法（適用于表面不平坦的設(shè)備和工器具接處面）將無菌規(guī)格紙（5X5厘米，紙質(zhì)要薄而軟）用無菌生理鹽水泡濕后，于需測部分分別貼上兩張，兩張紙面積共50 平方厘米，然后取下放入盛有10 毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5 平方厘米。2 檢驗方法細菌總數(shù)的檢驗將上述樣液充分振搖

3、，根據(jù)衛(wèi)生情況，相應(yīng)地做10 倍遞增稀釋，選擇其中2-3 個合適的稀釋度作平皿傾注培養(yǎng)，培養(yǎng)基用普通營養(yǎng)瓊脂，每個稀釋度作2 個平皿，每個平皿注入1 毫升樣液，于37培養(yǎng)24 小時后計菌落數(shù)。結(jié)果計算表面細菌總數(shù)（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均數(shù)X樣液稀釋倍數(shù)/30X2致病菌的檢驗沙門氏菌，參照進行金黃色葡球菌，參照進行4 .檢驗合格標準：細菌總數(shù)10100個/ cm2,5 .關(guān)鍵點：細菌總數(shù)0 10個/ cm2一般區(qū)域：細菌總數(shù)0 100個/ cm2三、人員手表面細菌污染情況的檢驗1. 采樣方法：用一支蘸有無菌生理鹽水的棉拭子涂擦被檢對象手的全部，反復(fù)兩次，涂擦的時候棉拭子要相應(yīng)地轉(zhuǎn)動，

4、擦完后，將手接觸部分剪去，將棉拭子放入裝有10 毫升無菌生理鹽水的試管內(nèi)送檢培養(yǎng)。2. 檢驗方法：同工器具表面細菌總數(shù)檢驗方法。3. 結(jié)果計算：每只手表面的細菌總數(shù)（cfu/只手）二平皿上菌落的平均數(shù)x 樣液稀釋倍數(shù)四、消毒液藥效的微生物學(xué)鑒定法1 采樣對象：正常使用的消毒液，和已知配制好備用的消毒液2 采樣及檢驗方法在無菌條件下，用無菌吸管吸取1 毫升樣液，加入9 毫升稀釋液中混勻，對于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可；對于含氯消毒劑、含碘消毒劑，需在肉湯中加入%硫代硫酸鈉，對洗必泰、季錢鹽類消毒劑，需在肉湯中加入 3% (W/V) 土溫80和卵磷脂；對醛類消毒劑，需在肉湯中加入%

5、甘氨酸；對于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入(W/V) 土溫80,以中和被檢樣液中的殘效作用，將注入了樣液的稀釋液充分搖勻，取1 毫升注入平皿，隨之倒入普通營養(yǎng)瓊脂，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，將平皿于37條件下培養(yǎng) 24 小時后計平板上生長的菌落數(shù)。3 結(jié)果分析平板上有菌生長，表明被檢樣液中有殘存活菌，若每個平板菌落數(shù)在10 個以下，仍可用于消毒， 若每個平板菌落數(shù)超過10 個，說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100 個，即不宜在用于消毒。該公式是一個經(jīng)驗公式.它的理論模式依據(jù)是：100CM2的面積上10MIN降落的菌落數(shù)，等于 1 升空氣中所含的細菌總數(shù).系數(shù)50000基于上述假說

6、和單位換算而來.細菌總數(shù)(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT5/10T:實際放置了 5MIN;100/A:A單一培養(yǎng)皿面積；1000:1M3=1000L啊,換算成 m3N:平均菌落數(shù)舉例二：一、物體表面采樣及檢查方法采樣面積被采表面 100cm2,取全部表面；被采表面100cm2,取100cm2。采樣方法用5 x 5cm2的標準滅菌規(guī)格板；放在被檢物體表面，用浸有無菌生理鹽水液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次；并隨之轉(zhuǎn)動棉拭于。連續(xù)采樣14個規(guī)格板面積；剪去手接觸部分，將棉拭于放入裝10ml 采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭子直接

