第三章發(fā)酵染菌及其防治

1、第三章第三章 工業(yè)發(fā)酵的染菌及其防治工業(yè)發(fā)酵的染菌及其防治1 12 23 3發(fā)酵染菌及其防止發(fā)酵染菌及其防止一一二二三三第一節(jié)第一節(jié) 染菌對(duì)發(fā)酵的影響染菌對(duì)發(fā)酵的影響1 1、什么叫發(fā)酵染菌、什么叫發(fā)酵染菌? ? 在發(fā)酵過程中，生產(chǎn)菌以外的其他微生物侵入了發(fā)酵在發(fā)酵過程中，生產(chǎn)菌以外的其他微生物侵入了發(fā)酵液，從而使發(fā)酵過程失去了真正意義上的純種培養(yǎng)。液，從而使發(fā)酵過程失去了真正意義上的純種培養(yǎng)。 菌種培養(yǎng)過程操作不當(dāng)菌種培養(yǎng)過程操作不當(dāng) 培養(yǎng)基滅菌不徹底培養(yǎng)基滅菌不徹底 發(fā)酵設(shè)備（如發(fā)酵罐、管道）密封不嚴(yán)發(fā)酵設(shè)備（如發(fā)酵罐、管道）密封不嚴(yán) 空氣除菌不凈空氣除菌不凈2 2、造成發(fā)酵染菌的可能途徑有

2、哪些？、造成發(fā)酵染菌的可能途徑有哪些？ 染菌仍是發(fā)酵工業(yè)的致命傷。輕者影響染菌仍是發(fā)酵工業(yè)的致命傷。輕者影響產(chǎn)率、產(chǎn)產(chǎn)率、產(chǎn)物提取收得率和產(chǎn)品質(zhì)量物提取收得率和產(chǎn)品質(zhì)量；嚴(yán)重者造成；嚴(yán)重者造成生產(chǎn)失敗生產(chǎn)失敗，浪費(fèi)大量原材料，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，而且擾亂浪費(fèi)大量原材料，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，而且擾亂生生產(chǎn)秩序產(chǎn)秩序，破壞，破壞生產(chǎn)計(jì)劃生產(chǎn)計(jì)劃。遇到連續(xù)染菌，特別是又。遇到連續(xù)染菌，特別是又找不到染菌原因，未有防治措施時(shí)，往往會(huì)影響找不到染菌原因，未有防治措施時(shí)，往往會(huì)影響人人們的情緒和生產(chǎn)積極性們的情緒和生產(chǎn)積極性，造成無(wú)法估量的危害。，造成無(wú)法估量的危害。3、染菌會(huì)對(duì)發(fā)酵工業(yè)造成哪些不良影響？、染

3、菌會(huì)對(duì)發(fā)酵工業(yè)造成哪些不良影響？4 4、在現(xiàn)有科學(xué)條件下能否做到徹底不染菌？、在現(xiàn)有科學(xué)條件下能否做到徹底不染菌？ 據(jù)報(bào)道，國(guó)外抗生素發(fā)酵平均染菌率為據(jù)報(bào)道，國(guó)外抗生素發(fā)酵平均染菌率為2%-5%2%-5%，國(guó)內(nèi)的，國(guó)內(nèi)的抗生素發(fā)酵、青霉素發(fā)酵染菌率抗生素發(fā)酵、青霉素發(fā)酵染菌率2%2%，鏈霉素、紅霉素和四，鏈霉素、紅霉素和四環(huán)素發(fā)酵染菌率約為環(huán)素發(fā)酵染菌率約為5%5%，谷氨酸發(fā)酵噬菌體感染率，谷氨酸發(fā)酵噬菌體感染率1-2%1-2%。 目前要做的是要目前要做的是要提高生產(chǎn)技術(shù)水平提高生產(chǎn)技術(shù)水平，強(qiáng)化，強(qiáng)化生產(chǎn)過程生產(chǎn)過程的管理，的管理，把握好各個(gè)易染菌的環(huán)節(jié)，把握好各個(gè)易染菌的環(huán)節(jié)，盡可能防止盡

4、可能防止發(fā)酵染菌的發(fā)生；而發(fā)酵染菌的發(fā)生；而且一旦發(fā)生染菌，要能盡快找出其且一旦發(fā)生染菌，要能盡快找出其污染的原因污染的原因，并采取相應(yīng)，并采取相應(yīng)的的有效措施有效措施，把發(fā)酵染菌造成的，把發(fā)酵染菌造成的損失損失降低到最小。降低到最小。5 5、既然染菌不可避免，哪我們應(yīng)該怎樣做？、既然染菌不可避免，哪我們應(yīng)該怎樣做？染菌對(duì)不同發(fā)酵品種的影響染菌對(duì)不同發(fā)酵品種的影響1 1污染不同微生物污染不同微生物2 2不同染菌時(shí)間不同染菌時(shí)間3 3不同染菌途徑不同染菌途徑4 4一、染菌對(duì)發(fā)酵的影響一、染菌對(duì)發(fā)酵的影響污染不同菌量污染不同菌量5 51 1、染菌對(duì)不同發(fā)酵品種的影響、染菌對(duì)不同發(fā)酵品種的影響放線菌

5、由于生長(zhǎng)的最適放線菌由于生長(zhǎng)的最適pHpH為為7 7左右，因此染細(xì)左右，因此染細(xì)菌為多，而霉菌生長(zhǎng)菌為多，而霉菌生長(zhǎng)pHpH為為5 5左右，因此染酵母左右，因此染酵母菌為多。菌為多。青霉素發(fā)酵染菌青霉素發(fā)酵染菌，絕大多數(shù)雜菌都能直接產(chǎn)生，絕大多數(shù)雜菌都能直接產(chǎn)生青霉素酶，而另一些雜菌則可被青霉素誘導(dǎo)而青霉素酶，而另一些雜菌則可被青霉素誘導(dǎo)而產(chǎn)生青霉素酶。不論在發(fā)酵前期、中期或后期，產(chǎn)生青霉素酶。不論在發(fā)酵前期、中期或后期，染有能產(chǎn)生青霉素酶的雜菌，都能使青霉素迅染有能產(chǎn)生青霉素酶的雜菌，都能使青霉素迅速破壞。速破壞。不同菌不同產(chǎn)品鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、卡那霉素鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、卡那霉素

6、等雖不象青霉素發(fā)酵染菌那樣一等雖不象青霉素發(fā)酵染菌那樣一無(wú)所得，但也會(huì)造成不同程度的危害。如雜菌大量消耗營(yíng)養(yǎng)，干擾生無(wú)所得，但也會(huì)造成不同程度的危害。如雜菌大量消耗營(yíng)養(yǎng)，干擾生產(chǎn)菌的正常代謝；改變產(chǎn)菌的正常代謝；改變pHpH，降低產(chǎn)量。，降低產(chǎn)量。灰黃霉素、制霉菌素、克念菌素灰黃霉素、制霉菌素、克念菌素等抗生素抑制霉菌，對(duì)細(xì)菌幾乎沒有等抗生素抑制霉菌，對(duì)細(xì)菌幾乎沒有抑制和殺滅作用抑制和殺滅作用。不同產(chǎn)品不同產(chǎn)品疫苗生產(chǎn)疫苗生產(chǎn)危害很大。現(xiàn)在疫苗多采用深層培養(yǎng)，這是一類不加提純危害很大。現(xiàn)在疫苗多采用深層培養(yǎng)，這是一類不加提純而直接使用的產(chǎn)品，在其深層培養(yǎng)過程中，一旦污染雜菌，不論死而直接使用的

7、產(chǎn)品，在其深層培養(yǎng)過程中，一旦污染雜菌，不論死菌、活菌或內(nèi)外毒素，都應(yīng)全部廢棄。因此，發(fā)酵罐容積越大，污菌、活菌或內(nèi)外毒素，都應(yīng)全部廢棄。因此，發(fā)酵罐容積越大，污染雜菌后的損失也越大。染雜菌后的損失也越大。2 2、污染不同種類和性質(zhì)的微生物的影響、污染不同種類和性質(zhì)的微生物的影響（1 1）污染噬菌體）污染噬菌體噬菌體的感染力很強(qiáng)，傳播蔓延迅噬菌體的感染力很強(qiáng)，傳播蔓延迅速，也較難防治，故危害極大。污染噬菌體后，可使發(fā)速，也較難防治，故危害極大。污染噬菌體后，可使發(fā)酵產(chǎn)量大幅度下降，嚴(yán)重的造成斷種，被迫停產(chǎn)。酵產(chǎn)量大幅度下降，嚴(yán)重的造成斷種，被迫停產(chǎn)。（2 2）污染其它雜菌）污染其它雜菌有些雜菌

