土壤微生物的分離純化與鑒定

1、微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)上-土壤微生物的分離純化與鑒定組別：*指導(dǎo)老師：*目錄摘要利用分離純化微生物的基本操作技術(shù)以及選擇培養(yǎng)基對(duì)土壤中的微生物進(jìn)行分離與純化，得到能夠產(chǎn)生果膠水解酶的細(xì)菌以及能夠分解幾丁質(zhì)的霉菌。根據(jù)菌落形態(tài)觀察，革蘭氏染色結(jié)果，芽抱有無(wú)及位置，運(yùn)動(dòng)性以及一系列的生理生化試驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)照種屬特征初步鑒定分離純化的微生物所屬的類(lèi)群。關(guān)鍵詞土壤微生物、細(xì)菌、果膠、霉菌、幾丁質(zhì)、劃線分離、純培養(yǎng)前言在自然條件下，微生物常常在各種生態(tài)系統(tǒng)中群居雜聚。群落是不同種類(lèi)微物的混和體。為了生產(chǎn)和科研的需要，人們往往需要從自然界混雜的微生物群體中分離出具有特殊功能的純種微生物；或重新分離被其他微生物污染或

2、因自發(fā)突變而喪失原有優(yōu)良性狀的菌株；或通過(guò)誘變及遺傳改造后選出優(yōu)良性狀的突變株及重組株。這種獲得單一菌株純培養(yǎng)的方法稱(chēng)為微生物的分離純化技術(shù)。純培養(yǎng)是指一株菌種或一個(gè)培養(yǎng)物中所有的細(xì)胞或抱子都是由一個(gè)細(xì)胞分裂、繁殖而產(chǎn)生的后代。分離純化技術(shù)主要由采集樣品、富集培養(yǎng)、純種分離和性能測(cè)定等幾個(gè)基本環(huán)節(jié)組成。實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .學(xué)習(xí)利用選擇培養(yǎng)基從土壤中分離能夠產(chǎn)生特殊水解酶的細(xì)菌以及霉菌的方法；2 .學(xué)習(xí)運(yùn)用劃線分離法純化分得的細(xì)菌以及真菌的方法；3 .學(xué)習(xí)測(cè)定土壤中細(xì)菌數(shù)目，種類(lèi)的方法；4 .根據(jù)菌落形態(tài)，染色結(jié)果，運(yùn)動(dòng)性以及生理生化試驗(yàn)鑒定未知細(xì)菌；小室培養(yǎng)法觀察鑒定未知真菌。實(shí)驗(yàn)原理一、經(jīng)典分類(lèi)鑒

3、定方法以上便是在微生物鑒定過(guò)程中的經(jīng)典思路及流程，因此我們可以針對(duì)以上各項(xiàng)指標(biāo)設(shè)計(jì)一系列試驗(yàn)包括形態(tài)學(xué)觀察，染色，生理生化試驗(yàn)，免疫學(xué)試驗(yàn)等對(duì)其進(jìn)行逐步定位。二、現(xiàn)代分類(lèi)鑒定方法1 .微生物遺傳型的鑒定(1) DNA堿基比例的測(cè)定(G+Cmol%Z下為該方法的關(guān)鍵因素：* 解鏈溫度法(Tmfi)* (G+C)mol%值只能做否定判斷；* (G+Cmol%fi差別5,屬不同的種；差別10,屬不同的屬。(2)核酸分子雜交法*DNA-DNA分子雜交原理：DNA分子解鏈的可逆性和堿基配對(duì)的專(zhuān)一性。結(jié)論：I DNA同源性60%(同種)II DNA同源性70%(同亞種)III DNA同源性6070%(不同

