微生物取樣方法

1、微生物取樣方法舉例一： 一、 空氣采樣及檢驗(yàn)方法1 培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂平板，按中條配制2 采樣（空氣沉降法）布點(diǎn)：面積小于30 平方米的車間，設(shè)一對角線，在線上取3 點(diǎn)，即中心一點(diǎn)，兩端在距墻1米處各取一點(diǎn)；面積大于30 平方米的車間，設(shè)東、西、南、北、中5 個(gè)點(diǎn)，其中東、西、南、北點(diǎn)均距墻1 米。采樣高度：與地面垂直高度80-150 厘米。采樣方法；用直徑為9 厘米的普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)上暴露20 分鐘蓋上送檢培養(yǎng)。3 培養(yǎng)：于37培養(yǎng)24 小時(shí)。4 檢測頻率：每周空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：生車間、熟車間、成品車間：低于100 個(gè)半成品庫、成品庫：低于10 個(gè)二、設(shè)備的采樣與檢驗(yàn)方法根據(jù)生產(chǎn)過程所

2、要求的重點(diǎn)衛(wèi)生部位，實(shí)驗(yàn)室對其進(jìn)行涂抹采樣，進(jìn)行細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)。1 采樣方法涂抹法（適用于表面平坦的設(shè)備和工器具產(chǎn)品接觸面）取經(jīng)過滅菌的鋁片框（框內(nèi)面積為50 平方厘米）放在需檢查的部位上，用無菌棉球蘸上無菌生理鹽水擦拭鋁片中間方框部分，擦完后立即將棉球投入盛有10 毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5 平方厘米。貼紙法（適用于表面不平坦的設(shè)備和工器具接處面）將無菌規(guī)格紙（5X5厘米，紙質(zhì)要薄而軟）用無菌生理鹽水泡濕后，于需測部分分別貼上兩張，兩張紙面積共50 平方厘米，然后取下放入盛有10 毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5 平方厘米。2 檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)的檢驗(yàn)將上述樣液充分振搖

3、，根據(jù)衛(wèi)生情況，相應(yīng)地做10 倍遞增稀釋，選擇其中2-3 個(gè)合適的稀釋度作平皿傾注培養(yǎng)，培養(yǎng)基用普通營養(yǎng)瓊脂，每個(gè)稀釋度作2 個(gè)平皿，每個(gè)平皿注入1 毫升樣液，于37培養(yǎng)24 小時(shí)后計(jì)菌落數(shù)。結(jié)果計(jì)算表面細(xì)菌總數(shù)（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均數(shù)X樣液稀釋倍數(shù)/30X2致病菌的檢驗(yàn)沙門氏菌，參照進(jìn)行金黃色葡球菌，參照進(jìn)行4 .檢驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌總數(shù)10100個(gè)/ cm2,5 .關(guān)鍵點(diǎn)：細(xì)菌總數(shù)0 10個(gè)/ cm2一般區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)0 100個(gè)/ cm2三、人員手表面細(xì)菌污染情況的檢驗(yàn)1. 采樣方法：用一支蘸有無菌生理鹽水的棉拭子涂擦被檢對象手的全部，反復(fù)兩次，涂擦的時(shí)候棉拭子要相應(yīng)地轉(zhuǎn)動，

4、擦完后，將手接觸部分剪去，將棉拭子放入裝有10 毫升無菌生理鹽水的試管內(nèi)送檢培養(yǎng)。2. 檢驗(yàn)方法：同工器具表面細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法。3. 結(jié)果計(jì)算：每只手表面的細(xì)菌總數(shù)（cfu/只手）二平皿上菌落的平均數(shù)x 樣液稀釋倍數(shù)四、消毒液藥效的微生物學(xué)鑒定法1 采樣對象：正常使用的消毒液，和已知配制好備用的消毒液2 采樣及檢驗(yàn)方法在無菌條件下，用無菌吸管吸取1 毫升樣液，加入9 毫升稀釋液中混勻，對于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可；對于含氯消毒劑、含碘消毒劑，需在肉湯中加入%硫代硫酸鈉，對洗必泰、季錢鹽類消毒劑，需在肉湯中加入 3% (W/V) 土溫80和卵磷脂；對醛類消毒劑，需在肉湯中加入%

5、甘氨酸；對于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入(W/V) 土溫80,以中和被檢樣液中的殘效作用，將注入了樣液的稀釋液充分搖勻，取1 毫升注入平皿，隨之倒入普通營養(yǎng)瓊脂，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，將平皿于37條件下培養(yǎng) 24 小時(shí)后計(jì)平板上生長的菌落數(shù)。3 結(jié)果分析平板上有菌生長，表明被檢樣液中有殘存活菌，若每個(gè)平板菌落數(shù)在10 個(gè)以下，仍可用于消毒， 若每個(gè)平板菌落數(shù)超過10 個(gè)，說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100 個(gè)，即不宜在用于消毒。該公式是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)公式.它的理論模式依據(jù)是：100CM2的面積上10MIN降落的菌落數(shù)，等于 1 升空氣中所含的細(xì)菌總數(shù).系數(shù)50000基于上述假說