7、涂抹物體的方法采樣。培養(yǎng)(略)二、空氣及與食品接觸面微生物檢驗方法、檢驗標準1、 目的：檢測生產(chǎn)車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機械設(shè)備的微生物指標，生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當中病原微生物的監(jiān)控，達到規(guī)定標準，以控制食品成品的質(zhì)量。2、 參照標準：中華人民共和國國家標準一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準GB15979- 1995、HACCP®理與實施 、 中華人民共和國國家標準公共場所空氣微生物檢驗方法細菌總數(shù)測定GB/T 2000、中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、 出入境檢驗檢疫局二000 四年出入食品微生物檢驗培訓(xùn)教

8、材中出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細菌檢驗方法、日本東京冷凍食品檢驗方法。3、 采樣與檢測方法：空氣的采樣與測試方法樣品采集：（1）取樣頻率：a）車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時，在加工前進行采樣，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。b）全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進行采樣。c）產(chǎn)品檢驗結(jié)果超內(nèi)控標準時，應(yīng)及時對車間進行采樣，如有檢驗不合格點，整改后再進行 采樣檢驗。d）實驗性新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗。e）正常生產(chǎn)狀態(tài)的采樣，每周一次。（ 2）采樣方法在動態(tài)下進行，室內(nèi)面積不超過 30 m2,在對角線上設(shè)里、中、外三點，里、外點位置距墻1m；室內(nèi)面積超過30 m2,設(shè)東、西、南、北、中五點，周圍 4點距墻1

9、 m。采樣時，將含平 板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板（直徑9 cm）置采樣點（約桌面高度），并避開空調(diào)、門窗等空氣流通處， 打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。 采樣后必須盡快對樣品進行相應(yīng)指標的檢測，送檢時間不得超過6h,若樣品保存于04c條件時，送檢時間不得超過 24h。菌落培養(yǎng)：（1）在采樣前將準備好的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置37c ±1C培養(yǎng)24 h,取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除。養(yǎng)基剔除。（ 2）將已采集樣品的培養(yǎng)基在6 h 內(nèi)送實驗室，細菌總數(shù)于37±1培養(yǎng) 48h 觀察結(jié)果，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。（ 3）菌落計算：a） 記錄平均菌落數(shù)，用“個/皿”來報告結(jié)

10、果。用肉眼直接計數(shù)，標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用510倍放大鏡檢查，不可遺漏。b） 若培養(yǎng)皿上有2 個或 2 個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2 個或 2 個以上菌落計數(shù)。工作臺（機械器具）表面與工人手表面采樣與測試方法：樣品采集：（1）取樣頻率：a）車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時，在加工前進行擦拭檢驗，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情 況。b）全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進行全面擦拭檢驗。c）產(chǎn)品檢驗結(jié)果超內(nèi)控標準時，應(yīng)及時對車間可疑處進行擦拭，如有檢驗不合格點，整改后 再進行擦拭檢驗。d）實驗新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗。e）對工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時，進行擦拭檢驗。f）正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭

11、，每周一次。（ 2） 采樣方法：a） 工作臺（機械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）取25cm2 的面積，在其內(nèi)涂抹10 次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。b） 工人手：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。（ 3）采樣注意事項：擦拭時棉簽要隨時轉(zhuǎn)動，保證擦拭的準確性。對每個擦拭點應(yīng)詳細記錄所在分場的具體位置、擦拭時間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時間細菌大腸菌群的檢測培養(yǎng):樣液稀釋：將放有棉棒的試管充分

12、振搖。此液為1： 10 稀釋液。如污染嚴重，可十倍遞增稀釋，吸取1ml 1： 10樣液加 9ml 無菌生理鹽水中，混勻，此液為1： 100 稀釋液。細菌總數(shù)：（1）以無菌操作，選擇12個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿 （平行樣）， 將已融化冷至45左右的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿， 每皿約15ml，充分混合。（ 2）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36±1 培養(yǎng) 48 h 后計數(shù)。（3）結(jié)果報告：報告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)大腸菌群：（ 1 ）平板法:a）以無菌操作，選擇12個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿

