KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)

1、KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)21、概述2、范圍3、生物學(xué)特性（菌體形態(tài)學(xué)特征、培養(yǎng)特性、抵抗力）4、檢驗(yàn)程序5、培養(yǎng)基和試劑KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)31、概述 副溶血性弧菌（ Vibrio parahaemolyticus ）是分布極廣的，為引起食物中毒重要的病原細(xì)菌之一，尤其是在的，經(jīng)常發(fā)生由于食用帶有大量副溶血性弧菌的海產(chǎn)食品，引起爆發(fā)性食物中毒。 歷史：副溶血性弧菌食物中毒于1950年在日本首發(fā)，副溶血性弧菌（V. parahemolyticus）于我國(guó)大陸沿海地區(qū)食物中毒中最常見的一種病原菌。 KJ02食品

2、衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)4 中毒原因:烹調(diào)時(shí)未燒熟、煮、透,或熟制品污染后未再?gòu)?底加熱。 中毒食品:副溶血性弧菌食物中毒多發(fā)生在海產(chǎn)品大量上 市時(shí)。中毒食品主要是海產(chǎn)品,其次為咸菜、 熟肉類、禽肉、禽蛋類,約有半數(shù)為腌制品。 KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)52 2、范圍、范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了副溶血性弧菌檢驗(yàn)方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于動(dòng)物性水產(chǎn)干制品、腌醉制生食動(dòng)物性水 產(chǎn)品、即食藻類食品、魚糜制品等水產(chǎn)食品和水產(chǎn)調(diào)味 品以及食物中毒樣品中副溶血性弧菌的檢驗(yàn)。KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)63 3、生物學(xué)特性、生物學(xué)特性 1 1）菌體形態(tài)學(xué)特征）菌體形態(tài)學(xué)特征 2

3、2）培養(yǎng)特性）培養(yǎng)特性 3 3）抵抗力）抵抗力 4 4）致病性）致病性1 1）菌體形態(tài)學(xué)特征）菌體形態(tài)學(xué)特征 本菌為本菌為G-G-，可兩端濃染可兩端濃染 ，多形態(tài)，無(wú)芽孢，單端單鞭毛，多形態(tài)，無(wú)芽孢，單端單鞭毛，有嗜鹽特性，在有嗜鹽特性，在30-3730-37最適溫度時(shí)增長(zhǎng)較快，一般冬季不易最適溫度時(shí)增長(zhǎng)較快，一般冬季不易檢出。檢出。多形態(tài)：多形態(tài)： 弧狀、逗點(diǎn)狀弧狀、逗點(diǎn)狀 球狀、絲狀、球狀、絲狀、 桿狀、棒狀等。桿狀、棒狀等。KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)7 2 2）培養(yǎng)特性）培養(yǎng)特性嗜鹽嗜鹽VP VP 在含氯化鈉在含氯化鈉5 5 (20-30(20-30最適最適) g) g

4、L L的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基 上生長(zhǎng)，無(wú)鹽和上生長(zhǎng)，無(wú)鹽和110110g g L L以上不生長(zhǎng)。以上不生長(zhǎng)。 生長(zhǎng)溫度：最適為生長(zhǎng)溫度：最適為3737，4 4 不生長(zhǎng)不生長(zhǎng) pH: pH: 最適最適pHpH為為7.4-8.07.4-8.0 需氧性需氧性: :需氧性很強(qiáng)，需氧性很強(qiáng)， 厭氧條件下生長(zhǎng)緩慢厭氧條件下生長(zhǎng)緩慢 KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)8 3 3）抵抗力）抵抗力 敏感：淡水等無(wú)鹽環(huán)境敏感：淡水等無(wú)鹽環(huán)境 不耐熱不耐熱 對(duì)酸敏感，在對(duì)酸敏感，在2 2冰醋酸或食醋中立即死亡，冰醋酸或食醋中立即死亡， 對(duì)氯、碳酸、來(lái)蘇水等一般化學(xué)消毒劑敏感：對(duì)氯、碳酸、來(lái)蘇水等一般化學(xué)消毒劑敏

5、感： 對(duì)磺胺噻唑、氯霉素、合霉素敏感。對(duì)磺胺噻唑、氯霉素、合霉素敏感。 耐受：耐高濃度耐受：耐高濃度NaClNaCl海水，鹽漬醬菜中存活時(shí)間較長(zhǎng)；海水，鹽漬醬菜中存活時(shí)間較長(zhǎng)； 耐低溫的抵抗力較強(qiáng)耐低溫的抵抗力較強(qiáng) 耐青霉素、磺胺嘧啶耐青霉素、磺胺嘧啶。KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)94、檢驗(yàn)程序 25g樣品樣品+3%氯化鈉氯化鈉堿性蛋白胨水堿性蛋白胨水TCBS平板平板36 1 18h 1、鏡、鏡 檢檢 3、三糖鐵試驗(yàn)、三糖鐵試驗(yàn)2、氧化酶試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn) 4、嗜鹽試驗(yàn)、嗜鹽試驗(yàn) 報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果 36 1 24h 36 1 24h 36 1 6h 科瑪嘉弧菌平板科瑪嘉弧菌平板

