食品微生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)之一培養(yǎng)基的制備與無ppt課件

1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的目的及微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的目的及實(shí)驗(yàn)室的要求實(shí)驗(yàn)室的要求一、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的目的一、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的目的1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)是微生物學(xué)的重要組成 部分，也是學(xué)習(xí)微生物學(xué)的一個(gè)重要環(huán)節(jié)2、通過實(shí)驗(yàn)操作，可以加深和鞏固對(duì)課堂講授內(nèi)容的理解。3、訓(xùn)練學(xué)生掌握最基本的操作技能；了解微生物學(xué)的基本知識(shí)；培養(yǎng)學(xué)生觀察、考慮、分析解決實(shí)際問題的能力；實(shí)事求是、嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)態(tài)度和勤儉節(jié)約、愛護(hù)公物的良好作風(fēng)。 二、微生物實(shí)驗(yàn)室的要求二、微生物實(shí)驗(yàn)室的要求 為了上好微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課，并保證安全，實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意如下事項(xiàng)：1、為了保證實(shí)驗(yàn)室的整潔和實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，非必要的物品和書包，不得帶入室內(nèi)，實(shí)驗(yàn)時(shí)不得高聲談話和

2、隨意走動(dòng)2、每次實(shí)驗(yàn)前要對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行充分預(yù)習(xí)，了解實(shí)驗(yàn)的目的、原理和方法，做到心中有數(shù)，并作合理安排。3、實(shí)驗(yàn)中要認(rèn)真觀察，及時(shí)做好實(shí)驗(yàn)記錄。對(duì)于當(dāng)時(shí)不能得到結(jié)果而需要連續(xù)觀察的實(shí)驗(yàn)，則需記下每次觀察的現(xiàn)象和結(jié)果，以便分析。4、實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，萬(wàn)一遇有帶菌物品灑漏、皮膚破傷或菌液吸入口中等意外情況發(fā)生時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師，及時(shí)處理，切勿隱瞞。 二、微生物實(shí)驗(yàn)室的要求二、微生物實(shí)驗(yàn)室的要求5、實(shí)驗(yàn)過程中，切勿使乙醚、丙酮、酒精等易燃藥品接近火源，如遇火險(xiǎn)，應(yīng)先關(guān)掉火源，再用濕布或沙土掩蓋滅火。必要時(shí)用滅火器。 6、凡實(shí)驗(yàn)用過的菌種以及帶有活菌的各種器皿，應(yīng)先經(jīng)高壓滅菌后才能洗滌

3、。制片上的活菌標(biāo)本應(yīng)先浸泡于3來蘇兒溶液或5石炭酸溶液中，半小時(shí)以后再行洗刷。如系芽孢桿菌或有孢子的菌，則應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。7、實(shí)驗(yàn)中需進(jìn)行培養(yǎng)的材料，應(yīng)注明組別、名稱及處理方法，實(shí)驗(yàn)完畢，應(yīng)將儀器、用具等洗凈，放好，做好桌面及地面的清潔工作。實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一常用培養(yǎng)基的制備、常用培養(yǎng)基的制備、滅菌與無菌檢測(cè)技滅菌與無菌檢測(cè)技術(shù)術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、通過本次實(shí)驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有各種微生物的存在。2、了解配制培養(yǎng)基的一般程序，掌握配制、分裝培養(yǎng)基的方法3、掌握高壓蒸汽滅菌的原理及操作技術(shù)（一環(huán)境中微生物的檢測(cè)（一環(huán)境中微生物的檢測(cè)一、目的和要求一、目的和要求 1 1、微生物在自然界廣泛存在，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)亦

4、不例外。由于、微生物在自然界廣泛存在，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)亦不例外。由于其個(gè)體小，人們用肉眼看不到。只有通過微生物的大量繁其個(gè)體小，人們用肉眼看不到。只有通過微生物的大量繁殖形成微生物群體，即菌落，肉眼才能看到它們。殖形成微生物群體，即菌落，肉眼才能看到它們。2 2、通過本次實(shí)驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有各種微生物的存在，對(duì)微、通過本次實(shí)驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有各種微生物的存在，對(duì)微生物有初步的認(rèn)識(shí)，并在今后的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中注意無菌生物有初步的認(rèn)識(shí)，并在今后的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中注意無菌操作，防止雜菌污染，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。操作，防止雜菌污染，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。 二、實(shí)驗(yàn)材料二、實(shí)驗(yàn)材料 1 1、牛肉膏蛋白胨營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)

