交叉配血知識(shí)講座1ppt課件

1、交叉配血知識(shí)講座交叉配血知識(shí)講座標(biāo)本的采集及要求標(biāo)本的采集及要求一一血型血型二二不規(guī)則抗體的篩選不規(guī)則抗體的篩選 三三交叉配血交叉配血四四一一標(biāo)標(biāo)本本的的采采集集及及要要求求v1.標(biāo)本要新鮮: 前三個(gè)月內(nèi)病人輸過血或已經(jīng)妊娠,則配血試驗(yàn)使用的標(biāo)本不得在這次輸血的48小時(shí)前抽取,避免因回憶反應(yīng)產(chǎn)生的抗體漏檢。新近的輸血或妊娠可以引起意外抗體的迅速出現(xiàn),如果對(duì)病人的輸血史或人身史不明,使用的標(biāo)本必須是輸血前48小時(shí)內(nèi)抽取的。血量約為5ml 。v2.病人在使用右旋糖酐、pvp等治療前抽取病人血液標(biāo)本備用,以防止紅細(xì)胞緡錢狀凝集對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾。標(biāo)標(biāo)本本的的采采集集及及要要求求v3.在24小時(shí)內(nèi)輸了1

2、2單位血后,可以輸注未經(jīng)交叉配血的ABO、RH同型的血液,因?yàn)樵冀徊媾溲玫难逡巡荒艽砘颊哐宓那闆r。v4.標(biāo)本必須有正確的標(biāo)簽,要防止血樣的稀釋和溶血的產(chǎn)生,溶血的標(biāo)本一般不能使用,因?yàn)檠逯械挠坞x血紅蛋白可以掩蓋在輸血前實(shí)驗(yàn)中抗體反映引起的溶血。標(biāo)本標(biāo)簽上的內(nèi)容與血液申請(qǐng)單上的內(nèi)容要一致。標(biāo)標(biāo)本本的的采采集集及及要要求求v5.血清或血漿均可用于輸血前檢查,但使用血漿標(biāo)本時(shí),應(yīng)注意排除纖維蛋白原的干擾,因?yàn)檠獫{有時(shí)有少許纖維蛋白凝塊,容易導(dǎo)致凝集結(jié)果的判斷。v6.輸血后所有的標(biāo)本均應(yīng)妥善保存于2-8冰箱中,至少一周。二、血二、血 型型v 1.紅細(xì)胞懸液的配制v 用于血型鑒定、配血等的紅

3、細(xì)胞至少要用大量生理鹽水洗一次,其目的是通過洗滌可以去除紅細(xì)胞表面的物質(zhì),如少量的血漿蛋白、已溶解紅細(xì)胞的基質(zhì),他們有競(jìng)爭(zhēng)抗體的作用,還有抗凝劑,他們有抗補(bǔ)體的作用。2. 紅紅細(xì)胞懸細(xì)胞懸液的常液的常用濃度用濃度2%的紅細(xì)胞懸液一般用于抗體效價(jià)的測(cè)定的紅細(xì)胞懸液一般用于抗體效價(jià)的測(cè)定5%的紅細(xì)胞懸液一般用于血型鑒定、配的紅細(xì)胞懸液一般用于血型鑒定、配血試驗(yàn)、及抗球蛋白試驗(yàn)等大多數(shù)血型血血試驗(yàn)、及抗球蛋白試驗(yàn)等大多數(shù)血型血清學(xué)試驗(yàn)清學(xué)試驗(yàn)10%的紅細(xì)胞懸液一般用于測(cè)定抗體的親的紅細(xì)胞懸液一般用于測(cè)定抗體的親和力試驗(yàn)和力試驗(yàn)3.離心力的標(biāo)準(zhǔn)離心力的標(biāo)準(zhǔn) v不同規(guī)格離心機(jī)，力矩不同，統(tǒng)一離心轉(zhuǎn)速，但

