血清和糖皮質激素調節(jié)蛋白激酶1SGK1在RON介導的肺腺癌細胞侵襲性生長中的作用百替生物ppt課件

1、報告人：報告人：Adam2019-12-25血清和糖皮質激素調理蛋白激酶血清和糖皮質激素調理蛋白激酶1SGK1在在RON介導的肺腺癌細胞侵襲性生長中的介導的肺腺癌細胞侵襲性生長中的作用作用簡介簡介SGK1作為RON、ERK1/2、-catenin和EMT信號傳導的關鍵蛋白，在RON介導的肺腺癌發(fā)生、開展中有重要作用。Questions：肺腺癌：肺腺癌肺腺癌：肺腺癌lung adenocarcinoma是肺癌的一種，是肺癌的一種，屬于非小細胞癌。肺腺癌大多來源于較小的支氣管粘膜分泌屬于非小細胞癌。肺腺癌大多來源于較小的支氣管粘膜分泌粘液的上皮細胞，因此大多數(shù)肺腺癌的早期病癥位于肺的周粘液的上皮細

2、胞，因此大多數(shù)肺腺癌的早期病癥位于肺的周圍部分，呈球形腫塊，接近胸膜。腺癌對放射治療敏感度差。圍部分，呈球形腫塊，接近胸膜。腺癌對放射治療敏感度差。吸煙是引致肺腺癌的主要成因，接觸某些化學物質，例如石吸煙是引致肺腺癌的主要成因，接觸某些化學物質，例如石棉、鈾、銘、鎳等都能夠與肺腺癌有關。棉、鈾、銘、鎳等都能夠與肺腺癌有關。關鍵詞關鍵詞受體酪氨酸激酶受體酪氨酸激酶RON：RON是受體酪氨酸家族是受體酪氨酸家族MET原癌基原癌基因因 亞家族中的一員亞家族中的一員, 主要在上皮細胞中表達主要在上皮細胞中表達, 其配體是巨噬細其配體是巨噬細胞刺激蛋白胞刺激蛋白 ( macrophage stimula

3、ting protein, MSP)。激。激活后的活后的RON 在體外引起細胞的分化、遷移、形變和基質侵在體外引起細胞的分化、遷移、形變和基質侵襲。襲。RON的過度表達、突變及其剪切變異體與人類的結直腸的過度表達、突變及其剪切變異體與人類的結直腸癌、乳腺癌、肺癌及腎癌等多種人體上皮源性腫瘤的發(fā)生、癌、乳腺癌、肺癌及腎癌等多種人體上皮源性腫瘤的發(fā)生、開展有關。開展有關。關鍵詞關鍵詞RON激活方式：研討顯示激活方式：研討顯示 RON 激活的方式有激活的方式有 2種種 , 即配體即配體依賴和配體非依賴方式。依賴和配體非依賴方式。 RON與與MSP結合后結合后 , 迅速經(jīng)過二聚化產生本身激酶域的磷酸迅

4、速經(jīng)過二聚化產生本身激酶域的磷酸化化, 而導致催化效率極大提高而導致催化效率極大提高, 并且磷酸化的并且磷酸化的RON亦能發(fā)生亦能發(fā)生構象變化構象變化, C 末端產生特殊的結合信息分子的多功能錨定位末端產生特殊的結合信息分子的多功能錨定位點。而后經(jīng)過不同的級聯(lián)途徑轉導各種信號。這些級聯(lián)徑中點。而后經(jīng)過不同的級聯(lián)途徑轉導各種信號。這些級聯(lián)徑中包括包括Ras/有絲分裂原激活蛋白激酶有絲分裂原激活蛋白激酶(MAPK), 磷脂酰肌醇磷脂酰肌醇-3-磷酸磷酸 (PI-3K) /AKT, jun N-末端激酶末端激酶 (JNK)/應激激活蛋白激應激激活蛋白激酶酶, -catenin, Smad和核因子和核

5、因子-kB(NF-kB)分子等。分子等。關鍵詞關鍵詞RON的致癌機制：的致癌機制：上皮間質轉化上皮間質轉化EMT： EMT指上皮組織喪失上皮特征而指上皮組織喪失上皮特征而獲得間質的表型。獲得間質的表型。EMT包括上皮細胞獲得紡錘形的形狀、包括上皮細胞獲得紡錘形的形狀、E-鈣黏素表達減少、鈣黏素表達減少、-catenin重新分配、細胞骨架肌動蛋白組、重新分配、細胞骨架肌動蛋白組、波形蛋白波形蛋白(vimentin)表達增高及表達增高及-平滑肌肌動蛋白平滑肌肌動蛋白(-SMA)表達。表達。EMT的獲得導致上皮源性腫瘤細胞侵襲和轉移才干的的獲得導致上皮源性腫瘤細胞侵襲和轉移才干的加強。加強。關鍵詞關