4、亞種)IV DNA同源性2060%(同屬)(3)16srRNA作為細(xì)菌進(jìn)化的計(jì)時(shí)器本次實(shí)驗(yàn)中由于實(shí)驗(yàn)性質(zhì)以及儀器試劑限制，主要以微生物形態(tài)鑒定以及生理生化指標(biāo)鑒定為主。實(shí)驗(yàn)整體思路：在確定取樣環(huán)境之后，對(duì)微生物原樣進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)a(chǎn)生合適的濃度在選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行涂板用于微生物的選擇與計(jì)數(shù)；通過(guò)檢測(cè)得到有特定功能的細(xì)菌以及霉菌進(jìn)行菌種的分離純化，用平板劃線法多次劃線得到純種；對(duì)得到的純種細(xì)菌染色并鏡檢，利用形態(tài)學(xué)方法以及運(yùn)動(dòng)性對(duì)微生物做一粗略的定位；根據(jù)鏡檢設(shè)計(jì)相關(guān)生理生化試驗(yàn)作進(jìn)一步定位；運(yùn)用小室培養(yǎng)法觀察霉菌形態(tài)并對(duì)其進(jìn)行鑒定；根據(jù)以上獲得的信息確定微生物類(lèi)群并加以定位。實(shí)驗(yàn)儀器及材料1 .土

5、樣：18號(hào)土樣2 .試劑及培養(yǎng)基a）培養(yǎng)基：果膠酶篩選培養(yǎng)基；幾丁質(zhì)酶真菌篩選培養(yǎng)基；果膠酶劃線分離培養(yǎng)基;幾丁質(zhì)酶劃線培養(yǎng)基；細(xì)菌半固體培養(yǎng)基；淀粉培養(yǎng)基；葡萄糖酵解培養(yǎng)基；乳糖酵解培養(yǎng)基；蛋白陳水培養(yǎng)基b）試劑：草酸錢(qián)結(jié)晶紫染液、番紅復(fù)染液等各種染料以及盧戈氏碘液、95%乙醇、5%1雀綠水溶液、無(wú)菌水等3 .儀器錐形瓶（500mL<2;300mLX2;100mL<3）、培養(yǎng)皿（20套）、試管（20支）、移液管（3支）、燒杯、玻璃棒、載玻片、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、涂布棒、U型管、德漢氏小管、酒精燈、漏斗、接種環(huán)、濾紙、棉塞、牛皮紙、無(wú)菌操作臺(tái)、滅菌鍋、紗布等實(shí)驗(yàn)步驟A.細(xì)菌的篩選，

6、分離純化及鑒定1 .細(xì)菌的篩選a）土樣處理i. 配制生理鹽水：在燒杯中配置的生理鹽水，用移液管各移取9ml于五支潔凈試管，再移取90ml配置好的生理鹽水于三角燒瓶，并放入少許玻璃珠，包好滅菌；ii. 加土樣：冷卻后準(zhǔn)確稱(chēng)取10g土樣放入盛有90ml無(wú)菌生理鹽水并帶有少許玻璃珠的三角燒瓶中，充分震蕩搖勻，然后放在30C恒溫培養(yǎng)箱中靜置15min。b）果膠酶菌種篩選i. 梯度稀釋?zhuān)河靡恢o(wú)菌吸管吸取1ml土壤懸液加入到盛有9ml無(wú)菌水的試管中充分混勻，此為10-1稀釋液，以此類(lèi)推制成10-2、10-3兩種稀釋度的土壤溶液（如下圖）；ii. 涂布：配制果膠酶篩選培養(yǎng)基，110度滅菌20-30分鐘，冷

7、卻后倒平板在培養(yǎng)皿蓋周邊用記號(hào)筆做好標(biāo)記，分別寫(xiě)上10-1、10-3兩種稀釋度字樣，每稀釋度標(biāo)記三皿，然后用無(wú)菌吸管分別由10-3、10-1兩管土壤稀釋液中吸取適量對(duì)好放入已寫(xiě)好稀釋度的平板中央位置，每皿準(zhǔn)確放入，用無(wú)菌玻璃棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，其方法是將菌液先沿一條直線輕輕地來(lái)回推動(dòng)，使之均勻分布，然后改變方向90度沿另一垂直線來(lái)回推動(dòng)，平板內(nèi)邊緣處改變方向用涂布棒再涂布幾次；iii. 培養(yǎng)：將平板倒置于30。叵溫箱中培養(yǎng)1-2天；iv. 果膠酶透明圈平板檢測(cè)：取10-1涂布平皿，用的剛果紅染色15-20min后，倒掉剛果紅，用1mol/L的NaCl脫色幾分鐘至觀察到透明圈，則說(shuō)明水