4、沒有統(tǒng)一離心力。離心轉(zhuǎn)速換算公式：RCF = 1.118 10-5 (rpm) 2 R (cm)v將試管成30-45角拿在手上，細(xì)胞扣朝上，手腕輕輕用力，用液體去沖細(xì)胞扣，如果為陰性，則細(xì)胞成細(xì)沙狀沿試管壁流下，如果為陽性，細(xì)胞成塊狀脫落細(xì)胞壁或成齒狀沿試管壁留下。切不可用力使勁搖試管，那樣凝集顆粒會(huì)被搖散，弱凝集則會(huì)誤判為陰性。 4.離心后結(jié)果觀離心后結(jié)果觀察注意事項(xiàng)察注意事項(xiàng) v 5.加樣時(shí)先加血清再加紅細(xì)胞，以避免漏加；抗體和抗原的比例一般為2：1。v 6.必須要做正反定型實(shí)驗(yàn)才能確定血型。v 7.正定型試驗(yàn)如果有條件可加做抗AB,可用來檢測(cè)弱A和弱B ,反定型一定要加做O細(xì)胞,可用來發(fā)

5、現(xiàn)不規(guī)則抗體。v 8.鹽水試驗(yàn)多采用立即離心法,正確的操作是紅細(xì)胞懸液加到血清后立即離心并觀察結(jié)果。反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)而延誤立即離心的時(shí)間對(duì)ABO血型系統(tǒng)的抗體檢出影響較大。v 如果在室溫放置2分鐘后離心,可能使3+-4+的凝集減弱為0+-1+,并伴有溶血現(xiàn)象。v 如果在室溫放置5分鐘后離心,原有的凝集可能消失,并有溶血。 有的標(biāo)本在延遲離心后,本來應(yīng)有的凝集會(huì)變?yōu)榧炔荒膊蝗苎?因而難以發(fā)現(xiàn)ABO血型的不配合。這多數(shù)發(fā)生在O型人的血清抗體與A型、B型或AB型紅細(xì)胞反應(yīng)的試驗(yàn)中,發(fā)生率為2%-3%。發(fā)生上述的原因是反應(yīng)強(qiáng)的抗A、抗B和抗原強(qiáng)度強(qiáng)的A、B抗原作用,補(bǔ)體C1在有Ca2+存在的條件下,固

6、定到紅細(xì)胞膜上,妨礙了紅細(xì)胞的凝集,進(jìn)一步可能引起溶血。解決的方法：A:血清與紅細(xì)胞混合后立即離心。B:用血漿或滅活的血清做試驗(yàn)C:用EDTA鹽水配制紅細(xì)胞懸液,D:稀釋血清9. 9. 正反定型不一致的原因正反定型不一致的原因一般正反定型結(jié)果不一致有技術(shù)原因也有受檢紅細(xì)胞或血清本身的的問題。（1技術(shù)和管理錯(cuò)誤-ABO定型中產(chǎn)生異常結(jié)果主要原因標(biāo)本和試劑搞錯(cuò)，造成假陽性或假陰性的結(jié)果。器材不潔產(chǎn)生假陽性結(jié)果。試劑污染或不足，產(chǎn)生假陽性或假陰性的結(jié)果。離心過度或不足，產(chǎn)生假陽性或假陰性的結(jié)果。陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。漏加試劑，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤，產(chǎn)生假陽性或假

7、陰性結(jié)果。正反正反定型定型不一不一致的致的原因原因（2標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。（3紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。（4血清異常 華通膠或血清蛋白異常引起串錢狀形成，影響反定性結(jié)果。（5紅細(xì)胞致敏 在含高蛋白介質(zhì)的試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。（6近期曾異型輸血，使病人血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時(shí)顯示“混合 外觀凝集景象。（7疾病因素導(dǎo)致抗原減弱 某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，檢出困難。（8紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象 紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。（9獲得

8、性類B 由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B活性。正反正反定型定型不一不一致的致的原因原因（10近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療，影響抗體效價(jià)，造成反定型困難。（11異常血漿蛋白 病人血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例異常和高濃度的纖維蛋白原等能導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。（12不規(guī)則抗體的產(chǎn)生 受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，如自身抗I，與試劑A、B細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng)。（13低丙種球蛋白血癥 可能會(huì)因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型時(shí)不見凝集或僅見弱凝集反響。（14藥物等因素 藥物、右旋糖酐等靜脈注射某些造影劑可引起紅細(xì)胞聚集而類似凝集。（15年齡因素 如新生兒、老