6、和單位換算而來.細(xì)菌總數(shù)(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT5/10T:實(shí)際放置了 5MIN;100/A:A單一培養(yǎng)皿面積；1000:1M3=1000L啊,換算成 m3N:平均菌落數(shù)舉例二：一、物體表面采樣及檢查方法采樣面積被采表面 100cm2,取全部表面；被采表面100cm2,取100cm2。采樣方法用5 x 5cm2的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板；放在被檢物體表面，用浸有無菌生理鹽水液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次；并隨之轉(zhuǎn)動棉拭于。連續(xù)采樣14個(gè)規(guī)格板面積；剪去手接觸部分，將棉拭于放入裝10ml 采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭子直接

7、涂抹物體的方法采樣。培養(yǎng)(略)二、空氣及與食品接觸面微生物檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)1、 目的：檢測生產(chǎn)車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機(jī)械設(shè)備的微生物指標(biāo)，生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控，達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，以控制食品成品的質(zhì)量。2、 參照標(biāo)準(zhǔn)：中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB15979- 1995、HACCP®理與實(shí)施 、 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)公共場所空氣微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定GB/T 2000、中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、 出入境檢驗(yàn)檢疫局二000 四年出入食品微生物檢驗(yàn)培訓(xùn)教

8、材中出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細(xì)菌檢驗(yàn)方法、日本東京冷凍食品檢驗(yàn)方法。3、 采樣與檢測方法：空氣的采樣與測試方法樣品采集：（1）取樣頻率：a）車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí)，在加工前進(jìn)行采樣，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。b）全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進(jìn)行采樣。c）產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)對車間進(jìn)行采樣，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后再進(jìn)行 采樣檢驗(yàn)。d）實(shí)驗(yàn)性新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗(yàn)。e）正常生產(chǎn)狀態(tài)的采樣，每周一次。（ 2）采樣方法在動態(tài)下進(jìn)行，室內(nèi)面積不超過 30 m2,在對角線上設(shè)里、中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)位置距墻1m；室內(nèi)面積超過30 m2,設(shè)東、西、南、北、中五點(diǎn)，周圍 4點(diǎn)距墻1

9、 m。采樣時(shí)，將含平 板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板（直徑9 cm）置采樣點(diǎn)（約桌面高度），并避開空調(diào)、門窗等空氣流通處， 打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。 采樣后必須盡快對樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測，送檢時(shí)間不得超過6h,若樣品保存于04c條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過 24h。菌落培養(yǎng)：（1）在采樣前將準(zhǔn)備好的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置37c ±1C培養(yǎng)24 h,取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除。養(yǎng)基剔除。（ 2）將已采集樣品的培養(yǎng)基在6 h 內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，細(xì)菌總數(shù)于37±1培養(yǎng) 48h 觀察結(jié)果，計(jì)數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù)。（ 3）菌落計(jì)算：a） 記錄平均菌落數(shù)，用“個(gè)/皿”來報(bào)告結(jié)

10、果。用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用510倍放大鏡檢查，不可遺漏。b） 若培養(yǎng)皿上有2 個(gè)或 2 個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2 個(gè)或 2 個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。工作臺（機(jī)械器具）表面與工人手表面采樣與測試方法：樣品采集：（1）取樣頻率：a）車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí)，在加工前進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情 況。b）全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進(jìn)行全面擦拭檢驗(yàn)。c）產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)對車間可疑處進(jìn)行擦拭，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后 再進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。d）實(shí)驗(yàn)新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗(yàn)。e）對工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時(shí)，進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。f）正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭

11、，每周一次。（ 2） 采樣方法：a） 工作臺（機(jī)械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）取25cm2 的面積，在其內(nèi)涂抹10 次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。b） 工人手：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。（ 3）采樣注意事項(xiàng)：擦拭時(shí)棉簽要隨時(shí)轉(zhuǎn)動，保證擦拭的準(zhǔn)確性。對每個(gè)擦拭點(diǎn)應(yīng)詳細(xì)記錄所在分場的具體位置、擦拭時(shí)間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時(shí)間細(xì)菌大腸菌群的檢測培養(yǎng):樣液稀釋：將放有棉棒的試管充分