8、會(huì)使生產(chǎn)菌有些雜菌會(huì)使生產(chǎn)菌自溶自溶產(chǎn)生大產(chǎn)生大量泡沫，即使添加消泡劑也無(wú)法控制量泡沫，即使添加消泡劑也無(wú)法控制逃液逃液，影響發(fā)酵過程，影響發(fā)酵過程的通氣攪拌。有的雜菌會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使的通氣攪拌。有的雜菌會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使pHpH下下降降，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。特別是染芽孢桿菌，由于芽孢特別是染芽孢桿菌，由于芽孢耐熱，不易殺死，往往一次染菌后會(huì)反復(fù)染菌。耐熱，不易殺死，往往一次染菌后會(huì)反復(fù)染菌。 污染其他雜菌的異?，F(xiàn)象：污染其他雜菌的異?，F(xiàn)象： 當(dāng)雜菌是當(dāng)雜菌是好氣性微生物好氣性微生物時(shí)，溶解氧的變化是在較短時(shí)間內(nèi)時(shí)，溶解氧的變化是在較短時(shí)間內(nèi)下降，直至接

9、近于零，且在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)不能回升；下降，直至接近于零，且在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)不能回升； 當(dāng)雜菌是當(dāng)雜菌是非好氣性微生物非好氣性微生物，而生產(chǎn)菌由于受污染而抑制生，而生產(chǎn)菌由于受污染而抑制生長(zhǎng)，使耗氧量減少，溶解氧升高。長(zhǎng)，使耗氧量減少，溶解氧升高。2 2） 好氣性發(fā)酵排出的氣體中的好氣性發(fā)酵排出的氣體中的CO2CO2含量與糖代謝含量與糖代謝有關(guān)。對(duì)有關(guān)。對(duì)于特定的發(fā)酵過程，工藝確定后，排出的氣體中的于特定的發(fā)酵過程，工藝確定后，排出的氣體中的CO2 CO2 含量的變化是有規(guī)律的。染菌后，培養(yǎng)基中糖的消耗發(fā)生含量的變化是有規(guī)律的。染菌后，培養(yǎng)基中糖的消耗發(fā)生變化變化 ，引起排氣中，引起排氣中CO2CO2含量的

10、異常變化，如雜菌污染時(shí)，含量的異常變化，如雜菌污染時(shí)，糖耗加快，糖耗加快， CO2CO2含量含量增加含量含量增加，噬菌體污染后，糖耗減，噬菌體污染后，糖耗減慢，慢，CO2CO2含量減少含量減少。因此，可根據(jù)。因此，可根據(jù)CO2CO2含量的異常變化含量的異常變化判斷染菌。判斷染菌?；鼗?還可以根據(jù)其他的一些異?，F(xiàn)象，如還可以根據(jù)其他的一些異?，F(xiàn)象，如菌體生菌體生長(zhǎng)不良長(zhǎng)不良、PHPH值的異常變化、發(fā)酵過程中值的異常變化、發(fā)酵過程中泡沫的異泡沫的異常增多常增多、發(fā)酵液的顏色發(fā)酵液的顏色異常變化、異常變化、代謝產(chǎn)物含量代謝產(chǎn)物含量的異常下跌、的異常下跌、發(fā)酵周期發(fā)酵周期的異常拖長(zhǎng)、發(fā)酵液的的異常拖長(zhǎng)

11、、發(fā)酵液的粘粘度異常增加度異常增加等判斷染菌。等判斷染菌。 對(duì)整個(gè)發(fā)酵過程的危害極大。對(duì)整個(gè)發(fā)酵過程的危害極大。嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的生長(zhǎng)繁殖。嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的生長(zhǎng)繁殖。干擾生產(chǎn)菌的代謝，影響產(chǎn)物的生成干擾生產(chǎn)菌的代謝，影響產(chǎn)物的生成 。影響相對(duì)較小影響相對(duì)較小 。（1 1）種子培養(yǎng)期染菌）種子培養(yǎng)期染菌由于接種量較小，生產(chǎn)菌生長(zhǎng)一開始不占由于接種量較小，生產(chǎn)菌生長(zhǎng)一開始不占優(yōu)勢(shì)，而且培養(yǎng)液中幾乎沒有抗生素（產(chǎn)優(yōu)勢(shì)，而且培養(yǎng)液中幾乎沒有抗生素（產(chǎn)物）或只有很少抗生素（產(chǎn)物）。因而它物）或只有很少抗生素（產(chǎn)物）。因而它防御雜菌能力低，容易污染雜菌。如在此防御雜菌能力低，容易污染雜菌。如在此階段染菌，應(yīng)

12、將培養(yǎng)液全部廢棄。階段染菌，應(yīng)將培養(yǎng)液全部廢棄。（2 2）發(fā)酵前期染菌）發(fā)酵前期染菌 發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。原因原因 發(fā)酵前期菌量不很多，發(fā)酵前期菌量不很多，與雜菌沒有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)；與雜菌沒有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)；且還且還未合成產(chǎn)物（抗生素）或產(chǎn)生很少，未合成產(chǎn)物（抗生素）或產(chǎn)生很少，抵御雜菌能力弱。抵御雜菌能力弱。在這個(gè)時(shí)期要特別警惕以制止染菌的發(fā)生。在這個(gè)時(shí)期要特別警惕以制止染菌的發(fā)生。染菌措施染菌措施 可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補(bǔ)料量，用酸堿調(diào)可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補(bǔ)料量，用酸堿調(diào)pHpH值，縮短培養(yǎng)周期等措施予以補(bǔ)救。如果前期染菌，且值，縮短培養(yǎng)周期等措施予以補(bǔ)救

13、。如果前期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補(bǔ)加一些營(yíng)養(yǎng)，重培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補(bǔ)加一些營(yíng)養(yǎng)，重新接種再用。新接種再用。（3 3）發(fā)酵中期染菌）發(fā)酵中期染菌 發(fā)酵中期染菌會(huì)嚴(yán)重干擾產(chǎn)生菌的代謝。雜菌大量產(chǎn)發(fā)酵中期染菌會(huì)嚴(yán)重干擾產(chǎn)生菌的代謝。雜菌大量產(chǎn)酸，培養(yǎng)液酸，培養(yǎng)液pHpH下降；糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，下降；糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時(shí)甚至?xí)挂旬a(chǎn)生的產(chǎn)物分解。有產(chǎn)物分泌減少或停止，有時(shí)甚至?xí)挂旬a(chǎn)生的產(chǎn)物分解。有時(shí)也會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大量泡沫。時(shí)也會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大量泡沫。措施措施 降溫培養(yǎng)，減少補(bǔ)料，密切注意代謝變

14、化情況。如果降溫培養(yǎng)，減少補(bǔ)料，密切注意代謝變化情況。如果發(fā)酵單位到達(dá)一定水平可以提前放罐，或者抗生素生產(chǎn)中可發(fā)酵單位到達(dá)一定水平可以提前放罐，或者抗生素生產(chǎn)中可以將高單位的發(fā)酵液輸送一部分到染菌罐，抑制雜菌。以將高單位的發(fā)酵液輸送一部分到染菌罐，抑制雜菌。（4 4）發(fā)酵后期染菌）發(fā)酵后期染菌 發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特別是抗生素，對(duì)雜菌有一定的抑制或殺特別是抗生素，對(duì)雜菌有一定的抑制或殺滅能力。因此如果染菌不多，對(duì)生產(chǎn)影響滅能力。因此如果染菌不多，對(duì)生產(chǎn)影響不大。如果染菌嚴(yán)重，又破壞性較大，可不大。如果染菌嚴(yán)重，又破壞性較大，可以提前放罐。以提前放

15、罐。將導(dǎo)致染菌范圍不斷擴(kuò)大，使將導(dǎo)致染菌范圍不斷擴(kuò)大，使生產(chǎn)蒙受重大損失。生產(chǎn)蒙受重大損失。 使發(fā)酵大面積染菌。使發(fā)酵大面積染菌。一般不具延續(xù)性，使單個(gè)（批）一般不具延續(xù)性，使單個(gè)（批）發(fā)酵罐發(fā)酵失敗。發(fā)酵罐發(fā)酵失敗。 染菌幾率較大。染菌幾率較大。 種子帶菌種子帶菌空氣帶菌空氣帶菌培養(yǎng)基或設(shè)備培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底滅菌不徹底 染菌程度越嚴(yán)重，即在發(fā)酵罐內(nèi)的染菌程度越嚴(yán)重，即在發(fā)酵罐內(nèi)的雜菌數(shù)量就雜菌數(shù)量就多多，對(duì)發(fā)酵的危害也就越大。但當(dāng)，對(duì)發(fā)酵的危害也就越大。但當(dāng)生產(chǎn)菌生產(chǎn)菌在發(fā)酵在發(fā)酵過程已有大量的繁殖，并已在發(fā)酵液中占優(yōu)勢(shì)，過程已有大量的繁殖，并已在發(fā)酵液中占優(yōu)勢(shì)，如果污染如果污染極少量的