9、年人等。正反定型不一致的處理方法正反定型不一致的處理方法v 如發(fā)現(xiàn)ABO正反定性不一致，首先要重做試驗(yàn)一次。嚴(yán)厲v 執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察結(jié)果，可v 解決明顯的問題，對(duì)一些疑難問題需進(jìn)一步檢查。可初步采v 取以下措施： （1另從受檢者采取1份新鮮血液標(biāo)本，這樣 可以糾正因污染或搞錯(cuò)標(biāo)本造成的不符合。 （2將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5%鹽水細(xì)胞懸 液，用抗A、抗B、抗A+B做實(shí)驗(yàn)，可以得到其他有用的信息。有條件的可加做抗H試驗(yàn)。（3對(duì)受檢者作直接抗人球蛋白試驗(yàn)，看紅細(xì)胞有沒有被致敏（4如疑為A抗原或B抗原減弱，可將受檢紅細(xì)胞與抗A或抗B血清作吸收放散試驗(yàn)（5 5如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞

10、成緡錢狀排列，加等滲鹽水如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞成緡錢狀排列，加等滲鹽水1 1滴混勻，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。滴混勻，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。（6 6做反定型試驗(yàn)時(shí)需要加做做反定型試驗(yàn)時(shí)需要加做O O細(xì)胞細(xì)胞常用的記錄符號(hào)及所示的凝集強(qiáng)度常用的記錄符號(hào)及所示的凝集強(qiáng)度v 4+:一個(gè)大的凝集塊,背景透明,無游離細(xì)胞v 3+:數(shù)個(gè)大凝集塊,背景透明,無游離細(xì)胞v 2+:許多小凝集塊,肉眼可見,大小均勻,背景基本透明,有游離細(xì)胞v 1+:很小的凝集塊,肉眼可見,背景不透明,游離細(xì)胞較多,需要用顯微鏡觀察v W+:微小凝集塊,肉眼很難看清,背景混濁,需要用顯微鏡觀察v O:無凝集,無溶血,全部是游離細(xì)胞,要用顯微

11、鏡觀察v PH:部分溶血v H:完全溶血v WF:混合外觀v 疑難血型病例v 1.白血病血型變異v 2.血漿蛋白紊亂v 3. 類Bv 4.多/全凝集v 5.冷凝集v 6.ABO亞型三、不規(guī)則抗體的篩選三、不規(guī)則抗體的篩選v 1.所謂不規(guī)則抗體是指抗A、抗B以外的血型抗體，其多為抗體。主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生。進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩選的目的是發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體，以確保安全用血，有效用血，有條件或時(shí)間允許的情況下最好獻(xiàn)血者血清也作不規(guī)則抗體的篩選，如有發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，鑒定此抗體，找出能與其相配合的血液，不可隨便用于輸血。因?yàn)槎酁榭贵w，在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能致敏相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞,必須

12、通過特殊介質(zhì)(酶、抗人球蛋白、等)才能使致敏紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)，這些方法的選擇可按抗體的血清學(xué)行為和試驗(yàn)的具體條件來確定。臨床上通常所稱的“同型血實(shí)際上是指血型系統(tǒng)和血型系統(tǒng)相同,其它紅細(xì)胞血型系統(tǒng)未必相同。如果交叉配血不仔細(xì),或者只用鹽水介質(zhì)配血,則有可能檢查不出血型系統(tǒng)之外的不規(guī)則抗體,而此抗體與相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng),可導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。 2.篩選細(xì)胞通常是由2-3個(gè)單人份的O型紅細(xì)胞組成一套篩選細(xì)胞試劑，包括以下常見的抗原：Rh系統(tǒng) 、MNSs系統(tǒng)、P系統(tǒng)、Lewis系統(tǒng)、Duffy系統(tǒng)等。3.抗體篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的不規(guī)則抗體。一些抗低頻率抗原的抗體則可能漏檢。