5、皿、牛肉膏蛋白胨營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿、75%75%酒精棉球酒精棉球 2 2、3737恒溫箱、酒精燈、剪刀、火柴、鑷子、滅菌棉球、恒溫箱、酒精燈、剪刀、火柴、鑷子、滅菌棉球、滅菌牙簽、記號(hào)筆等滅菌牙簽、記號(hào)筆等三、操作步驟 以以4 4人為一組，取人為一組，取5 5塊滅菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿，一皿對(duì)照不要打開蓋，其塊滅菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿，一皿對(duì)照不要打開蓋，其余每人余每人1 1皿，每組成員分別選擇下列任何一種方法加以處理并在皿上寫明班皿，每組成員分別選擇下列任何一種方法加以處理并在皿上寫明班級(jí)、姓名、日期及處理方法。級(jí)、姓名、日期及處理方法。 (1) (1)打開培養(yǎng)皿蓋，在空氣中暴露約打開培養(yǎng)皿蓋，在空氣中

6、暴露約1010分鐘，然后蓋上皿蓋。分鐘，然后蓋上皿蓋。 (2) (2)打開培養(yǎng)皿蓋，用手指觸摸培養(yǎng)基表面打開培養(yǎng)皿蓋，用手指觸摸培養(yǎng)基表面2323個(gè)點(diǎn)，注意不要將培養(yǎng)基弄破，個(gè)點(diǎn)，注意不要將培養(yǎng)基弄破，然后蓋上皿蓋。然后蓋上皿蓋。 (3) (3)取自己的頭發(fā)約取自己的頭發(fā)約5cm5cm長(zhǎng)長(zhǎng)3535根打開皿蓋用鑷子放于培養(yǎng)基表面。然后蓋上根打開皿蓋用鑷子放于培養(yǎng)基表面。然后蓋上皿蓋。皿蓋。 (4) (4)用滅菌棉球在實(shí)驗(yàn)臺(tái)用滅菌棉球在實(shí)驗(yàn)臺(tái)( (或凳子或凳子) )上擦兩下，打開皿蓋，在培養(yǎng)基表面輕輕涂上擦兩下，打開皿蓋，在培養(yǎng)基表面輕輕涂抹，然后蓋上皿蓋。注意不要將培養(yǎng)基弄破。抹，然后蓋上皿蓋。

7、注意不要將培養(yǎng)基弄破。 (5) (5)將接種的培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱適溫培養(yǎng)將接種的培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱適溫培養(yǎng)24-4824-48小時(shí)。小時(shí)。四、結(jié)果觀察 1、同組成員共同觀察并記錄結(jié)果，并與對(duì)照皿進(jìn)行比較。 2、描述你處理的培養(yǎng)皿中長(zhǎng)出的菌落，如形狀、顏色、大小、邊緣等特征五、思考題1、本組內(nèi)不同處理的培養(yǎng)皿上的菌落是否相同，從本實(shí)驗(yàn)中得到了什么啟示？2、在今后的實(shí)驗(yàn)操作中要注意的問題是什么？（二培養(yǎng)基的制備與滅菌（二培養(yǎng)基的制備與滅菌1 1、培養(yǎng)基：人工配制、適合微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生、培養(yǎng)基：人工配制、適合微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的混合基質(zhì)。代謝產(chǎn)物的混合基質(zhì)。2 2、營(yíng)養(yǎng)要素：碳源、氮源、能

8、源、生長(zhǎng)因子、無機(jī)、營(yíng)養(yǎng)要素：碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽和水鹽和水3 3、要、要 求：應(yīng)具備求：應(yīng)具備6 6大營(yíng)養(yǎng)要素；物質(zhì)比例合適；大營(yíng)養(yǎng)要素；物質(zhì)比例合適；必須滅菌。必須滅菌。 一、實(shí)驗(yàn)原理一、實(shí)驗(yàn)原理一、實(shí)驗(yàn)原理4 4、培養(yǎng)基的凝固劑：、培養(yǎng)基的凝固劑：瓊脂：融化溫度瓊脂：融化溫度96,96,凝固溫度凝固溫度40-45.40-45.常用濃度：常用濃度：1.5-2.0%1.5-2.0% 無營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，不易分解，耐壓滅菌無營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，不易分解，耐壓滅菌 明膠：融化溫度明膠：融化溫度2525，凝固溫度，凝固溫度2020。 常用濃度：常用濃度：5-12%5-12% 作氮源，易分解，不耐壓。作