16、雜菌極少量的雜菌，此時(shí)對(duì)發(fā)酵不會(huì)帶來(lái)太，此時(shí)對(duì)發(fā)酵不會(huì)帶來(lái)太大的影響。大的影響。 二、發(fā)酵染菌對(duì)產(chǎn)品提取的影響二、發(fā)酵染菌對(duì)產(chǎn)品提取的影響1、發(fā)酵染菌對(duì)過濾和提取的影響、發(fā)酵染菌對(duì)過濾和提取的影響 染菌發(fā)酵液中含有比正常發(fā)酵液更多的染菌發(fā)酵液中含有比正常發(fā)酵液更多的水溶性蛋白水溶性蛋白和和其它雜質(zhì)其它雜質(zhì)。采用有機(jī)溶劑萃取的提煉工藝，則采用有機(jī)溶劑萃取的提煉工藝，則極易發(fā)生乳化極易發(fā)生乳化，很難使水相，很難使水相和溶劑相分離，影響進(jìn)一步提純。和溶劑相分離，影響進(jìn)一步提純。采用直接用離子交換樹脂的提取工藝，如鏈霉素、慶大霉素，采用直接用離子交換樹脂的提取工藝，如鏈霉素、慶大霉素，染菌后大量雜菌黏

17、附在離子交換樹脂表面，或被離子交換樹脂染菌后大量雜菌黏附在離子交換樹脂表面，或被離子交換樹脂吸附，大大吸附，大大降低離子交換樹脂的交換容量，降低離子交換樹脂的交換容量，而且有的雜菌很難而且有的雜菌很難用水沖洗干凈，洗脫時(shí)與產(chǎn)物一起進(jìn)入洗脫液，影響進(jìn)一步提用水沖洗干凈，洗脫時(shí)與產(chǎn)物一起進(jìn)入洗脫液，影響進(jìn)一步提純。純。生產(chǎn)酶制劑時(shí)，雜菌產(chǎn)生的蛋白酶會(huì)水解產(chǎn)品酶，使產(chǎn)率降低。生產(chǎn)酶制劑時(shí)，雜菌產(chǎn)生的蛋白酶會(huì)水解產(chǎn)品酶，使產(chǎn)率降低。二、發(fā)酵染菌對(duì)提煉的影響二、發(fā)酵染菌對(duì)提煉的影響 2 2、發(fā)酵染菌、發(fā)酵染菌對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響（如內(nèi)毒素）：的影響（如內(nèi)毒素）：雜菌種類繁多，其代謝產(chǎn)物亦多，且多屬

18、未知，難于雜菌種類繁多，其代謝產(chǎn)物亦多，且多屬未知，難于監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)。 3 3、發(fā)酵染菌、發(fā)酵染菌對(duì)產(chǎn)品外觀對(duì)產(chǎn)品外觀的影響（如土霉素）：的影響（如土霉素）：由于感染雜菌，正常的代謝產(chǎn)物受到雜菌產(chǎn)物的影響，由于感染雜菌，正常的代謝產(chǎn)物受到雜菌產(chǎn)物的影響，使得外觀質(zhì)量達(dá)不到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。使得外觀質(zhì)量達(dá)不到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。三、染菌對(duì)三廢治理的影響三、染菌對(duì)三廢治理的影響 正常的發(fā)酵廢液正常的發(fā)酵廢液中混雜有大量的糖類、少量的中混雜有大量的糖類、少量的微生素、蛋白酶和其他代謝產(chǎn)物及無(wú)機(jī)鹽等。微生素、蛋白酶和其他代謝產(chǎn)物及無(wú)機(jī)鹽等。廢液中的廢菌體本身又是高蛋白物質(zhì)，是良好廢液中的廢菌體本身又是高蛋白物質(zhì)，是

19、良好的禽畜飼料添加劑，如可回收利用，即可治理的禽畜飼料添加劑，如可回收利用，即可治理環(huán)境，化害為利，也可創(chuàng)造經(jīng)濟(jì)價(jià)值。環(huán)境，化害為利，也可創(chuàng)造經(jīng)濟(jì)價(jià)值。 但是但是被雜菌污染的發(fā)酵廢液被雜菌污染的發(fā)酵廢液中會(huì)含有內(nèi)毒素，中會(huì)含有內(nèi)毒素，禽畜食后，容易發(fā)生病變，因此不能用作飼料禽畜食后，容易發(fā)生病變，因此不能用作飼料添加劑。而染菌后的廢液中的添加劑。而染菌后的廢液中的BODBOD含量增高，含量增高，因此會(huì)增加三廢治理的費(fèi)用和時(shí)間。因此會(huì)增加三廢治理的費(fèi)用和時(shí)間。 一、一、染菌的檢查檢查方法染菌的檢查檢查方法 二、二、發(fā)酵染菌原因分析發(fā)酵染菌原因分析 回 發(fā)酵過程是否染菌應(yīng)以發(fā)酵過程是否染菌應(yīng)以無(wú)菌

20、試驗(yàn)無(wú)菌試驗(yàn)的結(jié)果為依據(jù)進(jìn)行判的結(jié)果為依據(jù)進(jìn)行判斷。在發(fā)酵生產(chǎn)過程中，如何及早發(fā)現(xiàn)雜菌的污染并及斷。在發(fā)酵生產(chǎn)過程中，如何及早發(fā)現(xiàn)雜菌的污染并及時(shí)采取措施加以處理，是時(shí)采取措施加以處理，是避免染菌造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的避免染菌造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的重要手段重要手段。因此，生產(chǎn)上要求能。因此，生產(chǎn)上要求能準(zhǔn)確、快速準(zhǔn)確、快速的檢查出雜的檢查出雜菌的污染。目前常用于檢查是否染菌的菌的污染。目前常用于檢查是否染菌的無(wú)菌試驗(yàn)無(wú)菌試驗(yàn)方法主方法主要有以下四種：要有以下四種：檢查判斷檢查判斷目的意義目的意義（一）雜菌的檢查方法（一）雜菌的檢查方法 1 1、顯微鏡檢查法（形態(tài)觀察）、顯微鏡檢查法（形態(tài)觀察） 2 2

21、、肉湯培養(yǎng)法、肉湯培養(yǎng)法 3 3、平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法、平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法 4 4、發(fā)酵過程的異?，F(xiàn)象觀察法、發(fā)酵過程的異?，F(xiàn)象觀察法 無(wú)菌試驗(yàn)時(shí)，如果肉湯連續(xù)三次發(fā)生變色反應(yīng)（由紅無(wú)菌試驗(yàn)時(shí)，如果肉湯連續(xù)三次發(fā)生變色反應(yīng)（由紅色變?yōu)辄S色）或產(chǎn)生混濁，或平板培養(yǎng)連續(xù)三次發(fā)現(xiàn)有色變?yōu)辄S色）或產(chǎn)生混濁，或平板培養(yǎng)連續(xù)三次發(fā)現(xiàn)有異常菌落的出現(xiàn)，即可判斷為染菌。異常菌落的出現(xiàn)，即可判斷為染菌。無(wú)菌試驗(yàn)無(wú)菌試驗(yàn)注意注意事項(xiàng)事項(xiàng) 1 1、無(wú)菌試驗(yàn)的肉湯或培養(yǎng)平板應(yīng)保存并觀察至本批（罐）、無(wú)菌試驗(yàn)的肉湯或培養(yǎng)平板應(yīng)保存并觀察至本批（罐）放罐后放罐后12h12h，確認(rèn)為無(wú)雜菌后才能棄去。，確

22、認(rèn)為無(wú)雜菌后才能棄去。2 2、無(wú)菌試驗(yàn)期間應(yīng)每無(wú)菌試驗(yàn)期間應(yīng)每6h6h觀察一次無(wú)菌試驗(yàn)樣品，以便能觀察一次無(wú)菌試驗(yàn)樣品，以便能及早發(fā)現(xiàn)染菌。及早發(fā)現(xiàn)染菌。 回回（一）無(wú)菌試驗(yàn)方法（一）無(wú)菌試驗(yàn)方法（二）檢查的工序和時(shí)間見表（二）檢查的工序和時(shí)間見表31 總結(jié)發(fā)酵染菌的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，總結(jié)發(fā)酵染菌的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，積極采取必積極采取必要的措施，防止生產(chǎn)過程中再次染菌，要的措施，防止生產(chǎn)過程中再次染菌，把發(fā)把發(fā)酵染菌控制在生產(chǎn)前。酵染菌控制在生產(chǎn)前。防患于未然防患于未然是發(fā)酵生是發(fā)酵生產(chǎn)過程中控制染菌污染的最重要措施產(chǎn)過程中控制染菌污染的最重要措施 。分析目的分析目的二、發(fā)酵二、發(fā)酵二、發(fā)酵二、發(fā)酵（一）發(fā)酵