13、不規(guī)則抗體篩選的操作步驟不規(guī)則抗體篩選的操作步驟v 病人病人/被檢血清被檢血清 + 抗體篩選細(xì)胞抗體篩選細(xì)胞 鹽水介質(zhì)鹽水介質(zhì)v 非鹽水介質(zhì)聚凝胺、非鹽水介質(zhì)聚凝胺、抗球蛋白、酶）抗球蛋白、酶） v 1、取試管四支，標(biāo)明、取試管四支，標(biāo)明、和自身對(duì)照并向各管加病人血清血漿和自身對(duì)照并向各管加病人血清血漿100ul，加，加5%篩選細(xì)胞（篩選細(xì)胞（、）各）各50ul于于、 管中和管中和5%自身細(xì)自身細(xì)胞于自身對(duì)照管中。胞于自身對(duì)照管中。v 2、各加、各加LIM0.6ML，混合均勻后，靜置，混合均勻后，靜置15秒秒,再各加再各加Polybrene 溶液溶液100ul(約約2滴滴)，并混合均勻。，并混

14、合均勻。v 3 、以、以1300G離心，離心離心，離心15秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約約0.1ML液體。液體。v 4、輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，則必須重作。、輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，則必須重作。v 5、最后加入、最后加入Resuspending 100ul(約約2滴滴) ，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合并同時(shí)觀察，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。如果凝集散開，表示是由結(jié)果。如果凝集散開，表示是由Polybrene引起的非特異性聚集，抗體篩檢引起的非特異性聚集，抗體篩檢結(jié)果為陰性；如凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)

15、合的特異性反應(yīng)，抗體結(jié)果為陰性；如凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，抗體篩檢結(jié)果為陽性，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定。篩檢結(jié)果為陽性，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定。 抗篩陰性，交叉配血相容抗篩陰性，交叉配血相容 抗篩陰性，鹽水直接離心交叉配血不相容原因有：抗篩陰性，鹽水直接離心交叉配血不相容原因有：獻(xiàn)血者紅細(xì)胞是獻(xiàn)血者紅細(xì)胞是ABOABO血型不相容血型不相容存在在室溫反應(yīng)的同種異體抗體存在在室溫反應(yīng)的同種異體抗體獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞是多凝集紅細(xì)胞獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞是多凝集紅細(xì)胞4. 4. 抗體篩選和交叉配血試驗(yàn)結(jié)果分析抗體篩選和交叉配血試驗(yàn)結(jié)果分析 抗篩陰性，酶試驗(yàn)、抗球蛋白交叉配血試驗(yàn)等不相抗篩陰性，酶試驗(yàn)

16、、抗球蛋白交叉配血試驗(yàn)等不相容容 獻(xiàn)血者紅細(xì)胞獻(xiàn)血者紅細(xì)胞DATDAT試驗(yàn)為陽性試驗(yàn)為陽性受血者血清抗體活性很弱，則抗篩試驗(yàn)成陰性受血者血清抗體活性很弱，則抗篩試驗(yàn)成陰性抗體與低頻率抗原反應(yīng)抗體與低頻率抗原反應(yīng) 抗篩陽性，交叉配血相容抗篩陽性，交叉配血相容自身抗自身抗-H-H抗抗-Lebh-Lebh抗篩陽性，但獻(xiàn)血者紅細(xì)胞可能正好不含與相應(yīng)的抗抗篩陽性，但獻(xiàn)血者紅細(xì)胞可能正好不含與相應(yīng)的抗原，因此配血可以相合。原，因此配血可以相合。 抗篩陽性，交叉配血不相容抗篩陽性，交叉配血不相容同種異體抗體存在，自身對(duì)照成陰性同種異體抗體存在，自身對(duì)照成陰性同種異體抗體存在，自身對(duì)照成陽性同種異體抗體存在，