8、解圈內(nèi)的菌有水解果膠的能力；v. 菌落描述：取此菌進(jìn)行菌落形態(tài)描述，就菌落的大?。ù蟆⒅?，?。?，顏色（白，黃，粉紅等），干濕（干、濕），邊緣（整齊，不整齊），表面（光滑，粗糙，有無(wú)突起等）分別進(jìn)行闡述并詳細(xì)記錄；2.細(xì)菌的分離純化a）劃線分離：制備果膠酶劃線培養(yǎng)基，滅菌后倒平板，挑取具有水解圈的菌種，第一次劃線分離培養(yǎng)1-2天后取分離所得單菌落再進(jìn)行第二次劃線分離，劃線分離的具體方法是：先在平皿上劃定區(qū)域，然后將接種針在火焰上進(jìn)行滅菌操作，取含菌種的培養(yǎng)皿，在火焰上方（注意：不能離火焰太近）打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，先拿接種針在上蓋處劃線以降溫，然后用接種針輕挑所選菌落一到兩下，將平皿蓋上放好，再取剛剛冷

9、卻了的干凈平皿在1區(qū)進(jìn)行劃線接種操作。操作完畢后對(duì)接種針進(jìn)行滅菌操作，完成后在火焰上方打開(kāi)平皿蓋，將接種針冷卻后從1區(qū)引線到2區(qū)，再如圖所示劃線，劃完后引線到3區(qū)，同上進(jìn)行劃線，劃線完畢后蓋蓋平放；b）純種保藏：再配制一份普通細(xì)菌培養(yǎng)基，分裝試管后滅菌，制得斜面，將純種劃線接種在斜面上培養(yǎng)保存并進(jìn)行下一步的鑒定。3,細(xì)菌的基本形態(tài)及運(yùn)動(dòng)性鑒定a）純種果膠酶水解能力的測(cè)定配制果膠酶篩選培養(yǎng)基，110度滅菌20-30分鐘，冷卻后倒平板在培養(yǎng)皿蓋周邊用記號(hào)筆做好標(biāo)記，將分離純化的細(xì)菌點(diǎn)種于平板上（注意：點(diǎn)種的量不宜過(guò)多，以34個(gè)為宜），在30c培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12天，取培養(yǎng)后的平皿用%的剛果紅染色15-

10、20min后，倒掉剛果紅，用1mol/L的NaCl脫色幾分鐘至觀察到透明圈，測(cè)量并記錄透明圈的大小b）簡(jiǎn)單染色步驟i,涂片取一塊載玻片，在上邊用膠頭滴管加半滴無(wú)菌水，用接種環(huán)無(wú)菌操作將沾有菌的接種環(huán)置于載玻片上的無(wú)菌水種涂抹，待看到微弱的渾濁即可；（注意取菌不要太多）ii .干燥與固定涂菌面朝上，通過(guò)火焰以干燥并固定菌物，固定過(guò)程應(yīng)使載玻片通過(guò)火焰2-3次，注意溫度的控制，過(guò)熱的溫度會(huì)將細(xì)菌殺死，溫度以手背感覺(jué)微微發(fā)燙為標(biāo)準(zhǔn)；iii .染色將載玻片平放于載波片支架上，滴加結(jié)晶紫染液覆蓋涂菌部位即可，染色iv,水洗傾去染液，將載玻片的涂菌面朝下，自來(lái)水沖洗，水流不宜太急、太大，至洗出水無(wú)色為止；