23、染菌率計(jì)算基準(zhǔn)（一）發(fā)酵染菌率計(jì)算基準(zhǔn) 總?cè)揪士側(cè)揪手敢荒臧l(fā)酵染菌的批（次）數(shù)與總指一年發(fā)酵染菌的批（次）數(shù)與總投料批（次）數(shù)之比的百分率。染菌批次數(shù)應(yīng)包投料批（次）數(shù)之比的百分率。染菌批次數(shù)應(yīng)包括染菌后培養(yǎng)基經(jīng)重新滅菌，又再次染菌的批次括染菌后培養(yǎng)基經(jīng)重新滅菌，又再次染菌的批次數(shù)在內(nèi)。這是習(xí)慣的計(jì)算方法，也是我國(guó)的統(tǒng)一數(shù)在內(nèi)。這是習(xí)慣的計(jì)算方法，也是我國(guó)的統(tǒng)一計(jì)算方法。計(jì)算方法。總?cè)揪士側(cè)揪?=%=%100*總投料批（次）數(shù)發(fā)酵染菌批（次）數(shù)二、發(fā)酵二、發(fā)酵 造成染菌的因素很多，但總結(jié)幾十年的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)絕大造成染菌的因素很多，但總結(jié)幾十年的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)絕大部分罐批染菌的原因是比較清楚的，但

24、在實(shí)際生產(chǎn)中發(fā)酵部分罐批染菌的原因是比較清楚的，但在實(shí)際生產(chǎn)中發(fā)酵染菌率仍比較高，可以說產(chǎn)生這種現(xiàn)象大多數(shù)是由于工作染菌率仍比較高，可以說產(chǎn)生這種現(xiàn)象大多數(shù)是由于工作中中“明知故犯明知故犯”“”“不負(fù)責(zé)任不負(fù)責(zé)任”和和“僥幸心理僥幸心理”所造成的。所造成的。例如例如，滅菌的，滅菌的蒸汽壓不足蒸汽壓不足不能滅菌；設(shè)備有滲漏不能進(jìn)罐不能滅菌；設(shè)備有滲漏不能進(jìn)罐等等都是眾所周知的，但因?yàn)橛袃e幸心理還是照樣滅菌，等等都是眾所周知的，但因?yàn)橛袃e幸心理還是照樣滅菌，進(jìn)罐，結(jié)果以污染雜菌而告終?，F(xiàn)將我們收集到的進(jìn)罐，結(jié)果以污染雜菌而告終?，F(xiàn)將我們收集到的國(guó)內(nèi)外國(guó)內(nèi)外幾家抗生素工廠發(fā)酵染菌原因列于下：幾家抗生

25、素工廠發(fā)酵染菌原因列于下：日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來(lái)抗生素發(fā)酵染菌原因分析日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來(lái)抗生素發(fā)酵染菌原因分析 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率%種子帶菌或懷疑種子帶菌種子帶菌或懷疑種子帶菌 9.64接種時(shí)罐壓跌零接種時(shí)罐壓跌零 0.19培養(yǎng)基滅菌不透培養(yǎng)基滅菌不透 0.79總空氣系統(tǒng)有菌總空氣系統(tǒng)有菌 19.96泡沫冒頂泡沫冒頂 0.48夾套穿孔夾套穿孔 12.36盤管穿孔盤管穿孔 5.89接種管穿孔接種管穿孔 0.39閥門滲漏閥門滲漏 1.45攪拌軸密封滲漏攪拌軸密封滲漏 2.09罐蓋漏罐蓋漏 1.54其它設(shè)備滲漏其它設(shè)備滲漏 10.13操作原因操作原因 10.15 原因不明原因

26、不明 24.94上海第三制藥廠染菌原因分析上海第三制藥廠染菌原因分析 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率%種子帶菌種子帶菌 14.15盤管穿孔盤管穿孔 14.20閥門滲漏閥門滲漏 23.30空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有菌 10.0管理不善管理不善 25.80其它其它 7.49原因不明原因不明 5.78第四制藥廠鏈霉素發(fā)酵染菌原因分析第四制藥廠鏈霉素發(fā)酵染菌原因分析 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率%外界帶入雜菌（取樣、補(bǔ)料）外界帶入雜菌（取樣、補(bǔ)料） 8.20設(shè)備穿孔設(shè)備穿孔 7.60空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有菌 26.00停電罐壓跌零停電罐壓跌零 1.60接種接種 11.00蒸汽壓力不足或蒸汽量不足蒸汽壓力不足或蒸汽量不足

27、 0.60管理問題管理問題 7.80 操作違反規(guī)程操作違反規(guī)程 1.60種子帶菌種子帶菌 0.60原因不明原因不明 35.00造成染菌的主要原因總結(jié)造成染菌的主要原因總結(jié) 一、設(shè)備滲漏一、設(shè)備滲漏 二、空氣染菌二、空氣染菌 三、種子染菌三、種子染菌 四、滅菌不徹底四、滅菌不徹底 五、技術(shù)管理不善五、技術(shù)管理不善造成染菌的主要原因總結(jié)造成染菌的主要原因總結(jié)1 1、設(shè)備滲漏、設(shè)備滲漏 設(shè)備滲漏包括設(shè)備滲漏包括夾套穿孔、盤管穿孔、接種管穿孔、閥門滲漏、夾套穿孔、盤管穿孔、接種管穿孔、閥門滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏攪拌軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏等。從日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)等。從日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研

28、究所對(duì)染菌原因分析發(fā)現(xiàn)，這類染菌占酵研究所對(duì)染菌原因分析發(fā)現(xiàn)，這類染菌占33.8533.85，上海上海三廠的分析這類染菌為三廠的分析這類染菌為37.537.5。所以說加強(qiáng)設(shè)備本身及附屬所以說加強(qiáng)設(shè)備本身及附屬零部件的嚴(yán)密度檢查，對(duì)防御染菌是極其主要的，也是重要零部件的嚴(yán)密度檢查，對(duì)防御染菌是極其主要的，也是重要的。的。 由于發(fā)酵罐需要經(jīng)受溫度的升降變化，使用久了難免由于發(fā)酵罐需要經(jīng)受溫度的升降變化，使用久了難免會(huì)出現(xiàn)會(huì)出現(xiàn)夾層盤管夾層盤管的的細(xì)微腐蝕細(xì)微腐蝕而出現(xiàn)滲漏，導(dǎo)致染菌的發(fā)生。而出現(xiàn)滲漏，導(dǎo)致染菌的發(fā)生。 滲漏原因滲漏原因 當(dāng)設(shè)備滲漏時(shí)，往往每批染菌發(fā)生的時(shí)間逐漸提前。當(dāng)設(shè)備滲漏時(shí)，往

29、往每批染菌發(fā)生的時(shí)間逐漸提前。染菌特點(diǎn)染菌特點(diǎn)設(shè)備滲漏方面原因設(shè)備滲漏方面原因回回2 2、空氣帶菌、空氣帶菌從日本工業(yè)技術(shù)院和上海第四制藥廠分析空氣帶菌而從日本工業(yè)技術(shù)院和上海第四制藥廠分析空氣帶菌而造成的染菌分別為造成的染菌分別為19.9619.96和和26%26%。國(guó)內(nèi)外空氣除菌技。國(guó)內(nèi)外空氣除菌技術(shù)雖已有較大改善，但仍然沒有使染菌率降低到理想術(shù)雖已有較大改善，但仍然沒有使染菌率降低到理想的程度。因?yàn)榈某潭?。因?yàn)榭諝獬到y(tǒng)較為復(fù)雜，環(huán)節(jié)多空氣除菌系統(tǒng)較為復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇，偶遇不慎便會(huì)導(dǎo)致空氣除菌失敗。不慎便會(huì)導(dǎo)致空氣除菌失敗。3 3、種子帶菌、種子帶菌種子帶菌又分為種子帶菌又分為種子本

30、身帶菌種子本身帶菌和和種子培養(yǎng)過程種子培養(yǎng)過程中染菌中染菌。加強(qiáng)種子管理，嚴(yán)格無(wú)菌操作，種子。加強(qiáng)種子管理，嚴(yán)格無(wú)菌操作，種子本身帶菌是可以克服的。種子培養(yǎng)過程染菌與本身帶菌是可以克服的。種子培養(yǎng)過程染菌與發(fā)酵一樣有許多因素造成。發(fā)酵一樣有許多因素造成。4 4、滅菌不徹底、滅菌不徹底滅菌技術(shù)的好壞與滅菌質(zhì)量很有關(guān)系滅菌技術(shù)的好壞與滅菌質(zhì)量很有關(guān)系l蒸汽通入培養(yǎng)基，蒸汽通入培養(yǎng)基，升溫快慢、保溫時(shí)間升溫快慢、保溫時(shí)間產(chǎn)生產(chǎn)生過多泡沫過多泡沫l蒸汽總壓是否達(dá)到要求標(biāo)準(zhǔn)蒸汽總壓是否達(dá)到要求標(biāo)準(zhǔn)l環(huán)境中的環(huán)境中的雜菌數(shù)量因季節(jié)而有很大差別雜菌數(shù)量因季節(jié)而有很大差別。如上海。如上海第四制藥廠在卡那霉素生