17、自身對(duì)照成陽性冷反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性冷反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性溫反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性溫反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽性“錢串狀紅細(xì)胞形成引起非真實(shí)的陽性結(jié)果錢串狀紅細(xì)胞形成引起非真實(shí)的陽性結(jié)果v 輸血前試驗(yàn)“三保險(xiǎn)”:血型、抗篩、交叉配血v 相合%v 隨機(jī) 64v ABO 99.4v Rh 99.8v 抗篩 99.94v 交叉配血 99.95v 自身輸血 100四、交叉配血四、交叉配血v 交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)，實(shí)際上是檢查不配合v 性，使病人，獻(xiàn)血者血液之間沒有可測(cè)到的不相配合的v 抗原，抗體成分，試驗(yàn)應(yīng)在37下進(jìn)行。試驗(yàn)方法除作v 鹽水介質(zhì)外，還有抗球蛋

18、白試驗(yàn)法、酶法、聚凝胺法或v 其改良法。在配血的任何步驟中均不產(chǎn)生溶血或凝集獻(xiàn)v 血者的血液才能給予病人輸注。1.鹽水法鹽水介質(zhì)中紅細(xì)胞上的抗原決定族與相應(yīng)抗體分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，交叉連接形成肉眼可見的凝集塊。鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)用于IgM抗體的檢出、鑒定、鹽水配血試驗(yàn)以及用鹽水抗體鑒定的血型抗原，如ABO、MN、P等血型系統(tǒng)的抗原。在鹽水介質(zhì)中，凝集是IgM抗體的行為。當(dāng)抗A、抗B的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)2.低離子聚凝胺試驗(yàn)Poly是一種帶高價(jià)陽離子的多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞之間距離減少，能引起正常紅細(xì)胞可逆行的非

19、特異性凝集。如果是抗體致敏的紅細(xì)胞被聚凝胺，則凝集不可逆。 3.酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)v 紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電菏，是紅細(xì)胞互相v 排斥的原因。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)v 胞表面的負(fù)電菏。Zata電勢(shì)減少，紅細(xì)胞的間距縮短，v 抗體分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。酶法能顯著v 增強(qiáng)Rh和Kidd系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)，但蛋白酶能破壞M、N、v S、s、Fya和Fyb抗原，酶法不適應(yīng)這些抗原的檢測(cè)。常用的v 酶有菠蘿酶、木瓜酶、無花果酶等。酶的濃度為0.5%。酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)方法酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn)方法一期一期酶法酶法 也稱直接法，菠蘿酶和木瓜酶

20、適用于一期法。操作時(shí)在已標(biāo)記好的試管中加入100ul的血清和50ul的紅細(xì)胞懸液，再加50ul的酶溶液，37孵育15分鐘，1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，輕搖后觀察結(jié)果二期二期酶法酶法 也稱間接法，木瓜酶和無花果酶適用于二期法。二期分兩步，第一步是酶處理紅細(xì)胞：在1份洗滌的壓積紅細(xì)胞中加兩份木瓜酶溶液，37孵育30分鐘，用大量的Ph7。4的PBS洗滌3次，用生理鹽水配成5%的懸液備用。第二步是在已標(biāo)記好的試管中加受檢血清100ul ,再加50ul酶處理過的紅細(xì)胞懸液，37孵育15-30分鐘觀察結(jié)果，凝集和溶血皆屬于陽性反應(yīng)。4.抗人球蛋白抗人球蛋白v AGT試驗(yàn)又稱Coombs試驗(yàn),是檢查IgG抗體的最有效的方法.抗球蛋白血清除了可測(cè)定紅細(xì)胞上的IgG抗體外,還可以測(cè)定IgM和IgA,也可以測(cè)補(bǔ)體組分(C3、C4).AGT包括直接抗人球試驗(yàn)和間接抗人球試驗(yàn).v 直接抗人球試驗(yàn)試驗(yàn)是檢查體內(nèi)致敏紅細(xì)胞的一種方法,用于檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏,如新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng) 、自身免疫性溶血性貧血.v 間接抗人球蛋白試驗(yàn)是一種檢測(cè)血清中不完全抗體的方法,常用于血型鑒定、抗體的檢出和鑒定、輸血前交叉配血試驗(yàn)等.5.微柱凝膠法微柱凝膠法v 微柱凝膠法v 利用分子篩原理主管主管次管