第十一章熒光分析法

1、藥物分析教研室藥物分析教研室2主要內(nèi)容主要內(nèi)容第一節(jié)第一節(jié) 第二節(jié)第二節(jié) 熒光定量分析方法熒光定量分析方法第三節(jié)第三節(jié) 熒光分光光度計和其他熒光分析技術(shù)熒光分光光度計和其他熒光分析技術(shù)3 某些物質(zhì)受到光照射，除吸收某種波長的光之外，某些物質(zhì)受到光照射，除吸收某種波長的光之外，發(fā)射出比原來所吸收光的波長更長的光發(fā)射出比原來所吸收光的波長更長的光光致發(fā)光光致發(fā)光（二級光）。（二級光）。光致發(fā)光光致發(fā)光熒光熒光 luorescence 磷光磷光phosphorescence 熒光分析法是根據(jù)物質(zhì)的熒光分析法是根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線的位置熒光譜線的位置及其及其強度強度進行物質(zhì)鑒定和含量測定的儀器方法。進行

2、物質(zhì)鑒定和含量測定的儀器方法。 概述概述熒光熒光紫外可見紫外可見相同點分子光譜分子光譜不同點本質(zhì)發(fā)射光譜吸收光譜靈敏度10-810-10g/ml10-510-7g/ml選擇性高一般熒光分析法與紫外可見吸收光譜比較熒光分析法與紫外可見吸收光譜比較5（一）分子熒光的產(chǎn)生（一）分子熒光的產(chǎn)生一、分子熒光一、分子熒光 molecular fluorescence1 1、分子的電子能級與被激發(fā)過程、分子的電子能級與被激發(fā)過程分子的能級包括：電子能級（10ev）、振動能級(0.1ev)及轉(zhuǎn)動能級(0.001ev) 10)21(212121MS多重性總自旋量子數(shù)和自旋量子數(shù)分別為兩電子自旋方向相反，1 1、

3、分子的電子能級與被激發(fā)過程、分子的電子能級與被激發(fā)過程 單重態(tài)：singlet state (S) 三重態(tài)：triplet state (T)3121212121MS多重性總自旋量子數(shù)和自旋量子數(shù)分別為兩電子自旋方向相同，電子能級的多重性M:M=2S+1；S為總自旋量子數(shù)6躍遷類型的比較躍遷類型的比較躍遷類型基態(tài)激發(fā)單重態(tài)S*基態(tài)激發(fā)三重態(tài)T*所需能量大小自旋方向不變改變躍遷幾率接近于1106（光學禁阻）82、熒光的產(chǎn)生熒光的產(chǎn)生S2S1S0T1吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光發(fā)發(fā)射射磷磷光光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫能量l l 2l l 1l l 4 外轉(zhuǎn)換l l 3 3T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫910激發(fā)態(tài)激

4、發(fā)態(tài)基態(tài)的能量傳遞途徑基態(tài)的能量傳遞途徑 電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時，通過輻射電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時，通過輻射躍遷躍遷( (發(fā)光發(fā)光) )和無輻射躍遷等方式失去能量；和無輻射躍遷等方式失去能量；熒光延遲熒光磷光輻射躍遷輻射躍遷無輻射躍遷無輻射躍遷傳遞途徑傳遞途徑內(nèi)轉(zhuǎn)移外轉(zhuǎn)移系間跨越振動弛豫熒光熒光：10-710-9s，第一激發(fā)第一激發(fā)單重態(tài)單重態(tài)的最低振動能級的最低振動能級基態(tài)基態(tài)磷光磷光：10-410s； 第一激發(fā)第一激發(fā)三重態(tài)三重態(tài)的最低振動能級的最低振動能級基態(tài)基態(tài)（1）振動弛豫）振動弛豫（vibrational relexation）過程過程：激發(fā)態(tài)分子通過