11、v.干燥用吸水紙吸去多余水分后自然干燥；vi.鏡檢將制備好的樣片置于顯微鏡下進(jìn)行觀察，先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂螅瑢⒏弑剁R轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油，用油鏡觀察細(xì)菌的形態(tài)。c）革蘭氏染色步驟i.涂片先在載玻片一側(cè)用記號(hào)筆標(biāo)記間隔的四個(gè)區(qū)域，在另一側(cè)四個(gè)區(qū)域的位置分別滴加半滴無(wú)菌水。分別取四種活躍生長(zhǎng)期菌種（大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，枯草桿菌和一種自選菌）按常規(guī)方法涂片（不宜過(guò)厚），用酒精燈按照簡(jiǎn)單染色中所述干燥和固定的方法對(duì)四種菌進(jìn)行干燥和固定。ii. 初染滴加草酸錢(qián)結(jié)晶紫染液使之覆蓋涂菌部位，染色后水洗；iii. 媒染先用盧戈氏碘液沖去殘留水跡，再用碘液覆蓋1min后水洗；iv.

12、脫色先用乙醇沖去水跡，然后用95%醇覆蓋脫去色素，脫色約30s,立即用水沖洗；v.復(fù)染先用番紅洗去水跡，然后滴加番紅復(fù)染后水洗；vi.鏡檢將制備好的樣片置于顯微鏡下進(jìn)行觀察，先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂?，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油，用油鏡觀察細(xì)菌。分別以大腸桿菌與金黃色葡萄球菌所染顏色作為對(duì)照，來(lái)判斷枯草桿菌以及另一種自選菌的染色結(jié)果。d）芽抱染色步驟i. 涂片，加熱干燥及固定在潔凈蓋玻片接近中部?jī)商幏謩e滴一滴無(wú)菌水，分別接種枯草芽抱桿菌及梭狀芽抱桿菌。然后按照常規(guī)方法加熱干燥及固定；ii. 孔雀綠加熱染色用木夾夾住載玻片,向載玻片上滴加5%1雀綠水溶液使之完全覆蓋涂菌部位，

13、然后在酒精燈上微微加熱（孔雀綠著色能力強(qiáng)，加熱可使較難染色的芽抱染成綠色，且再難洗脫）至染液冒蒸汽開(kāi)始計(jì)時(shí)并維持5min,注意加熱時(shí)應(yīng)以有蒸汽微微冒出為宜，過(guò)熱或加熱不足均會(huì)影響觀察效果，且加熱時(shí)在載玻片上隨時(shí)補(bǔ)加染液，切勿讓涂片干涸；iii.水洗水洗一定要等載玻片冷卻后進(jìn)行，否則可能導(dǎo)致載玻片的破裂。具體水洗按常規(guī)方法進(jìn)行；iv.復(fù)染用呢!紅水溶液復(fù)染2min；v.水洗并干燥按常規(guī)方法水洗后自然干燥；vi.鏡檢先在低倍鏡下尋找視野范圍，然后換用高倍鏡調(diào)焦，最后加香柏油在油鏡下仔細(xì)尋找兩種細(xì)菌以及其周?chē)騼?nèi)部染成綠色的芽抱。e）半固體穿刺法觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性i.配制培養(yǎng)基配制半固體牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)

14、基，分裝于4支試管內(nèi)，110度滅菌20-30分鐘，正立于燒杯中冷卻至室溫；ii.在無(wú)菌操作臺(tái)上右手握接種針，以針挑取菌苔.垂直刺入半固體瓊脂培養(yǎng)的中心直至接近（但勿觸及）試管底，然后循原路退出。如圖所示：iii. 接種完成后在30C條件下培養(yǎng)兩大觀察并判斷其運(yùn)動(dòng)性。4.細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)a）淀粉水解試驗(yàn)i. 培養(yǎng)基制備配制淀粉培養(yǎng)基，滅菌后將冷卻至50C左右，無(wú)菌操作制成平板；ii. 接種用記號(hào)筆將平板劃成四部分，將所鑒定的菌種在不同位置點(diǎn)種。（注：由于四種菌對(duì)淀粉的水解程度不同，為防止由于接種量過(guò)大導(dǎo)致四種菌對(duì)應(yīng)區(qū)域水解部位發(fā)生重疊，宜采用點(diǎn)種的方式，如下圖）。接種完成后貼好標(biāo)簽；iii.

