上海交通大學(xué)遺傳學(xué)上午7組果蠅雜交實(shí)驗(yàn)

1、果蠅雜交實(shí)驗(yàn)方案果蠅雜交實(shí)驗(yàn)方案組員：鄭書(shū)鈺組員：鄭書(shū)鈺4 王藝辰王藝辰3 盧春曉盧春曉2 吳牡丹吳牡丹1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?1 觀察認(rèn)識(shí)果蠅性狀。 2 了解果蠅生活史。 3 掌握果蠅的飼養(yǎng)方法。 4 學(xué)習(xí)雜交實(shí)驗(yàn)原理與方法，探索果蠅若干性狀遺傳規(guī)律。 5 驗(yàn)證基因伴性遺傳的規(guī)律 6 驗(yàn)證基因連鎖與交換規(guī)律并計(jì)算重組值二、實(shí)驗(yàn)材料二、實(shí)驗(yàn)材料黑腹果蠅黑腹果蠅Drosophila melanogasterDrosophila melanogasterP：白眼，小翅，卷剛毛（Xw m sn Xw m sn）三隱性突變體雌果蠅 紅眼，長(zhǎng)翅，直剛毛（X+ + + Y ) 野生型雄果蠅 果蠅的生活

2、史果蠅的生活史 果蠅屬完全變態(tài)昆蟲(chóng)，其完整的生活周期科分為卵、幼蟲(chóng)、蛹和成蟲(chóng)4個(gè)明顯時(shí)期，如右圖。 25時(shí)成蠅一般在交配12天后開(kāi)始產(chǎn)卵，卵長(zhǎng)約0.5mm，白色橢圓形，前端背面有一對(duì)觸絲使卵能附在食物或瓶壁上。果蠅的完全變態(tài)發(fā)育：卵（embryo）、幼蟲(chóng)（instar larva）、蛹（pupa）、成蟲(chóng)（adult） 果蠅的生活史果蠅的生活史 受精卵24小時(shí)內(nèi)便孵化成幼蟲(chóng)，幼蟲(chóng)經(jīng)兩次蛻皮(分別為一齡幼蟲(chóng)，二齡幼蟲(chóng)）成為三齡幼蟲(chóng)，三齡幼蟲(chóng)體長(zhǎng)可達(dá)4-5mm，用肉眼觀察可見(jiàn)其一端稍尖，上有一黑色鉤狀口器，幼蟲(chóng)生活約4天左右開(kāi)始結(jié)蛹并停止攝食，爬到相對(duì)干燥的表面，逐漸形成菱形的蛹。果蠅的完全變態(tài)發(fā)育

3、：卵（embryo）、幼蟲(chóng)（instar larva）、蛹（pupa）、成蟲(chóng)（adult）果蠅的生活史果蠅的生活史 從蛹中羽化出的果蠅812小時(shí)候即可交配，交配后精子可以在雌蠅的受精囊中儲(chǔ)存一段時(shí)間，然后釋放到輸卵管中。所以雜交試驗(yàn)中母本必須使用未交配雌蠅。為什么選擇黑腹果蠅？為什么選擇黑腹果蠅？ 黑腹果蠅生活史短，繁殖力強(qiáng)，相對(duì)性狀明顯且可遺傳，易于培養(yǎng)，培養(yǎng)成本低，符合上述遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)研究要求。 同時(shí)因其染色體僅4對(duì)，基因組僅約165Mb，并且基因組超過(guò)60%的片段同人類(lèi)疾病基因相似。果蠅性別及突變形狀的鑒別果蠅性別及突變形狀的鑒別認(rèn)識(shí)：紅眼與白眼認(rèn)識(shí)：紅眼與白眼(w)(w)，長(zhǎng)翅與小翅，長(zhǎng)

4、翅與小翅(m), (m), 焦剛毛焦剛毛(sn)(sn)與直剛毛與直剛毛, ,雄性與雌性，雄性與雌性， 性梳和平衡棍。性梳和平衡棍。 野生型：紅眼、長(zhǎng)翅、直剛毛突變型：白眼、小翅、焦剛毛雜交管的觀察與記錄將所需品系的雌蠅與雄蠅放在一起培養(yǎng)，如果需要觀察F1代的性狀，7-8天后，需要倒掉親本，避免F1代雌蠅與父本雜交，影響結(jié)果。果蠅管標(biāo)記（紙蓋）親本管：P（+/-），組別：1（上午）-組數(shù)，2-（下午）-組數(shù)，接種時(shí)間；雜交管：F1/F2，組別：1（上午）-組數(shù)，2-（下午）-組數(shù)，接種或雜交時(shí)間；工具的使用培養(yǎng)瓶：有培養(yǎng)基，紙蓋與瓶口的密封，毛筆：分突變型和野生型，勿混用麻醉瓶：干燥、空的培養(yǎng)