31、產(chǎn)中，于炎熱的夏季將連第四制藥廠在卡那霉素生產(chǎn)中，于炎熱的夏季將連續(xù)滅菌預(yù)熱至續(xù)滅菌預(yù)熱至80800 0C C的培養(yǎng)基采樣培養(yǎng)，可發(fā)現(xiàn)無(wú)法的培養(yǎng)基采樣培養(yǎng)，可發(fā)現(xiàn)無(wú)法計(jì)數(shù)的大量的芽孢桿菌；而在冬季取樣的培養(yǎng)中，計(jì)數(shù)的大量的芽孢桿菌；而在冬季取樣的培養(yǎng)中，則僅發(fā)現(xiàn)則僅發(fā)現(xiàn)2 23 3個(gè)芽孢桿菌。故染菌率因季節(jié)不同而個(gè)芽孢桿菌。故染菌率因季節(jié)不同而發(fā)生明顯變化。發(fā)生明顯變化。l原材料儲(chǔ)存和保管原材料儲(chǔ)存和保管，如液胨、玉米漿、，如液胨、玉米漿、母液糖等有機(jī)原料母液糖等有機(jī)原料雜菌的數(shù)量雜菌的數(shù)量l發(fā)酵罐、培養(yǎng)基配制罐等設(shè)備的清洗發(fā)酵罐、培養(yǎng)基配制罐等設(shè)備的清洗質(zhì)量質(zhì)量有無(wú)滅菌的死角有無(wú)滅菌的死角對(duì)

32、減少或避免染菌仍然是十分必要的。對(duì)減少或避免染菌仍然是十分必要的。 5 5、技術(shù)管理不善、技術(shù)管理不善技術(shù)管理技術(shù)管理就是要對(duì)發(fā)酵每個(gè)環(huán)節(jié)嚴(yán)格控就是要對(duì)發(fā)酵每個(gè)環(huán)節(jié)嚴(yán)格控制，發(fā)酵中稍有不慎就可能染菌，所以制，發(fā)酵中稍有不慎就可能染菌，所以不能有僥幸心理而放松管理不能有僥幸心理而放松管理因管理不善因管理不善而染菌的有而染菌的有31個(gè)罐批，占個(gè)罐批，占25.08。經(jīng)分析有下表所列原因：經(jīng)分析有下表所列原因： 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率%進(jìn)罐前未做設(shè)備嚴(yán)密度檢查進(jìn)罐前未做設(shè)備嚴(yán)密度檢查 25.8接種違反操作規(guī)程接種違反操作規(guī)程 25.8檢修質(zhì)量缺乏驗(yàn)收制度檢修質(zhì)量缺乏驗(yàn)收制度 19.35操作不熟練操作不

33、熟練 19.35配料違反工藝規(guī)程配料違反工藝規(guī)程 6.45調(diào)度不當(dāng)調(diào)度不當(dāng) 3.25二、發(fā)酵染菌原因分析二、發(fā)酵染菌原因分析“防重于治防重于治”從發(fā)酵工廠的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，染菌從發(fā)酵工廠的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，染菌原因是以原因是以設(shè)備滲漏和空氣系統(tǒng)設(shè)備滲漏和空氣系統(tǒng)的染菌為主，其他次之。的染菌為主，其他次之。1、從染菌的、從染菌的規(guī)模規(guī)模來(lái)分析來(lái)分析2、從染菌的、從染菌的時(shí)間時(shí)間來(lái)分析來(lái)分析3、從染菌的、從染菌的類型類型來(lái)分析來(lái)分析2 2）前期染菌）前期染菌種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底1）大批發(fā)酵罐染菌）大批發(fā)酵罐染菌系統(tǒng)問題，如空氣過濾系統(tǒng)有問題，特別是總過濾器長(zhǎng)系統(tǒng)問題，如空

34、氣過濾系統(tǒng)有問題，特別是總過濾器長(zhǎng)期沒有檢查，可能受潮失效；移種或補(bǔ)料的分配站有滲期沒有檢查，可能受潮失效；移種或補(bǔ)料的分配站有滲漏或滅菌不徹底。漏或滅菌不徹底。3 3）單罐染菌）單罐染菌不是系統(tǒng)問題，而是該罐本身的問題。如不是系統(tǒng)問題，而是該罐本身的問題。如種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底、罐有滲漏、分過濾器失種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底、罐有滲漏、分過濾器失效效1、從染菌的規(guī)模來(lái)分析、從染菌的規(guī)模來(lái)分析4 4）中后期染菌）中后期染菌補(bǔ)料的料液滅菌不徹底或補(bǔ)料管道、補(bǔ)料的料液滅菌不徹底或補(bǔ)料管道、閥門滲漏，一般不會(huì)是種子問題閥門滲漏，一般不會(huì)是種子問題2.染菌時(shí)間分析：染菌時(shí)間分析：早期染菌中后期染

35、菌 種子帶菌；培養(yǎng)液或設(shè)備滅菌不徹底；中間補(bǔ)料、設(shè)備滲漏以及操作不當(dāng)。3.染菌種類分析：染菌種類分析：污染耐熱性芽孢桿菌？污染球菌、酵母？霉菌？設(shè)備存在死角或培養(yǎng)液滅菌不徹底；從蒸汽的冷凝水或空氣中帶來(lái)的，發(fā)酵罐的冷卻管或夾套滲漏引起的；滅菌不徹底或無(wú)菌操作不嚴(yán)格所致。耐熱的芽孢桿菌耐熱的芽孢桿菌球菌、無(wú)芽孢桿菌球菌、無(wú)芽孢桿菌等不耐熱菌等不耐熱菌淺綠色菌落的雜菌淺綠色菌落的雜菌霉菌霉菌酵母菌酵母菌填表填表 培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底 種子帶菌種子帶菌/ /空氣除菌不徹底空氣除菌不徹底設(shè)備或冷卻盤管的滲漏設(shè)備或冷卻盤管的滲漏無(wú)菌室滅菌不徹底或無(wú)菌操作不當(dāng)無(wú)菌室滅菌不徹底或無(wú)菌

36、操作不當(dāng)糖液滅菌不徹底或糖液放置時(shí)間過長(zhǎng)糖液滅菌不徹底或糖液放置時(shí)間過長(zhǎng) 種子帶菌及其防種子帶菌及其防止止 空氣帶菌及其防空氣帶菌及其防止止 設(shè)備的滲漏或設(shè)備的滲漏或“死角死角”造成的染菌及其防治造成的染菌及其防治 生產(chǎn)原料滅菌不徹底導(dǎo)致的染菌生產(chǎn)原料滅菌不徹底導(dǎo)致的染菌 操作不當(dāng)造成染菌及其防治操作不當(dāng)造成染菌及其防治 噬菌體染菌及其防治噬菌體染菌及其防治 原因分析原因分析種子保存種子保存種子培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基種子換代種子換代及接種及接種種子培養(yǎng)種子培養(yǎng)設(shè)備設(shè)備 1 1檢查檢查無(wú)菌室無(wú)菌室的無(wú)菌狀況，的無(wú)菌狀況， 特別是接種箱。檢查接種箱所特別是接種箱。檢查接種箱所用的殺菌熏劑。用的殺菌熏劑。

37、 2 2檢查發(fā)生污染的檢查發(fā)生污染的種子培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基滅菌狀況，檢查對(duì)三角瓶、滅菌狀況，檢查對(duì)三角瓶、棉花塞、培養(yǎng)基等所進(jìn)行的滅菌操作。棉花塞、培養(yǎng)基等所進(jìn)行的滅菌操作。 4 4檢查檢查滅菌鍋的工作情況滅菌鍋的工作情況， 校核溫度表和壓力表。滅菌校核溫度表和壓力表。滅菌鍋工作時(shí)鍋內(nèi)空氣務(wù)必排盡。鍋工作時(shí)鍋內(nèi)空氣務(wù)必排盡。 5 5檢查發(fā)生污染所用的檢查發(fā)生污染所用的保藏菌種保藏菌種。 6 6檢查操作人員的檢查操作人員的操作技術(shù)操作技術(shù)。 7 7搖瓶種子搖瓶種子 保證搖瓶間的清潔衛(wèi)生；搖瓶?jī)?nèi)液體裝料不保證搖瓶間的清潔衛(wèi)生；搖瓶?jī)?nèi)液體裝料不宜過多，避免濺起的培養(yǎng)液污染紗布；瓶口包扎八層紗布。宜過多