5、與溶劑分子碰撞而將部分能量傳遞給溶劑分子，其電子由同一電子能級激發(fā)態(tài)的較高振動能級回到最低振動能級的過程。特點：特點：發(fā)生在同一個電子能級內(nèi)不同振動能級間的躍遷；時間約10-12秒?；?1S2S1S0吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光振動弛豫能量l l 2l l 1 振動弛豫12（2 2）內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換（internal conversion)過程過程：當兩個電子的能級非?？拷?，以致其振動能級有重疊時，電子常常由高電子能級以非輻射躍遷方式轉(zhuǎn)移至低電子能級，這種過程稱為內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換特點：特點：發(fā)生在非?？拷膬蓚€電子能級間，他們的振動能級有重疊；時間約10-110-13秒?；?3S2S1S0吸吸

6、收收內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫能量l l 2l l 1內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫處于激發(fā)態(tài)的電子，通過振動弛豫和內(nèi)部能量 轉(zhuǎn)換，均回到第一激發(fā)態(tài)的最低振動能級過程：過程：振動弛豫內(nèi)部能量交換振動弛豫注：注：15（3 3）熒光）熒光（fluorescence）過程過程：電子由單重態(tài)的第一激發(fā)態(tài)最低振動能級躍遷到基態(tài)的任一振動能級而發(fā)射的光量子為熒光特點：特點：發(fā)生在激發(fā)單重態(tài)最低振動能級與基態(tài)之間。時間約為10-710-9 s。注：注： 發(fā)射熒光的能量比吸收的能量小 l1 l0 即發(fā)射波長 激發(fā)波長 16S2S1S0T1吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫能量l l 2l l 1l l 3 3T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫（4

7、4）外部能量轉(zhuǎn)換外部能量轉(zhuǎn)換（external conversion)過程過程：如果分子在溶液中被激發(fā)，激發(fā)分子之間、分子與溶劑之間會發(fā)生碰撞而失去能量，這種非輻射躍遷的過程稱為外部能量轉(zhuǎn)換特點：特點：發(fā)生在激發(fā)態(tài)的最低振動能級和基態(tài)之間；所需時間約為10-710-9秒。結(jié)果：結(jié)果：導致熒光或磷光減弱，甚至熄滅18S2S1S0T1吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫能量l l 2l l 1 外轉(zhuǎn)換l l 3 3T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫（5 5）體系間跨越）體系間跨越（intersystem crossing)過程過程：處于激發(fā)態(tài)的電子自旋方向發(fā)生改變，而使電子能級的多重性發(fā)生變化的過程特點：特點：

8、激發(fā)單重態(tài)與激發(fā)三重態(tài)振動能級重疊時，產(chǎn)生體系間的跨越（S1*T1 ）。結(jié)果：結(jié)果：這種跨越會導致熒光強度減弱，甚至熄滅。20S2S1S0T1吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫能量l l 2l l 1l l 4外轉(zhuǎn)換l l 3 3T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫影響體系間跨越幾率增大的因素：影響體系間跨越幾率增大的因素：含重原子的分子（如碘、溴等），體系間跨越最為常見。在溶液中存在氧分子等，這些順磁性物質(zhì)也能增加體 系間跨越的發(fā)生幾率。原因：原因：高原子序數(shù)的原子中，電子的自旋與軌道運 動之間的相互作用較大，有利于電子自旋反 轉(zhuǎn)的發(fā)生。22（6 6）磷光）磷光（phosporescence）過程

9、過程：電子由三重態(tài)的第一激發(fā)態(tài)最低振動能級躍遷到基態(tài)的任一振動能級而發(fā)射的光量子為磷光特點：特點：發(fā)生在激發(fā)三重態(tài)最低振動能級與基態(tài)之間。分子在三重態(tài)的最低振動能級上可以存活一段時間，發(fā)射時間約為10-410 s。注：注： 發(fā)射磷光的能量比熒光的能量小，l2l1 l0 即磷光波長 熒光波長 激發(fā)波長23S2S1S0T1吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光發(fā)發(fā)射射磷磷光光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫能量l l 2l l 1l l 4 外轉(zhuǎn)換l l 3 3T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫24熒光與磷光的比較熒光與磷光的比較熒熒 光光磷磷 光光躍遷激發(fā)單重態(tài)最低振動能級基態(tài)激發(fā)三重態(tài)最低振動能級基態(tài)光電子能量E激發(fā) E熒光E磷光波