13、（平行樣）， 將已融化冷至45左右的去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養(yǎng)基，約3-5 ml。c） 待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36±1 培養(yǎng) 24h 后計數(shù)。d） 結(jié)果計算：以平板上出現(xiàn)紫紅色菌落的個數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。e） 結(jié)果報告：報告每25cm2 食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)（ 2）試管法:a）以無菌操作，選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到BGLB肉湯培養(yǎng)基中，每個稀釋度接種三管。b）置BGLB肉湯管于36 ±1C培養(yǎng)48±2h。記錄所有BGLB肉湯管的產(chǎn)氣管數(shù)。c）結(jié)果報告：按BGLB肉湯管產(chǎn)氣管數(shù)，查

14、MPN表報告每25cm2食品接觸面中或每只手的大腸菌群值。金黃色葡萄球菌檢測（ 1 ）定性檢測a）取1ml稀釋液注入滅菌的平皿內(nèi)，傾注 15-20ml的B-P培養(yǎng)基，（或是吸取稀釋液，用L 棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板），放進36± 1C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2小時。b） 從每個平板上至少挑取1 個可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實驗。c）結(jié)果報告：B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實驗為陽性，即報告手（工器具）上有金黃色葡萄球菌存在。（ 2）定量檢測a） 以無菌操作，選擇3 個稀釋度各取1ml 樣液分別接種到含10氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，每個稀釋度接種三管

15、。b）置肉湯管于36± 1C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時。劃線接種于表面干燥的 B-P瓊脂平板，置 36c ± 1C培養(yǎng)4548小時。c）從B-P瓊脂平板上，挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養(yǎng)基，36c ± 1 C培養(yǎng)2024小時。d） 取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗，記錄試驗結(jié)果。e） 報告結(jié)果：根據(jù)凝固酶試驗結(jié)果，查MPN 表報告每25 cm2 食品接觸面中或每只手的金黃色葡萄球菌值。工廠環(huán)境中病原體的檢測計劃與方法檢測計劃：為了保證食品安全，工廠應(yīng)該對生產(chǎn)環(huán)境中的病原微生物進行檢測和評估，檢測項目包括李斯特菌，沙門氏菌等病原體微生物，化驗室應(yīng)該按照一定的計

16、劃對生產(chǎn)場所環(huán)境中的病原體進行檢測，其中包括地面、下水道、排水溝、墻壁、天花板、設(shè)備框架、運輸?shù)闹Ъ?，冷藏裝置、速凍機、傳送帶、設(shè)備的螺絲、維修工具等部位。當某個點檢測到病員微生物時，應(yīng)該對環(huán)境中的相似點加大檢測頻率；在把所有的預(yù)定點檢測完后，應(yīng)該對環(huán)境中的病原微生物的存在狀況進行全面評估，在下一次環(huán)境檢測循環(huán)過程中加強檢測容易出現(xiàn)病原體的環(huán)境點，達到持續(xù)改進的目的。檢測頻率: 每月兩次,每次每個區(qū)域至少選取5 個檢測點,分別進行檢測。環(huán)境李斯特菌的檢測方法（3MTM PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測試片）用涂抹棒，海綿或者其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。將收集的樣本添加10 毫升滅菌的緩沖蛋白胨水，將樣本與緩沖蛋白胨混合1 分鐘，將樣品置于室溫（20-30）1 小時，最久不超過小時，以修復(fù)損傷的李斯特菌。將測試片放在平坦處，掀起上層膜。用移液器垂直滴加3 毫升樣品到下層膜中央，將上層膜緩慢蓋下，以免產(chǎn)生氣泡。輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上，不要壓，扭轉(zhuǎn)或者滑動壓板。提起壓板等至少十分鐘，以使膠體凝固。將測試片透明面朝上，可疊放至十片，在37±1培養(yǎng)