38、，避免濺起的培養(yǎng)液污染紗布；瓶口包扎八層紗布。防止措施防止措施無(wú)菌室要求：無(wú)菌室要求：在無(wú)菌室中裝有在無(wú)菌室中裝有紫外燈紫外燈，打開紫外燈，照半小時(shí)，關(guān)燈后，打開紫外燈，照半小時(shí)，關(guān)燈后1515分鐘再接種。分鐘再接種。用消毒藥水如新潔而滅配成用消毒藥水如新潔而滅配成1/10001/1000濃度擦桌子、拖地，開啟濃度擦桌子、拖地，開啟超凈臺(tái)的通風(fēng)，超凈臺(tái)的通風(fēng)，接種時(shí)必須在超凈臺(tái)上操作接種時(shí)必須在超凈臺(tái)上操作，超凈臺(tái)裝有一臺(tái)鼓風(fēng)機(jī)，進(jìn)風(fēng)，超凈臺(tái)裝有一臺(tái)鼓風(fēng)機(jī)，進(jìn)風(fēng)口有一粗過濾器，出風(fēng)口有高效過濾器，保證無(wú)菌風(fēng)從超凈口有一粗過濾器，出風(fēng)口有高效過濾器，保證無(wú)菌風(fēng)從超凈臺(tái)吹出，外界有菌空氣不可能進(jìn)入

39、接種區(qū)域，保證無(wú)菌條件。臺(tái)吹出，外界有菌空氣不可能進(jìn)入接種區(qū)域，保證無(wú)菌條件。接種人員必須穿好無(wú)菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干凈。接種人員必須穿好無(wú)菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干凈。原因原因分析分析 要杜絕無(wú)菌空氣帶菌，就必須從要杜絕無(wú)菌空氣帶菌，就必須從空氣的凈化工藝空氣的凈化工藝和和設(shè)備的設(shè)計(jì)設(shè)備的設(shè)計(jì)、過濾介質(zhì)的選用和裝填過濾介質(zhì)的選用和裝填、過濾介過濾介質(zhì)的滅菌質(zhì)的滅菌和和管理管理等方面完善空氣凈化系統(tǒng)?？諝獾确矫嫱晟瓶諝鈨艋到y(tǒng)。空氣凈化系統(tǒng)導(dǎo)致染菌，占總?cè)揪膬艋到y(tǒng)導(dǎo)致染菌，占總?cè)揪?8189 9 。壓縮機(jī)壓縮機(jī)粗過濾器粗過濾器貯罐貯罐冷卻器冷卻器冷卻器冷卻器旋風(fēng)分離器旋風(fēng)

40、分離器絲網(wǎng)分離器絲網(wǎng)分離器加熱器加熱器過濾器過濾器空氣染菌原因分析：空氣染菌原因分析：空氣冷卻器的列管穿孔泄露，空氣冷卻器的列管穿孔泄露，冷卻水會(huì)滲入到空氣中，造成冷卻水會(huì)滲入到空氣中，造成染菌染菌。棉花棉花- -活性炭活性炭過濾器長(zhǎng)期使用后，棉花和活性炭的體積被壓縮過濾器長(zhǎng)期使用后，棉花和活性炭的體積被壓縮而松動(dòng)，如果上下端棉花鋪得厚薄不均，厚的一邊阻力大空而松動(dòng)，如果上下端棉花鋪得厚薄不均，厚的一邊阻力大空氣不暢通，薄的一邊空氣容易通過，久而久之，薄的一邊長(zhǎng)氣不暢通，薄的一邊空氣容易通過，久而久之，薄的一邊長(zhǎng)期受空氣頂吹而使棉花活性炭改變位置，造成過濾器失效。期受空氣頂吹而使棉花活性炭改變

41、位置，造成過濾器失效。過濾器過濾器用蒸汽滅菌時(shí)，若被蒸汽冷凝水潤(rùn)濕就會(huì)降低或喪失用蒸汽滅菌時(shí)，若被蒸汽冷凝水潤(rùn)濕就會(huì)降低或喪失過濾效能，滅菌完畢應(yīng)立即緩慢通入壓縮空氣，將水分吹干。過濾效能，滅菌完畢應(yīng)立即緩慢通入壓縮空氣，將水分吹干。超細(xì)纖維紙超細(xì)纖維紙作過濾介質(zhì)，滅菌時(shí)必須將管道中冷凝水放干凈，作過濾介質(zhì)，滅菌時(shí)必須將管道中冷凝水放干凈，以免介質(zhì)受潮失效。以免介質(zhì)受潮失效。在生產(chǎn)實(shí)踐中，空氣管道大多與其它物料管道相接，要裝上在生產(chǎn)實(shí)踐中，空氣管道大多與其它物料管道相接，要裝上止逆閥止逆閥防止其它物料竄入空氣管道污染過濾器，導(dǎo)致過濾介防止其它物料竄入空氣管道污染過濾器，導(dǎo)致過濾介質(zhì)失效。質(zhì)失效

42、。 進(jìn)風(fēng)口、生產(chǎn)環(huán)境、空氣過濾器（濾芯的滅菌進(jìn)風(fēng)口、生產(chǎn)環(huán)境、空氣過濾器（濾芯的滅菌要徹底，過濾介質(zhì)要定期檢查更換）。要徹底，過濾介質(zhì)要定期檢查更換）。原因分析原因分析 空氣過濾系統(tǒng)帶菌會(huì)使發(fā)酵罐批批染菌、罐罐空氣過濾系統(tǒng)帶菌會(huì)使發(fā)酵罐批批染菌、罐罐染菌，此時(shí)就要對(duì)空氣過濾系統(tǒng)進(jìn)行無(wú)菌樣檢測(cè)。染菌，此時(shí)就要對(duì)空氣過濾系統(tǒng)進(jìn)行無(wú)菌樣檢測(cè)。 染菌特點(diǎn)染菌特點(diǎn) 1 1油滲入空氣：改用無(wú)油潤(rùn)的壓縮機(jī)。油滲入空氣：改用無(wú)油潤(rùn)的壓縮機(jī)。 2 2列管式冷卻器穿孔。列管式冷卻器穿孔。 3 3過濾介質(zhì)松動(dòng)，空氣走短路。過濾介質(zhì)松動(dòng)，空氣走短路。 4 4過濾介質(zhì)被水潤(rùn)濕。過濾介質(zhì)被水潤(rùn)濕。 5 5過濾介質(zhì)老化過濾

43、介質(zhì)老化. . 防止防止措施措施壓縮機(jī)壓縮機(jī)粗過濾器粗過濾器貯罐貯罐冷卻器冷卻器冷卻器冷卻器旋風(fēng)分離器旋風(fēng)分離器絲網(wǎng)分離器絲網(wǎng)分離器加熱器加熱器過濾器過濾器回回設(shè)備滲漏設(shè)備滲漏 設(shè)備滲漏主要是設(shè)備滲漏主要是指發(fā)酵罐、補(bǔ)糖罐、冷卻盤管、指發(fā)酵罐、補(bǔ)糖罐、冷卻盤管、管道閥門等，由于化學(xué)腐蝕管道閥門等，由于化學(xué)腐蝕（發(fā)酵代謝所產(chǎn)生的有（發(fā)酵代謝所產(chǎn)生的有機(jī)酸等發(fā)生腐蝕作用）、機(jī)酸等發(fā)生腐蝕作用）、電化學(xué)腐蝕電化學(xué)腐蝕（如氧溶解于（如氧溶解于水，使金屬不斷失去電子，加快腐蝕作用）、磨濁水，使金屬不斷失去電子，加快腐蝕作用）、磨濁攤口金屬與原料中的泥沙之間攤口金屬與原料中的泥沙之間磨損、加工制作不良磨損

44、、加工制作不良等原因形成等原因形成后發(fā)生滲漏染菌后發(fā)生滲漏染菌。2 2、防止設(shè)備滲漏、防止設(shè)備滲漏 發(fā)酵設(shè)備及附件由于發(fā)酵設(shè)備及附件由于化學(xué)腐蝕、電化學(xué)腐蝕，物料與設(shè)化學(xué)腐蝕、電化學(xué)腐蝕，物料與設(shè)備摩擦造成機(jī)械磨損以及加工制作不良備摩擦造成機(jī)械磨損以及加工制作不良等原因會(huì)導(dǎo)致設(shè)備及等原因會(huì)導(dǎo)致設(shè)備及附件滲漏。附件滲漏。設(shè)備上一旦滲漏，就會(huì)造成染菌，設(shè)備上一旦滲漏，就會(huì)造成染菌，例如例如冷卻盤管、夾套穿孔冷卻盤管、夾套穿孔滲漏，有菌的冷卻水便會(huì)通過漏孔而進(jìn)入發(fā)酵罐中招致染菌。滲漏，有菌的冷卻水便會(huì)通過漏孔而進(jìn)入發(fā)酵罐中招致染菌。閥門滲漏也會(huì)使帶菌的空氣或水進(jìn)入發(fā)酵罐而造成染菌。閥門滲漏也會(huì)使帶菌