10、長激發(fā) 熒光 磷光發(fā)射時間10-910-7秒10-410秒25（二）（二） 激發(fā)光譜與發(fā)射（熒光）光譜激發(fā)光譜與發(fā)射（熒光）光譜激發(fā)波長發(fā)射波長熒光物質(zhì)分子的兩個特征光譜熒光物質(zhì)分子的兩個特征光譜&激發(fā)光譜(excitation spectrum)： F lex &熒光光譜(fluorescence spectrum)： F lem26（二）激發(fā)光譜與熒光光譜（二）激發(fā)光譜與熒光光譜激發(fā)光譜激發(fā)光譜：（與吸收光譜類似）表示不同激發(fā)波長的輻射引起：（與吸收光譜類似）表示不同激發(fā)波長的輻射引起 物質(zhì)發(fā)射某一波長熒光所得的光譜。物質(zhì)發(fā)射某一波長熒光所得的光譜。 方法：固定發(fā)射光波長方

11、法：固定發(fā)射光波長emem，依次改變激發(fā)波長，依次改變激發(fā)波長exex，測，測 熒光強度熒光強度F F，以，以F-F-exex作圖得熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜。作圖得熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜。發(fā)射光譜發(fā)射光譜：（熒光光譜）固定激發(fā)光波長：（熒光光譜）固定激發(fā)光波長exex，依次改變發(fā)射，依次改變發(fā)射 波長波長emem，測熒光強度，測熒光強度F F，以，以F-emF-em作圖得熒光光譜。作圖得熒光光譜。激發(fā)光譜與熒光光譜上的激發(fā)光譜與熒光光譜上的max是定性是定性定量的依據(jù)定量的依據(jù)27熒光光譜的特征熒光光譜的特征（重點）（重點）（1 1）斯托克斯位移：斯托克斯位移：熒光發(fā)射熒光發(fā)射波長波長總是大于總是大于激

12、發(fā)激發(fā)波長。波長。 原因：無輻射躍遷能量損失，包括振動弛豫和內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換等原因：無輻射躍遷能量損失，包括振動弛豫和內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換等（2 2）熒光光譜的形狀與激發(fā)波長無關熒光光譜的形狀與激發(fā)波長無關 原因：電子躍遷到不同激發(fā)態(tài)能級，吸收不同波長的能量，產(chǎn)原因：電子躍遷到不同激發(fā)態(tài)能級，吸收不同波長的能量，產(chǎn) 生不同吸收帶，但均回到第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能生不同吸收帶，但均回到第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能 級再躍遷回到基態(tài)，產(chǎn)生波長一定的熒光。級再躍遷回到基態(tài)，產(chǎn)生波長一定的熒光。（3 3）熒光光譜與激發(fā)光譜的鏡像關系熒光光譜與激發(fā)光譜的鏡像關系 通常熒光發(fā)射光譜與它的吸收光譜（與激發(fā)光譜形狀一通常

13、熒光發(fā)射光譜與它的吸收光譜（與激發(fā)光譜形狀一 樣）成鏡像對稱關系。樣）成鏡像對稱關系。 28 蒽的激發(fā)光譜和熒光光譜S0S1*=4=3=2=1=0=4=3=2=1=0b4b3b2b1b0c0c1c2c3c4E4E3E2E1E4E3E2E1蒽的能級躍遷圖鏡像關系的原因鏡像關系的原因由于電子基態(tài)的振動能級分布與激發(fā)態(tài)相似，由于電子基態(tài)的振動能級分布與激發(fā)態(tài)相似，故通常熒光故通常熒光光譜與它的激發(fā)光譜成鏡像對稱關系。光譜與它的激發(fā)光譜成鏡像對稱關系。29二、熒光的產(chǎn)生與分子結(jié)構(gòu)的關系二、熒光的產(chǎn)生與分子結(jié)構(gòu)的關系 relation between fluorescence and molecular

