基因工程操作程序?qū)W習(xí)教案

1、會計學(xué)1基因工程基因工程(jyn gngchng)操作程序操作程序第一頁，共42頁。補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因(jyn)(jyn)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)非編碼非編碼(bin m)(bin m)區(qū)區(qū)非編碼非編碼(bin m)(bin m)區(qū)區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動子啟動子終止子終止子 RNA RNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn)，并與聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn)，并與其結(jié)合。其結(jié)合。 轉(zhuǎn)錄開始后，轉(zhuǎn)錄開始后，RNARNA聚合酶沿聚合酶沿DNADNA分子移動，并以分子移動，并以DNADNA分子的一條鏈為模板合成

2、分子的一條鏈為模板合成RNARNA。 轉(zhuǎn)錄完畢后，轉(zhuǎn)錄完畢后，RNARNA鏈釋放出來，緊接著鏈釋放出來，緊接著RNARNA聚合聚合酶也從酶也從DNADNA模板鏈上脫落下來。模板鏈上脫落下來。第1頁/共41頁第二頁，共42頁。不能轉(zhuǎn)錄不能轉(zhuǎn)錄(zhun l)(zhun l)為信使為信使RNARNA，不能，不能 編碼蛋白質(zhì)。編碼蛋白質(zhì)。：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)(xingyng)(xingyng)的信的信使使RNARNA，能，能 編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì) 編碼編碼(bin (bin m)m)區(qū)區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)原核原核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核 苷酸序列，

3、在該序列中，苷酸序列，在該序列中， 最重要的是位于編碼區(qū)上最重要的是位于編碼區(qū)上 游的游的RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。啟動子啟動子第2頁/共41頁第三頁，共42頁。補(bǔ)：真核細(xì)胞的基因補(bǔ)：真核細(xì)胞的基因(jyn)(jyn)結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)編碼編碼(bin (bin m)m)區(qū)區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合結(jié)合(jih)(jih)位點(diǎn)位點(diǎn)內(nèi)含子內(nèi)含子 外顯子外顯子 啟動子啟動子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 啟動子啟動子終止子終止子第3頁/共4

4、1頁第四頁，共42頁。補(bǔ)：真核細(xì)胞的基因補(bǔ)：真核細(xì)胞的基因(jyn)(jyn)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)編碼編碼(bin (bin m)m)區(qū)區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合結(jié)合(jih)(jih)位點(diǎn)位點(diǎn)內(nèi)含子內(nèi)含子 外顯子外顯子 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子子啟動子啟動子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 內(nèi)含子：內(nèi)含子： 外顯子：外顯子： 第4頁/共41頁第五頁，共42頁。第5頁/共41頁第六頁，共42頁。真核真核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因(jy(jyn)n)結(jié)

5、構(gòu)結(jié)構(gòu)編碼編碼(bin (bin m)m)區(qū)區(qū)非編碼非編碼(bin m)(bin m)區(qū)區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用的核苷酸序列，：有調(diào)控作用的核苷酸序列， 包括位于編碼區(qū)上游的包括位于編碼區(qū)上游的RNARNA 聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。非編碼序列：非編碼序列：包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子第6頁/共41頁第七頁，共42頁。原核細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)不同點(diǎn)編碼區(qū)是編碼區(qū)是_的的編碼區(qū)是間隔的、編碼區(qū)是間隔的、_的的相同點(diǎn)相同點(diǎn)都由能夠編碼蛋白質(zhì)的都由能夠編碼蛋白質(zhì)的_和具和

6、具有調(diào)控作用的有調(diào)控作用的_區(qū)組成的區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)(jigu)(jigu)比較比較思思考考(s(skkoo) )編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)(jigu)(jigu)一樣長一樣長嗎？嗎？連續(xù)連續(xù)不連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼非編碼第7頁/共41頁第八頁，共42頁?；蚬こ袒蚬こ?jyn gngchng)(jyn gngchng)基本操作的四個基本操作的四個步驟步驟1 1、目的基因、目的基因(jyn)(jyn)的獲取的獲取2 2、基因、基因(jyn)(jyn)表達(dá)載體

