大腸桿菌的培養(yǎng)和分離學(xué)習(xí)教案

1、會計學(xué)1大腸桿菌大腸桿菌(d chn n jn)的培養(yǎng)和分的培養(yǎng)和分離離第一頁，共18頁。 單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼(ruyn)可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體（種群） 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)第1頁/共17頁第二頁，共18頁。第2頁/共17頁第三頁，共18頁。問題1：用什么(shn me)培養(yǎng)大腸桿菌？ 培養(yǎng)基。 按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求(xqi)，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。凝固劑瓊脂擴(kuò)大(kud)培養(yǎng)，工業(yè)生產(chǎn)分離純化，鑒定菌種，計數(shù)，保藏選擇培養(yǎng)基鑒定培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基第3頁/共17頁第四頁，共18頁。成分成分作用作用主要來源主要來源

2、碳源碳源主要作能源物質(zhì)主要作能源物質(zhì)無機(jī)碳無機(jī)碳(CO2)或有機(jī)碳或有機(jī)碳(糖類糖類)氮源氮源合成含合成含N類化合物類化合物N2，NH3，銨，硝酸鹽，銨，硝酸鹽尿素，牛肉膏，蛋白胨尿素，牛肉膏，蛋白胨無機(jī)鹽無機(jī)鹽調(diào)節(jié)滲透壓等調(diào)節(jié)滲透壓等水水生長因子生長因子調(diào)節(jié)促生長調(diào)節(jié)促生長維生素，維生素，Aa，堿基等，堿基等細(xì)菌(xjn)中性偏堿，霉菌中性偏酸。 如鑒定分解尿素的細(xì)菌，在培養(yǎng)基中添加酚紅，產(chǎn)生(chnshng)紅色反應(yīng)。LB液體(yt)培養(yǎng)基與LB固體培養(yǎng)基。 第4頁/共17頁第五頁，共18頁。加入青霉素的培養(yǎng)基: 分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽(shyn)的培養(yǎng)基: 分離金黃色葡萄球

3、菌 不加氮源的無氮培養(yǎng)基: 分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基: 分離自養(yǎng)型微生物第5頁/共17頁第六頁，共18頁。問題2：在培養(yǎng)過程(guchng)中如何進(jìn)行維持無菌狀態(tài)？ 消毒(xio d)VS滅菌 芽孢為細(xì)菌的休眠(ximin)體，對不良環(huán)境有很強(qiáng)耐受性 較為溫和的方法，如酒精 強(qiáng)烈，完全無菌 滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中 最普通也是最重要的技術(shù)。第6頁/共17頁第七頁，共18頁。滅菌消毒技術(shù)(jsh)大匯總 1、高壓蒸汽(zhn q)滅菌法 1kg/cm2、121 下維持(wich)15min. 2、90 下維持30min. 防止溫度過高，葡萄糖分解碳化 。 2、灼燒滅菌法 接種環(huán)

4、、接種針 玻璃刮刀 第7頁/共17頁第八頁，共18頁。3、干熱(n r)滅菌法 160-170 下加熱(ji r)1-2h。4、G6玻璃紗漏斗(ludu)過濾法 5、其他 三角瓶用封口膜、超凈臺操作（含紫外燈、過濾風(fēng)） 在接種時要速度快 第8頁/共17頁第九頁，共18頁。3、如何分離(fnl)大腸桿菌 劃線(hu xin)分離法 （平板(pngbn)劃線分離法） 培養(yǎng)皿倒置劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的 單菌落第9頁/共17頁第十頁，共18頁。第10頁/共17頁第十一頁，共18頁。涂布分離法 （稀釋(xsh)）1、玻璃刮刀(u do)放在酒精溶液中待用 2、取出時要經(jīng)過(jnggu)灼燒 3、一般要稀

5、釋菌液進(jìn)行培養(yǎng) 稀釋10-510-7倍，取不同濃度的稀釋液第11頁/共17頁第十二頁，共18頁。4、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離(fnl)的過程 溶解(rngji) 計算(j sun)稱量 調(diào)pH 分裝 加塞，包扎 滅菌 二倒平板、制斜面三 大腸桿菌的培養(yǎng)四 大腸桿菌的分離劃線分離法（或涂布分離法）使所需細(xì)菌大量繁殖 獲得單菌落，純化菌株 五 斜面接種培養(yǎng)目的菌株的純培養(yǎng)和菌種保存一 配制LB培養(yǎng)基,并滅菌 第12頁/共17頁第十三頁，共18頁。菌種管接種環(huán)（針）接種三角瓶（液體培養(yǎng)基）接種在固體培養(yǎng)基中 第13頁/共17頁第十四頁，共18頁。實驗(shyn)2：分離以尿素為氮源的微生物 1.如何(r

6、h)設(shè)計對照？ 2.如何(rh)把液體培養(yǎng)基配置成固體培養(yǎng)基？ 3.如何完成菌液稀釋？ 用什么液體來稀釋菌液？ 4.用什么方法來分離這種微生物？ 5.該實驗簡單的設(shè)計思路是什么？ 第14頁/共17頁第十五頁，共18頁。例1、某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察與計數(shù)(j sh)。請回答與此實驗相關(guān)的問題。（1）培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了 和 。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是 和 。（2）對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是 。（3）為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板(pngbn)置于

7、 中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37。要使該實驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板(pngbn)上接種 作為對照進(jìn)行實驗。（4）培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落(jnlu)，這說明湖水樣品中有 種細(xì)菌。一般說來，菌落(jnlu)總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越 （5）如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐 細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為 。第15頁/共17頁第十六頁，共18頁。KHKH2 2POPO4 41.4 g1.4 gNaNa2 2HPOHPO4 42.1 g2.1 gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2 g0.2 g葡萄糖葡萄糖10 g10 g尿素尿素1 g1

8、 g瓊脂瓊脂15 g15 g將上述物質(zhì)溶解后，用將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到蒸餾水定容到100 mL100 mL（1）此培養(yǎng)基能否用于植物組織培養(yǎng)？ （2）培養(yǎng)基中加入尿素的目的是 篩選(shixun) ，這種培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。（3）“目的菌”生長(shngzhng)所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中 的 和 ，實驗需要振蕩培養(yǎng)，原因是 。 （4）轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時，常采用 的方法接種，獲得(hud)單菌落后繼續(xù)篩選。 （5）下列材料或用具：培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿，玻棒、試管、錐形瓶和吸管，實驗操作者的雙手。其中需要滅菌的是： ；需要消毒的是： 。 （6）實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行 ,處理后，才能倒掉。 第16頁/共17頁第十七頁，共18頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)會計學(xué)。單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體（種群）。按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。接