15、培養(yǎng)將上述已接種的平板倒置于30c培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。b）葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)i. 培養(yǎng)基配制將配制好的葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基分裝于試管中同時(shí)向每只試管中加入一支德漢氏小管后放入滅菌鍋中進(jìn)行濕熱滅菌，冷卻至室溫。ii. 接種用記號(hào)筆在各試管上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱(chēng)和所接種的菌名。取盛有葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基的試管2支，接種鑒定菌，另一支作為對(duì)照。iii.培養(yǎng)將上述已接種的試管置于30c培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。c）乳糖發(fā)酵試驗(yàn)i. 培養(yǎng)基配制將配制好的乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基分裝于試管中同時(shí)向每只試管中加入一支德漢氏小管后放入滅菌鍋中進(jìn)行濕熱滅菌，冷卻至室溫。ii. 接種用記號(hào)筆在各試管上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱(chēng)和所接種的菌

16、名。取盛有乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基的試管2支，接種鑒定菌，另一支作為對(duì)照。iii. 培養(yǎng)將上述已接種的試管置于30c培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。d）呷咪試驗(yàn)i. 培養(yǎng)基的配制將配制好的蛋白陳水培養(yǎng)基分裝于試管中后放入滅菌鍋中進(jìn)行濕熱滅菌，冷卻至室溫。ii. 接種用記號(hào)筆在各試管上標(biāo)明所接種的菌名。取盛有蛋白陳水培養(yǎng)基的試管2支，接種鑒定的菌種。iii. 培養(yǎng)將上述已接種的試管置于30c培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。e）甲基紅試驗(yàn)i. 培養(yǎng)基的配制將配制好的蛋白陳水培養(yǎng)基分裝于試管中后放入滅菌鍋中進(jìn)行濕熱滅菌，冷卻至室溫。ii. 接種用記號(hào)筆在各試管上標(biāo)明所接種的菌名。取盛有蛋白陳水培養(yǎng)基的試管2支，接種鑒定的菌種。i

17、ii. 培養(yǎng)將上述已接種的試管置于30c培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。5.土壤中分解果膠細(xì)菌種類(lèi)和數(shù)目的測(cè)定及純化細(xì)菌菌屬鑒定取培養(yǎng)三天的菌液1000倍稀釋涂布平板3個(gè)，觀察不同形態(tài)菌落的數(shù)目以及總菌落數(shù)，并記錄，求3個(gè)平板的總菌數(shù)平均值來(lái)計(jì)算1g土壤中分解果膠的細(xì)菌數(shù)目。根據(jù)以上細(xì)菌的形態(tài)，革蘭氏染色結(jié)果，芽抱的位置，運(yùn)動(dòng)性以及生理生化試驗(yàn)結(jié)果查看伯杰手冊(cè)對(duì)純種細(xì)菌做出鑒定。B.霉菌的篩選，分離純化及鑒定1 .霉菌的篩選a）涂布配制幾丁質(zhì)酶篩選培養(yǎng)基，110度滅菌20-30分鐘，冷卻至不燙手,無(wú)菌操作加鏈霉素（1mL/1000mL倒平板在培養(yǎng)皿蓋周邊用記號(hào)筆做好標(biāo)記，分別寫(xiě)上100、10-2兩種稀釋

18、度字樣，每稀釋度標(biāo)記三皿，然后用無(wú)菌吸管分別由100、10-2兩管土壤稀釋液中吸取適量對(duì)好放入已寫(xiě)好稀釋度的平板中央位置，每皿準(zhǔn)確放入，用無(wú)菌玻璃棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，其方法是將菌液先沿一條直線輕輕地來(lái)回推動(dòng)，使之均勻分布，然后改變方向90度沿另一垂直線來(lái)回推動(dòng)，平板內(nèi)邊緣處改變方向用涂布棒再涂布幾次；b）培養(yǎng)將平板倒置于30。叵溫箱中培養(yǎng)2-3天；2 .霉菌的分離純化圖霉菌的劃線分離示意圖a）劃線分離：制備幾丁質(zhì)酶劃線培養(yǎng)基，滅菌后倒平板，挑取長(zhǎng)出的菌種，第一次劃線分離培養(yǎng)2-3天后取分離所得單菌落再進(jìn)行第二次劃線分離，劃線分離的具體方法是：先在平皿上劃定區(qū)域，然后將接種針在火焰上進(jìn)