14、 structure熒光壽命熒光壽命( f)和熒光效率和熒光效率 ( f) 熒光壽命：熒光壽命：除去激發(fā)光源后，分子的熒光強度降低到最除去激發(fā)光源后，分子的熒光強度降低到最大熒光強度的大熒光強度的1/e所需要的時間所需要的時間熒光量子產(chǎn)率（熒光量子產(chǎn)率（ ）：）：吸收的光子數(shù)發(fā)射的光子數(shù)物質(zhì)的熒光量子產(chǎn)率范圍一般是多少?如果一個分子將吸收的光子全部釋放，則其量子產(chǎn)率為如果一個分子將吸收的光子全部釋放，則其量子產(chǎn)率為100%100%。二、熒光的產(chǎn)生與分子結(jié)構(gòu)的關系二、熒光的產(chǎn)生與分子結(jié)構(gòu)的關系 relation between fluorescence and molecular structu

15、re 1.分子產(chǎn)生熒光必須具備的條件分子產(chǎn)生熒光必須具備的條件（1）具有合適的結(jié)構(gòu)）具有合適的結(jié)構(gòu)有強的紫外可見吸收；有強的紫外可見吸收；（2）具有一定的熒光量子產(chǎn)率（熒光效率）。）具有一定的熒光量子產(chǎn)率（熒光效率）。32（二）分子結(jié)構(gòu)與熒光的關系（二）分子結(jié)構(gòu)與熒光的關系1）共軛效應：提高共軛度有利于增加熒光效率）共軛效應：提高共軛度有利于增加熒光效率 并產(chǎn)生紅移并產(chǎn)生紅移 二、熒光的產(chǎn)生與分子結(jié)構(gòu)的關系二、熒光的產(chǎn)生與分子結(jié)構(gòu)的關系 relation between fluorescence and molecular structure332）剛性平面結(jié)構(gòu)：可降低分子振動，減少與溶劑）剛

16、性平面結(jié)構(gòu)：可降低分子振動，減少與溶劑的相互作用，故具有很強的熒光。如熒光素和酚酞的相互作用，故具有很強的熒光。如熒光素和酚酞有相似結(jié)構(gòu)，熒光素有很強的熒光，酚酞卻沒有。有相似結(jié)構(gòu)，熒光素有很強的熒光，酚酞卻沒有。 343）取代基效應）取代基效應給電子取代基給電子取代基-OH,-CN，-NH2等，可擴大共軛雙鍵體系加強等，可擴大共軛雙鍵體系加強熒光熒光得電子取代基得電子取代基 -C=O, -NO2-COOH，-SH等減弱熒光等減弱熒光重原子效應：重原子效應：芳環(huán)上取代芳環(huán)上取代F、Cl、Br、I之后，系間竄躍加強，之后，系間竄躍加強，熒光強度隨鹵素原子量熒光強度隨鹵素原子量取代基的位置：取代基

17、的位置：鄰、對位熒光鄰、對位熒光增強，間位抑制增強，間位抑制35（三）熒光試劑（了解）（三）熒光試劑（了解）1) 熒光胺熒光胺本身不顯熒光，能與脂肪族、芳香伯胺形本身不顯熒光，能與脂肪族、芳香伯胺形成熒光衍生物。成熒光衍生物。ex=275、390nm，em=480nm2)鄰苯二甲醛（鄰苯二甲醛（OPA）伯胺，伯胺，-氨基酸氨基酸 ex=340nm ,em=455nm3）丹酰氯）丹酰氯含伯、仲胺及酚基的生物堿含伯、仲胺及酚基的生物堿 丹酰肼丹酰肼可的松的羰基可的松的羰基 ex=365nm ,em=500nm4）無機離子）無機離子具有具有電子結(jié)構(gòu)的有機化合物電子結(jié)構(gòu)的有機化合物1 1、溫度：、溫度