7、的構(gòu)建表達(dá)載體的構(gòu)建3 3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4 4、目的基因的檢測與鑒定、目的基因的檢測與鑒定第8頁/共41頁第九頁，共42頁。一、目的一、目的(md)(md)基因的基因的獲取獲取1 1、目的、目的(md)(md)基因主要是指基因主要是指_編碼編碼(bin m)(bin m)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因基因請舉出三個以上的例子請舉出三個以上的例子2 2、獲取目的基因的常用方法有哪些、獲取目的基因的常用方法有哪些? ?（1 1）從基因文庫中獲取）從基因文庫中獲?。? 2）利用）利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增（3 3）人工合成）人工合成請閱讀請閱讀P9P9第一和二兩

8、段第一和二兩段第9頁/共41頁第十頁，共42頁?；蛭膸旎蛭膸?基因組文庫基因組文庫部分基因文庫部分基因文庫（如（如:cDNA文庫）文庫）1.1.基因文庫基因文庫第10頁/共41頁第十一頁，共42頁?；蚪M基因組文庫文庫(wnk)與部分與部分基因文基因文庫庫(wnk)的關(guān)系的關(guān)系第11頁/共41頁第十二頁，共42頁。2.2.基因文庫的構(gòu)建基因文庫的構(gòu)建(u jin)(u jin)方法方法鳥槍法：鳥槍法：供體細(xì)胞中的供體細(xì)胞中的DNADNA許多許多(xdu)DNA(xdu)DNA片片段段運(yùn)載運(yùn)載(ynzi)(ynzi)體體限制酶限制酶與載體連接與載體連接載入載入受體細(xì)胞受體細(xì)胞產(chǎn)生特定性狀產(chǎn)生

9、特定性狀導(dǎo)入導(dǎo)入外源外源DNADNA擴(kuò)增擴(kuò)增目的基因目的基因分離分離( (直接分離法直接分離法) )( (一一) )從基因文庫中獲取目的基因從基因文庫中獲取目的基因第12頁/共41頁第十三頁，共42頁。反轉(zhuǎn)錄法：反轉(zhuǎn)錄法：cDNA文庫文庫 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使使(xnsh)RNA為模板，為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成，然后在酶的作用下合成雙鏈雙鏈DNA，從而獲得所需，從而獲得所需的基因。的基因。目的目的(md)(md)基因的基因的mRNAmRNA雜交雜交(zjio)(zjio)雙鏈雙鏈( (單鏈單鏈RNA/RNA/單鏈單鏈DNA)

10、DNA)單鏈單鏈DNADNA反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶核酸酶核酸酶H H2.2.基因文庫的構(gòu)建方法基因文庫的構(gòu)建方法DNADNA聚合酶聚合酶雙鏈雙鏈DNA DNA （cDNAcDNA）( (目的基因目的基因) )第13頁/共41頁第十四頁，共42頁。上述上述(shngsh)(shngsh)三種目的基因提取的方法有何優(yōu)三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？缺點(diǎn)？優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)鳥槍法鳥槍法反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知氨基根據(jù)已知氨基酸合成酸合成DNADNA法法操作簡操作簡便便(jinbi(jinbin)n)廣泛廣泛使用使用工作量大，盲目工作量大，盲目(mngm)(mngm)，分離出來，分離出來的有時并非一個基因的

11、有時并非一個基因?qū)Ｒ恍詮?qiáng)專一性強(qiáng)操作過程麻煩，操作過程麻煩，mRNAmRNA很不穩(wěn)定，要求的技很不穩(wěn)定，要求的技術(shù)條件較高術(shù)條件較高專一性最強(qiáng)專一性最強(qiáng)僅限于合成核苷酸僅限于合成核苷酸對較少的簡單基因?qū)^少的簡單基因第14頁/共41頁第十五頁，共42頁。( (二二) )利用利用(lyng)PCR(lyng)PCR技術(shù)擴(kuò)增目技術(shù)擴(kuò)增目的基因的基因第15頁/共41頁第十六頁，共42頁。 概念：概念：PCRPCR全稱為全稱為(chn (chn wi)_wi)_，是一項(xiàng)，是一項(xiàng) 在生物在生物_復(fù)制復(fù)制_的核酸合成技術(shù)的核酸合成技術(shù) 條件條件(tiojin)(tiojin)：_、 _ _、_ _ 、_.