9、氮源，易分解，不耐壓。5 5、滅菌：用高壓蒸氣對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)必須根據(jù)培養(yǎng)基的種、滅菌：用高壓蒸氣對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)必須根據(jù)培養(yǎng)基的種類、容器的大小及數(shù)量采用不同的溫度及時(shí)間。一般少量分類、容器的大小及數(shù)量采用不同的溫度及時(shí)間。一般少量分裝的基礎(chǔ)培養(yǎng)基通常為裝的基礎(chǔ)培養(yǎng)基通常為12115min12115min滅菌。如盛裝培養(yǎng)基的容滅菌。如盛裝培養(yǎng)基的容器較大，則應(yīng)適當(dāng)增加其滅菌的溫度和時(shí)間。含糖培養(yǎng)基，器較大，則應(yīng)適當(dāng)增加其滅菌的溫度和時(shí)間。含糖培養(yǎng)基，一般采用一般采用1152030min1152030min滅菌，以免糖類因高熱而分解。由滅菌，以免糖類因高熱而分解。由于高壓蒸氣滅菌是通過提高

10、蒸氣壓力而使其升高溫度以殺死于高壓蒸氣滅菌是通過提高蒸氣壓力而使其升高溫度以殺死微生物，所以加壓前應(yīng)盡量排凈鍋內(nèi)的空氣。微生物，所以加壓前應(yīng)盡量排凈鍋內(nèi)的空氣。 消毒與滅菌消毒：消滅病原菌和有害微生物的營(yíng)養(yǎng)體滅菌：殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體，芽胞和 孢子。方法：一、物理的方法：加熱、過濾、輻射二、化學(xué)的方法：用化學(xué)試劑抑制或殺滅微生物。主要破壞細(xì)菌代謝機(jī)能。如重金屬離子，磺胺類藥物及抗生素等。 培養(yǎng)基的分類1、物理狀態(tài)分 （1固體培養(yǎng)基 （2半固體培養(yǎng)基 （3液體培養(yǎng)基 (4脫水培養(yǎng)基干燥培養(yǎng)基） 2、營(yíng)養(yǎng)成分分 （1天然培養(yǎng)基 （2合成培養(yǎng)基 （3半合成培養(yǎng)基3、不同功能分 （1選擇性培養(yǎng)基 （

11、2鑒別培養(yǎng)基 1%-2%瓊脂0.5%瓊脂不加瓊脂營(yíng)養(yǎng)瓊脂高氏一號(hào)PDA乳酸菌培養(yǎng)基MRSEMB二、實(shí)驗(yàn)材料及儀器(一)藥品 牛肉膏，蛋白胨，葡萄糖，可溶性淀粉，NaCl，KNO3，K2HPO4，MgSO4，F(xiàn)eSO4，瓊脂等。(二)試劑 40KOH，l0HCl。(三)其它 電子天平，電爐，硫酸紙，牛皮紙，線繩，棉花，紗布，石棉網(wǎng)、精密pH試紙，標(biāo)簽，燒杯，量簡(jiǎn)，玻棒，三角瓶，滴管，滅菌鍋等。三、方法步驟 1、培養(yǎng)基的種類很多，配制方法也不完全相同，但其基本程序和要求是大體相同的。一般培養(yǎng)基的配制程序如下 一般培養(yǎng)基的配制程序如下 計(jì)算 稱量 溶解定溶調(diào)節(jié)PH值 加瓊脂并溶解 過濾 分裝 滅菌 包扎 加塞 擺斜面 無菌檢查。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1、每4人一組分別制備一種培養(yǎng)基200ml。 灌裝7支試管后，裝入三角瓶。 （1牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。（1-6組） （2馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。（7-12組） （3高氏1號(hào)培養(yǎng)基。（13-16組） 2、分裝試管和三角瓶，滅菌后擺斜面。 試管高度的1/3左右不高于三角瓶高度的1/2分 裝漏 斗乳膠管玻璃管彈簧夾鐵架臺(tái)分裝試管 滅菌后，固體培養(yǎng)基如需制成斜面，應(yīng)趁熱將試管上部墊于滅菌后，固體培養(yǎng)基如需制成斜面，應(yīng)趁熱將試管上部墊于一根玻棒或木條上，使培養(yǎng)基斜面長(zhǎng)度為試管長(zhǎng)度的一根玻棒或木條上，使培養(yǎng)基斜面長(zhǎng)度為試管長(zhǎng)度的1 12 2擺斜面擺斜面五、