5、瓶，突變型和野生型勿混用，用棉塞文具盒：中的工具保持完整記錄與標(biāo)記記錄與標(biāo)記實(shí)驗(yàn)流程與步驟概述實(shí)驗(yàn)流程與步驟概述野生型 突變型雌雌雄雄Xw m sn Xw m snX+ + + Y X X白眼，小翅，卷剛毛 紅眼，長(zhǎng)翅，直剛毛Xw m sn Y 親本8天后子一代野生型野生型突變型突變型棄親本野生型突變型繼續(xù)培養(yǎng)12h后羽化突變型處女蠅雌果蠅每隔12h8天后雄果蠅子一代收集30對(duì)雌雄，轉(zhuǎn)瓶子二代羽化，觀察棄親本記錄雌雄與眼色8天后棄親本記錄 眼色，翅形，剛毛記錄雌雄與眼色小組組員分工小組組員分工記錄表格設(shè)計(jì)記錄表格設(shè)計(jì)伴性遺傳1伴性遺傳2親代 10只白眼，雌XwXw 10只只 紅眼，雄紅眼，雄

6、X+Yf1 _只只 白眼，雄白眼，雄 Xw Yf1 _只只 紅眼，雌紅眼，雌 X+Xw記錄表格設(shè)計(jì)記錄表格設(shè)計(jì)連鎖與交換類(lèi)別基因型表型觀察數(shù)親本型X+ + +Xw m snXw m snY 紅眼，長(zhǎng)翅，直剛毛白眼，小翅，卷剛毛單交換1單交換2雙交換合計(jì)日期日期第一天第一天 第二天第二天 第三天第三天 第四天第四天 第五天第五天 第六天第六天.性狀只性狀只性狀只性狀只性狀只性狀只性狀只性狀只連續(xù)性狀觀察成體果蠅好動(dòng)，應(yīng)用麻醉進(jìn)行鏡下觀察，轉(zhuǎn)瓶等操作。麻醉動(dòng)作： 左手小指與無(wú)名指夾取麻醉瓶瓶塞，瓶塞處滴加2-3滴乙醚。取果蠅培養(yǎng)瓶輕拍瓶壁，使果蠅震落在瓶底，再用左手無(wú)名指和中指夾取培養(yǎng)瓶塞，培養(yǎng)瓶

7、口與麻醉瓶口對(duì)接，輕拍上面的培養(yǎng)瓶，將果蠅引入麻醉瓶。迅速蓋塞約半分鐘，果蠅行動(dòng)緩慢。觀察完畢后，用干凈毛筆將所需果蠅轉(zhuǎn)移到側(cè)臥的新培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，待它清醒，再豎立加塞，防止果蠅粘在培養(yǎng)基上。實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作麻醉麻醉處女蠅的收集處女蠅的收集 準(zhǔn)備好親本培養(yǎng)管后，每天中午12：00觀察記錄果蠅的情況，在觀察到發(fā)黑的蛹時(shí)，將成蠅全部趕去，羽化后8小時(shí)內(nèi)挑選處女蠅。為了方便起見(jiàn)，建議每天早晨8：009:00將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)成蠅殺死，次日傍晚17:0019:00對(duì)新羽化出的果蠅進(jìn)行挑選。可以多收集幾只，一組做實(shí)驗(yàn)用，一組單獨(dú)培養(yǎng)觀察3天，看是否有卵產(chǎn)生。1.產(chǎn)卵多，幼蟲(chóng)密度過(guò)大，自然選擇導(dǎo)致突變型個(gè)體生存不利，死亡率高于野生型2.雜交親本棄除不完全（沒(méi)有在白色幼蟲(chóng)孵出時(shí)將親本全部放飛，連鎖與交換中，部分親本型子代與親本表型相同）3.部分新羽化的果蠅黏死在培養(yǎng)基上，表型無(wú)法識(shí)別。后者人為原因破壞了果蠅表型。4.保證品系的純正。如發(fā)現(xiàn)有從瓶中逃逸者，必須捕殺。經(jīng)常對(duì)親本果蠅進(jìn)行性狀檢查，排