12、振搖。此液為1： 10 稀釋液。如污染嚴(yán)重，可十倍遞增稀釋，吸取1ml 1： 10樣液加 9ml 無菌生理鹽水中，混勻，此液為1： 100 稀釋液。細(xì)菌總數(shù)：（1）以無菌操作，選擇12個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿 （平行樣）， 將已融化冷至45左右的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿， 每皿約15ml，充分混合。（ 2）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36±1 培養(yǎng) 48 h 后計(jì)數(shù)。（3）結(jié)果報(bào)告：報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)大腸菌群：（ 1 ）平板法:a）以無菌操作，選擇12個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿

13、（平行樣）， 將已融化冷至45左右的去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養(yǎng)基，約3-5 ml。c） 待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36±1 培養(yǎng) 24h 后計(jì)數(shù)。d） 結(jié)果計(jì)算：以平板上出現(xiàn)紫紅色菌落的個(gè)數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。e） 結(jié)果報(bào)告：報(bào)告每25cm2 食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)（ 2）試管法:a）以無菌操作，選擇3個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別接種到BGLB肉湯培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度接種三管。b）置BGLB肉湯管于36 ±1C培養(yǎng)48±2h。記錄所有BGLB肉湯管的產(chǎn)氣管數(shù)。c）結(jié)果報(bào)告：按BGLB肉湯管產(chǎn)氣管數(shù)，查

14、MPN表報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的大腸菌群值。金黃色葡萄球菌檢測（ 1 ）定性檢測a）取1ml稀釋液注入滅菌的平皿內(nèi)，傾注 15-20ml的B-P培養(yǎng)基，（或是吸取稀釋液，用L 棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板），放進(jìn)36± 1C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2小時(shí)。b） 從每個(gè)平板上至少挑取1 個(gè)可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)。c）結(jié)果報(bào)告：B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)為陽性，即報(bào)告手（工器具）上有金黃色葡萄球菌存在。（ 2）定量檢測a） 以無菌操作，選擇3 個(gè)稀釋度各取1ml 樣液分別接種到含10氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度接種三管

15、。b）置肉湯管于36± 1C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)。劃線接種于表面干燥的 B-P瓊脂平板，置 36c ± 1C培養(yǎng)4548小時(shí)。c）從B-P瓊脂平板上，挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養(yǎng)基，36c ± 1 C培養(yǎng)2024小時(shí)。d） 取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗(yàn)，記錄試驗(yàn)結(jié)果。e） 報(bào)告結(jié)果：根據(jù)凝固酶試驗(yàn)結(jié)果，查MPN 表報(bào)告每25 cm2 食品接觸面中或每只手的金黃色葡萄球菌值。工廠環(huán)境中病原體的檢測計(jì)劃與方法檢測計(jì)劃：為了保證食品安全，工廠應(yīng)該對生產(chǎn)環(huán)境中的病原微生物進(jìn)行檢測和評估，檢測項(xiàng)目包括李斯特菌，沙門氏菌等病原體微生物，化驗(yàn)室應(yīng)該按照一定的計(jì)

16、劃對生產(chǎn)場所環(huán)境中的病原體進(jìn)行檢測，其中包括地面、下水道、排水溝、墻壁、天花板、設(shè)備框架、運(yùn)輸?shù)闹Ъ?，冷藏裝置、速凍機(jī)、傳送帶、設(shè)備的螺絲、維修工具等部位。當(dāng)某個(gè)點(diǎn)檢測到病員微生物時(shí)，應(yīng)該對環(huán)境中的相似點(diǎn)加大檢測頻率；在把所有的預(yù)定點(diǎn)檢測完后，應(yīng)該對環(huán)境中的病原微生物的存在狀況進(jìn)行全面評估，在下一次環(huán)境檢測循環(huán)過程中加強(qiáng)檢測容易出現(xiàn)病原體的環(huán)境點(diǎn)，達(dá)到持續(xù)改進(jìn)的目的。檢測頻率: 每月兩次,每次每個(gè)區(qū)域至少選取5 個(gè)檢測點(diǎn),分別進(jìn)行檢測。環(huán)境李斯特菌的檢測方法（3MTM PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測試片）用涂抹棒，海綿或者其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。將收集的樣本添加10 毫升滅菌的緩沖蛋白胨水，將樣本與緩沖蛋白胨混合1 分鐘，將樣品置于室溫（20-30）1 小時(shí)，最久不超過小時(shí)，以修復(fù)損傷的李斯特菌。將測試片放在平坦處，掀起上層膜。用移液器垂直滴加3 毫升樣品到下層膜中央，將上層膜緩慢蓋下，以免產(chǎn)生氣泡。輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上，不要壓，扭轉(zhuǎn)或者滑動壓板。提起壓板等至少十分鐘，以使膠體凝固。將測試片透明面朝上，可疊放至十片，在37±1培養(yǎng)