18、：低溫，低溫，f f。 原因：溫度原因：溫度TT，分子運動加快，分子運動加快， 磁撞幾率磁撞幾率無輻無輻射躍遷射躍遷2 2、溶劑：、溶劑： 溶劑介電常數(shù)溶劑介電常數(shù)，極性，極性， * * E,E,f f， 溶劑粘度溶劑粘度 ，f 三、影響熒光強度的外部因素三、影響熒光強度的外部因素 relation between fluorescence and molecular structure363、pH影響影響 對酸堿化合物，溶液pH的影響較大，需要嚴格控制；4、熒光熄滅劑的影響、熒光熄滅劑的影響 熒光物質(zhì)與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子相互作用引起熒光強度降低或熄滅的現(xiàn)象。引起熒光熄滅的物質(zhì)為熒光熄滅劑

19、 常見的熄滅劑有：常見的熄滅劑有：鹵素離子、重金屬離子、氧分子以及硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物。給電子基團3738熄滅熄滅機理：機理： a碰撞失去能量碰撞失去能量 b生成不發(fā)光的配合物生成不發(fā)光的配合物 c溶解氧的存在使熒光物質(zhì)氧化或氧分子的順磁性溶解氧的存在使熒光物質(zhì)氧化或氧分子的順磁性 使激發(fā)單重態(tài)分子轉(zhuǎn)變?yōu)槿貞B(tài)使激發(fā)單重態(tài)分子轉(zhuǎn)變?yōu)槿貞B(tài) d濃度較大，自熄滅現(xiàn)象濃度較大，自熄滅現(xiàn)象 5 5、散射光的干擾、散射光的干擾散射光散射光: :當一束平行光照射在液體樣品上，大部分光線透過溶液， 小部分光線由于光子和物質(zhì)分子相碰撞，使光子的運動方 向發(fā)生改變而向不同角度散射，這種光稱為散射光

20、。瑞利光瑞利光: :光子和物質(zhì)發(fā)生彈性磁撞時，不發(fā)生能量交換，僅光子方 向改變，這種散射光稱為瑞利光。其波長與入射光相同。拉曼光拉曼光: :光子和物質(zhì)發(fā)生非彈性磁撞，光子改變方向同時，與物質(zhì) 有能量交換，散射光波長有所改變，增大或減小，這種散 射光為拉曼光。 波長增大的拉曼光對熒光測定有干擾39硫酸奎寧在不同激發(fā)波長下的熒光硫酸奎寧在不同激發(fā)波長下的熒光(a)與散射光譜與散射光譜(b)熒光光譜熒光光譜散射光譜散射光譜4041 能用熒光分析法測定的有機物包括能用熒光分析法測定的有機物包括多環(huán)胺類、萘酚類、嘌啉類、多環(huán)胺類、萘酚類、嘌啉類、吲哚類、多環(huán)芳烴類吲哚類、多環(huán)芳烴類、具有芳環(huán)或芳雜環(huán)結(jié)構(gòu)

21、的、具有芳環(huán)或芳雜環(huán)結(jié)構(gòu)的氨基酸類及蛋白質(zhì)氨基酸類及蛋白質(zhì)等；藥物中的等；藥物中的生物堿類生物堿類如麥角堿、蛇根堿、麻黃堿、嗎啡、喹啉類如麥角堿、蛇根堿、麻黃堿、嗎啡、喹啉類及異喹啉類生物堿等；及異喹啉類生物堿等；甾體類甾體類如皮質(zhì)激素及雌醇等；如皮質(zhì)激素及雌醇等；抗生素類抗生素類如青如青霉素、四環(huán)素等；霉素、四環(huán)素等；維生素類維生素類如維生素如維生素A、B1、B2、B6、B12、E、抗抗壞血酸、葉酸及煙酰胺等。此外，壞血酸、葉酸及煙酰胺等。此外，中草藥中的許多有效成分中草藥中的許多有效成分，不少，不少是屬于是屬于芳香性結(jié)構(gòu)的大分子雜環(huán)芳香性結(jié)構(gòu)的大分子雜環(huán)類，都能產(chǎn)生熒光，可用熒光分析類，都