6、生化實(shí)驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn) API 20 E API 20 EKJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)105 5、培養(yǎng)基和試劑、培養(yǎng)基和試劑5 5.1 .1 3%3%氯化鈉堿性蛋白胨水：氯化鈉堿性蛋白胨水： 增菌用，高鹽增菌用，高鹽5 5.2 .2 TCBSTCBS瓊脂：瓊脂：5 5.3 .3 科瑪嘉瓊脂：科瑪嘉瓊脂： 分離培養(yǎng)用分離培養(yǎng)用KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)11TCBSTCBS上的副溶血弧菌菌上的副溶血弧菌菌科瑪嘉上的副溶血弧菌菌落科瑪嘉上的副溶血弧菌菌落KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)125.4 ：初步鑒定：初步鑒定 u3.5氯化鈉三糖鐵瓊脂：底層氯化鈉三糖鐵

7、瓊脂：底層 變黃，斜面不變色，有動(dòng)力，變黃，斜面不變色，有動(dòng)力， 不產(chǎn)生硫化氫不產(chǎn)生硫化氫.u鏡檢形態(tài)：本菌為鏡檢形態(tài)：本菌為G-，可兩端可兩端 濃染濃染 ，多形態(tài)，無(wú)芽孢。多形態(tài)，無(wú)芽孢。u氧化酶試驗(yàn)：氧化酶試驗(yàn)：VP為氧化酶陽(yáng)性。為氧化酶陽(yáng)性。u嗜鹽性試驗(yàn)：嗜鹽性試驗(yàn)：0%不生長(zhǎng)不生長(zhǎng) 7%旺盛生長(zhǎng)旺盛生長(zhǎng) 10%不生長(zhǎng)不生長(zhǎng)KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)135.5 ONPG試驗(yàn)：5.6 甘露醇試驗(yàn)：5.7 賴氨酸試驗(yàn)：5.8 MR-VP試驗(yàn)：生化試驗(yàn)KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)14結(jié)果結(jié)果 樣品經(jīng)過(guò)增菌培養(yǎng)、樣品經(jīng)過(guò)增菌培養(yǎng)、分離培養(yǎng)后，根據(jù)形分離培養(yǎng)后，根

8、據(jù)形態(tài)觀察、生化試驗(yàn)的態(tài)觀察、生化試驗(yàn)的結(jié)果判斷是否發(fā)現(xiàn)副結(jié)果判斷是否發(fā)現(xiàn)副溶血性弧菌并報(bào)告溶血性弧菌并報(bào)告。 KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)u革蘭氏陽(yáng)性球菌，直徑為0.8-1.0微米，鏡檢時(shí)呈單個(gè)、成對(duì)、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群；u無(wú)芽孢，不運(yùn)動(dòng)；u兼性厭氧菌，在好氧條件下生長(zhǎng)最好。KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)l大多數(shù)菌株能生長(zhǎng)在6.5-46之間（最適溫度30-37）能在pH4.2-9.3之間生長(zhǎng)（最適pH為7.0-7.5）；l大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長(zhǎng)的條件，而且在單個(gè)菌株

9、中可能也有變化。KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)好氧生長(zhǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生接觸酶；產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶，大多數(shù)菌株可水解天然的動(dòng)物蛋白；所有的毒株產(chǎn)生凝固酶，人和動(dòng)物來(lái)源的菌株通常可凝固兔、人、馬和豬的血漿。KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血素溶血素：外毒素，分、四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細(xì)胞素殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；c.血漿凝固酶血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻

10、礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。d.脫氧核糖核酸酶脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來(lái)作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E五種。KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)在自然界中廣泛存在，空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可找到。作為人和動(dòng)物的常見病原菌，其主要存在于人和動(dòng)物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機(jī)會(huì)很多。傳播媒介為被該菌污染的食品，主要為淀粉類(如剩飯、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及魚、肉、蛋類等。被污染的食

11、物在室溫20-22放置5小時(shí)以上時(shí)，病菌大量繁殖，并產(chǎn)生腸毒素。 KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，多見于奶、肉、蛋、魚及其制品。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。 KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)幾乎所有的消毒試劑以及熱加工過(guò)程對(duì)金黃色葡萄球菌都有嚴(yán)重的破壞作用腸毒素可耐受100 30分鐘不被破壞。對(duì)于加工過(guò)的食品或食品加工設(shè)備而言，此菌或其腸毒素的存在通常作為衛(wèi)生條件差的一種指標(biāo)。 KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)25g樣品樣品+7.5%氯化鈉肉湯或氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大

12、豆肉湯氯化鈉胰酪胨大豆肉湯血平板血平板36 1 24h 鏡鏡 檢檢 營(yíng)養(yǎng)肉湯營(yíng)養(yǎng)肉湯血漿凝固酶血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn) 報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果 36 1 24h 36 1 24h 36 1 6h BP平板平板KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯增菌。KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)u血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血平板 上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。u血平板上其典型菌落呈金黃色，有時(shí)也為白色，大而突起， 圓形，不透明， 表面光滑， 有溶血圈。 KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)BP平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和痕量礦物元素丙酮酸鈉是一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑亞碲酸鹽對(duì)除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色卵黃提供營(yíng)養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對(duì)金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。KJ02食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)u在BP平板上其典型菌落為：圓形，光滑突起，濕潤(rùn)，直徑2-3mm，顏色呈灰色到黑玉色，邊緣常為淡色（米黃色或灰白色略帶灰色或黃色的白色），周