6、鍵詞EMT分類：分類：I型型EMT：與胚胎構成相關，涉及：與胚胎構成相關，涉及Wnt、Notch通路；通路；II型型EMT：與損傷修復相關，涉及：與損傷修復相關，涉及Smads、ERK-MAPK、PI3K-AKT通路；通路；III型型EMT：與上皮細胞惡性腫瘤相關，涉及酪氨酸激酶受體、：與上皮細胞惡性腫瘤相關，涉及酪氨酸激酶受體、整合素、整合素、Wnt、NF-kB、TGF-1通路。通路。關鍵詞關鍵詞血清和糖皮質激素調理蛋白激酶血清和糖皮質激素調理蛋白激酶SGK：一種新的絲：一種新的絲/蘇氨蘇氨酸蛋白激酶，與蛋白激酶酸蛋白激酶，與蛋白激酶BPKB/Akt具有高度同源性。具有高度同源性。當細胞遭到

7、糖皮質激素或血清刺激后，當細胞遭到糖皮質激素或血清刺激后，SGK的轉錄程度會迅的轉錄程度會迅速升高，因此命名為血清和糖皮質激素調理蛋白激酶，有速升高，因此命名為血清和糖皮質激素調理蛋白激酶，有SGK1、2、3三種異構體。三種異構體。SGK1參與了人體許多重要的生參與了人體許多重要的生理過程，如離子通道活化、細胞增殖與凋亡等。理過程，如離子通道活化、細胞增殖與凋亡等。關鍵詞關鍵詞Erk1/2：細胞外調理蛋白激酶：細胞外調理蛋白激酶extracellular regulated protein kinases, ERK)分為分為ERK1和和ERK2,統(tǒng)稱為統(tǒng)稱為ERK1/2,主要被各種生長因子、離

8、子射主要被各種生長因子、離子射線、過氧化氫等磷酸化而激活線、過氧化氫等磷酸化而激活,進入細胞核作用于進入細胞核作用于E1k-1,c-myc,c-fos,c-jun,ATF,NF-kB和和AP-1等轉錄因子等轉錄因子,促進某些基促進某些基因的轉錄與表達因的轉錄與表達,和細胞的增殖與分化親密相關。和細胞的增殖與分化親密相關。關鍵詞關鍵詞關鍵詞關鍵詞-catenin：-鏈蛋白鏈蛋白(-catenin)最早作為一種黏附因子被最早作為一種黏附因子被發(fā)現(xiàn)，后來人們發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，后來人們發(fā)現(xiàn)-catenin還是一種多功能的蛋白質。還是一種多功能的蛋白質。-catenin主要位于細胞膜，而在胞漿中游離量較少。主要

9、位于細胞膜，而在胞漿中游離量較少。-catenin的功能主要為介導細胞間黏附和參與基因的表達。的功能主要為介導細胞間黏附和參與基因的表達。-catenin作為一種多功能的蛋白質，廣泛存在于各種類型作為一種多功能的蛋白質，廣泛存在于各種類型的細胞，如內皮細胞、成纖維細胞、成骨細胞中，在參與的細胞，如內皮細胞、成纖維細胞、成骨細胞中，在參與這些細胞的增殖、分化和凋亡等方面發(fā)揚了重要的調理作這些細胞的增殖、分化和凋亡等方面發(fā)揚了重要的調理作用。用。臨床樣本中目的檢測A549細胞中目的檢測siRNA干擾A549細胞SGK1抑制劑處置肺腺癌動物造模小鼠體內的siRNA干擾課題設計課題設計1.1.臨床樣本

10、中目的檢測臨床樣本中目的檢測實驗分組：實驗分組：肺腺癌組織肺腺癌組織癌旁正常組織癌旁正常組織實驗方法：實驗方法：Western blotqRT-PCR檢測目的：檢測目的：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist2.A5492.A549細胞中目的檢測細胞中目的檢測實驗分組：實驗分組：A549細胞細胞實驗方法：實驗方法：Western blotqRT-PCR檢測目的：檢測目的：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist3. siRNA3. siR

11、NA干擾干擾A549A549細胞細胞實驗分組：實驗分組：對照組對照組空白組空白組干擾組干擾組實驗方法：實驗方法：脂質體轉染脂質體轉染W(wǎng)estern blotqRT-PCRCCK-8流式細胞術流式細胞術Transwell檢測檢測裸鼠成瘤實驗裸鼠成瘤實驗檢測目的：檢測目的：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist4. SGK14. SGK1抑制劑處置抑制劑處置實驗分組：實驗分組：A549細胞細胞A549+SGK1抑制劑處置抑制劑處置實驗方法：實驗方法：脂質體轉染脂質體轉染W(wǎng)estern blotqRT-PCRCCK-8流式細胞術流式細胞術Transwell檢測檢測裸鼠成瘤實驗裸鼠成瘤實驗檢測目的：檢測目的：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist5.5.肺腺癌動物造模肺腺癌動物造模實驗分組：實驗分組：正常小鼠正常小鼠模型小鼠模型小鼠實驗方法：實驗方法：見下頁見下頁檢測目的：檢測目的：利用利用WB檢測檢測RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist6.6.小鼠體內的小鼠體內的siRNAsiRNA干擾干擾實驗分組：實驗分組：正常小鼠造模組正常小鼠