19、行滅菌操作，取含菌種的培養(yǎng)皿，在火焰上方（注意：不能離火焰太近）打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，先拿接種針在上蓋處劃線以降溫，然后用接種針輕挑所選菌落一到兩下，將平皿蓋上放好，再取剛剛冷卻了的干凈平皿在1區(qū)進(jìn)行劃線接種操作。操作完畢后對(duì)接種針進(jìn)行滅菌操作，完成后在火焰上方打開(kāi)平皿蓋，將接種針冷卻后從1區(qū)引線到2區(qū)，再如圖所示劃線，劃算后引線到3區(qū)，同上進(jìn)行劃線，劃線完畢后蓋蓋平放；b）再配制一份PDA培養(yǎng)基，分裝試管后滅菌，制得斜面，將純種劃線接種在斜面上培養(yǎng)保存并進(jìn)行下一步的鑒定。3 .小室培養(yǎng)法鑒定霉菌a）滅菌準(zhǔn)備制作4個(gè)平皿，在每個(gè)平皿皿底鋪一張略小于皿底的圓濾紙片，再放一U形玻棒，具上放一潔凈載玻片和四

20、塊蓋玻片，蓋上皿蓋、再與1個(gè)空平皿一起用牛皮紙包好；在100mL錐形瓶中用甘油配制20%勺甘油，加塞包好；最后取10mL移液管兩支用牛皮紙包好。b）滅菌將上述用牛皮紙包好的儀器與試劑連同配好的PDA®養(yǎng)基一并放入滅菌鍋中110c滅菌30min（由于培養(yǎng)基中有葡萄糖，為防止由于高溫而使糖發(fā)生糊化而變質(zhì)，滅菌溫度不宜過(guò)高）。c）制作瓊脂薄片在無(wú)菌操作臺(tái)上分別取已滅菌并溶化冷卻至約50C的馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基67mL注入兩個(gè)滅菌空平皿中，使之凝固成薄層。在兩個(gè)凝固后的平板背部用記號(hào)筆畫(huà)下約1X1的方格，通過(guò)無(wú)菌操作，用解剖刀沿畫(huà)下的方格線將其切成方形的瓊脂塊。（注：解剖刀使用前應(yīng)先在酒精中浸泡

21、，然后在酒精燈上灼燒，冷卻后再進(jìn)行切割操作）d）接種在無(wú)菌操作臺(tái)上，先用銀子將載玻片放于U型玻璃管上，然后用解剖刀取一小塊兒瓊脂塊，置于載玻片上（注意：銀子與解剖刀每次使用前都應(yīng)先在酒精中浸泡，灼燒冷卻后再進(jìn)行下一步的操作），用接種環(huán)分別從斜面培養(yǎng)物上挑取很少量的鑒定菌的抱子，分別接種于培養(yǎng)小室中瓊脂塊的邊緣上，用無(wú)菌銀子將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上。最后用移液管在培養(yǎng)小室中的圓濾紙上加3ml滅菌的20%的甘油（用于保持平皿內(nèi)的濕度），蓋上皿蓋并貼標(biāo)簽，每一種菌接種兩個(gè)小室。e）恒溫培養(yǎng)將接種后的平皿正置于28c培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)34天。f）鏡檢在顯微鏡下直接觀察小室培養(yǎng)后的載玻片，用低倍鏡即可較為清晰的觀察到霉菌的菌絲體及抱子，根據(jù)真菌手冊(cè)對(duì)所得的菌進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果A.細(xì)菌部分倍稀釋平板的細(xì)菌種類(lèi)和數(shù)目表i細(xì)菌種類(lèi)及數(shù)目的測(cè)定平板1平板2平板3平均數(shù)種類(lèi)數(shù)688菌落數(shù)152428221g土壤中細(xì)菌的總數(shù)目：22x100OX100/X1