12、_.原理原理(yunl)(yunl)：_方式：方式：以以_方式擴(kuò)增，即方式擴(kuò)增，即_（n n為擴(kuò)增循為擴(kuò)增循 環(huán)的次數(shù)）環(huán)的次數(shù)）結(jié)果：結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外體外特定特定DNADNA片段片段DNADNA復(fù)制復(fù)制已知基因的核苷酸序列已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸一對引物一對引物TaqTaq酶酶指數(shù)指數(shù)2 2n n使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴(kuò)增使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴(kuò)增( (二二) )利用利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因第16頁/共41頁第十七頁，共42頁。過程過程(guchng)(guchng)：a a、DNADNA變性（

13、變性（90-9690-96）：雙鏈）：雙鏈DNADNA模板模板(mbn)(mbn) 在熱作用下，在熱作用下，_斷裂，形成斷裂，形成_b b、退火（復(fù)性、退火（復(fù)性 25-65 25-65）：系統(tǒng)溫度降低，引）：系統(tǒng)溫度降低，引 物物與與DNADNA模板結(jié)合模板結(jié)合(jih)(jih)，形成局部，形成局部_。 c c、延伸、延伸（70-7570-75）：在）：在TaqTaq酶的作用下，從酶的作用下，從 引物的引物的55端端33端端延伸，合成與模板互補(bǔ)延伸，合成與模板互補(bǔ) 的的_。 氫鍵氫鍵單鏈單鏈DNADNA雙鏈雙鏈DNADNA鏈鏈第17頁/共41頁第十八頁，共42頁。第18頁/共41頁第十九頁

14、，共42頁。（3 3）人工合成）人工合成(rn (rn n h chn)n h chn)一、目的基因一、目的基因(jyn)(jyn)的獲取的獲取 條件：如基因比較條件：如基因比較(bji(bji o)o)小，小， 又已知；又已知； 方法：可借助方法：可借助 用化學(xué)方法直接人用化學(xué)方法直接人 工合成。工合成。核苷酸序列核苷酸序列DNADNA合成儀合成儀第19頁/共41頁第二十頁，共42頁。根據(jù)根據(jù)(gnj)已知的氨基酸序列合成已知的氨基酸序列合成DNA法法 ： 根據(jù)已知蛋白質(zhì)根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測的氨基酸序列，推測(tuc)(tuc)出相應(yīng)的信使出相應(yīng)的信使RNARNA序列，然后按照堿

15、序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對原則，推基互補(bǔ)配對原則，推測測(tuc)(tuc)出它的結(jié)構(gòu)出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成單核苷酸為原料合成目的基因。目的基因。蛋白質(zhì)的氨基酸序列蛋白質(zhì)的氨基酸序列(xli)(xli)mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測推測推測推測目的基因目的基因化學(xué)合成化學(xué)合成2.2.基因文庫的構(gòu)建方法基因文庫的構(gòu)建方法第20頁/共41頁第二十一頁，共42頁。1.1.用一定的用一定的_切割切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切 口，露出口，露出_。2.2.用

16、用_切斷切斷(qi dun)(qi dun)目目 的基因，使其產(chǎn)生的基因，使其產(chǎn)生_ _ _。( (二二) )基因表達(dá)載體基因表達(dá)載體(zit)(zit)的構(gòu)建的構(gòu)建 核心核心(hxn)3.3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_ _處，處， 再加入適量再加入適量_，形成了一個重組，形成了一個重組 DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一種限制酶同一種限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA連接酶連接酶相同相同第21頁/共41頁第二十二頁，共42頁。質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA分子分子(fnz)(fnz)限制限制(xinzh)(xin

17、zh)酶酶處理處理一個切口一個切口(qi ku)(qi ku)兩個黏性末端兩個黏性末端兩個切口兩個切口獲得目的基因獲得目的基因DNADNA連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒） 核心核心同一種同一種( (二二) )基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建4.4.過程過程: :第22頁/共41頁第二十三頁，共42頁。5.5.基因基因(jyn)(jyn)表達(dá)載體的組表達(dá)載體的組成：成：復(fù)制原點(diǎn)復(fù)制原點(diǎn)+ +目的目的(md)(md)基因基因+ +啟動子啟動子+ +終止子終止子+ +標(biāo)記標(biāo)記基因基因它們有什么它們有什么(shn me)作用？作用？第23頁/共41頁第二十四頁，共4