22、能產(chǎn)生熒光，可用熒光分析法作初步鑒別及含量測定。熒光分析法的靈敏度高，選擇性較好，法作初步鑒別及含量測定。熒光分析法的靈敏度高，選擇性較好，取樣量少，方法快速，已成為醫(yī)藥學、生物學、農(nóng)業(yè)和工業(yè)等領域取樣量少，方法快速，已成為醫(yī)藥學、生物學、農(nóng)業(yè)和工業(yè)等領域進行科學研究工作的重要手段之一。以下是幾個重要的熒光試劑：進行科學研究工作的重要手段之一。以下是幾個重要的熒光試劑：42第二節(jié)第二節(jié) 熒光定量分析方法熒光定量分析方法一、熒光強度與物質(zhì)濃度的關系一、熒光強度與物質(zhì)濃度的關系 當一束強度為當一束強度為I0的紫外的紫外/可見光照射一濃度為可見光照射一濃度為c、液層厚度為液層厚度為l的液槽時，可在溶

23、液的的液槽時，可在溶液的各個方向各個方向觀觀察到熒光，其察到熒光，其 吸收光強度為吸收光強度為Ia透過光強度為透過光強度為It熒光強度為熒光強度為FI0It IaF垂直方向垂直方向（= I0 - It ）熒光強度正比于被熒光物質(zhì)吸收的光強度熒光強度正比于被熒光物質(zhì)吸收的光強度IaF = K(I0 It) K K ：取決于熒光效率取決于熒光效率 f f根據(jù)根據(jù)Beer Law=10- clItI0F = K(I0 - I0 10- c l ) = KI0(1- 10- c l ) = KI0(1- e2.303 c l )由于由于 ex =1+x+x2/2!+x3/3!+xn/n!所以所以 e-

24、2.3 c l =1 - 2.3 cl + (-2.3 cl) 2/2!+ (-2.3 cl) 3/3!+e-2.3 c l =1 - 2.3 cl 43e-2.3 cl =1 - 2.3 cl 代入代入 F = KI0(1- e2.303 cl )F = KI0(1- 1+2.3 c l ) =2.3 K I0 l c 當熒光效率當熒光效率 f f 、入射光強度、入射光強度I0、物質(zhì)的摩爾吸收物質(zhì)的摩爾吸收系數(shù)系數(shù) 、液層厚度、液層厚度l均固定不變時，均固定不變時，熒光強度正比于該熒光強度正比于該溶液的濃度溶液的濃度F = K c 熒光定量分熒光定量分析的依據(jù)析的依據(jù)4445二、定量分析方法

25、二、定量分析方法1.1.工作曲線法工作曲線法 配制一系列標準濃度試樣，測定熒光強度，繪制配制一系列標準濃度試樣，測定熒光強度，繪制F-c的標的標準校正曲線，再在相同條件下測量未知試樣的熒光強度，在準校正曲線，再在相同條件下測量未知試樣的熒光強度，在標準曲線上求出試樣的濃度標準曲線上求出試樣的濃度空白調(diào)空白調(diào)0，標品調(diào)，標品調(diào)100%或或50%462、比例法：、比例法：在線性范圍內(nèi)，測定標樣和試樣的熒光強度0000ssxxsxxsFFcFFccFFcFF3、多組分樣品的熒光分析、多組分樣品的熒光分析 a無相互干擾，分別測定 b有干擾，同紫外可見吸收光譜定量方法 解聯(lián)立方程組法 等吸收雙波長消去法

26、47第三節(jié)第三節(jié) 熒光分光光度計熒光分光光度計四個部分四個部分激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測器激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測器特殊點特殊點有有兩個單色器兩個單色器，光源與檢測器通常成，光源與檢測器通常成直角直角48第三節(jié)第三節(jié) 熒光分光光度計熒光分光光度計單色器單色器：選擇激發(fā)光波長選擇激發(fā)光波長的第一單色器和選擇發(fā)的第一單色器和選擇發(fā)射光射光( (測量測量) )波長的第二波長的第二單色器單色器光源光源：氙燈氙燈 ( (可見與紫可見與紫外區(qū)外區(qū)) )檢測器檢測器：光電倍增管光電倍增管492.儀器的校正儀器的校正（1）靈敏度校正：）靈敏度校正：最低信號、最低信噪比所對應的濃度最低信號、最低信噪比所對應的濃