45、的空氣或水進(jìn)入發(fā)酵罐而造成染菌。設(shè)備上的漏隙如果肉眼能看見，容易發(fā)現(xiàn)，也容易治理；但設(shè)備上的漏隙如果肉眼能看見，容易發(fā)現(xiàn)，也容易治理；但有的微小泄漏，肉眼看不見，必須通過一定的試漏方法才能有的微小泄漏，肉眼看不見，必須通過一定的試漏方法才能發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn) 。 試漏方法可采用試漏方法可采用水壓試漏法水壓試漏法。即被測(cè)設(shè)備的出口處裝上壓。即被測(cè)設(shè)備的出口處裝上壓力表，將水壓入設(shè)備，待設(shè)備中壓力上升到要求壓力，關(guān)閉進(jìn)力表，將水壓入設(shè)備，待設(shè)備中壓力上升到要求壓力，關(guān)閉進(jìn)出水，看壓力有否下降。壓力下降則有滲漏。但有些滲漏很小，出水，看壓力有否下降。壓力下降則有滲漏。但有些滲漏很小，看不出何處漏水，可以用稀堿

46、溶液壓入設(shè)備，然后用蘸有酚酞看不出何處漏水，可以用稀堿溶液壓入設(shè)備，然后用蘸有酚酞的紗布揩，只要酚酞能變紅處即為滲漏處。的紗布揩，只要酚酞能變紅處即為滲漏處。 閥門滲漏可以用閥門滲漏可以用集氣桶集氣桶來(lái)試漏。方法是先在集氣桶中裝滿來(lái)試漏。方法是先在集氣桶中裝滿水，然后關(guān)閉所有閥門，向發(fā)酵罐中通入空氣，使罐壓上升到水，然后關(guān)閉所有閥門，向發(fā)酵罐中通入空氣，使罐壓上升到要求壓力，一般一公斤以上。由于集氣桶連通各管道，觀察哪要求壓力，一般一公斤以上。由于集氣桶連通各管道，觀察哪根管子冒泡，即這根管子的閥門漏氣。根管子冒泡，即這根管子的閥門漏氣。3、檢查設(shè)備滲漏方法、檢查設(shè)備滲漏方法 由于存在溫差（內(nèi)

47、冷卻水溫、外滅菌溫），溫度急劇由于存在溫差（內(nèi)冷卻水溫、外滅菌溫），溫度急劇變化，或發(fā)酵液的變化，或發(fā)酵液的pHpH低、化學(xué)腐蝕嚴(yán)重等原因低、化學(xué)腐蝕嚴(yán)重等原因 。原因原因分析分析 生產(chǎn)上可采取仔細(xì)清洗，檢查滲漏，或降低冷卻水生產(chǎn)上可采取仔細(xì)清洗，檢查滲漏，或降低冷卻水中中CLCL-1 -1的含量等措施加以防治的含量等措施加以防治 防治防治措施措施 死角死角 受攪拌與通風(fēng)的影響，易磨蝕穿孔。受攪拌與通風(fēng)的影響，易磨蝕穿孔。 管中的空氣流速不一致，靠近空氣進(jìn)口處流速最大，管中的空氣流速不一致，靠近空氣進(jìn)口處流速最大，離進(jìn)口處距離越遠(yuǎn)流速越小。離進(jìn)口處距離越遠(yuǎn)流速越小。 原因原因分析分析 采取頻繁

48、更換空氣分布管或認(rèn)真洗滌等措施采取頻繁更換空氣分布管或認(rèn)真洗滌等措施 。防治防治措施措施原因原因分析分析 發(fā)生局部化學(xué)腐蝕或磨蝕，產(chǎn)生穿孔滲漏。發(fā)生局部化學(xué)腐蝕或磨蝕，產(chǎn)生穿孔滲漏。 罐焊接處等的周圍容易積集污垢。罐焊接處等的周圍容易積集污垢。 發(fā)酵罐的制作不良。發(fā)酵罐的制作不良。 發(fā)酵罐封頭上的各個(gè)接口。發(fā)酵罐封頭上的各個(gè)接口。 發(fā)酵罐的修補(bǔ)焊接位置不當(dāng)發(fā)酵罐的修補(bǔ)焊接位置不當(dāng) 。圖圖5-3 5-3 不銹鍋襯里破裂形成不銹鍋襯里破裂形成“死角死角” ” 圖圖5-4 5-4 發(fā)酵罐底部培養(yǎng)基的沉積污垢形發(fā)酵罐底部培養(yǎng)基的沉積污垢形成成 圖圖5 5 發(fā)酵罐支撐件加強(qiáng)板形成發(fā)酵罐支撐件加強(qiáng)板形成“

49、死角死角”染菌染菌 1 1、采取罐內(nèi)壁、采取罐內(nèi)壁涂刷防腐涂料、涂刷防腐涂料、加強(qiáng)清洗并定期加強(qiáng)清洗并定期鏟除污垢等是有效消除染菌的措施鏟除污垢等是有效消除染菌的措施 。2 2、采用不銹鋼或、采用不銹鋼或復(fù)合鋼復(fù)合鋼可有效克服此弊端并注可有效克服此弊端并注意清洗是可以避免染菌的意清洗是可以避免染菌的 。防治防治措施措施原因原因分析分析 1 1、經(jīng)常將一些管路匯集到一條總的管路上。、經(jīng)常將一些管路匯集到一條總的管路上。 2 2、管路大多采用法蘭連接。、管路大多采用法蘭連接。 但常會(huì)發(fā)生諸如墊圈大小不配套、法蘭不平但常會(huì)發(fā)生諸如墊圈大小不配套、法蘭不平整、安裝未對(duì)中、法蘭與管子的焊接不好、受整、安

50、裝未對(duì)中、法蘭與管子的焊接不好、受熱不均勻使法蘭翹曲以及密封面不平等現(xiàn)象，熱不均勻使法蘭翹曲以及密封面不平等現(xiàn)象，從而形成從而形成“死角死角”而染菌而染菌 。 采用單獨(dú)的排氣、排水和排污管可有效防止采用單獨(dú)的排氣、排水和排污管可有效防止染菌的發(fā)生。染菌的發(fā)生。 法蘭的加工、焊接和安裝要符合滅菌的要求法蘭的加工、焊接和安裝要符合滅菌的要求盡可能減少或取消連接法蘭等措施盡可能減少或取消連接法蘭等措施 。防治防治措施措施圖圖5-5 5-5 滅菌時(shí)蒸汽不易通達(dá)的滅菌時(shí)蒸汽不易通達(dá)的“死角死角”及其消除方法及其消除方法圖圖5-6 5-6 法蘭連接不當(dāng)造成的法蘭連接不當(dāng)造成的“死角死角”染菌染菌原因原因分

51、析分析 采用加工精度高、材料好的閥門可減采用加工精度高、材料好的閥門可減少此類染菌的發(fā)生。少此類染菌的發(fā)生。 防治防治措施措施 目前生產(chǎn)上使用的閥門不能完全滿足發(fā)酵目前生產(chǎn)上使用的閥門不能完全滿足發(fā)酵工程的工藝要求，是造成發(fā)酵染菌的主要原因工程的工藝要求，是造成發(fā)酵染菌的主要原因之一之一 ?；鼗卦蛟蚍治龇治?淀粉質(zhì)原料淀粉質(zhì)原料，在升溫過快或混合不均勻時(shí)容易結(jié)，在升溫過快或混合不均勻時(shí)容易結(jié)塊，使塊，使團(tuán)塊中心部位團(tuán)塊中心部位“夾生夾生”，蒸汽不易進(jìn)入，蒸汽不易進(jìn)入將將雜菌殺死雜菌殺死 培養(yǎng)基中諸如麩皮、黃豆餅一類的固形物含量較培養(yǎng)基中諸如麩皮、黃豆餅一類的固形物含量較多，多，在投料時(shí)濺到