18、2頁。( (三三) )將目的將目的(md)(md)基因?qū)胧荏w細(xì)胞基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化(zhunhu) (zhunhu) 目的基因進(jìn)入目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且內(nèi)，并且(bngqi)(bngqi)在在 受體細(xì)胞內(nèi)維持受體細(xì)胞內(nèi)維持_和和_的過程的過程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)第24頁/共41頁第二十五頁，共42頁。( (三三) )將目的將目的(md)(md)基因?qū)胧荏w細(xì)胞基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化(zhunhu) (zhunhu) 方法方法(fngf)(fngf)將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胫参锛?xì)胞植物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)雱游锛?xì)胞動物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胛⑸锛?xì)胞

19、微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞目的基因進(jìn)入目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持受體細(xì)胞內(nèi)維持_和和_的過程的過程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)第25頁/共41頁第二十六頁，共42頁。1 1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞(xbo)(xbo)的方法：農(nóng)桿的方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法菌轉(zhuǎn)化法（1 1）農(nóng)桿菌介紹）農(nóng)桿菌介紹（2 2）原理及適用范圍）原理及適用范圍( (三三) )將目的將目的(md)(md)基因?qū)胧荏w細(xì)胞基因?qū)胧荏w細(xì)胞第26頁/共41頁第二十七頁，共42頁。( (三三) )

20、將目的將目的(md)(md)基因?qū)胧荏w細(xì)胞基因?qū)胧荏w細(xì)胞第27頁/共41頁第二十八頁，共42頁。第28頁/共41頁第二十九頁，共42頁。( (四四) )目的目的(md)(md)基因的檢測與鑒基因的檢測與鑒定定檢查是否檢查是否(sh fu)成功成功檢測檢測(jin (jin c)c)檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因方法方法DNADNA分子雜交分子雜交第29頁/共41頁第三十頁，共42頁。第30頁/共41頁第三十一頁，共42頁。( (四四) )目的基因的檢測目的基因的檢測(jin c)(jin c)與鑒定與鑒定檢查是否檢查是否

21、(sh fu)成功成功檢測檢測(jin (jin c)c)檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法方法方法方法方法方法DNADNA分子雜交分子雜交分子雜交分子雜交（注意與上不同之處）（注意與上不同之處）抗原抗體雜交抗原抗體雜交第31頁/共41頁第三十二頁，共42頁。第32頁/共41頁第三十三頁，共42頁。( (四四) )目的基因的檢測目的基因的檢測(jin c)(jin c)與鑒與鑒定定檢查檢查(jinch)是否

22、成功是否成功檢測檢測(jin (jin c)c)鑒定鑒定檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子雜交分子雜交分子雜交分子雜交（注意與上不同之處）（注意與上不同之處）抗原抗體雜交抗原抗體雜交第33頁/共41頁第三十四頁，共42頁。DNADNA分子分子(fnz)(fnz)雜交示雜交示意圖意圖 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物

23、的采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNADNA分子分子(fnz)(fnz)的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補(bǔ)的的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會結(jié)合在一起，堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。是兩條游離的單鏈。 P15P15思考思考(sko)(sko)與探究與探究第34頁/共41頁第三十五頁，共42頁。1）以下說法正確的是）以下說法正確的是 （ ） A、所有的限制酶只能識別一種特定的核苷酸、所有的限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列序

24、列(xli) B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體 C、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多個、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多個限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接 D、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來C C第35頁/共41頁第三十六頁，共42頁。2）不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由）不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由(lyu)是是 A、能復(fù)制、能復(fù)制 （ ） B、有多個限制酶切點(diǎn)、有多個限制酶切點(diǎn) C、具有標(biāo)記基因、具有標(biāo)記基因 D、它是環(huán)狀、它是環(huán)狀DNA第36頁/共41頁第三十七頁，共42頁。3）有關(guān)基因工程）有關(guān)基因工程(jyn gngchng)的敘述中，錯誤的敘述中，錯誤的是（的是（ ） A、DNA連接酶將黏性末端的堿基