52、罐壁或罐內(nèi)的各種支架上，容在投料時(shí)濺到罐壁或罐內(nèi)的各種支架上，容易形成堆積易形成堆積，這些堆積物在滅菌過程由于傳熱較，這些堆積物在滅菌過程由于傳熱較慢，一些雜菌也不易被殺滅。慢，一些雜菌也不易被殺滅。 1 1、升溫前先通過升溫前先通過攪拌混合均勻攪拌混合均勻，并加人一定量的，并加人一定量的淀粉酶進(jìn)行液化；有大顆粒存在時(shí)應(yīng)先經(jīng)過篩除淀粉酶進(jìn)行液化；有大顆粒存在時(shí)應(yīng)先經(jīng)過篩除去，再行滅菌；去，再行滅菌； 2 2、對(duì)于麩皮、黃豆餅一類的固形物含量較多的對(duì)于麩皮、黃豆餅一類的固形物含量較多的培養(yǎng)基，采用罐外預(yù)先配料，再轉(zhuǎn)至發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)培養(yǎng)基，采用罐外預(yù)先配料，再轉(zhuǎn)至發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)行實(shí)罐滅菌較為有效。行實(shí)罐滅

53、菌較為有效。防治防治措施措施 1 1購(gòu)進(jìn)原料應(yīng)購(gòu)進(jìn)原料應(yīng)干燥干燥，倉(cāng)貯原料應(yīng)保持干燥。，倉(cāng)貯原料應(yīng)保持干燥。 2 2制各培養(yǎng)基時(shí)，粉碎原料先用冷水浸潤(rùn)，制各培養(yǎng)基時(shí)，粉碎原料先用冷水浸潤(rùn)， 調(diào)調(diào)漿罐攪拌要充分防止結(jié)塊。漿罐攪拌要充分防止結(jié)塊。 3 3粉碎原料顆粒應(yīng)粉碎原料顆粒應(yīng)足夠小足夠小，大顆粒會(huì)影響殺菌效，大顆粒會(huì)影響殺菌效果。果。 4 4假如生產(chǎn)原料被孢子嚴(yán)重污染，假如生產(chǎn)原料被孢子嚴(yán)重污染， 制成培養(yǎng)基制成培養(yǎng)基后，后， 可在可在3030保溫?cái)?shù)小時(shí)，保溫?cái)?shù)小時(shí)， 待孢子發(fā)芽待孢子發(fā)芽后再行后再行殺菌。殺菌。具體具體措施措施原因原因分析分析1 1、滅菌時(shí)由于操作不合理，未將罐內(nèi)的空氣完全

54、排除，造成壓力、滅菌時(shí)由于操作不合理，未將罐內(nèi)的空氣完全排除，造成壓力表顯示表顯示“假壓假壓”。培養(yǎng)基滅菌前含有大量雜菌，滅菌時(shí)如果培養(yǎng)基滅菌前含有大量雜菌，滅菌時(shí)如果蒸蒸汽壓力汽壓力不足，就達(dá)不到要求的溫度；不足，就達(dá)不到要求的溫度；2 2、產(chǎn)生泡沫發(fā)泡嚴(yán)重時(shí)泡沫可上升至罐頂甚至逃逸，以致泡沫頂、產(chǎn)生泡沫發(fā)泡嚴(yán)重時(shí)泡沫可上升至罐頂甚至逃逸，以致泡沫頂罐。罐。滅菌時(shí)產(chǎn)生大量滅菌時(shí)產(chǎn)生大量泡沫泡沫或發(fā)酵罐中有或發(fā)酵罐中有污垢堆積污垢堆積，就會(huì)窩藏大，就會(huì)窩藏大量雜菌，造成滅菌不徹底。量雜菌，造成滅菌不徹底。3 3、連續(xù)滅菌過程中，培養(yǎng)基滅菌的溫度及其停留時(shí)間沒有符合滅、連續(xù)滅菌過程中，培養(yǎng)基滅菌

55、的溫度及其停留時(shí)間沒有符合滅菌的要求。菌的要求。培養(yǎng)基滅菌方法培養(yǎng)基滅菌方法高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌分批滅菌分批滅菌 121121，3030分鐘分鐘連續(xù)滅菌連續(xù)滅菌 罐溫罐溫125125130 130 ，30304545分鐘分鐘為什么蒸汽滅菌時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量泡沫呢？為什么蒸汽滅菌時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量泡沫呢？ 原因分析：原因分析：培養(yǎng)基和水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，培養(yǎng)基和水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，如果滅菌時(shí)升溫太快，培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐內(nèi)的空氣如果滅菌時(shí)升溫太快，培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐內(nèi)的空氣排出較慢，就會(huì)產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上升到發(fā)酵罐頂，泡排出較慢，就會(huì)產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上升到發(fā)酵罐頂，泡沫

56、中的耐熱菌就不能與蒸汽直接接觸，未被殺死。沫中的耐熱菌就不能與蒸汽直接接觸，未被殺死。防止方法防止方法:緩慢開啟蒸汽閥門，或加入少量消泡劑。緩慢開啟蒸汽閥門，或加入少量消泡劑。滅菌時(shí)還會(huì)因設(shè)備安裝或污垢堆積造成一些滅菌時(shí)還會(huì)因設(shè)備安裝或污垢堆積造成一些“死角死角”。這。這些死角蒸汽不能有效達(dá)到，常會(huì)窩藏耐熱芽孢桿菌，所以些死角蒸汽不能有效達(dá)到，常會(huì)窩藏耐熱芽孢桿菌，所以設(shè)備安裝要注意不能造成死角，發(fā)酵設(shè)備要經(jīng)常清洗，鏟設(shè)備安裝要注意不能造成死角，發(fā)酵設(shè)備要經(jīng)常清洗，鏟除污垢。除污垢。補(bǔ)充：發(fā)酵染菌后的措施補(bǔ)充：發(fā)酵染菌后的措施l染菌后的培養(yǎng)基必須滅菌后才可放下水道染菌后的培養(yǎng)基必須滅菌后才可放

57、下水道。滅菌方法：可通蒸汽滅菌，也可加入過氧乙酸等化學(xué)滅菌劑滅菌方法：可通蒸汽滅菌，也可加入過氧乙酸等化學(xué)滅菌劑攪拌半小時(shí)，才放下水道。否則由于各罐的管道相通，會(huì)造攪拌半小時(shí)，才放下水道。否則由于各罐的管道相通，會(huì)造成其它罐的染菌，而且直接放下水道也會(huì)造成空氣的污染而成其它罐的染菌，而且直接放下水道也會(huì)造成空氣的污染而導(dǎo)致其它罐批染菌。導(dǎo)致其它罐批染菌。l凡染菌的罐要找染菌的原因凡染菌的罐要找染菌的原因，對(duì)癥下藥，該罐也要徹底清，對(duì)癥下藥，該罐也要徹底清洗，進(jìn)行空罐消毒，才可進(jìn)罐。洗，進(jìn)行空罐消毒，才可進(jìn)罐。l染菌厲害時(shí)，車間環(huán)境要用石灰消毒染菌厲害時(shí)，車間環(huán)境要用石灰消毒，空氣用甲醛熏蒸。，

58、空氣用甲醛熏蒸。特別，若染噬菌體，空氣必須用甲醛蒸汽消毒。特別，若染噬菌體，空氣必須用甲醛蒸汽消毒。原因原因分析分析 引起發(fā)酵生產(chǎn)噬菌體污染的原因，大都是由于生引起發(fā)酵生產(chǎn)噬菌體污染的原因，大都是由于生產(chǎn)過程中，產(chǎn)過程中，人們不加注意地把大量活菌體隨意排人們不加注意地把大量活菌體隨意排放放，這些活菌體棲息于周圍環(huán)境，同少量與其有，這些活菌體棲息于周圍環(huán)境，同少量與其有關(guān)的其它溶原性菌株按觸，關(guān)的其它溶原性菌株按觸， 經(jīng)過經(jīng)過變異和雜交變異和雜交， 最最終發(fā)生使生產(chǎn)菌株溶菌的終發(fā)生使生產(chǎn)菌株溶菌的烈性噬菌體烈性噬菌體，并在環(huán)境，并在環(huán)境中逐漸增殖，隨空氣流動(dòng)，污染種子和發(fā)酵罐。中逐漸增殖，隨空氣流動(dòng)，污染種子和發(fā)酵罐。被噬菌體污染的發(fā)酵罐又大量排氣，便是更太的被噬菌體污染的發(fā)酵罐又大量排氣，便是更太的發(fā)源點(diǎn)。發(fā)源點(diǎn)。1 1、鏡檢可發(fā)現(xiàn)、鏡檢可發(fā)現(xiàn)菌體數(shù)量明顯減少，菌體不規(guī)則（圖）菌體數(shù)量明顯減少，菌體不規(guī)則（圖），嚴(yán)，嚴(yán)重時(shí)完全看不到菌體，且是在短時(shí)間內(nèi)菌體自溶。重時(shí)完全看不到菌體，且是在短時(shí)間內(nèi)菌體自溶。2 2、發(fā)酵、發(fā)酵pHpH值逐漸上升值逐漸上升，4-84-8小時(shí)之內(nèi)可達(dá)小時(shí)之內(nèi)可達(dá)8.08.0以上，不再下以上，不再下降。降。3 3、發(fā)酵液、發(fā)